最新园艺植物育种学实验指导书(.3)

园艺植物育种学实验指导书(2013.3)

园艺植物育种学总论实验指导书

黄桂香编著

广西大学农学院园艺系

2013年3月

目录

实验一园艺植物花粉生活力测定(3h) (3)

（一）果树花粉生活力测定 (3)

（二）蔬菜花粉生活力测定 (6)

实验二、三园艺植物开花习性观察及有性杂交育种(6h) (7)

（一）果树开花习性观察及有性杂交育种 (7)

（二）蔬菜开花习性观察及有性杂交育种 (8)

实验四、园艺植物品种描述及鉴别(3h) (10)

（一）番茄品种描述及鉴别 (10)

（二）荔枝品种描述及鉴别 (13)

实验五、种胚分离培养技术(3h) (16)

实验六、园艺植物选择育种(3h) (17)

实验七、园艺植物品种调查及育种方案的制订(6h) (20)

实验八、园艺植物花粉单核期观察(3h) (20)

实验一、园艺植物花粉发芽试验及生活力测定

内容一：果树花粉发芽试验及花粉生活力测定

一、目的要求

练习并掌握果树花粉发芽试验及花粉生活力测定技术

二、材料用具

供试花粉、氯化钙、硼酸、琼脂、蔗糖、凹玻片、棉花、染色瓶、蒸馏水、显微镜、计数器、天平、载玻片、盖玻片、烧杯、镊子、水浴锅、玻璃杯、玻棒、冰箱、温箱、干燥器等。联苯胺、α—萘酚、碳酸钠、酒精、过氧化氢、氯化三苯基四氮吡、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、量筒、量瓶、滴瓶等。

安全提示：因联苯胺、α—萘酚、氯化三苯基四氮唑为易制毒化学品，操作时要按规范要求，避免人体直接接触，注意安全。

三、说明

在有性杂交工作中，常因杂交亲本组合的花期不遇，或亲本植株异地而必须预先收集父本花粉，花粉应贮藏在低温(0—4℃)，干燥(相对湿度0—4%)不受阳光直射(或黑暗)的环境下，可以较长时间地保持花粉的生活力，经贮藏或外地采来的花粉，在授粉之前，必须检验花粉的生活力，以确定花粉发芽的可靠程度，这对检验杂交后的效果，具有重要意义。

花粉人工发芽的效果与培养基的配制是否适合有很大关系，培养基常用不同浓度的蔗糖和琼脂1%及蒸馏水配制而成，不同果树的花粉对蔗糖浓度要求不同。一般柑桔花粉要求蔗糖浓度以10—15%为宜；苹果及梨以10—15%为宜，桃以10%为宜。通过控制蔗糖浓度的高低可调节培养基的渗透压，防止播种的花粉在培养基上发生破裂现象。培养基一般以微酸性为宜，pH值相应调整在6—5.2之间，发芽温度控制在20—25℃，并需要空气和较高的湿度。如在培养基中加入少量的硼酸和维生素B1，更可促进花粉发芽。

测定花粉生活力，同样是检查花粉的质量，因为做花粉发芽试验时，操作较复杂，设备要求较高，需时也较长。为了简易而迅速地测定花粉的生活力，也有用化学染色的方法测定花粉生活力，但此种方法有一个很大的缺点，就是不能真实地反映出有发芽力的花粉究竟有多少，因为即使染上色的花粉也不一定都具有生活力。所以一般常用而且较为可靠的方法仍然是采用花粉发芽试验，而染色法作为一种粗略的快速测定，还是比较简便的。

四、方法和步骤

(一)花粉发芽试验

(1)培养基的配制：在100毫升蒸馏水中，加入琼脂1克，蔗糖(按果树花粉种类不同的比例加入)和0.01g的硼酸共同置于烧杯中加热煮沸，使琼脂和蔗糖等充分溶解于水中，在加热过程中，由于水分蒸发，必须加入失去的水分，才能保持准确的浓度，然后将烧杯置于水浴锅中(或盛热水的烧杯中)备用，以防培养基冷却凝固

(2)发芽床的装置：用玻棒将冷却前(约50℃)的培养基滴入凹玻片的凹孔中(1—2滴)，要求培养基表面必须园正，待其凝固后用作播种花粉之发芽床。

(3)播种花粉用接种丝或头发沾上花粉(花粉事先收集使之干燥，贮藏于干燥器中置于冰箱内)少许，均匀地播种于培育基表面，播种时要防止花粉成团堆集于培育基上；也要防止花粉埋入培养基过深，影响花粉发芽。播种后要在显微镜下检查，花粉分布是否均匀。花粉堆积过多难以计数，而过少则影响发芽。以每一视野中（10×10）分布有100—200粒左右花粉为宜。播种完毕后，将凹玻片插入染色瓶中(染色瓶底事先放入少量的脱脂棉，并加入适量的无菌水)，盖上瓶盖。再在染色瓶上贴上标签，注明花粉种类，蔗糖浓度，采集时间，播种时间，工作者姓名等。然后置于温箱中（温度调至25—28℃左右）。

(4)播种后的检查：播种根据树种不同，隔不同时间在显微镜下，检查花粉发芽情况、苹果、梨、桃在3—4小时后检查第一次，以后每隔2—4小时检查一次（北方可适当缩短2次之间的时间），柑桔在24小时检查一次。每次检查三个视野（最好能固定视野检查。如不能固定视野检查，则每次检查的视野不能重复）。同时用计数器统计出花粉总粒数及发芽粒数，直至花粉粒数不再增加为止，花粉发芽标准，以花粉管伸长超过花粉直径为准。

(二)花粉生活力测定

1、B、C夏尔达考夫染色法：具有生活力的花粉粒中，含有过氧化物酶，它能促使过氧化物放出活性氧，这种氧是在花粉萌发时，进行的许多综合反应时

所必需的。因此，通过对过氧化物酶的测定，可间接地判断花粉是否具有生活力。

(1) 预先配制下列溶液

① 0.20克联苯胺溶于100毫升50%酒精溶液中。

② 0.15α-萘酚溶于100毫升之50%酒精溶液中。

③ 0.25克碳酸钠溶于100毫升之蒸馏水中。

以上三溶液分别装入棕色瓶中贮藏备用(或用量瓶放在暗色避光处)，使用时将上述三种溶液等量混合，配成混合液，装于棕色滴瓶中备用。

④在使用前配好0.3%过氧化氢溶液，装于棕色滴瓶中备用。

(2) 操作步骤：

在载玻片上加入少量待测花粉，然后在花粉上滴一小滴混合液和一小滴过氧化氢溶液，用玻棒把花粉和溶液充分混合，再盖上盖玻片(盖上后常出现很多气泡，不要把气泡认为花粉)，经过3—4分钟后，在显微镜下检查被染色和未染色的花粉粒数，因联苯胺被氧化后呈兰色，α—苯酚被氧分后呈红色，同时被氧化则呈紫红色，因此联苯胺，α—苯酚和过氧化氢的混合液同时参与作用下，凡具生活力的花粉因含有过氧化物酶使过氧化氢释放出氧，从而使花粉染成红色。生活力愈强的花粉染色愈深，不具生活力的花粉则呈黄色和无色。

(3) 观察和测定结果：

表二花粉染色记载表