实验十一 人类X小体的观察
实验十一 人类X小体的观察
（2）6-PGD杂合体细胞电泳实验
证据3：X染色体数与Barr小体数
X染色体显示异固缩现象。在靠近核膜的地方，成为性 染色质体（sex-chromatin body），而雄性没有。细胞学 的研究发现Barr小体的数目正好是X染色体数目减1（n-1)。 总之， X染色体在哺乳动物中的失活是指在任何二倍 体的哺乳动物细胞中，无论存在几条X染色体，都只有一 条xX染色体保持活性。这个过程使X连锁基因得到剂量补 偿，保证染色体为XX的女性和XY的男性具有相同的有效基 因产物。
2、画2～3个典型细胞，示X小体的形态和所处部位。
3. Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什 么用途？
5.10 A calio cat (a), where the random distribution of orange and black patches demonstrates the Lyon hypothesis.
证据2：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 葡萄糖-6磷酸脱氢酶（G-6PD）的活性在男女间没 有区别。根据淀粉凝胶电脉的差异，可分为A型和B型。 由X上一对等位基因GdA和GdB控制。只有一个氨基酸 的差异。杂合体AB显示两条带。但从皮肤上取很小一 片，用胰蛋白酶处理，使细胞分散，单独培养，发现， 有的细胞群显示A型，有的显示B型女性带毛根毛发一根,放在一干净的载玻片上。
②软化:滴加软化液（50%醋酸或盐酸）软化5min。 ③ 加一滴染液后室温下放10min （勿使干燥），加上盖玻片， 垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
人口腔X小体
X小体的形状
六、实验结果
1.X小体： 油镜下可见X小体为 一致密的浓染小体。 轮廓清晰，约1um，常 附着于核膜边缘或靠 边内侧，其形态有三 角形、卵形、扁平形 等。 正常女性间期细胞 核中X小体比例约 30%～50%。
人类X染色质小体的检测
山东大学遗传学实验人类X染色质小体的检测摘要在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体。
又称X小体，通常位于间期核膜边缘。
本次实验通过对口腔粘膜细胞和毛囊细胞的染色和压片观察，了解X染色质体形成的机理、观察识别巴氏小体的形态特征及所在部位。
前言巴氏小体又称X小体，正常女性，位于间期细胞核中，紧贴核膜内缘，大小约1～1.5um，呈现三角或椭圆形小体，数量为x染色体数减一。
巴氏小体是由于女性两个X染色体中的一个失活形成的。
Lyon的剂量补偿学说认为，女性有两个X染色体，但所表达的绝大部分遗传物质与只有1个X染色体的男性是一样多的。
这是因为女性的X染色体中只有1个保持活性，而另一个是晚复制的，没有活性。
该失活的染色体在形态学上呈异染色体，即DNA螺旋压的很紧，染色深而致密，称之为巴氏小体。
体育运动会上的性别鉴定主要采用巴氏小体方法。
材料与方法材料1.实验材料口腔粘膜细胞、毛囊细胞2.实验器具显微镜一台、解剖针、牙签、载玻片、盖玻片、滤纸3.实验试剂硫堇、苯酚品红、HCl、95%的乙醇、无水乙醇、蒸馏水、生理盐水方法1．口腔粘膜细胞：受检者清水漱口数次，用洁净牙签从女性口腔两侧刮取粘膜，原位刮2～3次，第1次舍去，第2，3次分别涂于干净载玻片上。
室温干燥3-5分钟，用HCl 水解3-5分钟，水洗3次，每次1分钟，再用硫堇染色15-20分钟，水洗一次，显微镜观察，95%的乙醇分色3-5秒。
盖上盖玻片，开始镜检。
染液采用改良苯酚品红染液。
母液Ａ：3ｇ碱性品红，溶于100Ml70％酒精中（可长期保存）。
母液Ｂ：取10ml母液Ａ，加入90ml5％苯酚水溶液。
取45ml母液Ｂ，加入6ml冰醋酸和6ml37％福尔马林溶液，此即为苯酚品红染液。
改良苯酚品红：取2～10ml苯酚品红染液，加入98～90ml45％冰醋酸和1～1.8ｇ山梨醇。
即为所需染液。
染液配制过程中应注意：山梨醇的含量不可过多，以免出现结晶。
人X染色质的观察
染色质是细胞间期核周期不同阶段的存在形式。染色质主 要有两种类型：在细胞分裂期凝缩而在间 期松散(成为弥散状)的称为常染色质；在所 有时期一直凝缩着的称为异染色质。
• 实际上异染色质又可分为两类：一类是在 各种细胞中都处于凝缩状态，最晚进行复 制的异染色质，这类异染色质不含有结构 基因，没有什么“功能”，称之结构异染 色质；另一类则是在有些细胞或在一定的 发育时期和生理条件下才表现为凝缩状态 的异染色质，这类异染色质虽含有结构基 因，但从生理上讲，绝大多数基因是失活 的，称为兼性异染色质。如X染色质就是一 种兼性异染色质
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主要仪器、材料及试剂
（１）材料 口腔上皮细胞
（２）主要仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、 吸管。
（３）主要试剂 ①固定液 ②染色液
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主要仪器、材料及试剂
（１）材料 口腔上皮细胞
（２）主要仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、牙签、滤纸、 吸管。
（３）主要试剂 ①固定液 ②染色液
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实验方法及实验步骤
（1） 清水漱口三次以上，用灭菌牙签的钝 头刮取口腔颊部细胞(将第一次刮取物弃 去），涂于干净的载波片上使成一薄层，空 气中干燥。
（2）固定：60%冰醋酸中固定20min. （3）染色：加几滴改良苯酚品红染液染色
10-15min.清水冲去浮色。
（4）镜检： 在低倍镜下，可见口腔粘膜上皮细胞核为圆形或 卵圆形．细胞质不着色；换油镜，选择典型的可 计数细胞进一步观察，可计数细胞的判断标准是： 核较大、染色清晰、轮廓清楚、无皱褶及缺损， 染色质为细丝状或均匀的细粒，核膜周围无细菌 污染：在可计数细胞内，仔细寻找X染色质：X染 色质的特征是：染色深，轮廓消晰，平凸形、半 圆形、扁平形或三角形，大小为1—1.5um．多位 于核膜内侧缘：统计X染色质的阳性率(至少应观 察100个细胞)。
人类X染色质小体的检测实验报告
实验十二人类X染色质小体的检测实验报告赵宁宁（郭强，赵蔚，赵凯强）生物103班1002040310 2011年11月9日摘要在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，通常称为X染色质小体（或称巴氏小体，性染色质小体，X小体等）。
巴氏小体通常位于间期核膜边缘。
1949年，美国学者巴尔（M.L.Barr）等发现雌猫的神经细胞间期核中有一个深染的小体而雄猫却没有，这表明这种小体与。
在人类，男性细胞核中很少或根本没有巴氏小体，而女性则有1个。
以后研究表明，巴氏小体就是性染色体异固缩（细胞分裂周期中与大部分染色质不同步的螺旋化现象）的结果。
伴随着巴氏小体的进一步研究，科学家们对X染色体失活的研究产生了极大地兴趣。
1.引言学者们对X染色质小体的研究一直没有中断过，而且在逐步地取得着突破，并在遗传学研究中具有着很多重大的意义。
早期的研究因为取材的问题不便而收到限制。
现在制备和观察X染色质小体有两种传统的方法，分别用两种不同的材料。
本次试验利用人类的毛囊细胞作为实验材料制片染色，观察染色质以及X染色质小体。
2．实验材料、器具和试剂每个同学：女生的头发，显微镜，解剖针；载玻片，盖玻片。
每组同学：固定液（95％酒精冰醋酸=3:1，装在染色缸中），蒸馏水;45％醋酸，二甲苯，香柏油，镜头纸；卡包品红染液。
图1 头发及臂毛的结构图3.实验步骤3.1 获取实验材料本次试验所用的实验材料是毛囊细胞。
因男性细胞核中很少或根本没有巴氏小体，而女性细胞中则有1个，所以选取女生的毛囊细胞作为实验材料。
拔取一根毛根比较大的毛发,一般是女生的头发。
尽量选择颜色较浅的或者是白色的头发，这样就可以在制片中减少色素的干扰。
3.2 制片在一张干净的载玻片中央滴一滴45％的醋酸，将毛根浸渍在其中。
静置约5分钟，待毛根稍软后用镊子尖或解剖针尖将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下。
注意，此时不能用太大力量，否则可能将毛发上的色素细胞一起刮下，影响制片的效果。
性染色质：人体X-染色质观察
四、实验用具药品
1.仪器用具：显微镜、载玱片、盖玱片、剪刀、镊子、 酒精灯、牙签 2.药品试剂：改良品红、醋酸洋红、50%醋酸、蒸
馏水
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性染色质：人体X-染色质观察
五、实验步骤：
1.口腔颊部粘膜细胞的观察 用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮粘膜细胞，在 原位刮取2-3次，分别涂抹在干净载片上，待稍干后， 滴加1-2滴1%醋酸洋红染液，常温下染色2-5分钟，勿 使干燥，压片后镜检。 要点：先漱口
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性染色质：人体X-染色质观察
二、实验原理：
Barr小体特征及位置：它是处于失活状态的X染色体， 一般位于细胞核膜内侧边缘的一个深染区（较细胞核 要小），形状多样。 剂量补偿效应：是指XY型性别决定的生物，由X染色 体上的基因决定的性状在两性的表现几乎相同。即X染 色体上的基因的表达产物在雌、雄细胞中是等量的。 补偿的实现途径：1、X染色体转录速率的差异性，雄 性细胞中的X染色体转录速率＞雌性细胞中2条X染色 体的转录速率；2、雌性细胞中有一条2条染色体，在间期，有一条 呈松散状态，参加细胞生理活动；另一条保持异固缩 状态，我们称之为Barr小体。 由于Barr小体是处于失活状态，所以一般位于细胞核 内边缘。形状多样（微凸形、三角形、卵形、短棒形 等）。
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性染色质：人体X-染色质观察
二、实验原理：
人类X染色质观察
陈宗礼 齐向英
一、实验目的
初步掌握X-染色质标本的制作方法； 识 别人类细胞X-染色质的形态特征及所在位 置，为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提 供参考条件。
二、实验原理
1949年Barr等发现，在雌猫的神经细胞核内 有一个浓缩的深染小体，在雌性的细胞中没 有。后来了解，在雌体细胞中的两条X-染色 体在间期是有一条，（或这条的大部分）处 于凝集而不活动状态，从而形成了这种X-染 色质（或称性染色质，Barr’s body）后来进 一步发现。在所有哺乳动物的细胞中广泛从 在。
五、实验内容和步骤
3. 水洗：用蒸馏水冲洗两次，用吸水纸吸 去剩余水分。 4. 染色压片：稍干后滴加1-2滴2%乳酸醋酸 地衣红，室温下染色20-30分钟，勿使干 燥，然后加盖片复以吸水纸，用手指轻度加 压后待检。
五、实验内容和步骤
（二）毛发根部细胞涂片的制备： 1. 取材：拔取一根带有毛根的头发，自基 部截取2cm左右置载片上。 2. 预染：在毛根部加一滴地衣红染液预染 片刻。
二、实验原理
X-染色质是异染色质化的失活的X-染色体， 普遍存在于哺乳类雌体细胞中。人类在女性 两个X染色体中，有一个是失活的呈异固缩 状态（不包括胚胎发育早期及配子形成的时 期）。在间期核表现为深染的X-染色质。正 常情况大小约为1-1.5mm，频率在13-39%左 右，而在正常男性个体中缺乏这种现象（02%）。因而通过X-染色质的检查可鉴别胎儿 性别，并为判断性染色体异常引起的遗传病 提供参考资料。
三、实验材料
口腔黏膜细胞或发根细胞。
四、ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验器具和药品试剂
1. 器具：显微镜，洁净的载片和盖片，压 舌板，刮片或牙签，吸水纸。 2. 试剂：95%乙醇，5%醋酸，2%乳酸醋酸地 衣红。
人类X染色质(巴氏小体)制备与观察
人类X染色质（巴氏小体）的制备与观察摘要巴氏小体是由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在间期细胞核中形成的呈异固缩状态，贴近于核膜边缘的染色小体，在遗传学、细胞观察方面有重要意义。
实验中作者取人口腔颊部上皮细胞与发根毛囊细胞进行硫瑾染色操作，通过显微观察对巴氏小体进行识别与计数，描述巴氏小体的形态，并统计其在不同性别人体细胞中的出现率。
引言在哺乳动物体细胞间期细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体失活并呈异固缩状态，此即为巴氏小体。
又称X小体、性染色质，直径约1μm，通常位于间期核膜边缘。
1949年，加拿大学者Barr在雌性猫的神经元细胞核中发现一种染色很深的小体，而在雄性猫中则极少出现[1]。
通常人类男性细胞核中很少或没有巴氏小体，而女性有1个，性染色体异常的患者如XXY、 XXYY、XXX、XXXY等，巴氏小体的数量＝X染色体数量－1。
综合巴氏小体与哺乳动物性染色体的剂量补偿效应，Lyon M．F 于1961年提出Lyon 假说，主要内容有：(1)正常的雌性哺乳动物两条X染色体只有一条在遗传上有活性，另外一条失活；(2)X染色体失活是随机的。
因此表达是随机的，结果在杂合子中会出现嵌合现象（mosaic）。
例外：有袋类失活的X染色体全部是父方的。
(3)失活发生在胚胎发育的早期，如人在受精后的16天（5000-6000个细胞时）。
一个细胞的一条染色体一旦失活，这个细胞的后代细胞中该染色体均失活。
Lyon假说虽然可以解释一些问题但不是全部，如人类中的44AXO型个体表现为Turner 综合症、44AXXY表现为Klinefelter综合症。
随着生物学和医学的发展人们已经认识到单条X染色体失活现象是普遍存在的，但失活的染色体上存在失活区和非失活的。
如人类中位于X染色体上的基因，G6PD（葡萄糖-6磷酸脱氢酶）、AHF（抗溶血第Ⅷ因子）等是非失活的，而Xg血型基因是失活的。
巴氏小体的生物学观察，对于优生学中鉴别性别和预防性连锁疾病的发生，以及作为癌细胞核异常主要形态学特征之一鉴定癌细胞，有重要价值[1]。
实验十一 人类X染色质的观察
五、作业 作业
(1)观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性可数细胞为对照，分别计算显示X-染色质 细胞所占的百分比。 (2)观察中选绘4～5个典型细胞，示明X-染色基部截取 2 cm左右置载玻片上， （2）在毛根部加1滴2％乳酸醋酸地衣红染液， 片刻后再加1滴50％醋酸(或只加50％醋酸)， 低倍镜下观察。
（3）待毛根鞘软化后拨去毛干，重新加1滴 染液，覆以盖玻片， （4）在酒精灯上轻微加热后静置5 min，隔 一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。
一、实验目的 初步掌握观察与鉴别X染色质的简易方法 识别其形态特征及所在部位。
二、实验原理
剂量补偿效应
人类正常男性体细胞中只有1条X染色体，不失活， 故见不到X染色质； 女性的2条X染色体中，在间期时有一条不表现活 性而保持浓缩状态，因此易于用适当的染料加以 显示，成为便于观察的性染色质体(或称X-小体、 Barr小体)。
1材料正常女性口腔颊部黏膜毛发根部细胞2实验器具显微镜洁净的载玻片和盖玻片刮片吸水纸3实验药品和试剂95酒精50醋酸2乳酸醋酸地衣红1口腔颊部黏膜细胞的观察1用清洁灭菌的刮片从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞在原位刮取23次2分别涂抹在干净载玻片上每次可涂13片涂抹范围为12张盖玻片大小
人类X染色质的观察 实验十一 人类 染色质的观察
三、实验材料
1、材料
正常女性口腔颊部黏膜、毛发根部细胞
2、实验器具 实验器具
显微镜、洁净的载玻片和盖玻片、刮片、吸水纸
3、实验药品和试剂 实验药品和试剂
95％酒精、50％醋酸、2％乳酸醋酸地衣红
四、实验步骤
1、口腔颊部黏膜细胞的观察
（1）用清洁灭菌的刮片，从女性口腔两侧颊部 刮取上皮黏膜细胞，在原位刮取2～3次 （2）分别涂抹在干净载玻片上，每次可涂1～3 片，涂抹范围为1～2张盖玻片大小。
人类X染色质小体的制备和观察
人类X染色质小体的制备和观察实验时间2016.12.06晚摘要：本实验利用传统的细胞生物学方法，通过选取女性和男性口腔上皮细胞，制备人类X 染色质小体装片，并进行观察，对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
1引言1948年Barr发现雌性动物大多数组织中都存在着被碱性染料深染的小体，并称之为性染色质(sex chromatin)。
在之后的几年，Barr及其学生又相继研发了用皮肤活组织切片及口腔上皮细胞涂片检测性染色质的技术。
国际奥委会曾用使用检测性染色质的方法防止“伪娘”参加女子项目。
从大量的观察、统计的数据中，Harnden归纳出一个细胞中性染色质数与一个个体中所含的X染色体数、倍性的关系：一个细胞中性染色质数(最大值)=X染色体数-倍性/2。
本实验利用传统的细胞生物学方法，通过选取女性和男性口腔上皮细胞，制备人类X染色质小体装片，并进行观察，对X染色质小体的形态特征进行辨别。
最后对奥运利用巴氏小体进行性别检测存在的问题进行分析。
2实验材料2.1实验材料每一个学生：显微镜，载玻片，盖玻片，牙签，一次性水杯，镊子，解剖针。
每一组学生：引用矿泉水，固定液(95%乙醇：冰乙酸=3:1，装在染色缸中)，蒸馏水；70%、95%乙醇，无水乙醇，45%乙醇，5mol/LHCl，记号笔；二甲苯，香柏油，镜头纸；石炭酸品红染液。
2.2实验步骤2.2.1获取实验材料取一干净载玻片，用记号笔在即将涂细胞的一面作个标记。
用水将口漱净，尽可能除去口中杂物。
然后用牙签钝头在口腔(颊内侧)用力刮取，弃去第一次得到的刮取物，在同一部位继续刮取以取得深层的表皮细胞，将刮得的细胞涂抹在干净的载玻片上，反复几次，使玻片上的材料尽量抹厚些。
实验材料选自同学口腔上皮细胞。
2.2.1染色及制片在晾干的玻片上直接滴上石炭酸品红染料,染色10分钟，盖上盖玻片，吸去多余的染料，放在显微镜下观察[1]。
X小体的观察
。
250
,
在酒 克 地衣
,
第三 是 用猩 红
,
快 绿 染色液 染 色
,
将 口腔
,
精灯 上 加 热 至 微 沸
红 使其溶解
,
然 后 慢慢 地加 入
,
2
粘膜 细 胞 涂 于 载 玻 片 上
0 分钟 1 红 染 料染色 2 分钟 用 快绿 染 1一
5 分钟
, , ,
在9 5 % 的 酒 精 中固定
2
待 冷却后
4
小时
分l 0 % 8 J 在7
5 % 9
、
1。 劝% 酒 精 中脱 水
,
x
各 2 分钟
小体
x
用二 甲苯 透 明 3 次 ( 每次 2 分钟 )
。
用
中性树胶 或 无 色指 甲油封片
成 的 小 体标本
,
用 这 种染 色 法制
、
细 胞质 呈 浅绿 色 细胞核 呈 深
,
绿色
人类 口 腔粘膜 细 胞 中小的 体 ( 醋 酸乳 酸 地 衣 红 染 色 )
。
在显 微镜 下 观 察到
x
,
这就是 小体
x
后 用
,
,
SN
H
0 分钟 C I 水解 1
经 自来 水 蒸馏水
,
典 型 的 小体是 一 直径 约 l 微米的结构 多数 紧 靠核膜 边缘
的 其 他 部位
。
大
、
冲 洗质用 硫 荃 染 色液染 色 3 0 分钟 中分 色 胶 封片
,
在7 0 % 酒精
,
只 有很 少 一 部份出 现 在核
x
小体 镜检
人类X染色质小体的检测
人类X染色质小体的检测摘要X染色小体是哺乳动物真核细胞中随机或印记失活的X染色体，该变化有x染色体失活中心调节。
失活的目的是使X连锁基因在两性间的表达水平达到一个平衡的过程，在遗传学上称为剂量补偿效应。
本实验采用有Moor发明的并广泛的运用于现在的临床和研究的颊涂片法（buccal smear method），以女性的口腔上皮细胞为材料，经染色后直接加盖玻片观察。
发现其是一个很小的深色的点，经常存在于细胞核的边缘。
1引言X染色质小体又称巴氏小体、性染色质小体等，是由Barr和其研究生Bertram首先发现并提出的。
当时广泛的运用于临床诊断中。
这个发现开启了一个全新的研究领域。
在20世纪60年代Ohno和Lyon分别提出了“Ohno定律”和“Lyon假说”使人们逐渐认识到x染色质小体是一条随机失活的想染色体。
这些工作激发了人们对x染色体失活方面的研究兴趣。
对其进行了深入的探讨，结果显示器失活与染色体上的XIC（X染色体失活中心）有关。
2 实验材料和方法2.1 实验材料显微镜，载玻片，盖玻片，消毒牙签，固定液（95％酒精冰醋酸=3:1，装在染色缸中），香柏油，镜头纸，卡包品红染液。
2.2 实验方法2.2.1 材料的获取本实验采用的材料是女性的口腔上皮细胞，将口漱干净，用消毒牙签在口腔一侧用力刮取。
弃去第一次的然后在同一个地方刮取，涂在干净的载玻片上，反复多涂几层。
然后迅速的将其插入到3-5min。
2.2.2 制片在晾干的固定好的装片上用卡宝品红染色10min，然后直接加盖玻片，也可用95%的酒精分色1-3min，再用无水酒精分色两次，每次1min再加盖玻片。
用油镜观察x染色质小体。
3 实验结果在光学显微镜下，X染色质小体是一个结构紧密，轮廓清晰的染色较深的小体。
通常位于细胞核边缘，直径大约1微米。
呈三角形、卵形、短棒形、或双球形。
一般来说，在动物细胞中，对于每一个物种来说，X染色质小体的位置是恒定的，它可以处于靠近核仁、靠近核膜或者是自由地处于核内区内三种位置。
人体X-染色质的观察
观察与区别X染色质：通过实验 初步掌握简易方法，识别其形态及所 在部位，为进一步研究人体染色质的 畸变与疾病提供参考条件。
二.实验原理
1949年Barr等发现，在雌猫的神经细 胞核间期有一个凝缩的深染小体，而在雄 性的细胞中没有。
后来了解，在雌体中的两条X染色体在 间期时有一条(或这条的大部分)处于凝集而 不活动状态，从而形成了这种X-染色质(或 称性染色质、Barr小体)。
1932年美国遗传学家首先在果蝇中发 现了剂量补偿效应，并把它看作是维持雌 雄两性生物基因表达的一致所特有的一种 遗传效应。
剂量补偿效应：在XY型性别决定机制 的生物中，使性连锁基因在两种性别中有 相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。
进一步研究发现，所有哺乳类雌体细胞中都 有一条这种表现的X染色体；
五.实验方法和步骤
1.口腔颊部黏膜细胞的观察：
a.刮取口腔黏膜细胞: 漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜 细胞，原位刮2-3次，分别涂抹在干净载片上，每 次可涂1-2片，涂抹范围约盖片大小(男性做对照)。 b.染色: 待稍干后，滴加1-2滴改良苯酚品红，染色10-15分 钟。
c.压片: 加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。
★ X-染色质的形态：
1.结构致密的浓染小体，轮廓清楚； 2.大小约1u左右，常附着于核膜边缘或靠
近内侧； 3.其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒
形及双球形；
FEMALE
MALE
三.实验材料
1.女性口腔颊部黏膜细胞 2.毛发根部细胞
四.实验仪盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红
六.实验结果
1.观察50个女性可数细胞，同时观察50个男 性者为对照，分别计算显示X-染色质细胞 所占的百分比。
人类X染色质小体的检测 山东大学
科目遗传学实验题目人类X染色质小体的检测人类X染色质小体的检测摘要X染色质是指雌性哺乳动物体内的体细胞在间期细胞核中，除了一条X染色体外，另一条呈固缩状态的染色质结构，也称巴氏小体。
该特殊结构曾被用于检测奥运女选手遗传性别。
本次实验采用人口腔黏膜细胞和发根细胞为标本，通过硫瑾染液染色，在显微镜下观察巴氏小体部位和形态特征，并进行简单计数统计，估计自己具巴氏小体的细胞比率。
1.引言1948年，Barr的研究生Bertram在研究长时间刺激后神经元是否产生细胞学变化的实验时，观察到核仁附近有一种染色很深的小体，并且存在于部分细胞之中。
Barr通过观察标本，发现该结构与性别有关，称其为“核仁随体”并推测该小体是由两条性染色体的异染色质衍化而来的。
随着人类核型分析技术的成熟，X染色质小体逐渐被证实并且广泛用于大规模筛检X染色体数畸变个体。
1960年，Ohno和Hauschka发现X染色质小体实际上是一条在细胞分裂间期，收缩的、异染色质化的X染色体，与核仁关系不大。
后续研究表明，X染色质小体是由于胚胎发育早期X染色体失活造成的，在X 染色体长臂靠近着丝点的一段序列控制X染色体的失活。
本实验以人类口腔黏膜细胞和发根细胞为标本，经解离、硫瑾染液染色和压片后，观察巴氏小体的部位和形态，通过简单的计数，估计具巴氏小体的细胞比率。
2.材料和方法2.1 实验材料显微镜，牙签，镊子，解剖针，载玻片，盖玻片；冰醋酸，蒸馏水，95%乙醇，1MHCl，染液：硫瑾染液。
2.2 实验方法2.2.1 获取实验材料实验一：口腔黏膜细胞先漱口2-3次，尽可能除去口中的杂物。
用牙签钝头在口腔一侧用力刮取，弃去第一次的刮取物，在同一部位用另一根牙签重新刮取，将刮到的细胞涂在清洁干燥的载片上，反复几次，晾干。
实验二：发根细胞拔取带毛囊的一根头发，将其置于45%的醋酸溶液中解离5Min，等毛根松软之后用解剖针尖将外层毛囊的组织细胞轻轻刮下。
用解剖针将载玻片上的组织细胞摊平。
X小体的检测和多倍体诱发实验
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实验材料： • 口腔粘膜（男女）、发根细胞（女）。 实验器具和药品： • 1.器具：普通显微镜、恒温水浴锅、载玻
片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、纱布等。 • 2.药品：95%乙醇、乙醚、改良碱性品红。
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实验步骤：
1.取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除 去细菌和食物残渣；用洁净的牙签从口腔 两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去， 将第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻 片上。
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Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细 胞核膜边缘，这主要是因为这条染色体处在 失活状态所致，Morishima等利用放射性标 记的方法证实了失活状态的性染色体与其他 异 染 色 质 （ heterochromatin ） 一 样 ， 在 DNA 复 制 时 总 落 后 于 其 他 常 染 色 质 ， 且 大 多出现在核膜边缘。性染色质的数目是X染 色体数减1。故可以根据X小体的有无、数 目来鉴定胎儿的性别和性别畸形。
二、实验原理
• 秋水仙碱是细胞有丝分裂的抑制剂，它的主要 作用是抑制纺锤丝微管的形成，因而抑制了染 色体移向两极的运动，使细胞停滞在中期状态 而不能分裂成二个新的子细胞，而秋水仙碱对 染色体结构并无明显的影响，对细胞也不产生 严重毒害，细胞解除秋水仙碱环境后仍可正常 生长分裂，因而出现细胞含有多个染色体组的 情况，亦即构成了多倍体细胞。如果用秋水仙 素处理植物的根尖，则在根尖分生区内可检测 到大量染色体加倍的细胞，若处理植物幼苗的 芽，则可以得到染色体加倍的植株。
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实验原理：
• 1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞 时，发现雌猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染 料染色的小体而雄猫没有。后来发现人类正常女 性口腔上皮、阴道上皮、皮肤、羊水等的细胞中 都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有 哺乳动物雌体细胞中都有同样的一个小体。一般 认为这种小体是两个X染色体中的一个在间期发 生异固缩形成的，故而将其称为X小体，X染色 质，又称为Barr小体。
形态学实验：人类X小体的检测
➢ 克氏（Klinefelter′s）综合征，先天性睾丸发育不全综 合征，患者为男性但有一个巴氏小体，核型是47，XXY 。
➢ 特纳氏（Turner‘s）综合征，先天性卵巢发育不全综合征， 患者为女性但却无巴氏小体，核型是45，XO 。
➢ 超雌：XXX, XXXY有2个巴氏小体等。
现的个数， 计算X小体的阳性率。 讨论
4.滴片：吸取细胞悬液自10—20cm高垂直向下滴在 一张预冷的载玻片上（2-3滴），标记，空气风干 或烘干。
目的是形成细胞单层，使染色体分散，便于观察，故从高处向下滴片， 让液体分散开，同时用冰片的目的是降低液体的表面张力。
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实验方法
5.水解：玻片放入盐酸缸中，室温水解10min后取 出，自来水细水漂洗数秒钟，洗去多余盐酸，空 气风干或烘干。
2.低渗：加入5ml预热的低渗液，轻轻混匀，37℃ 低渗10min。
低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使粘 附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形 态。
3.固定： （1）加入新鲜配制的Carnoy固定液1ml，混匀，室
温预固定2min，1000r/min离心8min，弃上清。
取材前需用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣；用 洁净的牙签钝端从口腔两侧颊部刮取粘膜，为防止后面的 离心损耗，应尽量多取一些。
弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时，应 小心吸取。
加入低渗液后，轻轻混匀，不能太用力，以防核膜破裂。 固定液使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果。 载玻片于临用前在-20度冰箱中取出，现用现取，以防温
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ12
实验方法
（2）加入固定液5ml，吹打混匀，室温固定15min， 1000r/min离心10min，弃上清。
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证据1：玳瑁猫（三色猫） X染色体上：O—黄色 o—黑色 常染色体上：S—白色，不完全显性，有上位作用， 决定白斑的分布，SS分布范围广，Ss仅限于腹部和四 肢。 基因型XOXoS_，三色猫都是雌的，偶然有XOXoYS。 可用两条X染色体中的一条的不活化来说明: 在有些 细胞中，带有o的X是活化的，显黄色。在另一些细胞 中，有O的X是活化的，显黑色。
Lyon假说（Lyon hypothesis）
①雌性哺乳动物细胞内只有一条X染色体有活性（Xa），另一 条X失活并固缩（Xi)，表现为性染色质体； ②失活发生在胚胎的早期（妊娠16天,细胞数5000-6000，植 入子宫壁时）,异染色质化。X上的基因随之处于失活状态 （不是全部基因，有些基因能逃避失活）。 ③两条X染色体哪条失活，是完全随机的。某一个一旦失活以 后，在相继的细胞世代中，这个X总处于失活状态。 ④雌体中两类细胞相间存在，杂合体雌性X连锁基因作用上是 嵌合体（mosaic）
2、画2～3个典型细胞，示X小体的形态和所处部位。
3. Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有什 么用途？
（2）6-PGD杂合体细胞电泳实验
证据3：X染色体数与Barr小体数
X染色体显示异固缩现象。在靠近核膜的地方，成为性 染色质体（sex-chromatin body），而雄性没有。细胞学 的研究发现Barr小体的数目正好是X染色体数目减1（n-1)。 总之， X染色体在哺乳动物中的失活是指在任何二倍 体的哺乳动物细胞中，无论存在几条X染色体，都只有一 条xX染色体保持活性。这个过程使X连锁基因得到剂量补 偿，保证染色体为XX的女性和XY的男性具有相同的有效基 因产物。
由雌性哺乳动物体细胞中失活的X染色体在 间期细胞核中呈异固缩状态（染色质高度螺旋 化），形成直径约1μm大小，贴近于核膜边缘的 染色小体，又称为X染色质或性染色质。 剂量补偿效应（dosage compensation effect）——指具有两份或两份以上的基因量的 个体与只有一份基因量的个体的基因表达趋于一 致的遗传效应。
七、作业及思考题
1 .什么是剂量补偿效应？ 2. 画2～3个典型细胞，示X小体的形态和所 处部位。 3. Barr小体分析技术在人类遗传学工作中有 什么用途？
1 .什么是剂量补偿效应？
使细胞核中具有两份或两份以上基因的个体和只 有一份基因的个体出现相同表型的遗传效应。 一个细胞核中某一基因的数目称为基因剂量。在以 性染色体决定性别的动物中，常染色体上的基因剂 量并无差别，因为雌雄两性动物的常染色体的形态 和数目都相同。但是对于性染色体来讲，包括人类 在内的哺乳动物雌性个体的每一体细胞中有两条X 染色体，所以在X染色体上的基因剂量有两份，而 雄性个体只有一条 X染色体，基因剂量只有一份。
实验十一
人类X小体的观察
一、实验目的
1、了解X染色体失活假设及计量补偿效应的机制。
2、了解人类性染色质的检查方法。
二、实验原理
1949年Barr和Bertran在研究猫的间期神经细胞时，发现雌 猫体细胞核膜边缘有一个可被碱性染料染色的小体而雄猫没 有。后来发现人类正常女性口腔粘膜细胞、皮肤、羊水等细 胞中都有一个这样的小体，继而有人进一步发现所有哺乳动 物雌体细胞中都有同样的一个小体。一般认为这种小体是两 个X染色体中的一个在间期发生异固缩形成的，故而将其称 为X小体，X染色质，又称为Barr小体。 Barr小体出现在哺乳动物雌性个体细胞的细胞核膜边缘， 这主要是因为这条染色体处在失活状态所致，在DNA复制时 总落后于其他常染色质，且大多出现在核膜边缘。性染色质 的数目是X染色体数减1。故可以根据X小体的有无、数目来 鉴定胎儿的性别和性别畸形。
五、实验步骤
口腔粘膜
①取材:受检查者用水漱口数次，尽可能除去细菌和食物残渣； 用洁净的牙签从口腔两侧颊部刮取粘膜，第一次刮取物弃去，将 第二次、第三次刮取物涂在干净的载玻片上。 ②软化:滴加软化液（50%醋酸或盐酸）软化5min。用滤纸吸取 多余的软化液。 ③ 染色制片:滴加1～2滴改良品红于室温下染色10min（勿使干 燥），加上盖片，垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
5.10 A calio cat (a), where the random distribution of orange and black patches demonstrates the Lyon hypothesis.
证据2：葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 葡萄糖-6磷酸脱氢酶（G-6PD）的活性在男女间没 有区别。根据淀粉凝胶电脉的差异，可分为A型和B型。 由X上一对等位基因GdA和GdB控制。只有一个氨基酸 的差异。杂合体AB显示两条带。但从皮肤上取很小一 片，用胰蛋白酶处理，使细胞分散，单独培养，发现， 有的细胞群显示A型，有的显示B型，但没有显示两条 带的。
5.9 Barr body occurrence in various human karyotypes, where all X chromosomes except one (N-1) are inactivated.
三、实验材料
口腔粘膜（女）、发根细胞（女）。
四、实验器具和药品
1.器具：普通显微镜、荧光显微镜、恒温水 浴锅、载玻片、盖玻片、镊子、牙签、滤纸、 纱布等。 2.药品：醋酸、盐酸、改良碱性品红。
发根细胞
①取女性带毛根毛发一根,放在一干净的载玻片上。
②软化:滴加软化液（50%醋酸或盐酸）软化5min。 ③ 加一滴染液后室温下放10min （勿使干燥），加上盖玻片， 垫上滤纸用手指轻轻加压即可。
人口体： 油镜下可见X小体为 一致密的浓染小体。 轮廓清晰，约1um，常 附着于核膜边缘或靠 边内侧，其形态有三 角形、卵形、扁平形 等。 正常女性间期细胞 核中X小体比例约 30%～50%。