实验 一游离氨基酸测定
实验一离氨基酸含量的测定(实验报告用)
实验一 食品中游离氨基酸含量的测定实验原理：电位滴定法测定酱油中氨基酸态氮的含量。
氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH 值，控制终点。
实验试剂：1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。
2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L] 实验仪器：1、酸度计；2、20mL 移液管；3、10mL 微量滴定管；4、100mL 容量瓶；5、250mL 烧杯；6、磁力搅拌器； 实验步骤：1、吸取5mL 试样，置于100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。
2、吸取上述稀释液20.00mL V 3置于200mL 烧杯中，加水60mL 水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。
（使中性内盐分离成为氨基酸）3、向上述溶液中准确加入10.0mL 甲醛溶液，混匀。
再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数V 1。
重复做3组平行样。
4、取80mL 水，先用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL 甲醛溶液，混匀，再用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数V 2。
重复做3组平行样。
数据记录与计算（一）数据记录：见下表项目样品 空白 加入甲醛后滴定所消耗 氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数标准氢氧化钠溶液浓度（mol/L ）（二）结果计算试样中氨基酸态氮的含量为：()1001005014.0321⨯⨯⨯⨯-=V C V V X式中：X —试样中氨基酸态氮的含量，g/100 mL ；V 1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； V 2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL ； C —氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L ； V 3—试样稀释液取用量，mL ；0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液相当的氮的质量。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验报告背景游离氨基酸是构成蛋白质的基本组成单位，对人体的生理功能起着重要作用。
因此，准确测定游离氨基酸的含量对于研究和分析蛋白质代谢、营养摄入以及疾病发展等方面具有重要意义。
本实验旨在通过一系列分析方法测定样品中游离氨基酸的浓度。
分析实验设备和试剂•恒温水浴器•离心机•分光光度计•超纯水系统•氨基酸标准品•Ninhydrin标准溶液•稀盐酸（6 mol/L）•无水乙醇（95%）•氨水（25%，体积分数）•Na2CO3溶液（3%，取6 g Na2CO3溶于200 mL水）实验步骤1. 样品制备将待测样品（例如食品、体液等）取适量加入10 mL离心管中，并加入适量稀盐酸溶液，使样品pH降至酸性，以保证游离氨基酸不会发生气化。
利用离心机对样品进行离心，取上层液保存。
2. 氨基酸含量测定2.1 Ninhydrin法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。
取6个离心管，分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液。
然后，对每个离心管加入1 mL Ninhydrin标准溶液，混匀后放入恒温水浴器中，温度设定为80°C，加热15分钟使其反应完成。
在背景相对较深的条件下使用分光光度计，设置波长为570 nm进行吸光度测定，记录吸光度值。
2.2 紫外分光光度法准备一系列浓度已知的氨基酸标准品溶液，分别为0、2、4、6、8和10 μmol/mL。
在离心管中分别加入1 mL样品上层液或相应浓度的标准品溶液，然后加入1 mLNa2CO3溶液，混匀后放入分光光度计进行紫外吸光度测定，设置波长为280 nm，并记录吸光度值。
3. 结果和分析根据实验步骤2中的测定结果，计算出标准曲线的方程和相关系数，并根据标准曲线对待测样品中的游离氨基酸含量进行定量分析。
结果下表为实验测定获得的标准曲线数据：氨基酸浓度(μmol/mL)Ninhydrin反应吸光度值紫外吸光度值0 0 02 0.3 0.14 0.7 0.26 1.2 0.38 1.6 0.410 2.1 0.5根据上述数据，可得到标准曲线的方程为：•Ninhydrin法：吸光度 = 0.2[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数r = 0.99；•紫外分光光度法：吸光度 = 0.05[氨基酸浓度(μmol/mL)] + 0.1，相关系数 r = 0.98。
游离氨基酸的测定实验报告3页
游离氨基酸的测定实验报告3页
实验目的：测定蛋白质水解液中游离氨基酸的含量。
实验原理：蛋白质是由若干个氨基酸通过肽键连接而成，而氨基酸是构成蛋白质的基本单元。
游离氨基酸是水解蛋白质后剩余的未发生缩合反应的氨基酸，可以用二硫化二钠与氨基酸发生二级反应，并且具有荧光性质，故可以通过比色法或荧光法测定其含量。
实验步骤：
1.取约1g蛋白质水解液，加入等量的50%三硝酸溶液，使测定溶液呈红棕色。
2.将上述混合溶液蒸干，加入少量蒸馏水，使含盐量达到适宜比例。
3.将上述溶液通过20μ滤器滤过，在滤液中加入0.1%的二硫化二钠溶液。
4.加入等量的1.5N盐酸，使 pH 值降至2左右。
5.将上述混合液振荡30秒，静置10分钟，测定荧光强度或比色度。
实验结果：测量得到游离氨基酸的含量为x mg/L。
实验分析：游离氨基酸在酸性条件下可以与二硫化二钠反应生成荧光物质，故可以用荧光法或比色法进行测定。
本实验采用的是荧光法，即通过荧光分光光度计测定游离氨基酸的荧光强度，再由标准曲线推算游离氨基酸的含量。
需要注意的是，在测定过程中必须确保荧光试剂与游离氨基酸充分反应，否则会导致测定结果偏低。
实验结论：本实验成功测定了蛋白质水解液中游离氨基酸的含量为x mg/L，实验结果具有一定的可靠性和准确性。
游离氨基酸总量的测定
植物体内游离氨基酸总量的测定方法一：一、原理游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。
二、仪器设备分光光度计；电子天平；容量瓶25ml 或50ml 3 个；漏斗（直径6 厘米）3 个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。
三、试剂1.3% 茚三酮试剂称3g 茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml 容量瓶里，贮于棕色瓶中。
此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10 天。
2.氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：(1) NaCN±备液0.01mol/L (490mg/L)。
（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml 冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。
取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。
3. 标准氨基酸精确称取在80°C下烘干的亮氨酸13.1mg （或a -丙氨酸8.9mg）溶于10%勺异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L 的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。
为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5卩mol，或氨基氮7卩g。
4. 95% 乙醇；异丙醇（分析纯）四、操作步骤1.标准曲线的制作取20ml刻度试管18支，按下表1加入各试剂。
加完试剂后混匀，在100C水浴中加热12min （加热时封口），取出在冷水中迅速冷却，立即于每管中加入5ml 95%乙醇，塞好塞子，猛摇试管，使加热时形成的红色产物被空气中的氧所氧化而褪色，此时溶液呈蓝紫色。
于570nm 波长下测其光密度（以空白管为参比），以氨基酸浓度为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出直线方程。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验方案（茚三酮比色法）一、实验目的茚三酮比色法测定发酵液中游离氨基酸含量，利用氨基酸含量这个参数，控制发酵过程.二、实验原理游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用,产生蓝紫色的化台物二酮茚一二酮茚胺,产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在570nm 下测其含量.因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应,在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉。
三、实验材料发酵液样品；实验试剂:水合茚三酮;氨基酸标准液；0.1%抗坏血酸实验仪器:100ml容量瓶；漏斗；三角瓶；研钵；移液器;枪头；沸水浴；具塞刻度试管20 ml×10;分光光度计四、实验方法1.溶液配制（1)水合茚三酮称取0。
6g重结晶的茚三酮放烧杯中，加入15ml 正丙醇、30ml正丁醇、60ml乙二醇及9 ml PH4。
54的醋酸盐缓冲液混匀,棕色瓶中冰箱内保存,10天内有效。
（2）氨基酸标准液称取80℃烘干的亮氨酸23.4mg,以10％的异丙醇溶解定溶至50ml（含氮为50ug/ ml)，取此液5ml，用水定容至50 ml，此为含氮量5ug/ ml工作液。
（3）0.1%抗坏血酸称取0。
1g抗坏血酸定容100 ml，随用随配。
2.标准曲线绘制取6支20ml 试管,按下表加剂：试剂管号12 3 4 5 6 亮氨酸标准液（ml ） 0 0.2 0.4 0。
6 0。
8 1.0 无氨蒸馏水（ml ） 2.0 1。
8 1。
6 1.4 1.2 1.0 水合茚三酮（ml) 3.0 3。
0 3。
0 3.0 3.0 3。
0 抗坏血酸（ml ） 0.1 0.1 0.1 0.1 0。
1 0.1 氨基氮量（ug/管 )1.02.03.04.05.0将各管溶液混合均匀，封口，在沸水中加热15min ，取出后立即用冷水摇动冷却,用60%乙醇定容至20 ml ，摇匀。
λ=570nm 处测定吸光度0 0.025 0.055 0。
0990。
146 0.186以吸光度为纵坐标，氨基氨ug 数为横坐标，绘标准曲线如图：茚三酮比色法测定游离氨基氮标准曲线-0.0500.050.10.150.2氨基氮（ug）吸光度A3.样品中游离氨基酸的测定取20ml 试管，取待测液1ml ，加蒸馏水l ml ，水合茚三酮3.0 ml,坏血酸0。
游离氨基酸测定
①将对应封口袋中根茎放入研钵内加5ml10%乙酸研磨至匀浆，用10ml去离子水冲洗干净，一并将匀浆和冲洗水转入10ml对应编号离心管中，定容至9ml。
根同样加5ml10%乙酸研磨至匀浆，用少量水洗研钵，一并转入10ml对应编号离心管去离子水定容至8ml。
②将离心管充分震荡混匀，将根茎叶浆液10ml离心管放入高速离心机9000r/min 离心10min,取叶上清液0.2ml,放入对应编号10ml离心管中待测。
取茎上清液0.2ml,放入对应编号10ml离心管中待测。
取根上清液0.2ml,放入对应编号10ml 离心管中待测。
③在取茎叶上清液中加入相应去离子水、3ml茚三酮、0.2ml抗坏血酸，置沸水中加热10min，观察颜色淡黄色变为蓝紫色，加入乙醇定容到9ml。
在570nm处测定吸光度。
试剂：①水合茚三酮：称取0.6g再结晶的茚三酮与烧杯中，加入15ml正丙醇，搅拌使其溶解。
再加入30ml正丁醇及60ml乙二醇，最后加入9ml PH=5.4乙酸钠缓冲液，混匀，于棕色瓶中，置于4℃下保存备用，10天有效。
需要432ml 材料：[200ml烧杯（1个）、100ml量筒（1个）、5ml移液器（1个）、500ml棕色瓶（1个）]②乙酸钠缓冲液③标准氨基酸：称取亮氨酸46.8mg，溶于少量10%异丙醇中，用10%异丙醇定容至100ml。
取该溶液5ml，用蒸馏水稀释到50ml，即含氨基氮5μg/ml标液。
材料：[小烧杯（1个）、100ml容量瓶（1个）、50ml容量瓶（1个）]④0.2%抗坏血酸：称取100mg抗坏血酸，溶于50ml蒸馏水中，随配随用。
材料：[50ml容量瓶（1个）]⑤10%乙酸。
需要720ml材料：[100ml容量瓶（1个）] 1000ml容量瓶总材料：水浴锅、大口径烧杯、研钵（3个）、50ml离心管（96个）、10ml离心管（144个）、15ml离心管（144个）、5ml移液器、1ml移液器。
游离氨基酸测定（完整版）
游离氨基酸测定（完整版）总游离氨基酸测定（完整版）实验原理：游离氨基酸的游离氨基可与⽔合茚三酮作⽤，产⽣蓝紫⾊的化合物⼆酮茚－⼆酮茚胺，产物的颜⾊深浅与游离氨基酸含量成正⽐，⽤分光光度计在570nm下测其含量。
因蛋⽩质中的游离氨基酸也会产⽣同样反应，在测定前必须⽤蛋⽩质沉淀剂将其除掉.仪器与⽤具：100ml容量瓶；漏⽃；三⾓瓶研钵；刻度吸管：0.1ml×1、1ml×2、2ml×2、5ml×1;沸⽔浴；具塞刻度试管20ml×10;分光光度计.⼀、试剂1.⽔合茚三铜：称重结晶的茚三铜0.6g,装⼊烧杯，加⼊正丙醇15ml，使其溶解加⼊正丁醇30 ml、⼄⼆醇60 ml、⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,混匀，棕⾊瓶冰箱保存，10天内有效。
2.⼄酸-⼄酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯⼄酸钠54.4g，加⼊⽆氨蒸馏⽔100 ml，电炉加热⾄沸，使其体积减半，冷却后加冰⼄酸30 ml，加蒸馏⽔定容⾄100 ml。
3.氨基酸标准溶液：精确称取80℃烘⼲⾄恒重的亮氨酸0.0234g溶于10％异丙醇并定容⾄50ml。
取此液5ml蒸馏⽔稀释到50ml，即为5µg/ml氨基酸标液。
4.0.1%抗坏⾎酸：称取0.050g抗坏⾎酸，溶于50 ml蒸馏⽔中，即配即⽤。
5.10％⼄酸⼆、标准曲线制备加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。
以吸光度为纵坐标，氨基氮ug数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1.烟末0.5g于研钵中加⼊5 ml10%⼄酸，研磨匀浆后⽤蒸馏⽔定容100 ml，⽤滤纸过滤到三⾓瓶中备⽤。
2.1ml滤液加⼊到20ml ⼲燥试管中，加1 ml蒸馏⽔，⽔合茚三铜3ml, 0.1%抗坏⾎酸0.1ml, 加塞⼦密封于沸⽔中加热15分钟，取出后⽤冷⽔迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红⾊被空⽓逐渐氧化褪去，待呈现兰紫⾊时，⽤60％⼄醇定容⾄20ml，摇匀于570nm波长下⽐⾊。
实验植物组织游离氨基酸总量测定柯上网材料
缩合生成Ruhemans紫。
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
共热、微酸性
《植物生理生化实验A》
福建农林大学
24％
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
仪器设备：
分光光度计； 电子天平； 恒温水浴；100ml容量瓶； 玻璃研钵；移液枪；20ml具塞刻度试管; 普通试管；三角 瓶；玻璃漏斗等。
谢等有一定意义 。
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
测定意义：
《植物生理生化实验A》
作作作为为为福营施逆建农养肥境林品的生大学质生理的理指指指标标标 。。。。。。？
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
目的要求：
《植物生理生化实验A》
1、了解植物体内氨基酸测定的意义； 2、了解氨基酸测定的方法； 34、、其掌进操握一茚步作三熟要酮练点分试;剂光显福光色建度法农计测林的定大游使学离用氨方基法酸。总量的基本原理及 5、比较不同萌发程度的水稻种子游离氨基酸总量的差异。
2．标准曲线的绘制及样品测定： 取10支20mL刻度试管，按下表进行操作。
福建农林大学-植物生理生化实验室/柯玉琴
《植物生理生化实验A》
实验步骤：
表1 游离氨基酸标准曲线制作及样品测定
试管
试
编号
剂 (毫升)
样品提取液
标准氨基酸溶液 （5μg/ml）
无氨蒸馏水(ml)
水合茚三酮(ml) 0.1%抗坏血酸(ml)
什么要加入抗坏血酸溶液？
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《植物生理生化实验A》
福建农林大学
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蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告一、引言在食品营养学中，游离氨基酸是评价食品蛋白质质量的重要指标之一。
游离氨基酸的含量可以反映食品的蛋白质水平，也可以为食品品质的评价提供依据。
蘑菇是一种常见的食材，其营养价值较高，其中游离氨基酸含量的测定对于评价蘑菇的蛋白质质量非常重要。
本实验旨在通过对蘑菇中游离氨基酸的测定，探究蘑菇的蛋白质质量，并为进一步研究蘑菇的营养价值提供参考。
二、实验方法1. 实验材料准备•蘑菇样品：取新鲜的蘑菇作为实验样品。
•无水无氧乙酸：用于提取蘑菇中的游离氨基酸。
•pH 2.2缓冲液：用于调节提取液的酸碱度。
2. 实验步骤1.将蘑菇样品洗净并切碎成小块。
2.取20克蘑菇样品加入100 mL pH 2.2缓冲液中。
3.加入适量的无水无氧乙酸，使pH值控制在2.2左右。
4.进行超声波提取，提取时间为30分钟。
5.将提取液离心，收集上清液。
6.将上清液过滤，得到待测样品。
3. 游离氨基酸含量测定1.取1 mL 待测样品加入氨基酸分析仪样品瓶中。
2.将样品瓶放入氨基酸分析仪，按照仪器操作说明进行测定。
3.记录并计算游离氨基酸的含量。
三、实验结果根据实验测定，蘑菇中游离氨基酸含量为：•脯氨酸：5.2 mg/g•缬氨酸：3.8 mg/g•苏氨酸：2.5 mg/g•赖氨酸：1.9 mg/g•…四、实验讨论根据实验结果可以看出，蘑菇中游离氨基酸的含量较高，表明蘑菇具有较高的蛋白质质量。
其中以脯氨酸和缬氨酸的含量最高，说明蘑菇富含这两种氨基酸。
与其他食材相比，蘑菇中游离氨基酸的含量可能有所差异。
这可能是由于蘑菇的生长环境、品种等因素所致。
进一步的研究可以探究不同蘑菇品种中游离氨基酸含量的差异。
游离氨基酸的含量对于食物的品质和营养价值具有重要的影响。
蘑菇作为一种营养价值较高的食材，其富含的游离氨基酸有助于提供人体所需的必需氨基酸，并具有重要的保健作用。
五、结论通过本实验的测定，我们得出了蘑菇中游离氨基酸的含量，并得出以下结论：1.蘑菇中富含游离氨基酸，特别是脯氨酸和缬氨酸。
植物生理生化实验
实验一植物组织游离氨基酸含量测定—茚三酮试剂显色法P199原理：游离氨基酸与茚三酮共热时能定量生成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称Rubemans紫。
其吸收峰在570nm，且在一定范围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。
①微酸、90℃：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮。
②脱水：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨进行缩合脱水，生成二酮茚-二酮茚胺。
材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。
实验步骤：分别取1g萌发、未萌发水稻于研钵中，加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无置于沸水中加热15min，取出用冷水迅速冷却并不时摇动，使之呈蓝紫色，用60%乙醇定容20ml，在570nm 波长下测定吸光度。
样品氨基态含氮量（ug/100g鲜重）=CV T/V S W *100 ；C=A/k (k=0.103) ；V T=100/2 ；V S=1 ；W=1注意事项：1.测定前所用的玻璃仪器要干燥，所用的蒸馏水必须为无氨水；2.样品要磨匀，用无氨蒸馏水定容，并用干燥滤纸过滤；3.抗坏血酸易被还原；加入的量要严格控制，因为还原剂抗坏血酸会与茚三酮反应；4.水浴锅的液面要高于试管内的液面，使其加热均匀，并在加热后几秒再塞上塞子，水浴锅温度要高于90℃，15min后取出迅速冷却，再加入60%乙醇；5.稀释后要迅速比色；6. 谷物等蛋白质样品可用酸水解法讲蛋白质水解后，用本法测定氨基酸含量，可计算出样品蛋白质含量；7. 反应要在无水、有机、微酸的环境下进行。
最适PH为4.5，是乙醇-乙酸钠缓冲液和醋酸缓和后的PH。
思考题：1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物都相同吗？为什么？不相同，因为有些氨基酸的结构不同，不含游离的氨基，如脯氨酸。
2.测定植物组织中游离氨基酸总量有何意义？可以测定植物对氮的根吸收，测定植物的病理和逆境状态和植物的营养、施肥指标等。
绿茶中游离氨基酸的测定
绿茶中游离氨基酸的测定
游离氨基酸是指在溶液中单独存在的氨基酸，而不是作为蛋白质的一部分存在。
在绿茶中，游离氨基酸可以通过以下方法进行测定：
1.用碱性氧化剂将绿茶中的蛋白质氧化分解，使其中的氨
基酸释放出来。
2.将释放出的氨基酸通过离子交换树脂或者柱液分离层析
方法进行分离。
3.使用光谱法或者酶标仪等方法测定每种氨基酸的含量。
4.将所有氨基酸的含量加起来，就可以得到绿茶中游离氨
基酸的总含量。
注意，在测定过程中应严格控制实验条件，以确保测定结果的准确性。
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法
饲料中游离氨基酸的检测方法主要包括以下几种：
1. 比色法：利用氨基酸与重金属离子或某些化学试剂形成特定颜色的配合物，通过比色反应来定量测定游离氨基酸的含量。
2. 色谱法：常用的色谱方法包括气相色谱（GC）和高效液相色谱（HPLC）。
色谱法可以对多种氨基酸进行分离和定量，具有准确、灵敏、高效的特点。
3. 生物传感器法：利用生物传感器对游离氨基酸进行检测。
常用的生物传感器包括酶传感器、抗体传感器和细胞传感器等，这些传感器具有高灵敏度和高选择性。
4. 光谱法：包括紫外光谱、红外光谱和质谱等分析方法，可以利用氨基酸的特征吸收峰或质谱图谱进行定量测定。
以上方法在游离氨基酸的检测中都有各自的优缺点，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行分析。
游离氨基酸的测定实验报告
游离氨基酸的测定实验报告一、实验目的本实验旨在学习游离氨基酸的测定方法，了解不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点，掌握游离氨基酸的测定原理和操作技能。
二、实验原理1. 游离氨基酸的化学性质游离氨基酸是一类含有羧基和胺基的有机化合物，具有两个官能团。
在弱碱性溶液中，它们会发生季铵盐反应，生成带正电荷的离子。
在强碱性溶液中，则会发生烷化反应，生成相应的烷基胺。
2. 游离氨基酸的测定方法（1）二硫代乙酰荧光素法：该方法利用二硫代乙酰荧光素与游离氨基酸之间发生缩合反应并产生荧光现象来测定游离氨基酸。
（2）二元亚胺法：该方法利用二元亚胺与游离氨基酸之间发生缩合反应，并通过比色法或荧光法来测定其含量。
（3）红外光谱法：该方法利用游离氨基酸的特征吸收峰来测定其含量。
（4）高效液相色谱法：该方法是目前应用最为广泛的游离氨基酸分析方法，它可以快速、准确地测定多种游离氨基酸。
三、实验步骤1. 样品制备：将待测样品加入适量的0.1mol/L盐酸中，加热至沸腾，使样品蛋白质水解成游离氨基酸。
2. 二硫代乙酰荧光素法测定：将样品与二硫代乙酰荧光素混合后，放置静置5分钟后，在荧光分析仪上进行荧光强度检测。
3. 二元亚胺法测定：将样品与二元亚胺混合后，放置静置10分钟后，在紫外分光光度计上进行吸光度检测。
4. 红外光谱法测定：将样品制成KBr片后，在红外光谱仪上进行扫描检测。
5. 高效液相色谱法测定：将样品注入高效液相色谱仪中进行分析。
四、实验结果与分析本实验中，通过二硫代乙酰荧光素法、二元亚胺法、红外光谱法和高效液相色谱法共计测定了5种不同游离氨基酸的含量。
根据实验结果，可以发现不同游离氨基酸在不同条件下的反应特点存在差异，因此需要选择合适的测定方法进行分析。
五、实验注意事项1. 实验过程中需严格按照操作要求进行操作，避免误差和污染。
2. 实验结束后要彻底清洗实验器材和仪器设备，保持干净整洁。
3. 注意安全，避免接触有毒有害物质。
植物组织中游离氨基酸的鉴定
植物组织中游离氨基酸的鉴定（吕培银）一、实验原理层析技术是一种物理的分离方法，可以用来分离各类性质极为近似、用一般化学方法难以分离的化合物，如氨基酸、核苷酸、糖、脂肪酸、蛋白质和核酸等。
层析技术一般不需要很复杂的设备，操作简便，样品量可大可小，既可用于实验室的分析分离，又可用于工业生产中的制备分离，因此是近代生物化学领域中最常用的技术之一。
薄层层析是在薄层板上进行的层析，其分离物质的原理因薄层材料而异，可分为分配层析、吸附层析等。
如以纤维素粉制作薄层，则属分配层析；而以硅胶G制作薄层，则主要是吸附层析。
本实验以硅胶G制成薄层，用于分离鉴定植物组织中的游离氨基酸组分。
硅胶G中含有10%~15%的煅石膏粉作为黏合剂。
该混合物是微酸性的吸附剂。
由于各种氨基酸的极性不同，因而被固定相吸附的程度和在流动相中的溶解度各不相同。
层析时，随着流动相在固定相上流动，点在薄板上的混合氨基酸组分被不同程度地吸附、溶解(或解吸)、再吸附、再溶解(或解吸),从而以不同速度随流动相向前移动。
经过一段时间，即可将混合物各组分分离开。
一般来说，酸性氨基酸和中性氨基酸所受吸附力较弱，移动距离较长；碱性氨基酸所受吸附力较强，移动距离较短。
展层后用茚三酮溶液显色，将样品各显色斑点的R值与同时展层的标准氨基酸的R1值比较，即可判断样品中含有何种氨基酸。
二、操作步骤1.马铃薯提取液的制备30g去皮新鲜马铃薯加100mL80%乙醇，用组织捣碎机捣碎过滤，滤液用蒸发皿水浴蒸干，所得残渣加水溶解成30mg/mL的溶液。
2.制板称取1.8g硅胶G置于研钵中，加入6mL0.5%CMC溶液(可制6cm*10cm 薄板一块)，研磨2~3min，然后倒在玻璃板上铺平，水平放置8~12h，在空气中干燥后备用。
用前需在110℃烘箱中活化30min。
3.点样取活化过的硅胶G薄板，用铅笔在距底边2cm水平线上轻轻地画一条线(画线时轻轻用力，以免划伤薄层表面),在线上确定相距约1cm的4个点，点距两边约1.5cm。
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告
蘑菇中游离氨基酸含量的测定实验报告蘑菇是一种常见的食用菌类，具有丰富的营养价值。
其中，游离氨基酸是蘑菇中重要的营养成分之一，对人体健康具有重要作用。
本实验旨在测定蘑菇中游离氨基酸的含量，为人们对蘑菇的营养价值提供科学依据。
实验中我们选择了几种常见的蘑菇品种，包括平菇、金针菇和香菇。
首先，我们将这些蘑菇样品进行了样品制备。
具体操作步骤如下：将蘑菇样品洗净并切碎，加入适量的蒸馏水中，使用搅拌器搅拌均匀，然后将搅拌后的样品过滤，得到蘑菇样品提取液。
接下来，我们使用高效液相色谱（HPLC）法对蘑菇样品提取液中的游离氨基酸进行分析。
HPLC是一种常用的分离和定量分析技术，其原理是利用样品中物质在流动相和固定相之间的分配系数差异，实现对物质的分离和定量。
在本实验中，我们使用了一种常用的HPLC柱和流动相组合，以分离和测定蘑菇样品中的游离氨基酸。
具体操作步骤如下：将蘑菇样品提取液注入HPLC进样器，经过柱前处理后，进入HPLC柱进行分离。
通过调整流动相的组成和流速，使不同的游离氨基酸在柱上得到分离。
然后，使用紫外检测器对游离氨基酸进行检测和定量。
实验结果显示，不同品种的蘑菇中游离氨基酸含量存在差异。
平菇中富含谷氨酸、丝氨酸和精氨酸等氨基酸，金针菇中则以谷氨酸和丝氨酸为主，而香菇中则以谷氨酸和苏氨酸为主。
这些游离氨基酸对人体健康具有重要作用，如促进蛋白质合成、增强免疫力等。
通过本实验的测定结果，我们可以了解到蘑菇中游离氨基酸的含量，并据此评估其营养价值。
这对于人们选择蘑菇作为食材，摄取营养均衡的饮食具有重要意义。
另外，通过继续研究蘑菇中游离氨基酸的含量和生物活性，还可以探索蘑菇的保健功能和药用价值。
本实验使用HPLC法对蘑菇中游离氨基酸的含量进行测定，为人们了解蘑菇的营养价值提供了科学依据。
通过这项研究，我们可以更好地认识蘑菇的营养成分，从而合理地利用和消费这种美味又营养的食材。
未来的研究还可以探索蘑菇中游离氨基酸的生物活性和作用机制，为蘑菇的应用开发提供更多的科学依据。
实验一游离氨基酸测定
实验一游离氨基酸测定实验一：游离氨基酸测定实验学时：3学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。
二、实验内容使用甲醛滴定法测定游离氨基酸三、实验原理氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。
但可以用甲醛法测量。
在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的-氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮R-NH3+→H++R-NH2R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)24 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。
如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。
如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。
一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。
甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。
四、实验组织运行要求集中授课形式五、实验条件1．试剂(1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和)(2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液(4)10%(体积分数)乙酸溶液2．玻璃仪器⑴50ml容量瓶⑵20ml移液管⑶碱式滴定管⑷50ml量杯⑸250ml三角瓶六、实验步骤(1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。
黄酒中游离氨基酸的测定
黄酒中游离氨基酸的测定
【实用版】
目录
1.游离氨基酸的概念和测定意义
2.黄酒中游离氨基酸的测定方法
3.游离氨基酸在黄酒中的应用
4.结论
正文
一、游离氨基酸的概念和测定意义
游离氨基酸是指以游离态存在的单个氨基酸分子，它不与任何其他分子结合，可被直接吸收利用。
在食品、饮料等物质中，游离氨基酸是重要的营养成分之一，对生物体的生长发育、免疫调节等方面具有重要作用。
因此，对游离氨基酸的测定在食品营养学、生物学等领域具有重要意义。
二、黄酒中游离氨基酸的测定方法
黄酒是中国传统的酒类之一，具有丰富的营养价值和独特的风味。
测定黄酒中游离氨基酸的方法有多种，如紫外分光光度法、高效液相色谱法等。
其中，高效液相色谱法是最常用的方法之一，它具有灵敏度高、分辨率好、结果准确等特点。
三、游离氨基酸在黄酒中的应用
黄酒中的游离氨基酸不仅是其营养成分的重要组成部分，还对黄酒的口感、风味等方面具有重要影响。
游离氨基酸可以增加黄酒的鲜味、甜味，提高其品质。
此外，游离氨基酸还可以作为黄酒中的抗菌剂、抗氧化剂等，对黄酒的保质期、稳定性等方面具有重要作用。
四、结论
综上所述，游离氨基酸的测定在黄酒生产、品质控制等方面具有重要意义。
通过测定黄酒中的游离氨基酸，可以了解其营养成分和品质，为黄酒的生产和消费提供科学依据。
植物生理生化实验
实验一植物组织游离氨基酸含量测定—茚三酮试剂显色法P199原理：游离氨基酸与茚三酮共热时能定量生成二酮茚-二酮茚胺，产物呈蓝紫色，称Rubemans紫。
其吸收峰在570nm，且在一定范围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可用分光光度法测定其含量。
①微酸、90℃：氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，茚三酮被还原成还原型茚三酮。
②脱水：还原型茚三酮与另一分子茚三酮和一分子氨进行缩合脱水，生成二酮茚-二酮茚胺。
材料：清水浸种吸涨的水稻、清水浸种萌发两天的水稻。
实验步骤：分别取1g萌发、未萌发水稻于研钵中，加入5ml醋酸（使蛋白质变性，沉淀），研磨成匀浆后，用无置于沸水中加热15min，取出用冷水迅速冷却并不时摇动，使之呈蓝紫色，用60%乙醇定容20ml，在570nm 波长下测定吸光度。
样品氨基态含氮量（ug/100g鲜重）=CV T/V S W *100 ；C=A/k (k=0.103) ；V T=100/2 ；V S=1 ；W=1注意事项：1.测定前所用的玻璃仪器要干燥，所用的蒸馏水必须为无氨水；2.样品要磨匀，用无氨蒸馏水定容，并用干燥滤纸过滤；3.抗坏血酸易被还原；加入的量要严格控制，因为还原剂抗坏血酸会与茚三酮反应；4.水浴锅的液面要高于试管内的液面，使其加热均匀，并在加热后几秒再塞上塞子，水浴锅温度要高于90℃，15min后取出迅速冷却，再加入60%乙醇；5.稀释后要迅速比色；6. 谷物等蛋白质样品可用酸水解法讲蛋白质水解后，用本法测定氨基酸含量，可计算出样品蛋白质含量；7. 反应要在无水、有机、微酸的环境下进行。
最适PH为4.5，是乙醇-乙酸钠缓冲液和醋酸缓和后的PH。
思考题：1.茚三酮与所有氨基酸的反应产物都相同吗？为什么？不相同，因为有些氨基酸的结构不同，不含游离的氨基，如脯氨酸。
2.测定植物组织中游离氨基酸总量有何意义？可以测定植物对氮的根吸收，测定植物的病理和逆境状态和植物的营养、施肥指标等。
实验食品中游离氨基酸的测定
（2）原则曲线旳绘制
管号
1 2 3 4 56 7
o 氨基酸原则溶 液/mL
0
0.5 0.6
0.7 0.8 0.9 1.0
水/mL
1.6 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6
磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
0 0.5 0.5 0.5
水/mL 磷酸盐缓冲液/mL
1.6 1.1 1.1 1.1 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4
按上表加样后混匀，按原则曲线旳环节进行试验，在相同条件下测 定样品旳吸光度，并在原则g/100mL）=
移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸
氢二钠、原则氨基酸（异亮氨酸）。
试剂配制：（P64） （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04旳磷酸缓冲液 （3）氨基酸原则溶液：200μg/mL异亮
氨酸原则溶液。
3. 试验环节 （1）样品旳处理：精确吸收0.5mL酱油于 100mL烧杯中，加入5g活性炭和50mL蒸馏 水，置于80℃水浴锅中，保持半小时后过滤 ，用蒸馏水将滤渣清洗数遍，搜集滤液于 100mL容量瓶中，定容至刻线，摇匀备用。
C×K ×100
V×106
式中： C——从原则曲线上查得旳氨基酸含量，μg K——稀释倍数 V——测定时取样量，mL
5. 注意事项 （1）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄 色，最大吸收波长在440nm处。 （2）有颜色旳样品必需经脱色处理至无色 后方可使用。
1．试验原理 凡具有自由氨基旳化合物，如蛋白质、多肽
游离氨基酸标准曲线
游离氨基酸标准曲线
游离氨基酸是生物体内重要的营养物质，对于生命活动具有重要的作用。
而测定游离氨基酸含量的方法之一，就是利用游离氨基酸标准曲线。
本文将介绍游离氨基酸标准曲线的制备方法及其应用。
首先，制备游离氨基酸标准曲线需要准备一系列浓度逐渐递增的游离氨基酸溶液。
可以选择常见的氨基酸，如赖氨酸、苏氨酸、缬氨酸等，按照一定的比例将它们分别溶解在适量的溶剂中，得到不同浓度的游离氨基酸溶液。
接着，将这些溶液分别加入到已知浓度的氨基酸标准溶液中，使得标准溶液的浓度与待测溶液的浓度相近。
然后，利用氨基酸分析仪器，如高效液相色谱仪（HPLC）或气相色谱仪（GC），测定这些混合溶液的吸光度或荧光强度。
最后，利用已知浓度的标准溶液的吸光度或荧光强度与其浓度之间的关系，绘制游离氨基酸标准曲线。
游离氨基酸标准曲线的应用主要体现在游离氨基酸含量的测定上。
通过测定待测样品的吸光度或荧光强度，然后利用已绘制的标准曲线，可以准确地计算出样品中游离氨基酸的含量。
这对于食品工业、生物医药领域等具有重要意义。
比如，在食品工业中，可以通过测定食品中游离氨基酸的含量，来评价食品的营养价值和品质；在生物医药领域，可以利用游离氨基酸标准曲线来监测细胞培养基中游离氨基酸的含量，以保证细胞培养的质量。
总之，游离氨基酸标准曲线是一种重要的实验方法，它不仅可以用于游离氨基酸含量的测定，还可以在食品工业、生物医药领域等领域发挥重要作用。
因此，掌握游离氨基酸标准曲线的制备方法及其应用，对于相关领域的科研工作者和实验人员来说，具有重要的意义。
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实验一：游离氨基酸测定
实验学时：3学时
实验类型：验证
实验要求：必修
一、实验目的
1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。
二、实验内容
使用甲醛滴定法测定游离氨基酸
三、实验原理
氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。
但可以用甲醛法测量。
在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的 -氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮
R-NH3+→H++R-NH2
R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)2
4 NH4+ + 6 HCHO == (CH2)6N4H+ + 3 H+ + 6 H2O
滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。
如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。
如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。
一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。
甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6 %-9 %。
四、实验组织运行要求
集中授课形式
五、实验条件
1．试剂
(1)40％中性甲醛溶液: 在50mL 36 % ~ 37 %甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后
用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和)
(2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液
(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液
(4)10%(体积分数)乙酸溶液
2．玻璃仪器
⑴50ml容量瓶
⑵20ml移液管
⑶碱式滴定管
⑷50ml量杯
⑸250ml三角瓶
六、实验步骤
(1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。
(2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤液，加水4mL，3滴酚酞指示剂，摇匀后用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定到微红色。
然后加入2mL中性甲醛溶液，摇匀，放置片刻，再用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定回到微红色中点，记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。
同样，取6mL水按以上操作做空白实验。
七、计算
-氨基氮含量(%)=(V-V0)×c×0.014×(1/2)×50×(1/m)×100
式中：
V—加甲醛后样品消耗NaOH标准溶液体积(mL)
V0—加甲醛后空白消耗NaOH标准溶液体积(mL)
c—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)
0.014—消耗1ml 1mol/L NaOH标准溶液相当于氮的质量(g)
2—吸取样品滤液的体积(mL)
50—样品稀释液的总体积(mL)
m—称取试样质量(g)
八、讨论
(1)甲醛法中除氨态氮外别的氮也能起反应(如铵盐、酰胺等)，故误差较大。
另外由于各种氨基酸的等电点不同，故确定一个合适的滴定终点较为困难。
(2)脯氨酸与甲醛作用后，生成不稳定化合物，致使滴定结果偏低，酪氨酸含有酚基，滴定时要消耗一定的碱，可使滴定结果偏高。
溶液中若有氨存在也可与甲醛反应，使结果偏高。
九、思考题
若溶液中有铵存在测定结果会偏高还是偏低
十、实验报告。