红细胞血型血清学检测技术规范
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ABO及RH(D)血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA -K2抗凝管采集血液2ml (标本应新鲜，注意避免污染)3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA -K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO： 1. 1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.25%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3受检者血清。
1.4受检者5%红细胞盐水悬液。
2.RH 2.1IgG型抗D标准血清。
2.25%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ABO血型鉴定：生理盐水凝集法一试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
RH鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh(D)抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ABO鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备2只试管，分别为抗A，抗B试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入A，B型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心2分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
红细胞血型检测与技术要求
学习要求：
• 1.输血前主要包括哪些内容？ • 2.受血标本接受时的注意事项有哪些？ • 3.ABO血型和RhD血型鉴定时的注意事项有
哪些？ • 4.交叉配血试验的影响因素有哪些？ • 5.抗球蛋白试验的临床应用有哪些方面？ • 6.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪
些？
红细胞血型检测和技术要 求
(1)定型方法：正、反定型的试管离心方法目 前仍被认为是最可信赖的ABO定型方法。
1)定型试剂：有些ABO血型诊断试剂是以人的
血清汇聚而制成的，但必须具备以下条件
：
第一，高效价(1：
128)的IgM抗A或抗B。
第二，
具较好的亲和性红并细胞不血含型检冷测和凝技术集要素。
求
二、受血者和供血者ABO和Rh 2)ABO亚型的鉴定定：型
求
（三）标本的要求
1. 对输血前检查的血液标本应严格要求能代表受血 者当前的免疫学状况，标本还需经鉴定和标记， 保证其准确无误地来自受血者和供血者，应和血 液申请单上的内容一致。
2. 防止受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集 过程中发生溶血则不能使用。
3. 受血者配血试验对的血液标本必须是输血前3天 采集的。
正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应 ，检测红细胞 表面是否存在A抗原或B抗 原。
Байду номын сангаас
反定型：用标准A细红细胞胞血及型检B测细和胞技术与要 被检血清反 求
二、受血者和供血者ABO和Rh 定型
红细胞血型检测和技术要 求
二、受血者和供血者ABO和Rh
定型
1.ABO定型 最适的反应温度为4℃，但在室 温反应良好，所以常规的ABO定型试验仅在 室温进行。
2)血清异常：血清蛋白引起缗钱状形成，影 响反定型结果。红细胞血型检测和技术要
血型鉴定标准操作规程
血型鉴定标准操作规程1.目的为规范各血型系统血型鉴定的技术操作，保证鉴定结果准确及临床输血安全有效，特制定本规程。
2.适用范围适用于输血科（血库）进行各血型系统血型鉴定。
3.职责输血科（血库）技术人员负责各血型系统血型鉴定。
4.所需设备和试剂设备普通离心机，血型血清学专用离心机，普通显微镜。
试剂各血型系统单克隆血型试剂，3%-5%的A、B、O型试剂红细胞。
5.检测环境条件室温应控制在18-27℃，湿度应保持30%-70%。
6.项目及方法ABO血型鉴定ABO血型鉴定原理红细胞上具有A抗原，而血清中含有抗B抗体者为A型；红细胞上有B抗原，而血清中含有抗A抗体者为B型；红细胞上没有A和B抗原，而血清中含有抗A、B抗体者为O 型；红细胞上有A和B抗原，而血清中没有相应抗体者为AB型，见表1。
表1.试剂血清、红细胞鉴定血型（一）玻板法实验操作（1）洁静的玻板，用记号笔在正定型一侧注明抗A、抗B、抗A（B）,反定型一侧孔中注明A细胞、B细胞、O细胞。
（2）在正定型一侧孔中先加入相应试剂血清1滴,再加入待检者20%红细胞悬液1滴；在反定型一侧先加入待检者血清2滴,再加入相应20%试剂红细胞(为3-5人份的混合红细胞)1滴。
（3）摇动玻板数次,5min后观察凝集现象，判断并报告检测结果。
如有怀疑者,须做试管法对照。
（4）报告方式:通过计算机信息系统发布正式血型结果。
注意事项（1）操作者必须认真细致,严格查对,准确报告血型结果。
（2）鉴定血型时,室内温度宜在18-27℃,以免产生假阳性。
遇有可疑冷凝集时 (1)先将玻板放在日光灯处加热3-5分钟后观察 (2)将待检者红细胞用37℃生理盐水洗涤2-3次后，再做血型鉴定。
（3）抗A、抗B、抗A(B)试剂血清，效价不低于256，亲和力在15s以内出现凝集，3min 时凝块不小于1mm2，冷凝集等效价在1:4以下。
（4）应另备有一套合格的试剂的血清作对照。
（5）所有待检者的血型均应做正、反定型，防止误定血型。
红细胞血型血清学技术
（二）红细胞悬液的配制
用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要 用大量生理盐水洗一次，其目的是通过 洗涤可以去除红细胞表面的下列物质：
1) 少量的血浆 蛋白；如纤维 蛋白原等； 2)已溶解红细 胞的基质；他 们有竞争抗体 的作用。
3)可溶性的抑 制物质 ，如 A、 B、H、Lewis 等血型物质； 4)抗凝剂；他 们有抗补体作 用。
练习题：
1.用于抗人球蛋白试验的标本要抗凝，否则： A．C3b 容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 B．C4b容易致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假阳 性。 C．血型物质吸附于红细胞造成试验结果假阳性. D．血型抗体致敏红细胞造成抗人球蛋白试验假 阳性。 E．A和B。
2 ．血型血清学试验中，关于红细胞悬液使用 浓度正确的是： A．2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 B．5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血 试验及抗人球蛋白试验等大多数血型血清学试 验。 C．10% 的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲 和力试验。 D．血型血清学试验与红细胞悬液使用浓度无 关。 E．A、B及C均正确。
（一）标本采集 1．红细胞标本
★特殊情况： 用于抗球蛋试验（ Coomb’s 试验）的 标本要抗凝，否则，补体C3b、C4b容 易致敏红细胞造成抗球蛋试验 （Coomb’s试验）假阳性。 存在有受Ca2+抑制的自身抗体时，不 宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本。
（一）标本采集 2．血清标标本
盐水介质凝集试验
原 理
盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与 相应抗体分子上的抗原结合部位结合，交 叉连结形成肉眼可见的凝集块。
★用 途：
盐水介质凝集试验用于 IgM 抗体 的检出、鉴定、盐水配血试验。 盐水抗体鉴定的血型抗原 ，如 ABO、MN、P等血型系统的抗原。
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程
红细胞血型抗体效价测定标准操作规程本文介绍了红细胞血型抗体效价测定标准操作规程，以规范输血科医务科护理部的技术操作，并适用于评估母婴血型不合的新生儿溶血病的风险程度及产前检查等其他临床需要。
在材料和设备方面，需要3%～5%的A、B型反定型试剂红细胞、0.2 mol/L二巯基乙醇(2-Me)应用液、抗球蛋白试剂、待检者血标本、微柱凝胶抗球蛋白卡等。
在检测环境方面，室温应控制在18-27℃，湿度应控制在30%-70%。
在检测原理方面，对于IgM类红细胞血型抗体，将受检血清经连续倍比稀释后与表达检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞反应，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
对于IgG类红细胞血型抗体，则先用巯基试剂2-Me裂解其中的IgM型抗体，经巯基试剂2-Me处理后再测定IgG类红细胞血型抗体。
在操作步骤方面，盐水介质法测定IgM类红细胞血型抗体效价。
具体操作为将受检血清加入一系列稀释盐水中，分别加入A、B型反定型试剂红细胞，静置30分钟后观察凝集情况，以受检血清凝集试剂红细胞的最高稀释倍数的倒数作为受检血清中检测目标抗体的效价，并根据“红细胞凝集强度与评分标准”评分，完成对IgM类红细胞抗体效价的测定。
7.1.1.对12支试管进行排列编号，第2至第12管每管加入0.1ml生理盐水，第1管及第2管分别加入受检者血清0.1ml，混匀后吸出0.1ml移至第3管内，以此类推，连续倍比稀释至第12管（2048倍）。
7.1.2.在12支试管中，分别加入3%检测目标抗体对应抗原的试剂红细胞50μl，轻摇试管架。
7.1.3.使用血型血清学专用离心机进行离心，离心速度为120g，离心时间为1min，观察并记录有无溶血及凝集情况。
7.1.4.结果判读：镜检呈“1+”凝集的最高稀释倍数的倒数即为检查目标抗体的效价，根据“红细胞凝集强度与评分标准”进行评分。
血型鉴定标准操作规程
血型鉴定标准操作规程1 目的规范血型鉴定，提升输血工作从业人员技术水平，保证血型鉴定检测质量，保障临床输血安全。
2 职责输血科(血库)岗位工作人员负责血型鉴定检测全过程。
3 适用范围适用于输血科(血库)工作人员从事血型鉴定检测。
4 生物安全要求血型鉴定检测标本，存在潜在的生物安全危害,所有标本的操作过程必须遵守：被血液污染的物品必须放入医疗专用垃圾袋，损伤性废弃物放入利器盒。
5 设备和材料5.1 标本: 采血EDTA抗凝标本(紫色长管)。
5.2 试剂：抗A、抗B血型定型试剂、RhD血型定型试剂、2%～5%A、B、O标准试剂红细胞、标准Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号不规则抗体筛选红细胞、凝聚胺（低离子强度溶液（LIM）、凝聚胺溶液、悬浮液）、生理盐水等。
5.3设备：输血科（血库）血型血清学专用离心机、标本离心机、显微镜、试管架等。
5.4 耗材：清洁干燥一次性塑料试管(5ml)、清洁干燥一次性塑料吸管(1ml)、清洁干燥载玻片、速干手消毒液/消毒纸巾、污物桶、利器盒、医疗废弃物专用袋、医疗废弃物处置标签、一次性橡胶手套、干净工作服、口罩等。
6 环境血型鉴定检测环境要求宽敞明亮、干燥通风、安全卫生、整洁有序。
7 操作步骤7.1 ABO血型鉴定操作规程7.1.1 方法试管法。
7.1.2 原理根据红细胞上有或无A抗原和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。
利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO 血型。
正定型就是用已知抗A和抗B血型抗体来测定红细胞A抗原或/和B抗原；反定型就是用已知A红细胞和B红细胞来测定血清/血浆中有无相应的抗A 或/和抗B。
7.1.3 标本种类：受检者血清/血浆、2%～5%受检者红细胞盐水悬液。
7.1.4 试剂及器材：抗A、抗B 血型抗体；2%～5%A、B、O标准试剂红细胞；生理盐水；试管架；清洁干燥试管；清洁干燥吸管；清洁干燥载玻片；生物显微镜；血库专用离心机。
7.1.5 操作步骤7.1.5.1 检查所用试剂的批号、外观、有效期及相应的器材。
红细胞血型检测技术
2）结果保存时间长：在室温条件下，凝胶试剂卡一 般可保存数天甚至数周，也可以拍照保留试验结果图 像存档备用。
3）标本用量少：标本用量为试管法的1/10～1/5，尤 其有利于新生儿及某些特殊血液标本的检测。
第二章 红细胞血型检测技术 P36
血型血清学检验的重要性
血型血清学检验是输血前检查的必要内容，是 输血安全的重要保证，同时也是新生儿溶血病、 器官移植等重要的实验室检查。
红细胞抗原抗体反应基本理论
红细胞抗原与相应抗体无论是在体内或是在体 外，均可发生反应。
体外试验红细胞抗原抗体反应的本质是凝集反 应，其中抗体以前多从人血清中提取（但现在 的抗A、抗B试剂一般为基因工程制备的单克 隆抗体），又称为血清学试验。
微柱凝胶试剂卡分类
应用
中性凝胶试剂卡：用于ABO血型正反定型、RhD抗原 测定、其他血型抗原鉴定及盐水介质交叉配血等；
特异性凝胶试剂卡：用于ABO血型正定型、RhD抗原 测定和其他血型鉴定；
抗球蛋白凝胶试剂卡：用于IgG抗D抗体鉴定RhD抗原， 红细胞不规则抗体筛查和交叉配血等。
卡式法的优点：
2. 原理 ：葡聚糖凝胶颗粒-凝胶微柱-微柱凝胶卡。
是利用凝胶颗粒之间的间隙形成的分子筛作用，在微柱凝胶介质 中红细胞与相应抗体结合，经低速离心，凝集成块的红细胞因体 积大被凝胶阻滞不能通过凝胶层，留于凝胶介质的上层或中间， 即阳性反应；未凝集游离红细胞因体积小而通过凝胶之间的间隙 沉积于微柱凝胶检测管底部，形成细胞扣，即阴性反应。
7）药物：药物如低分子右旋糖酐、聚乙烯吡 咯烷酮及静脉注射某些造影剂，血液粘滞性增 高，可使红细胞凝集而类似凝集表现。
红细胞血型抗体鉴定操作规程
红细胞血型抗体鉴定操作规程 SXYJ-GZ-02161目的规范红细胞血型抗体鉴定的操作，发现有临床意义的不规则抗体，确保红细胞血型抗体鉴定的准确性。
2适用范围适用于疑为抗体筛选阳性者，如交叉配血、输血反应和新生儿溶血病等的检测。
3职责检测者负责依据此程序进行红细胞血型抗体鉴定操作。
4材料与设备抗体筛选细胞、混合筛选细胞、谱细胞、IgG抗-D血清、3%RhD阳性红细胞盐水悬液、1%木瓜酶试剂、抗人球蛋白试剂、0.9%无菌生理盐水；一次性使用滴管、试管、玻片；KUBOTA KA-2200型离心机、S648型电热恒温水温箱（37℃）、HH.W21.600型电热恒温水温箱（56℃）等。
5操作方法5.1待检标本的准备及要求5.1.1待检标本准备两管血样，一管用EDTA抗凝，另一管不抗凝血清：待检的不抗凝标本应退缩充分，用离心机离心并分离出血清；5.1.2细胞：从待检的抗凝标本中吸出一滴红细胞，用0.9%生理盐水充分洗涤三遍，配制成3%红细胞盐水悬液。
5.2盐水介质法5.2.1加受检者血清2滴于标好的试管中；5.2.2加3%试剂红细胞悬液1滴于每个试管中混合；5.2.3离心3400转15秒（KA-2200型离心机Ⅱ档），观察溶血和凝集反应，记录结果；5.2.4按需要置4℃、室温（18-25℃）、37℃孵育15-30分钟；5.2.5离心观察溶血和凝集，并记录结果，溶血或凝集都是阳性结果。
5.3间接抗人球蛋白法：方法参见SXYJ-GZ-0211。
5.4木瓜酶法：方法参见SXYJ-GZ-0215。
5.5吸收试验：根据初步判断抗体的性质选择相应的方法（参见SXXJ-GZ-0208）。
5.6放散试验：根据初步判断抗体的性质选择相应的方法（参见SXXJ-GZ-0209）。
6结果判定根据凝集强度和溶血现象(方法参见SXYJ-GZ-0202:5.2.1.6)，对结果进行判读。
根据细胞谱反应格局确定抗体特异性。
7注意事项7.1对所有疑为抗体筛选阳性的样本均进行此项鉴定，常规筛选使用1、2、3号筛选细胞或混合筛选细胞，抗体特异性鉴定使用谱细胞。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
红细胞血型血清学技术
★红细胞悬液的常用浓度
压积红细胞1滴加8滴生理盐水所配成的悬液约为10%， 按此比例配制其他所需浓度的红细胞悬液。 2%的红细胞悬液一般用于滴定抗体效价。 5%的红细胞悬液一般用于血型鉴定、配血试 验、及抗球蛋白试验等大多数血型血清学试验。 10% 的红细胞悬液一般用于测定抗体的亲和 力试验。
（二）红细胞悬液的配制
用于血型鉴定、配血等的红细胞至少要 用大量生理盐水洗一次，其目的是通过 洗涤可以去除红细胞表面的下列物质：
1) 少量的血浆 蛋白；如纤维 蛋白原等； 2)已溶解红细 胞的基质；他 们有竞争抗体 的作用。
3)可溶性的抑 制物质 ，如 A、 B、H、Lewis 等血型物质； 4)抗凝剂；他 们有抗补体作 用。
（一）标本采集 2．血清标标本
采集方法： 取静脉血注入干燥试管内，放置 37 ℃水浴中，凝固后用玻璃棒搅动血块， 使之与试管壁剥离， 然 后 放 置 4 ℃ 冰 箱过夜，离心分离血清。 必要时，当血液凝固后即可离心分 离血清。
（一）标本采集 2．血清标标本
★需注意的问题： 血清如需于4℃冰箱保存，需加叠氮钠（NaN3） 防腐，叠氮钠（NaN3）终浓度0.1%。 血清如用于制备试剂（如抗A、抗B标 准 血 清 ） 要经过56℃灭活补体后才能使用。 一般实验避免使用血浆，防止纤维蛋白的干扰。
练习题： 5．血清和红细胞混合后，延迟立即离心的后果 对哪个血型系统抗体的检出影响较大？ A．Rh血型系统。 B．MNSs血型系统。 C．ABO血型系统。 D．P血型系统。 E．Lewis血型系统。
练习题： 6．血清和红细胞混合后，延迟立即离心可使 某些凝集反应减弱或消失甚至引起溶血，解 决方法是： A．血清和红细胞混合后立即离心。 B．用血浆或灭活后的血清做试验。 C．用 EDTA 盐水配制红细胞悬液，以消除这 种现象。 D．稀释血清后再做试验可消除这种现象。 E．以上均正确。
红细胞血型血清学技术
单价特异性抗体鉴定容易，多价（多特 异性抗体和自身抗体）鉴定比较难 辅助其他实验鉴定 血型物质抑制实验、吸收放散实验等 采用不同温度、pH
抗体效价滴定 antibody titration
抗体效价滴定
一种抗体半定量的分析方法 用选定的RBC对系列稀释的血清（倍比 稀释）进行滴定 用肉眼明显可见凝集的最高血清稀释度 数值的倒数来表示效价
也可以非溶解性物质形式存在与毛发、 骨骼、皮肤等组织中
定义
抗体能与有相应抗原的RBC发生特异性 凝集，体液中的可溶性抗原物质可以与 该抗体发生特异性中和，抑制了抗体凝 集RBC的作用。这种利用可溶性抗原物 质来抑制抗体与RBC凝集作用的实验， 称为凝集抑制试验（Agglutination-inhibition
效价测定是以判断RBC凝集为基础的，判断方法如下： 4+：一个结实的大凝块，背景清楚 3+：数个结实的凝块，背景清楚 2+：中等大小的凝块加小凝块，背景清楚 1+：小凝块，背景较浑浊 ±或W+：细胞有微小的凝块，背景红色浑浊，通常用显 微镜观察 MF：混合外观凝集，少数RBC形成较大的凝集块，而 周围是游离的RBC 0：阴性，RBC呈游离状态，无凝集现象 H：溶血，有游离血红蛋白，为阳性结果
二硫苏糖醇 （DTT） 2-巯基乙醇 （2-Me）
方法： 二硫苏糖醇（DTT）/ 2-巯基乙醇（2Me）与等量血清在37℃反应30min
血清IgG抗体效价测定
原理 血清标本经巯基试剂处理后，IgM抗体 被破坏而失去相应的血清学反应能力， 此时运用辅助检测IgG抗体的方法如抗 球蛋白实验等，就可以进行IgG 抗体效 价滴定
效价评分
Marsh改良的Race和Sanger的效价数字系统 效价： 评分： “4+” 12分 “3+” 10分 “2+” 8分 “1+” 5分 “±或W+:” 2分 “0” 0分 各稀释度计分的总和即为总积分
红细胞血型血清学技术综述
红细胞血型血清学技术综述血型是人类血液的主要特征之一，表达了血液各种成分的遗传多态性。
人类红细胞血型抗原是研究最早的抗原，1901年奥地利维也纳大学的Kar Landsteiner发现人类第一个血型——ABO血型后，迄今发现的血型系统已接近30个，包括ABO、MNS、P、RH、Lutheran、Kell等。
1 红细胞血型鉴定1.1 ABO血型鉴定1.1.1原理根据红细胞上和血清（或血浆）中有或无A抗原或/和B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。
可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。
正定型是用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型红细胞和B型红细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。
应用筛选红细胞检测鉴定标本的血清中是否存在不规则抗体，如果存在，应用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。
1.1.2 结果判读细胞均匀无凝集者为阴性（-），细胞有凝集者或反应中红细胞溶血者为阳性（+）。
1.2.1 原理Rh血型系统是继ABO血型系统之后又一重要的血型系统，与ABO血型系统不同的是，在没有相应的抗原免疫的情况下，一般不会产生Rh抗体[1] 。
红细胞表面存在正常D抗原，则该细胞与抗D（IgM）试剂发生直接凝集，与抗D （IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为阳性；若红细胞表面D抗原位点数减少或抗原结构产生变异，则该细胞与抗D（IgM）试剂不发生直接凝集，与抗D（IgG ）试剂发生间接凝集，该细胞Rh血型为D弱反应型；红细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中发生凝集都应为RhD阳性。
若不存在D抗原，则该细胞无论在间接凝集试验还是在直接凝集试验中均不发生凝集，该细胞Rh血型为阴性。
用抗C、抗c、抗E、抗e這4种Rh定型试剂通过血凝试验来检查红细胞上是否存在相应抗原。
用筛选红细胞检测RhD阴性确证血清中是否存在不规则抗体，如果存在用谱细胞进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。
输血前血型血清学检验要求及标准
Ac Bc 4+ 4+
输血前血型血清学检验要求和标准
19
多凝集现象原因
• 病人红细胞被细菌或病毒感染，使T抗原激活。 • 所有正常人血清均含有T抗体。 • 反应强度取决于血清中T抗体的量。
输血前血型血清学检验要求和标准
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ABO正反定型矛盾
血浆异常（3）：丫啶黄抗体
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB Ac Bc
- 3+ -
4+ 4+
输血前血型血清学检验要求和标准
21
ABO正反定型矛盾
血浆异常（4）：不规则抗体
正定型
反定型
抗A 抗B 抗AB Ac Bc 4+ 4+ 4+ + +
输血前血型血清学检验要求和标准
22
ABO正反定型矛盾
血浆异常（5）：其他原因
• 高效价冷凝集素 • 抗A1（A2,A2B型） • 抗H（A1,A1B型）
7
ABO、RhD血型抗原检测卡
• 混合凝集外观：一般出现在嵌合体血型中
多发生在异型输血、异卵双生、双精受精和异 型骨髓移植后。异型输血、异型骨髓移植属于 暂时性嵌合（人工嵌合），双卵双生、双精受 精是遗传嵌合属于永久性嵌合。
输血前血型血清学检验要求和标准
8
ABO、RhD血型抗原检测卡
• 检验结果的解释 A、B管凝胶强度<3+，可疑为A、B亚型结果或其他 原因引起的抗原减弱； RhD凝集强度<3+，可疑为变异株。
• 酸化的抗B试剂仅与“真B”反应。
输血前血型血清学检验要求和标准
27
处理方法
缗钱状凝集
• 用N.S洗涤被检红细胞，或在反应管中滴加 1~2滴N.S。
(整理)红细胞血型血清学试验
红细胞血型血清学试验安徽省合肥市第一人民医院输血科林正民江建锋陈玲梁晓浏IgG抗A（B）测定【原理】血清以巯基乙醇（2-mercaptoethanol,简称2-me）处理后，IgM抗体分子裂解为6-7 S 亚单位。
此种亚单位虽然仍保持与抗原结合的能力，但已失去与相应红细胞凝集的作用。
IgG 抗体分子则不被2-me灭活，保持与相应红细胞致敏的血清学特性。
IgA抗体分子可部分被灭活（7S亚单体不受影响，9 S及11 S多聚体被灭活）。
【试剂】1、0.2mol/L 2-巯基乙醇应用液取巯基乙醇1.6ml以pH 7.4 PBS（KH2PO4 1.73g, Na2HPO4·12H2O 19.35g, NaCl 8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml，分装安瓿，每支1ml或2ml,冰箱保存备用。
2、受检者血清。
3、5%A型和B型红细胞PBS（或生理盐水）悬液。
4、抗人球蛋白血清。
【操作】1、吸取受检者血清0.4ml，加2-me应用液0.4ml，混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h。
2、排列小试管（10mm×60mm）两排，每排10支，第一排每管各加pH 7.4的PBS 0.4ml。
3、第1排第1管加2-me处理血清0.4ml，混合，吸出0.6ml，移0.2ml至第2排第1管内，其余0.4ml移入第1排第2管内，混合。
以此类推，作倍量稀释至第10管，每管内留有1:2, 1:4, …1:1024不同稀释度的血清各0.2ml。
4、第1排每管各加5%A型红细胞悬液0.2ml，第2排每管各加5%B型红细胞悬液0.2ml，置37℃水浴温育1h。
5、结果观察如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A(B)或IgA抗A(B)所引起，称为“盐水效价”。
6、其余红细胞未见凝集的试管，再以pH 7.4 PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压实红细胞。
7、每管各加pH 7.4的PBS 2滴，混合。
S005红细胞ABO血型(正定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（正定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（正定型）。
三、原理用已知抗A、抗B标准血清（单克隆抗体）测定被检者红细胞上有无相应的A或B抗原，结合反定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(正定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限责任公司；3、批准文号：国药准字S1*******；4、包装规格：抗A、抗B试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃避光保存。
6、有效期：自检定合格之日起2年；7、试剂性能：试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；特异性试验合格。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管2支，分别标明抗A、抗B，用滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴于试管，再分别在对应管中加入抗A、抗B标准血清1滴。
2、摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s或室温静臵1小时。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
4、ABO血型（正定型）表现型反应格局表受检者血型受检者红细胞+试剂标准血清抗A 抗BA + -B - +O - -AB + +5、红细胞ABO血型（正定型）结果凝集强度判断对照表红细胞凝集反应描述凝集强度混合凝集外观镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布溶血，上清液中有游离血红蛋白溶血红细胞凝集成一大块，血清清晰透明4+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰3+红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞2+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞1+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞±镜下未见凝集，红细胞均匀分布阴性九、质量控制1、对新进批号的试剂应作抗体效价验定。
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RhD血型鉴定
Rh主D阴要性内确认容试验 D变异型
D•抗中原国位弱输点D血数技减术少操作规程(血抗站原部结不分构完)产全19生D97变年异版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意)
•与A常A规BB使T用ec的hn抗icDal定M型an试u剂al 不14凝th集ed或弱凝集
• AABB Standard 21st ed
鉴定其他弱A或弱B亚型
I. 红细• 胞中与国抗输-血A、技抗术-操A1作、规抗程-B(血及站抗部-A分B的)1凝99集7年程版度 II.红细• 胞中上国的输H血物技质术活操性作的规强程弱(血站部分)(征求意) III.血•清A中A是B否B T存e在ch抗nic-Aal1M和a不nu规a则l 1抗4t-hBed IV.分•泌型AA人B唾B 液Sta中ndAa、rdB、21Hst物ed质
红细胞血型抗体鉴定
主要内容
方法:盐水悬浮细胞凝集试验
•间免中接 疫国抗 荧输球 光血蛋 技技白 术术试、操验放作射及规免各程疫种(血技改站术良部的分IA)T1997年版 •酶中联国免输疫血吸技附术试操验作(E规L程ISA(血) 站部分)(征求意) •固A相A红BB细T胞ec粘hn附ic试al验M以an及ua凝l 胶14试th e验d
ABO血型鉴定
主要内容
方法: 红细胞凝集试验
正定• 型中国用输已血知技抗术-A操或作抗规-B程定(血型站试部剂分来)测19定97红年细版 反定•• 型中AA国用B输胞B已血上T知e技有cAh术1无n型i操c相细a作l应胞M规的和a程nABu抗(a型血l原细站1或4胞部th/来分e和d测)B(征抗定求原血意清)中
检测项目
主要内容
✓ ABO血型鉴定
• •✓
中中国国Rh输输血血血型技技鉴术术定操操作作规规程程((血血站站部部分分))(1征99求7年意版)
•✓ AA红B细B T胞ec血hn型ica抗l M体an鉴ua定l 14th ed
•✓ AA交B叉B S配ta血nd试ard验21st ed
✓ HDN血型血清学检查
方法: 凝集反应、吸收放散、血凝抑制试验(唾液试验)
新生儿红细胞ABO血型抗原较弱，不宜作亚型鉴定。
主要内容Rh血型鉴定
原理: Rh血型系统最常见的抗原主要有C,c,D,E,e 5种。
可• 中分国别输用血抗技C、术抗操c作、规抗程D、(血抗站E部、分抗)e1这9957种年R版h 定• 中型国试输剂血通技过术血操凝作试规验程来(检血查站红部细分胞)(征上求是意否)存 在• 相AA应B抗B原Te。ch在ni临ca床l M输a血nu中al，14一th般ed只做D抗原 的• 鉴AA定B。B凡St被an检da红rd细2胞1st和ed抗D试剂凝集者为
采用含IgG抗D抗体的
采用抗不同D表位的抗D
试剂进行抗球蛋白试验
抗体测定不同D表位
当确定红细胞上无D蛋白表达时， 才能最终判定被检标本为RhD阴性
RhD血型鉴定
要主求: 要内容
红细胞在直接凝集试验中被IgM抗-D凝集的和
在•Rh中D国阴输性血确技认术试操验作中规被程任(何血一站种部抗分-)D1凝99集7年的版都 应•标中记国为输Rh血D技阳术性操。作在规直程接(凝血集站试部验分和)(征在求Rh意D)阴 性标接••凝确记集认为AAAA试试RBBh验验BBD阴中中STte性与不acnh。任/dn弱ai红何cr凝ad细一l 集M2胞种1a的st与n抗e标udI-agD本lM都1，抗4不t需h-D凝e进d定集一型的步试血进剂液行在需直
新生儿溶血病血型血清学检查
主要内容
原理: 新生儿溶血病(HDN)是由母婴血型不合引起, 胎儿和新生儿红细胞被来自母体的 IgG抗体致敏,
并•在中其国自输身血网技状术内操皮作系规统程受(到血免站疫部性分破)1坏99。7年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
• 中中国国输输血血技技术术操操作作规规程程((血血站站部部分分))199977年年版版 • 中中国国输输血血技技术术操操作作规规程程((血血站站部部分分))(征求意)件稿) • AAAABBBBTTeecchhnnicicaallMMaannuuaall 1144th ed • AAAABBBBSStatannddaarrdd 2211sstt ed
(抗球蛋白法、放散试验)
主要内容
THANKS! • 中国输血技术操作规程(血站部分)1997年版
• 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
用经确认的标本制备和保存步骤；
➢ 肉眼判定标本是否存在影响检测结果的因素, 如溶
血、脂血等。
主要内仪容器设备的要求
u 仪器设备在安装后，需校准方可使用，校准
•周中期国至输少血一技年术一操次作，规仪程器(设血备站需部有分维)19护97程年序版。 •所中有国的输校血准技、术维操护作须规有程记(录血。站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed u •仪A器A设BB备S所ta使nd用ar的d软21件st和ed实验室的信息系统
• AAB有B S无ta相nd应ar的d抗21-Ast或ed/和抗-B
正反定型结果不一致或有疑问，需进一步行ABO血型确 认试验。
主要内容ABO亚型鉴定
A1和•A中2亚国型输鉴血定技术操作规程(血站部分)1997年版 原理:• 抗中-国A血输清血中技含术有操抗作-规A和程抗(血-A站1两部种分抗)(征体求，意抗)-A
• AABB Standard 21st ed
交叉配血试验
主要内容 原理: 交叉配血试验指检查受血者与供血者的抗原 抗体成分是否相容，以及是否含有不规则抗体等, 以保证输血安全。 • 中国输血技术操作规程(血站部分)1997年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
•
AABB
Technical
M an列Duia抗a,lk原1, :4FMytha,,eNFdy, Sb,,
s, Mur, Jka, Jkb
,
• AABB Standard 21st Leeda。并尽可能多的包含
Duffy, Kidd血型系统中
主要抗原的纯合子以及
低频率抗原。
红细胞血型抗体鉴定
主要内容
要求: 必须对筛选检测出的抗体进行鉴定，评估其
临选•床阳中意 性国义 标输。 本血不 送技进 至术行具操抗有作体资规鉴质程定的(的参血实比站验实部室 验分需 室)1将 进99抗 行7年体 最版筛 后 鉴•定中或国确输证血。技术操作规程(血站部分)(征求意)
• AABB Technical Manual 14th ed
RhD阳性，不凝集者为RhD阴性。
Rh血型鉴定
主要内容
• 中国输血技术操作规程(血站部分)1997年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
方法: 根据所选试剂的恃性，Rh血型的鉴定方法可 采用试管直接盐水凝集法，酶技术、抗人球蛋白 技术、聚凝胺、微柱凝胶等。
交叉配血试验
主要内容 方法:交叉配血分“主侧”交叉试验，即患者血清与献 血者红细胞的相容性试验；“次侧”交叉试验即献 血者血清与患者红细胞的相容性试验。 患•者与中献国血输者血的技配术血血操样作，规每程次(输血血站后部，分4℃)1保99存7年3～版7天。 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
须经过确认。
主要内容记录的要求
n •所中有国检输测血标技本术具操有作可规追程溯(血性站。部分)1997年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意)
n •核 录A是对A否当BB一前T致AeBc，Ohn/结Ric果haDl不M定一a型n致u结a必l果须1与4查th既e找d往原的因血。型记 • AABB Standard 21st ed
可以• 凝AA集BAB型T和ecAhBni型ca红l M细a胞nu，al而1抗4th-Aed1只能与部分 A型• 和AAABB型B红St细an胞da反rd应2，1s据t e此d 凡与抗-A1强反应者
被定为A1或A1B型，不与抗-A1反应，而与抗-A强
反应者被定为A2或A2B型。
ABO亚型鉴定
主要内容
AABB•: 有AA输B血B 史Sta或nd/和ard妊娠21史st e的d 献血者需要进行红细
胞血型抗体鉴定(具临床意义的抗体)
红细胞血型抗体鉴定
主要内容
试剂: 用于筛选的试剂红
细胞必须来自至少两名
• 中国输血技术操作规程无种(关细血胞O站型为部供R分1者R，1)，1要9另9求7一年一种版
• 中国输血技术操作规程为(R血2R站2表部型分，)且(征表求达意下)
RhD阴性确认试验。
红细胞血型抗体鉴定
主要内容 原理: 用已知抗原表型的试剂红细胞组，通过直接凝 集试验和间接抗球蛋白试验，筛选标本中可能存在 的血型同种免疫性抗体。避免含有临床意义的血型 同•种中抗国体输随血血技液术、操血作液规成程分(制血品站一部同分输)1入99。7年版 • 中国输血技术操作规程(血站部分)(征求意) • AABB Technical Manual 14th ed • AABB Standard 21st ed
对标本的一般要求
主要内容 ➢ 实验室所检测标本须有清晰的惟一性标识；
➢ 标本须和血液、血液成分制品来自于同一献血者；