第讲第二章第五节酶类药物的生产第六节糖类药物

药用酶制备方法
1、直接提取法 工艺包括：选材→预处理→提取→分离→纯化。 关键：选择含量丰富的动植物原材料 重点：工艺简便、稳定、成本低、无污染、收率和酶比活力、适于大
规模生产的提取纯化方法。 2、微生物发酵法 工艺包括：菌种培养→种子培养→发酵→发酵液处理 关键：选育高产菌株 高产菌株的选育途径：①自然界筛选，②诱变育种，③基因工程和细
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（5）抗病毒 多糖可以提高机体组织细胞对细菌，原虫，病毒和真 菌感染的抵抗力。
（6）其他作用 类肝素、硫酸软骨素、小分子量肝素等具有降血脂、 降血胆固醇，抗动脉粥样硬化作用，用于防治冠心病 和动脉硬化。促进细胞DNA，蛋白质的合成，促进细 胞的增殖、生长。
多糖的提取、分离纯化与鉴定
1、提取分离 ①水或盐溶液直接提取（大部分） 但因大部粘多糖与蛋白质结合于细胞中，因此需用酶解法或碱
如：天冬酰胺酶（抗恶性肿瘤、抗白血病）、神 经氨酸苷酶（肿瘤免疫治疗剂）。
药用酶的分类及应用
5、其他药用酶 解毒：有机磷解毒酶（用于治疗有机磷农药中毒，
缓解中毒症状） 青霉素酶（能分解青霉素，用于治疗青霉素引起 的过敏反应） 抗衰老、抗辐射：超氧化物歧化酶（清除体内氧 自由基） 细胞色素C（是参与呼吸链的一种非常有效的电子 传递体，是组织缺氧治疗的急救和辅助用药） 降血压、降血脂：弹性蛋白酶 防踽齿：葡聚糖酶
糖类药物的类型
3、多糖 又称多聚糖，由20个以上单糖聚合而成。如香 菇多糖、右旋糖酐、甘露聚糖、茯苓多糖等。 多糖在细胞内的存在方式有游离型与结合型两 种。结合型多糖有糖蛋白、脂多糖。在组织中， 粘多糖几乎没有例外地与蛋白质以共价结合。
多糖的来源
1、动物多糖 来源于动物结缔组织、细胞间质。 如：肝素（抗凝血的作用）、硫酸软骨素（防 治脉硬化和骨质增生）
如：链激酶、尿激酶和纤溶酶（临床上用于治疗血栓）。
药用酶的分类及应用
4、抗肿瘤的酶类 作用：
1961年Broome发现L-天冬酰胺酶具有抗肿瘤的 作用。它能分解患者血液中的L-天冬酰胺，抑制需 要L-天冬酰胺的肿瘤细胞的增殖，正常细胞由于自 身能合成天冬酰胺而不受影响，从而选择性地抑制 肿瘤，达到抗肿瘤的目的。
药用酶的分类及应用
3、与治疗心脑血管疾病有关的酶类 作用：
血液中存在着相互拮抗的凝血系统和抗凝血系统（纤维蛋 白溶解系统）。
在生理状态下，血液中的凝血酶会形成微量纤维蛋白，沉 着于血管内壁，但这些微量的纤维蛋白又不断地被激活了的 纤维蛋白溶解系统所溶解，两者保持动态平衡，保证了血流 畅通。一旦这种平衡被打破，血管腔内血液就会发生凝固或 血液中的某些有形成分相互黏集形成固体块——血栓。血栓 的形成会引起心、脑、肺等重要器官缺血坏死，需要及时采 取措施消除栓塞。
性（亲合性）不同的纯化方法——盐析、凝胶层析、亲和 层析、超速离心等。
药用酶生产实例——ＳＯＤ
新鲜血液
离心去除 血浆
红细胞
溶血、离心 去血蛋白
上清液
分级沉淀 （盐析、有机溶剂）
沉淀物
重溶、加热 去杂蛋白
SOD粗提液
精制ＳＯＤ
超滤、浓缩
提高浓度
浓
缩
液
凝胶色谱 Sephadex
G-75
糖类药物的生产
胞工程。 3、动植物细胞培养法 如：大蒜细胞进行培养来生产超氧化物歧化酶（SOD），利用木瓜细
胞生产木瓜凝乳蛋白酶。
药用酶的常用提取纯化方法
1、水溶液法 ①盐浓度：稀盐溶液或缓冲液；一般使用
等渗盐溶液，如0.002～0.005mol/L磷酸盐 缓冲溶液或0.15mol/L氯化钠溶液。 ②温度：低温下操作； ③pH：选择偏离等电点的适当pH值。
药用酶的常用提取纯化方法
2、有机溶剂法 【针对与脂类结合的酶，注意不可引起变性】
常用的有机溶剂：丁醇 方法：①均相法；②二相法。 3、表面活性剂法
【一种解构蛋白质结合力的方法】 纯化方法参见蛋白质的纯化。 4、其他
【蛋白质分离纯化中已介绍】 利用溶解度、分子结构和大小、电离性质、生物功能专一
基团（如糖醛酸和各种硫酸
基），在溶液中以聚阴离子形式存在，因而可用阴离 子交换剂进行交换吸附。吸附时可以使用低盐浓度样 液，洗脱时可以逐步提高盐浓度如梯度洗脱或分步阶 梯洗脱。 （4）其他方法
此外，超滤法、凝胶过滤层析法、区带电泳法及金 属络合法等在多糖的分离纯化中也常采用。
高压电泳设备
多糖的提取、分离纯化与鉴定
3、纯度鉴定 测定所得组分是否均一。 方法： 功能团分析 比旋光度 纸色谱 HPLC 高压电泳
典型糖类药物生产实例——透明质酸（HA）
（一）来源和用途 1、来源
存在于动物的组织细胞间质和某些细菌的荚膜 中。 原料：鸡冠、人脐带、动物眼球。 2、用途：高效天然保湿因子，临床上作为填 充剂。
多糖的来源
2、植物多糖 主要是一些中草药多糖。 如：黄芪多糖、牛膝多糖、猪苓多糖、枸杞子 糖缀合物。 作用：免疫调节、抗肿瘤、降血压、抗辐射、 抗突变、抗凝血、抗血栓等等。
多糖的来源
3、微生物多糖 来源分为：细菌多糖、真菌多糖和藻类多糖 （《本草纲目》中列出很多的食用菌、食用藻） 分泌类型分为：胞内多糖和胞外多糖。
典型糖类药物生产实例——透明质酸
（二）结构与性质 是一种酸性粘多糖，由等量的葡萄糖醛酸和乙
酰氨基葡萄糖组成。 （三）生产工艺 组织提取法 细菌发酵法
冻鸡冠
绞碎 蛋白酶
酶解液
过滤 乙醇沉淀
解离液
0.4MNaCl 解离
络合沉淀
络合 1%CPC
粗滤、精滤
粗品
重溶 0.1MNaCl 氯仿沉淀
水相
滤液
药用酶的分类及应用
1893年，Francis用木瓜蛋白酶治疗白喉 和结核性溃疡病，疗效很好。
定义：用于预防、治疗和诊断疾病的一类 酶制剂称为药用酶。
药用酶的分类及应用
1、消化酶类 作用：水解和消化食物中的成分，如蛋白质、糖类和脂类
等。作为消化剂能补充内源性消化酶的不足，用于治疗消 化紊乱或促进消化。 胃蛋白酶、多酶片（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶） 等用于治疗消化不良、食欲不振。 2、消炎酶类 作用：用于外伤、手术后、关节炎、副鼻窦炎等伴有水肿 的炎症，能抑灭细菌，促进渗出液再吸收，达到消炎的目 的。 如：蛋白酶（菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、胶原酶、胰蛋白 酶）；多糖水解酶（溶菌酶、葡聚糖酶）；核酸酶；超氧 化物歧化酶等。
第二章 天然生物材料的提取制药
生化药物概述 氨基酸类药物的生产 多肽和蛋白质类药物的生产 核酸类药物的生产 酶类药物的生产 糖类药物的生产 脂类药物的生产 维生素和辅酶类药物的生产
酶类药物的生产
一、药用酶的分类及应用 二、药用酶制备方法 三、药用酶的常用提取纯化方法 四、药用酶生产实例
糖类药物的生理活性
（1）增强机体免疫力 主要表现为影响补体活性，促进淋巴细胞增殖，激活 或提高吞噬细胞的功能。增强机体的抗炎、抗氧化和 抗衰老作用。
（2）抗肿瘤 通过增强机体的免疫功能而达到抗癌作用，毒副作用 小。
（3）抗辐射 抗射线的损伤，有抗氧化、防辐射作用。
糖类药物的生理活性
（4）抗凝血 肝素是天然抗凝剂。
多糖的提取、分离纯化与鉴定
2、多糖的纯化 （1）乙醇沉淀法 制备粘多糖的最常用手段，分级沉淀法。（乙醇分 部） （2）季铵盐络合法 粘多糖与一些阳离子表面活性剂（如：十六烷基三 甲基溴化铵CTAB和十六烷基氯化砒啶CPC等）能形 成季胺盐络合物。 原理：在低离子强度的水溶液中，这些季胺盐络合 物不溶解；在离子强度大时，这种络合物可以解离， 溶解，释放。
一、糖类药物的类型 二、多糖的来源 三、糖类药物的生理活性 四、多糖的提取、分离纯化与鉴定 五、典型糖类药物生产实例
糖类药物的类型
1、单糖及其衍生物 单糖是糖的最小单位，如葡萄糖、果糖、氨基 葡萄糖和维生素C等。 衍生物：6-磷酸葡萄糖，1,6-二磷酸果糖，磷 酸肌醇等。
2、寡糖 又称低聚糖，由2～20个单糖聚合而成。如蔗 糖、麦芽糖、乳糖、乳果糖。
95%乙醇 沉淀
沉淀物
脱水干燥
精品HA
CPC：氯代十六烷基吡啶。低盐条件下，HA与CPC络合沉淀；高盐条件下，二者解离。
思考题
1. 常见的酶类药物包括哪些种类？ 2. 酶类药物的提取纯化时应注意什么？ 3. 多糖的分离纯化方法？
纤维蛋白溶解系统
HPLC System with Binary Pump, Autosampler and Variable Wavelength Detector
解法使糖-蛋白质间的结合键断裂，促使多糖释放。 ②碱解法 多糖与蛋白质结合的糖肽键对碱不稳定，故可用碱解法使糖与
蛋白质分开。 ③酶解法 理想的工具酶是专一性低的、具有广泛水解作用的蛋白酶。 如：鹿茸中酸性多糖采用木瓜蛋白酶消化法提取，收率很高。
多糖的提取、分离纯化与鉴定
2、除杂蛋白（游离蛋白质） 方法： ①Sevag法（氯仿）； ②三氯乙酸法； ③三氟三氯乙烷法。