洁净手术室空气采样方法
手术室空气采样方法
层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。
（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。
每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。
标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。
单皿最大值不应超过平均值3倍。
（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。
标准：I级<30cfu/m3；II级<150cfu/m3；III级<450cfu/m3；IV级<500cfu/m3。
（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降后在37℃下培养24h。
标准：同回风口动态平板采样法标准。
层流手术室静态（空态）时空气采样方法：1、采样方法：（1）当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；当送风口分散布置时，按全室统一布点方法检测。
（2）沉降法采样时，用直径9cm的培养皿，在空气中暴露30min，37℃培养24h，培养皿中的菌落数（cfu）代表空气中沉降下来的细菌数，以个/皿表示。
（3）浮游法采样时，用裂隙采样器在空气中随机采样30min，对采样皿或采样条培养得出的菌落数（cfu），代表空气中浮游下来的细菌数，以个/m3表示。
2、采样高度：（1）采样点可布置在地面上或不高于地面的任意高度上；（2）在手术区检测时应无手术台；当手术台已固定时，检测高度应在台面之上。
3、布点方法：（见表1）4、采样注意事项：（1）在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上；（2）采样后的培养基条或培养皿，应37℃条件下培养24h，并计算菌落数，菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位；（3）当采用浮游法测定浮游菌浓度时，细菌浓度测点数应和被测区域的含尘浓度测点数相同，且宜在同一位置上。
手术室空气净化微生物监测
手术室管理与监测一、手术室空气净化微生物监测洁净手术室空气净化微生物监测包括静态〔空态〕空气采样和动态空气采样两种方法，采样可以选择平皿沉降法和空气样器法两种方法，我院采用平皿沉降法。
1、静态〔空态〕空气采样法（1）采样时间：新房验收、净化设备检修或更换后，在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样。
（2）采样方法：①静态〔空态〕空气采样宜在其他项目检测完毕，对全室外表进行常规清洁消毒之后进行。
②当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测，当送风口分散布置时，全室统一检测。
采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上。
空气采注：分布在集中送风面正投影区角的采样点距离邻近两边的距离位0.12米。
③当用平皿沉降法采样时，采样布点数既要不少于〔表1〕中的布点数，又应满足〔表2〕规定的最少培养皿数的要求表2 平皿沉降法最少培养皿数被测区域洁净度级别最少培养皿数〔Ø 9cm,以沉降30分钟计〕100级131000级 510000级 3100000级 2300000级 2④不管用何种方法检测细菌密度，都必须有2次空白对照。
第1次对用于检测的培养皿或培养基条做比照试验，每批1个对照皿。
第2次是在检测时，每室或每区1个对照皿，对操作过程做对照试验，模拟操作过程，但培养皿或培养基条打开后应又立即封盖。
两次对照结果都必须为阴性，整个操作应符合无菌操作的要求。
⑤采样后的培养基或培养皿，应立即置于36℃+1℃温箱培养48小时，计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后一位。
(3)结果判断：我国洁净手术室的等级标准以及主要洁净辅助用房等级标准分别见表3表3 洁净手术室的等级标准〔静态或空态〕等级手术室沉降法细菌最大平均密度外表最大空气洁净度级别名称手术区周边区染菌密度手术区周边区I 2 100级1000级手术室Ø9皿Ø9皿II2 1000级10000级手术室Ø9皿Ø9皿III一般洁净2个/30min 4个/30min 5个/cm2 10000级100000级手术室Ø9皿Ø9皿IV 准洁净5个/30min ·Ø9皿5个/cm2 300000级手术室注：I级眼科专用手术室周边区按10000级要求表4 洁净辅助用房的等级标准〔静态或空态〕等沉降法细菌最大平均密度外表最大染菌密度空气洁净度级别级〔个/ cm2〕I· Ø9皿 5 局部100级· Ø9皿其他区域1000级II· Ø9皿 5 10000级III4个/30min · Ø9皿 5 100000级IV5个/30min · Ø9皿 5 300000级注：细菌密度是直接所测的结果，不是沉降法和采样器法互相换算的结果。
空气培养采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）图2四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开后盖面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养24小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
5.放置培养皿示意图：盖面朝下斜扣到底盘A边上培养底盘A六、洁净室空气细菌菌落总数标准。
空气培养采样方法
空气培养采样方法 Jenny was compiled in January 2021医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）图12．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）图2四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开后盖面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
21.2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养24小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
5.放置培养皿示意图：盖面朝下斜扣到底盘A边上培养底盘A六、洁净室空气细菌菌落总数标准。
空气培养的采样方法
医院惯例空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法 1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确流露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与尺度）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通呵护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与尺度一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样安插点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样安插点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
采样安插点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求： 1.送风口集中安插时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散安插时，全室统一检测，测点可均布，不该安插在送风门正下方；2.采样点可安插在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边沿0.12m，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法)采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80—150厘米。
三、布点方法1。
面积≤30 m2，设一条对角线取三点,即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1)2．室内面积〉30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西,南，北距墙均1米（图2)四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿,打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后,送检培养。
五、结果分析I类区域:<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：〈500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域:层流洁净手术室、层流洁净病房(参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房.Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域:传染病科及病房.洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级:共放9个培养皿,其中手术区域3点,周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级:共放7个培养皿，其中手术区域3点,周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级:面积〉30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求： 1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时,全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面0。
8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m,培养皿放置30分钟；3。
采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数,菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
环境卫生学监测空气采样方法
采样时间：
洁净手术室静态（空态）时空气采样方法（沉降法）
未采用洁净技术净化空气的房间采用平板暴露法
• 将普通营养琼脂平皿（φ90mm）放置各采 样点，采样高度为距地面0.8m－1.5m；
• 采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露 规定时间（Ⅱ类环境暴露15min，Ⅲ、Ⅳ类 环境暴露5min）后盖上平皿及时送检。
采样方法
结果判定：
• 洁净手术部和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总 数符合 GB50333 的要求。
• Ⅱ类区域：细菌总数 ≤ 4cfu/15min·平皿 • Ⅲ、Ⅳ类区域：细菌总数 ≤ 4cfu /5min ·平皿
监测部门
医院对感染高风险部门如：手术室、产房、 介入手术室、新生儿室、母婴同室、血液净化室 的空气净化与消毒质量进行监测。
环境卫生学监测 空气采样方法
主要内容：
• 一、空气消毒效果监测采样方法 • 二、环境卫生学监测结果分析流程 • 三、紫外线灯管强度监测方法
• 环境卫生学监测的目的： • 监测消毒效果是否达到标准要求，追
寻消毒方法是否正确。 • 规范采集标本的意义： • 采集标本准确，无污染，培养结果准
确
一、空气消毒效果监测采样方法
2、根据科室监测计划以科室为单位每季度到医院感 染管理科领取环境卫生学监测检验申请单，采样前一 日到微生物实验室领取培养皿，次日空气消毒后，进 行诊疗活动前进行采样，并在2小时内送检。（培养 皿上注明：科室、采样地点、时间）
3、手卫生调查：依从性、正确率、知晓率汇总，每 月25日前通过OA上报至医院感染管理科。
照射强度：
普通30 W直管型紫外线灯辐照强≥90μW/cm2为合格； 使用中紫外线灯辐照强度≥70 μW/cm2为合格 30 W高强度紫外线灯的辐射强度≥180 μW/cm2为合 格。
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
洁净手术室空气采样方法精选版
洁净手术室空气采样方法Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】洁净手术室空气采样方法1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。
2、采样方法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。
（2）平板暴露法平板直径9cm、采样高度1.5m，暴露5min。
3、检验方法平板37℃培养48h。
计数菌落数并分离致病菌。
4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。
（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。
每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。
标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。
单皿最大值不应超过平均值3倍。
（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。
标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500 cfu/m3。
（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降0.5h后在37℃下培养24h。
手术室空气采样方法
1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。
2、采样方法：（1）布点：室内面积w 30 m2，设内、中、外对角线点，内外点距墙1m ;室内面积＞30 m2，设四角及中央5 点，四角点距墙1m。
（ 2 ）平板暴露法平板直径9cm 、采样高度 1.5m ，暴露5min 。
3、检验方法平板37 C培养48h。
计数菌落数并分离致病菌。
4 、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3 ）=A X TA 为平板面积（cm2 ）; T 为暴露时间（min ）;N 为平均菌落数（cfu ）5、结果判定(1)I、II类区域，细菌总数W 10cfu/cm3 ，并未检出致病菌为消毒合格。
(2)III类区域，细菌总数W200cfu/cm3并未，检出致病菌为消毒合格。
(3)IV类区域，细菌总数W500cfu/cm2并未，检出致病菌为消毒合格。
6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法(沉降法)或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。
(1)回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术 2 小时、手术结束前抽检3-4次。
每个回风口中部摆放3个倾斜30C,①90培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。
标准：每皿菌落计数平均值应符合表 4 标准要求。
单皿最大值不应超过平均值 3 倍。
(2)动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行 4 小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。
标准：I 级＜30cfu/m3 ; II 级＜150 cfu/m3 ; III 级＜450 cfu/m3 ; IV 级＜500 cfu/m3 。
（3）其他洁净用房在当天上午 1 0时和下午4时各测 1 次，在每个回风口中部摆放3个①90培养皿，沉降0.5h后在37 C下培养24h。
标准：同回风口动态平板采样法标准。
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养(自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80—150厘米。
三、布点方法 1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1)2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西,南，北，中取五点,其中东，西,南，北距墙均1米（图2)四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘,在采样点准确暴露5分钟后,送检培养.五、结果分析I类区域：〈10 cfu/m3II类区域:<200 cfu/m3III类区域:<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间.Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图:二、局部千级,周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点,面积≤30 m2布放2点。
五、要求： 1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时,全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2。
采样点可布置在地面上或不高于地面0。
8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0。
12m,培养皿放置30分钟;3。
采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时;4.然后计数生长的菌落数,菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位.5.放置培养皿示意图：盖面朝下斜扣到底盘A边上六、洁净室空气细菌菌落总数标准。
洁净手术室空气采样方法
洁净手术室空气采样方法悬浮菌采样法是最常用的洁净手术室空气采样方法之一，其原理是将空气中的悬浮颗粒捕集下来，并通过培养方法验证其菌落形成单位（CFU）的数量。
悬浮菌采样常用的工具有空气采样器、以及标准方法中规定的培养基。
在采样前，首先需选择合适的采样位置，包括手术台、空调出风口、病房边墙等，然后将采样器置于采样位置，按照采样器的使用说明操作，使其吸收一定量的空气样品。
采样结束后，将采样器中的培养基进行培养，并计算出菌落形成单位，从而评估空气中的微生物水平。
震荡均衡法是另一种常用的洁净手术室空气采样方法，它主要通过震荡的方式使悬浮颗粒沉降到培养基上，然后进行培养与计数。
在使用震荡均衡法进行采样时，首先需要选择合适的采样位置，通常是手术台的稍上方或空调出风口，然后将震荡采样器放置在采样位置，并按照设备的使用说明进行操作。
采样结束后，将采样器中的培养基进行培养，并计算出菌落形成单位，从而评估空气中微生物的水平。
半封闭法采样法主要是通过半封闭的设备捕集空气样本，再将样本中的微生物培养，从而评估空气质量。
在使用半封闭法进行采样时，首先需要选择合适的采样设备，一般有采样盘和培养皿。
将采样盘放置在采样位置，然后将空气样本吸入盘中，并尽量封闭盘与外界环境的接触。
之后将采样盘上的培养皿进行培养，并计算出菌落形成单位，从而评估空气中微生物的水平。
需要注意的是，以上三种方法都是传统的微生物培养方法，无法对所有类型的微生物进行快速、准确的检测。
因此，近年来也出现了一些新的技术，如聚合酶链式反应（PCR）和荧光定量PCR（qPCR）。
这些方法可以快速检测微生物的存在，并准确计算其数量。
但这些新方法的应用还需要进一步研究和验证。
在进行洁净手术室空气采样时，还需要注意采样器的使用方法和采样时间的选择。
采样器的使用应按照说明进行操作，避免操作不当导致结果不准确。
采样时间的选择应根据手术室的使用情况和要求进行，一般建议至少进行30分钟以上的连续采样。
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
空气培养操作方法
空气培养操作方法1、采样时间I类环境在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样；II类、III类、IV类环境在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样。
2、人员要求：测试人员穿着整洁，戴口罩，手消毒或戴手套。
动作要轻，避免产生污染干扰。
3、采样方法（1）I类环境：被测区域洁净度级别最少培养数*（ф90mm，沉降计）最大平均浓度（个/30min·ф90mm皿）洁净手术室I级洁净手术室II级洁净收术室III级洁净手术室IV级洁净手术室100级区13点，周边1000级区8点，各有一个对照皿。
1000级区5点，周边10000级区6点，各有一个对照皿。
10000级区3点，周边100000级区4点，各有一个对照皿。
面积>30m2时4点，面积≤30m2时2点，各有一个对照皿。
手术区，周边手术区,周边手术区，周边洁净辅助用房I级（1000级）II级（10000级）III级（100000级）IV级（300000级）局部100级区13点，1000级区5点3点2点2点局面，周边（2）II类、III类、IV类环境采用平板暴露法。
室内面积≤30m2，设内中外对角3点，内、外点应距墙壁1米处；室内面积>30m2，设4角及中央5点，4角的布点部位应距墙壁1米处。
将普通营养琼脂平皿（90mm）放置各采样点，采样高度为距离地面—；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间（II类环境暴露15min；III类、IV类环境暴露5min）后盖上平皿盖及时送检。
4、放置方法、次序：放置培养皿从平面中最靠里的房间布置，依次向外布，最后人员撤出。
每间房间也是从房间最靠里的地方开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。
收取培养皿时顺序相反，从最外边的房间开始收，每间房间从最靠门的培养皿开始收，最先布置的最后收。
培养皿放置后后拿开皿盖，搭放在皿边上，沉降后30分钟，盖上盖子收起。
5、对照皿：对照皿放置方法为将皿盖拿开后，马上重新盖上，同样放置30分钟后，收起。
洁净手术室空气采样方法
洁净手术室空气采样方法1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。
2、采样方法：（1）布点：室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。
（2）平板暴露法平板直径9cm、采样高度1.5m，暴露5min。
3、检验方法平板37℃培养48h。
计数菌落数并分离致病菌。
4、平板暴露法结果计算50000N细菌总数（cfu/m3）=A×TA为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）5、结果判定（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。
（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。
每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。
标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。
单皿最大值不应超过平均值3倍。
（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。
标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500 cfu/m3。
（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降0.5h后在37℃下培养24h。
标准：同回风口动态平板采样法标准。
层流手术室静态（空态）时空气采样方法：1、采样方法：（1）当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；当送风口分散布置时，按全室统一布点方法检测。
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积≤30 m2，设一条对角线取三点，即中间一点，两端各距墙1米处各取一点（图1）2．室内面积>30m2，设两条对角线，东，西，南，北，中取五点，其中东，西，南，北距墙均1米（图2）四、采样方法用9厘米直径普通琼脂平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：<10 cfu/m3II类区域：<200 cfu/m3III类区域：<500 cfu/m3六、附录Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养方法与标准）。
Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
Ⅳ类区域：传染病科及病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6点。
采样布置点示意图：三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级：面积>30m2布放4点，面积≤30 m2布放2点。
五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘，培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后１位。
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洁净手术室空气采样方
法
Revised as of 23 November 2020
洁净手术室空气采样方法
1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。
2、采样方法：
（1）布点：
室内面积≤30 m2，设内、中、外对角线3点，内外点距墙1m；室内面积 >30 m2，设四角及中央5点，四角点距墙1m。
（2）平板暴露法
平板直径9cm、采样高度，暴露5min。
3、检验方法
平板37℃培养48h。
计数菌落数并分离致病菌。
4、平板暴露法结果计算
50000N
细菌总数（cfu/m3）=A×T
A为平板面积（cm2）； T 为暴露时间（min）；N 为平均菌落数（cfu）
5、结果判定
（1）I、II类区域，细菌总数≤10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
（2）III类区域，细菌总数≤200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
（3）IV类区域，细菌总数≤500cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法：
要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法(浮游菌法)检测细菌菌落总数。
（1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术2小时、手术结束前抽检3-4次。
每个回风口中部摆放3个倾斜30℃，Φ90 培养皿，暴露30分钟后，37°C培养24小时。
标准：每皿菌落计数平均值应符合表4标准要求。
单皿最大值不应超过平均值3倍。
（2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行4小时等，选择不少于3个程序，测定细菌菌落总数。
标准：I级<30cfu/m3 ；II级<150 cfu/m3；III级<450 cfu/m3；IV级<500
cfu/m3。
（3）其他洁净用房在当天上午10时和下午4时各测1次，在每个回风口中部摆放3个Φ90培养皿，沉降后在37℃下培养24h。
标准：同回风口动态平板采样法标准。
层流手术室静态（空态）时空气采样方法：
1、采样方法：
（1）当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测；当送风口分散布置时，按全室统一布点方法检测。
（2）沉降法采样时，用直径9cm的培养皿，在空气中暴露30min，37℃培养24h，培养皿中的菌落数（cfu）代表空气中沉降下来的细菌数，以个/皿表示。
（3）浮游法采样时，用裂隙采样器在空气中随机采样30min，对采样皿或采样条培养得出的菌落数（cfu），代表空气中浮游下来的细菌数，以个/m3表示。
2、采样高度：
（1）采样点可布置在地面上或不高于地面的任意高度上；
（2）在手术区检测时应无手术台；当手术台已固定时，检测高度应在台面之上。
3、布点方法：
洁净手术室空气采关布点位置与方法
区域最少测点数手术区图示
Ⅰ级洁净手术室 5点（双对角线布点）
手术区和洁净辅助用房 8点（每边内2点）
局部100级区
Ⅰ级周边区
Ⅱ～Ⅲ级洁净手术 3点（单对角线布点）集中送风面正投影区
室手术区 6点（长边内2点，短边内1点）集中送风面正投影区
Ⅱ级周边区 4点（每边内1点）
Ⅲ级周边区
Ⅳ级洁净手术室及分散 4点（避开送风口正下方）
布置送风口的洁净室面 2点（避开送风口正下方）
积＞30㎡
面积≤30㎡
注：分布在集中送风面正投影区角的采样点距离邻近两边的距离位米
4、采样注意事项：
（1）在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上；
（2）采样后的培养基条或培养皿，应37℃条件下培养24h，并计算菌落数，菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后1位；
（3）当采用浮游法测定浮游菌浓度时，细菌浓度测点数应和被测区域的含尘浓度测点数相同，且宜在同一位置上。
每次采样应满足表8的最小采样量的要求，每次采样时间不应小于30分钟。
（4）当用沉降法测定沉降菌浓度时，细菌浓度测点数即要不少于含尘浓度测点数，应满足表9规定的最少培养皿数的要求（不含对照皿）。
如沉降时间适当延长，则最少要求培养皿数可按比例减少，但不能少于含尘浓度的最少测点数。
（5）不论用何种方法检测细菌浓度，都必须有两次空白对照。
第一次用于检测培养皿或培养基条（每批一个对照皿（条））；第2次对操作过程做对照试验（每室或每区将1个对照皿（条），打开后又立即封盖，进行模拟操作）；两次对照结果必须为阴性，整个操作过程应符合无菌操作的要求。
（6）新房验收时，应最后做空气、物表细菌检测。