无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。
二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。
三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。
2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。
3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。
4.液体融化装置：用于融化固体培养基。
5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。
6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。
7.放射源：用于灭菌工作区域。
8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。
9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。
四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。
2.准备所需的培养基和试剂。
3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。
4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。
5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。
6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。
7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。
8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。
9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。
10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。
11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。
12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。
13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。
14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。
五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。
2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。
3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。
无菌检验标准操作规程(SOP)
目的：制定无菌检验标准操作规程，确保检验操作正确。
范围：本标准适用于本公司大容量注射剂无菌检验操作。
责任者：质管部、化验室主任、QC检验员内容：1、标准依据：《中国药典》2015年版二部附录XI H。
2、简述：无菌检查方法系用于检查药品是否无菌的一种方法。
检查项目包括需气菌、厌气菌及真菌检查。
若供试品符合该项检查方法的有关规定，仅表明了在该检验条件下未发现微生物污染。
3、环境要求：该项检查应在环境洁净度万级（C级）背景下的局部百级（A级）的单向流区域内或隔离系统中进行。
其全过程必须严格遵守无菌操作。
防止微生物污染，但所采取的措施不得影响供试品中微生物的检出。
操作前环境洁净度应经验证。
日常检验需对试验环境进行监控。
5、方法验证：进行该项检查前应按照《无菌检查方法验证规程》确认该方法的适用性。
4、人员要求：无菌检查人员必须具备微生物专业知识，并经过无菌技术培训。
6、检验数量及检验量：6.1、接种每种培养基所需的最少检验数量:2%或10个（取较少者），供试品无菌检查若采用薄膜过滤法，应增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；若采用直接过滤法，应增加供试品无菌检查时每个培养基容器接种的样品量作阳性对照用。
6.2、每支供试品接入每种培养基的最少量:半量（100ml≤V≤200ml），采用薄膜过滤法时，检验量应不少于直接接种的供试品总接种量，只要供试品特性允许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
7、细菌培养温度为30～35℃，真菌培养温度为23～28℃。
8、仪器用具：垂直层流超净工作台、生化培养箱、电热恒温水浴箱、显微镜、离心机、双碟、试管、三角瓶、刻度离心管、注射器（针头）、剪刀、镊子、注射器盒、75％酒精棉球、紫外光灯365nm、真空泵、一次性使用集菌培养器。
9、消毒剂配制：9.1、75％乙醇溶液（配制酒精棉球用）。
9.2、0.2％新洁尔灭溶液（配制消毒棉球用）。
9.3、2％来苏尔溶液（配制消毒棉球用）。
10、试剂及培养基的配制：10.1、0.1％蛋白胨水溶液：取蛋白胨1.0g，加水1000ml,微温使溶解，滤清，调节PH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
无菌检查法培养基的适用性检查
一、目的：建立无菌检查培养基适用性检查的标准操作规程，确保培养基的有效性。
二、适用范围：无菌检测用培养基适用性检查。
三、责任者：化验员、质监员、质控室主任、质保室主任。
四、程序：1 环境要求：无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区与工作台面，必须进行洁净度验证。
2 培养基及其制备方法：培养基应适合需气菌、厌气菌或真菌的生长，均以115℃灭菌30分钟。
3 所有培养基均采用商品脱水培养基，临用时按使用说明配制，所用溶解用水均为纯化水，配制并分装好的培养基必须在当天(2小时内最佳)进行灭菌处理。
4 培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基等应符合培养基的无菌无菌性检查及灵敏度检查要求。
5 培养基的无菌性检查每批制备好的培养基各随机抽取5支，营养琼脂培养基、需气菌、厌气菌培养基经30～35℃培养培养，霉菌培养基经20～25℃培养，培养14天，应无菌生长。
6 培养基灵敏度检查6.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术，以保证试验菌种的生物学特性。
1） 金黄色葡萄球菌[CMCC （B ）26 003]；2） 铜绿假单胞菌 [CMCC （B ）10 104]；3） 枯草芽孢杆菌 [CMCC （B ）63 501]；4） 生孢梭菌 [CMCC （B ）64 941]； 标 题 无菌检测培养基适用性检查规程编 码：SOP-CP-035-00 共 4 页 制 定 人审核人 批 准 人 生效日期 日 期 日 期日 期 修订日期起草部门 质控室 颁发部门 质保室 分发部门 质控室、质保室5）白色念珠菌[CMCC（F）98 001]；6）黑曲霉[CMCC（F）98 003]。
6.2 菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐培养基中，30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养24～48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成1ml含菌小于100CFU的菌悬液。
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。
范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。
依据：中国药典》2015年版《药品生产质量管理规范》2010年修订《中国药品检验标准操作规程》2010年版责任：QC化验员对实施本规程负责。
内容:1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。
本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。
2、材料及设备2.1 生化培养箱2.2 生物安全柜2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）2.4 灭菌试管、灭菌注射器2.5 0.9%无菌氯化钠溶液2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。
3、无菌检查培养基的适用性检查3.1无菌性检查取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。
3.2灵敏度检查3.2.1菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]3.2.2菌液制备3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。
103培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程
103培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程一、适用性检查操作规程1.目的适用性检查的目的是评估103培养基在特定微生物种类的培养和生长方面的适用性。
该操作规程旨在确保试验能够准确、可靠地评估103培养基的适用性。
2.实验器材和试剂-103培养基-微生物种类样品-混合废液-恒温培养箱-离心机-吸管或移液管-培养皿或试管3.实验步骤3.1.将103培养基根据要求制备好，确保无菌。
3.2.取微生物种类样品分别接种到103培养基上。
3.3.按照正常培养条件进行孵育，如温度、湿度和气氛条件等。
3.4.观察培养基上的微生物生长情况，记录并比较不同菌株之间的差异。
3.5.对比观察培养基和其他培养基的结果，评估103培养基在不同微生物种类上的适用性。
4.结果与分析4.1.分析培养基上不同微生物种类的生长情况，评估培养基的适用性。
4.2.根据观察结果，可以得出结论，103培养基是否适用于特定微生物种类的培养和生长。
5.结论和建议根据实验结果，验证103培养基的适用性并给出相应的结论和建议，如培养基的优点、缺点、适用范围和注意事项等。
1.目的方法适用性试验旨在评估103培养基在特定微生物检测方法中的适用性，确保能够准确、可靠地检测目标微生物的存在。
2.实验器材和试剂-103培养基-微生物样品-培养皿或试管-移液管或吸管-离心机-过滤膜3.实验步骤3.1.根据目标微生物的检测方法要求，准备好所需的实验器材和试剂。
3.2.用103培养基制备好所需的培养基和培养条件。
3.3.取微生物样品，按照检测方法要求处理样品。
3.4.将处理后的样品分别接种到103培养基上，确保无菌。
3.5.按照检测方法要求进行培养和检测。
3.6.观察培养基上的微生物生长情况，并比较不同微生物检测方法的结果。
4.结果与分析4.1.分析不同微生物检测方法的结果，评估103培养基在特定检测方法中的适用性。
4.2.根据实验结果，可以得出结论，103培养基是否适用于特定微生物检测方法。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。
4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基使用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。
2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。
4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。
5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。
5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。
5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。
5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。
实验用培养基适用性检查标准操作规程
起草人Prepared by:起草日期Date:_____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date:_____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date: QA批准人Approved by:批准日期Date:质量部QD目的Purpose为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。
范围Scope本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。
职责Responsibility分析员：严格按照本操作规程执行。
及时完成各类相关记录。
在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。
主管：监督本操作规程的执行。
对检验员进行必要的培训。
指导任何可能的OOS和偏差调查。
内容procedure1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。
2试验用菌种及培养基2.1菌种:2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。
2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]2.2培养基2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。
2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar2.3微生物计数培养基的适用性检查2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
培养基适用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程
1．目的：检查培养基对相关菌种的适用性，保证微生物实验结果的有效性。
2. 适用范围：适用于首次使用的培养基种类、购入的新批次培养基的适用性检查。
3. 依据：《中国药典》（2010版）四部：无菌检查法/微生物限度检查法-培养基的适用性检查
4. 职责：微生物检验员实施，QA监督。
5. 内容：
5.1 设备和材料
恒温培养箱、无菌培养皿/试管、接种环、酒精灯/火焰喷枪、超净工作台、＜100CFU/ml 的工作菌液、灭菌后的培养基（无菌检查用、计数用）
5.2 培养基适用性检查-无菌检查用
5.2.1 无菌性：
每种培养基每批随机抽取不少于10支，其中5支置30~35℃、另5支置20~25℃培养14天。
14天后均应无菌生长。
5.2.2 灵敏度
取培养基3支，其中2支接种相应的工作菌液各1ml，另1支不接种，作为空白对照，置30~35℃培养3天（或20~25℃培养5天）。
逐日观察结果。
空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，则判定该培养基的灵敏度检查符合规定。
5.3 培养基适用性检查-计数用
取无菌培养皿，吸取相应的工作菌液各1ml注入无菌培养皿，立即倾注培养基，每株试验菌接种2个培养皿，混匀，凝固。
同时用对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
置30~35℃培养48小时（或23~28℃培养72小时），计数。
若被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态、大小应与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查符合规定。
6.相关表格：《培养基适用性检查记录》。
培养基适用性检查标准操作规程
培养基适用性标准操作规程第 1 页共4页1目的规范培养基适应性检查的标准操作。
2范围本规程适用于《中华人民共和国药典》2010年版二部规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检査。
3责任3.1本规程由质量保证中心主任指定人员起草。
3.2与本文件相关的部门负责人参与审阅，企业质量负责人批准本文件。
3.3质量控制中心负责具体实施本规程。
4内容4.1依据4.1.1《药品生产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华人民共和国药典》2010年版二部4.2试验用菌株及培养基4.3试验用仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压力灭菌器、净化工作台、电热干燥箱、恒温水浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养皿（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度0.01，10ml分度0.1）4.3.3接种环、乙醇灯、乙醇棉球或碘伏棉球、火柴、记号笔、灭菌镊子、不锈钢药匙、白瓷盘。
4.4操作步骤4.4.1菌液的制备4.5.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。
取30～35℃培养18～24h的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液，备用。
4.5.1.2 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。
取于23～28℃培养24～48h的白色念珠菌新鲜培养物1ml，用0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备用。
4.5.1.3 接种黑曲霉菌的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，于23～28℃培养5～7天，加入3～5ml0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml)聚山梨酸酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液备用。
实验室管理制度及职责-无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程 SOP-QC-026-V1.0
目的：建立一个无菌检查用培养基适用性检查的标准操作规程。
范围：适用于实验室检验操作者。
职责：实验室检验人员对实施本标准负责。
内容：1、概述：培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节，无菌检查用培养基的无菌性检查和灵敏度检查无菌检查结果判断的重要影响因素。
2、培养基适用性检查的范围：2020年版《中国药典》规定微生物检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、试验用菌株金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］、枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］生孢梭菌［CMCC(B)64941］、白色念珠菌［CMCC(F)98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］4、试验用培养基①胰酪大豆胨液体培养基（TSB）或硫乙醇酸盐流体培养基（FTM）②培养基批号：培养基英文首字母简写+年份后两位+月份+号数+配制批（例：2020.12.25配制的胰酪大豆胨液体培养基第一批——TSB20122501）5、试验用稀释剂①0.9%无菌氯化钠溶液②含0.05%（ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液6、试验用仪器设备①恒温培养箱（30—35℃）、恒温培养箱（20—25℃）、湿热灭菌器、生物安全柜。
②锥形瓶、烧杯、试管及试管塞、移液器（100μl—1000μl）、移液器（1ml—10ml）。
③一次性接种环、一次性涂布棒、酒精灯、酒精棉球、打火机、记号笔等。
6、操作步骤：①培养基无菌性检查：每批培养基随机取不小于5瓶(支)，培养14天，应无菌生长。
②培养基灵敏度检查：菌液的制备a接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，于30～35℃培养18～24h，取上述培养物1ml，用 0.9%无菌氯化钠溶液或PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10倍递增稀释制成每1ml含菌数不大于100cfu的菌悬液，备用。
微生物实验室培养基适用性操作规程
微生物实验室培养基适用性操作规程建立培养基适用性检查操作规程，保证培养基的质量，确保检验结果的准确性。
本规程规定了培养基适用性检查方法和操作要求，适用于微生物实验室计数用培养基、控制菌检查用培养基的适用性检查。
1、简述1.1 培养基适用性检查试验可用于确定实验室所使用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基、按处方自行配制培养基所用不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查要求。
1.2 计数用培养基适用性检查包括需氧菌、霉菌及酵母菌总数计数。
1.3 控制菌检查用培养基适用性检查包括促生长能力、抑制能力及指示特性的检查。
2 计数用培养基适用性检查微生物限度检查中计数用培养基有5种，胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、R2A琼脂培养基、平板计数培养基。
2.1 培养基及配制2.1.1 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂对照培养基；沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂对照培养基；R2A琼脂培养基、R2A琼脂对照培养基；平板计数培养基。
2.1.2 配制：照《培养基配制标准操作规程》配制。
2.2 试剂及稀释剂配制2.2.1 试剂：pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、聚山梨酯80、氯化钠。
2.2.2 稀释剂配制➢∙pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：称取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液14.63g,加水1000mL溶解，分装，灭菌（121℃、15min）。
➢∙0.05％（mL/mL）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液：取已经灭菌好的聚山梨酯80（1mL），加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，摇匀，即得。
➢∙0.9％无菌氯化钠溶液：称取氯化钠9.0g，加水溶解使成1000mL，分装，灭菌（121℃、15min）。
3 试剂及消毒液配制3.1 试剂新洁尔灭溶液、84消毒液、苯酚、75％医用消毒酒精。
SOP-QC10018 培养基适用性检查标准操作规程
培养基适用性检查标准操作规程1. 目的1.目的建立培养基配制适用性检查的标准操作规程，规范实验人员的操作。
2. 范围适用于微生物检验人员对培养基的规范管理。
3. 依据药品生产质量管理规范（2010年版修订）、《中华人民共和国药典》第四部4. 职责4.1 微生物检验员：负责实验室所需求的培养基管理工作，使日常检验正常进行。
4.2 微生物检验主管：负责对日常配制培养基的规范操作进行监督。
5. 程序5.1 培养基的贮藏5.1.1 未开封的胶水培养基贮存于阴谅室，使用培养基处于低温、干燥、和避光条件下。
开封的胶水培养基应盖紧，贮存于阴谅库。
5.1.2 灭菌好的培养基应进行预培养72h检查无菌后，置4～8℃冷藏保存，培养基储存期为7天。
5.2 培养基的配制应填写培养基配制及使用记录。
供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。
5.3 培养基的质量控制5.3.1 计数培养基适用性检查菌种及菌液制备菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代( 从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第0代)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
计数培养基适用性检查和计数方法适用性试验用菌株见表1。
菌液制备按表 1规定程序培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液;取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05% ( ml/mI)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/mI )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%( mI/ml )聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或含0.05% ( mI/ml )聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
菌液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用;若保存在2～ 8C,可在24小时内使用。
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无菌检查用培养基的适用性检查标准操作规程
目的：建立无菌检查用培养基适用性检查标准操作规程。
范围：适用于无菌检查使用培养基的适用性检查。
依据：中国药典》2015年版
《药品生产质量管理规范》2010年修订
《中国药品检验标准操作规程》2010年版
责任：QC化验员对实施本规程负责。
内容:
1、概要：无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌检查及灵敏度检查要求。
本检查可在供试品的检查前或与供试品的检查同时进行。
2、材料及设备
2.1 生化培养箱
2.2 生物安全柜
2.3 中国浊度标准管（由中国药品生物制品检定所提供）
2.4 灭菌试管、灭菌注射器
2.5 0.9%无菌氯化钠溶液
2.6 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液：取聚山梨酯80 0.05ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠至100ml，混匀，灭菌即可。
3、无菌检查培养基的适用性检查
3.1无菌性检查
取新鲜配制灭菌的培养基各5瓶，硫乙醇酸盐流体培养基置30～35℃，胰酪大豆胨液体培养基置20～25℃，培养14天，应无菌生长。
3.2灵敏度检查
3.2.1菌种
培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0代），
并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌[Staphylococcus aureus CMCC(B) 26003]
铜绿假单胞菌[Pseudomonas aeruginosa CMCC(B) 10104]
枯草芽孢杆菌[Bacillus subtilis CMCC(B) 63501]
生孢梭菌[Clostridium sporogenes CMCC(B) 64941]
白色念珠菌[Candida albicans CMCC(F) 98001]
黑曲霉[Aspergillus niger CMCC(F) 98003]
3.2.2菌液制备
3.2.2.1 金黄色葡萄球菌菌悬液制备
3.2.2.1.1 取金黄色葡萄球菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，取新鲜传代菌种一支待用。
取一支灭菌中试管，加入3ml 0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，使之成为均匀悬液。
3.2.2.1.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。
记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。
3.2.2.1.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。
根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。
3.2.2.1.4 铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液制备方法同金黄色葡萄球菌。
3.2.2.2 生孢梭菌菌悬液的制备
3.2.2.2.1取生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基上，30～35℃培养18～24小时，取一支灭菌中试管，用灭菌注射器吸取硫乙醇酸盐流体培养基中底部三分之二处的新鲜菌液1ml，加入
3mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，轻轻混匀，使之成为均匀悬液。
3.2.2.2.2 比浊稀释方法同金黄色葡萄球菌，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液系列稀释至不大于100cfu/ml。
3.2.2.3 白色念珠菌菌悬液的制备
3.2.2.3.1 取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，取新鲜传代菌种一支待用。
取一支灭菌中试管，加入3mlpH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，把新鲜传代菌种培养物用接种环轻轻刮取，在加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的试管壁上研磨，
使之成为均匀悬液。
3.2.2.3.2 取菌悬液1ml于比浊管中，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液逐步稀释至与标准管的浊度一致。
记录下所加入的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量，余下的2ml菌液盖上试管塞以备用。
3.2.2.3.3 打开试管塞，取1ml菌液于中试管中，加入比浊时所需的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液的量一致的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，此时试管中的细菌浓度与标准比浊管相一致。
根据细菌浊度标准菌数表的菌数，将菌悬液用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液系列稀释至不小于100cfu/ml。
3.2.2.4 黑曲霉菌悬液的制备
3.2.2.
4.1 取黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，取新鲜传代菌种一支待用，打开试管塞，加入3～5ml 0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液，轻轻振荡，用灭菌注射器吹打，将孢子洗脱。
3.2.2.
4.2 然后用注射器吸出孢子悬液至无菌中试管内，与比浊管进行比浊，并用0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液系列稀释至小于100cfu/ml。
3.2.2.5.菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；若保存在2～8℃，可在24小时内使用。
黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在验证过的贮存期内使用。
3.2.3培养基接种及培养
3.2.3.1.按硫乙醇酸盐流体培养基及胰酪大豆胨培养基固体粉末的处方量配制成液体培养基，并按规定的温度和时间进行湿热灭菌，待用。
3.2.3.2.取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，30～35℃培养3天，逐日观察结果。
3.2.3.3.取每管装量为9ml的胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，20～25℃培养5天，逐日观察结果。
3.2.4结果判定：
3.2.
4.1 空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。
3.2.
4.2 若加菌的培养基管不生长或生长不好，判该培养基的灵敏度检查不符合规定，不得用于无菌试验。
3.2.
4.3 培养基接种的菌悬液液浓度应为小于100cfu/ml，分别计数其菌数，结果应符合要求。
5.1 《无菌检查用培养基适用性检查记录》。