实验一 细菌形态观察和染色实验
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实验一
细菌形态观察和染色实验
一、目的要求
学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操 作技术; 初步掌握革兰氏染色法; 巩固显微镜（油镜）的使用方法; 初步认识细菌的形态特征。
二、基本原理
革兰 氏染 色程 序 革兰 氏阳 性菌 (G+) 革兰 氏阴 性菌 (G-) 结 晶 紫 初 染 蓝 紫 色 蓝 紫 色 碘 液 媒 染 蓝 紫 色 蓝 紫 色 乙 醇 脱 色 蓝 紫 色 无 色 番 红 复 染 蓝 紫 色 红 色 最 终 结 果 蓝 紫 色 红 色
四、操作步骤
涂片 涂成薄膜
现场演示
自然干燥
干燥
1-2min
固定
1min
通过火焰2～3次
结晶紫初染
碘液媒染
2min
乙醇脱色
至流出的乙醇ຫໍສະໝຸດ Baidu紫色
番红复染
油镜镜检观察。
混合涂片涂色
按上述方法，在同一载玻片上， 以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡 萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。
注意：
原理
细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类 脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、 网状结构孔径缩小，透性降低，结 晶紫—碘的复合物仍保留在细胞内 细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高， 乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细 胞壁透性增大，结晶紫—碘的复合 物较易洗脱出来
三、器材
菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物， 金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物， 枯草芽孢杆菌12～24h营养琼脂斜面培养物。 染色剂 革兰氏染色液。 仪器或者其他用具 显微镜，酒精灯，载 玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二 甲苯），擦镜纸，生理盐水等
1 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚； 2 热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破 坏细胞形态； 3 染色时，每一步骤后都要立即水洗； 4 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革 兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性 菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误 染成阴性菌，脱色时间一般20～30S。
五、实验报告
结果 列表简述3 株细菌的染 色观察结果。 画出各菌的 形状和革兰 氏染色颜色 反应。
金黄色葡萄球菌(G+)
变形杆菌(G-)
枯草芽孢杆菌(G+)
大肠杆菌(G-)
六、思考题
你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果
的正确性？其中最关键的环节是什么？ 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的 粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。 你怎么运用大肠杆菌来证明结果的正确 性？ 热固定的目的是什么？
细菌形态观察和染色实验
一、目的要求
学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操 作技术; 初步掌握革兰氏染色法; 巩固显微镜（油镜）的使用方法; 初步认识细菌的形态特征。
二、基本原理
革兰 氏染 色程 序 革兰 氏阳 性菌 (G+) 革兰 氏阴 性菌 (G-) 结 晶 紫 初 染 蓝 紫 色 蓝 紫 色 碘 液 媒 染 蓝 紫 色 蓝 紫 色 乙 醇 脱 色 蓝 紫 色 无 色 番 红 复 染 蓝 紫 色 红 色 最 终 结 果 蓝 紫 色 红 色
四、操作步骤
涂片 涂成薄膜
现场演示
自然干燥
干燥
1-2min
固定
1min
通过火焰2～3次
结晶紫初染
碘液媒染
2min
乙醇脱色
至流出的乙醇ຫໍສະໝຸດ Baidu紫色
番红复染
油镜镜检观察。
混合涂片涂色
按上述方法，在同一载玻片上， 以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或大肠杆菌和金黄色葡 萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。
注意：
原理
细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类 脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、 网状结构孔径缩小，透性降低，结 晶紫—碘的复合物仍保留在细胞内 细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高， 乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细 胞壁透性增大，结晶紫—碘的复合 物较易洗脱出来
三、器材
菌种 大肠杆菌约24h营养琼脂斜面培养物， 金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物， 枯草芽孢杆菌12～24h营养琼脂斜面培养物。 染色剂 革兰氏染色液。 仪器或者其他用具 显微镜，酒精灯，载 玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二 甲苯），擦镜纸，生理盐水等
1 载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌 不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚； 2 热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破 坏细胞形态； 3 染色时，每一步骤后都要立即水洗； 4 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革 兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性 菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误 染成阴性菌，脱色时间一般20～30S。
五、实验报告
结果 列表简述3 株细菌的染 色观察结果。 画出各菌的 形状和革兰 氏染色颜色 反应。
金黄色葡萄球菌(G+)
变形杆菌(G-)
枯草芽孢杆菌(G+)
大肠杆菌(G-)
六、思考题
你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果
的正确性？其中最关键的环节是什么？ 现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的 粗壮杆菌，请你鉴定其革兰氏染色反应。 你怎么运用大肠杆菌来证明结果的正确 性？ 热固定的目的是什么？