植物器官培养

（三）茎尖培养方法及步骤
取 材
及材 消料 毒处 理
接 种
培 养
驯 化 移 栽
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1、 取材
取1-2㎝顶梢
①直接取材：在生长旺盛、枝 条健壮、无病的母株上选生 长不久、杂菌污染少的顶梢 （1－2cm）（取前可喷杀菌
药，可顶芽或侧芽）。
②从试管苗获取。
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2、材料处理及消毒
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第三节 生殖器官的培养
一、花器官的培养 二、种子的培养 三、胚胎的培养*
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一、花器官的培养
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一、花器官的培养（花蕾）
1. 定义： 花器官培养指整个花器及其 组成部分如花托、花瓣、花
丝、花柄、子房、花药等的
无菌培养。
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2、意义：
愈伤组织诱导：BA 1-3mg/L,NAA 0.25-1mg/L；
分化培养：CTK 2 mg/L；
生根培养：NAA 0.5－1.0 mg/L
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(2)培养过程：
培养约2周至4周→→形成愈伤组织→→再分化培养基上
（附加6-BA 2mg／L ）进行分化培养→→约10d左右，愈 伤组织开始转绿出现绿色芽点→→发育成无根苗→→生 根培养基（附加 NAA0.5-l mg/L ） →→发育形成完整植 株。
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（三）叶片的离体培养方法
发育方式：叶片培养再生成完整植株有两种方式： ① 是直接诱导形成芽和根→→完整植株； ② 是先诱导形成愈伤组织，再经愈伤组织分化形成芽和根
→→完整植株。
其中，以第二种方式最为常见。
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叶片离体培养发育方式（成苗途径）
叶原基
叶 叶 子 叶 鞘 片 叶 柄
通过离体花芽培养可了解整体植物和内源激素在花芽性别
决定中所起的作用 可以了解花器各部分对果实和种子发育的作用 内、外源激素在果实种子发育过程中的调控作用 生产上也可用于珍贵品种的扩大繁殖。
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二、种子培养
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1. 定义：
种子培养是指受 精后发育完全的 成熟种子和发育 不完全的未成熟 种子的无菌培养。
不定芽
愈 伤 组 织
芽 和 根
试 管 苗
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1. 材料选择及灭菌
取植物的幼嫩叶片，切割成适当大小（2—3cm）， 在流水中冲洗干净。再用75％酒精浸泡约10s →→ 饱和漂白粉液中浸3-15min，或在0.1％升汞中浸35min →→无菌水冲洗数次→→无菌的干滤纸上吸 干水分→→接种。
将采集到的茎尖切成0.5-1.0cm长→→去叶（休眠 芽预先剥除鳞片） →→流水冲洗2-4h →→ 75％的酒 精中处理30s →→稀释20倍的次氯酸钠中浸5-8min(取
自老枝条上的可适当延长时间）→→用无菌水冲洗数次，
准备接种。
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3、接种
接种前再剥掉一些叶片，使茎尖0.5cm →→接种
注：细嫩与成熟叶片消毒时间不同
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2.接种
外植体大小：0.5cm2 薄片（叶柄、子叶） 上表皮朝上接种培养基。最好带叶脉，注意极性
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3.培养
（1）培养基： MS、B5、White 、N6；蔗糖3%； 2.4－D利于愈伤组织形成，NAA抑制芽形成，利于根发生，
KT、6-BA利于芽形成。
官培养 植 物 器 官 培 养 繁殖器 官培养
根培养 茎培养（ 包括茎尖、茎段） 叶培养（包括叶原基、叶柄、 叶鞘、叶片、子叶）
花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药） 种子培养（包括成熟与未成熟） 胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、 子房、胚乳培养 ）
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外植体形态发生形成完整植株的途径
2. 无性繁殖系的建立
种子消毒 →→ 接种→→待根伸长后从根尖一端切取长
1.2cm的根尖→→接种于培养基→→发育出侧根→→待侧
根生长约1周后切取侧根的根尖进行扩大培养→→又迅速
生长并长出侧根→→切下进行培养，如此反复→→得到 从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。
3. 培养条件
暗光和温度25-27℃。
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（4） 诱导生根
采用1／2MS培养基 加入一定的生Βιβλιοθήκη Baidu素类调节物质，如NAA、IBA等。 新梢基部浸入50或100mg/l的IBA溶液处理4-8h，
然后转移到无激素的生根培养基中。
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(5) 驯化移栽入土
在生根培养1个月左右→→生长健壮而发达的根系→→ 炼苗→→移栽 →→管理（温、光、湿、气）
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三、茎段培养
指不带芽和带一个以上定芽或不定芽（包括块茎、球茎 在内）的幼茎切段的无菌培养。
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茎段培养用于快速繁殖的优点
培养技术简单易行，繁殖速度较快，每年可增殖 105-1012株苗； 加速良种和珍贵植物的繁殖，芽生芽方式增殖的 苗木质量好，且无病，性状均一； 解决不能用种子繁殖的无性繁殖植物的快速繁殖 的问题，且可节省种株； 试管苗便于运输和防止种苗带菌传播，有利于国 际种质交流； 试管苗可用于保存某些难以用种子保存的种质资 源。
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2. 意义 ：
可以打破种子休眠， 促进萌发； 通过胚胎拯救解决远缘杂种 败育性，产生后代； 快速繁殖苗木 优点：植株分化容易，
无菌操作方便
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三、胚胎的培养*
定义：植物胚胎培养是指对植物的胚(幼胚、成熟胚)、
子房、胚珠和胚乳进行离体培养，使其发育成完整植株
的技术。
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（一）胚胎培养的意义
克服远缘杂种的不育性 ； 使胚发育不全的植物获得后代； 缩短育种年限 ； 研究与胚发育有关的内外因素。
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（二）离体胚培养
离体胚培养包括胚胎发生过程中不同发育期的胚，一 般可分为成熟胚和幼胚培养。
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1.成熟胚培养
指子叶期后至发育完全的胚。
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(二)病毒在植物体内的分布

病毒侵染植株的叶片后，经过一段时间，即向附近的 细胞增殖转移。转移速度很慢，每小时只有几微米。 当叶片内病毒浓度增大到一定量时，就转移到韧皮部， 随后通过维管束转移到其它部分。由于病毒转移速度 慢，加上茎尖分生组织无维管束，病毒只能通过胞间 连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长 点的病毒数量极少，几乎检测不出。茎尖培养时，切 取的茎尖越小，带病毒的可能性就越小。 ——茎尖脱毒的基本原理
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茎尖生长状态
生长太慢：茎尖不增大→→变绿→→细胞逐渐老化→→休眠 原因: 生长素浓度太低；温度过低或过高； 生长太快：茎尖迅速增大→→愈伤组织→→丧失成苗能力 原因: 生长素浓度过高；光照太弱或温度太高； 生长正常：茎尖基部稍增大并形成少量愈伤组织，茎尖颜色 逐渐变绿，并伸长，叶原基发育成可见的小叶，
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离体根生长的营养要求


1、无机成分 要求培养基中有全部必要元素， 因为它是离体生长所需要的，一般的为MS、B5培 养基。 2、氮源 氮源有铵态氮、硝态氮和可溶性有机 氮如氨基酸或酰胺等，其中以硝态氮的效果最好。 加入含各种氨基酸的水解酪蛋白，能促进离体根 的生长。




二、茎尖的培养*
（一）茎尖培养概念及类型
（二）病毒在植物体内的分布
（三）茎尖培养方法及步骤
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(一)茎尖培养概念及类型
茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行 无菌培养。
茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： ①微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长点, 其长度不超 过 0.5mm。
（一）外植体-愈伤组织-完整植株。
具体又可分为三种： 1、愈伤组织-同时长芽和根-植株。 2、愈伤组织-茎-根-植株。 3、愈伤组织-根-芽-植株。 4、愈伤组织-体细胞胚-植株
第二节
营养器官培养
一、离体根的培养
二、茎尖的培养*
三、茎段的培养 四、离体叶的培养*
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一、离体根的培养
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一、离体根的培养
4、根的间接增殖 第一步在脱分化培养基上诱导形成愈伤组织，如胡杨 的根段培养，可诱导形成白色愈伤组织。 第二步在再分化培养基上诱导形成芽的分化，如胡杨 从绿色愈伤组织分化出小植株。
胡 萝 卜 根 培 养
5、培养方式 离体根的培养方式有三种类型。 第一种固体培养法，即将根尖接种在固体培养基 上，根依靠培养基中的养分和生长物质而不断生长。 第二种是液体培养法，把根尖接种在无琼脂的液 体培养基中，经常振荡使根获得充足的氧气。 第三种是固体-液体培养法，就是把根基部插入固 体琼脂培养基中，根尖浸在液体培养基中，根尖生长 而根不断的伸长和分枝。
进而形成小苗。
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（2）初代培养条件
每天 光照16h， 光强度1500-30001x， 温度25±2℃
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（3） 继代培养
茎尖长成的新梢→→切成小段→→增殖培养基中→→ 1
个月左右→→新梢又可切成小段→→再转入新培养基
→→建立和维持了茎尖无性系。 （即微型扦插）
继代培养可用MS培养基。
培养较易成功，在含有大量无机元素和糖的基本培养基上，
第四章
植物器官培养
第一节 概述 第二节 营养器官培养 第三节 繁殖器官培养
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第一节
概述
植物器官培养（Organ Culture）是指对植物某一器官 的全部、部分或器官原基进行离体培养的技术。分为 营养器官（根、茎、叶）和繁殖器官（胚胎、种子、 花器官）培养。
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营养器
（一） 意义：
①生理代谢研究的优良实验体系
②研究器官分化形态建成的良好体系
③建立快速生长的根无性系
④进行诱变育种
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（二） 培养方法
1. 培养基选择
White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基
注：离体根生长要求提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效
果好，加入VB1、VB6最重要，生长素对离体根影响不一致。 培养温度25－27℃，暗光培养。
要求：随切随接，动作迅速。 料在1－5% VC液中浸一下。 亦可将切下茎尖材
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4、培养的方法和程序
（1）培养基
① 基本培养基 MS、White、 B5、 Heller培养基。 ② 蔗糖作碳源效果好，浓度2－3%。
③ 激素（ 2，4-D，IAA， NAA ）和有机添加物有明显影 响。但激素浓度以0.1mg/L为宜，不要太高。
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②普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧 芽。 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便， 茎尖容易成活，成苗所需时间短 。 茎尖培养的意义： 普通茎尖培养技术简单，操作方便，易成活，成苗 时间短，加快繁殖。 微茎尖培养可获得脱毒苗；
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胚胎培养已有近百年的历史：
1904年的Haning最早成功地培养了萝卜和辣椒的胚，
并萌发形成小苗。
30年代•成功地把兰科植物的胚培养成小植株。 40 年代在苹果、桃、柑桔、梨、葡萄、山楂、马铃薯、 甘蓝与大白菜的种间杂种的胚胎培养、胚乳培养 及子房与胚珠培养均取得了不同程度的进展
3 、碳源 以蔗糖的效果最佳，几乎为葡萄糖的 10 倍。蔗糖的浓度为2—3%。 4 、维生素 维生素以 B1 和 B6 最为重要，缺少它根 的生长受到阻碍，而加入它可使根的生长成倍的加 快。B1的使用浓度为0.1-1.0mg/L为宜。 5 、生长物质 对离体根的生长而言，生长素的效 应最为明显，在一般情况，加入适量的生长素能促 进根的生长，其反应和需要量因植物种而异： 6 、温度和光照 黑暗有利于根的形成，温度一般 在16-25℃ 7、PH 根发生和生长所需的PH范围一般为5.0-6.0
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(3)培养条件：
温度：25±2℃
光照时间：10-12h，
光照强度：1500-3000 Lx 。
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叶的培养比胚，茎尖和茎段培养难度大。 首先要选用易培养成功的叶组织，如幼叶比成熟叶易 培养，子叶比叶片易培养。 其次要添加适当的生长素和细胞分裂素，保证利于叶 组织的脱分化和再分化。
四、离体叶的培养*
（一）定义：
离体叶培养指包括叶原基、叶柄、叶 鞘、叶片、子叶在内的叶组织的无 菌培养。
它大多经脱分化形成愈伤组织，再
由愈伤组织分化出芽和根。 其中叶片培养是一个典型的代表。
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（二）意义：
1.是繁殖稀有名贵品种的有效手段； 2.可用于研究形态建成、光合作用、叶绿素形成等理论问题。