反相高效液相色谱法
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2.高压定量进样阀（常用）
泵
泵
柱
柱
排放 进样
排放 进样
百度文库
图 六通进样阀
色谱柱
标准柱型： 4.6mm或 3.9mm L: 15-30cm 填料粒度：5-10m
发展趋势： 填料粒度小 柱径小
装柱技术：干法：填料粒度大于20m时可用。
湿法（匀浆法）：配成悬浮液。高压泵压入 色谱柱，洗净备用
检测系统
用反相高效液相色谱法 分离芳烃
预备知识
与气相色谱法的比较： 流动相：由气相液相
气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而 HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性 强、具有生物活性、热稳定性差的物质。
与经典的液相色谱法的比较：
在经典的液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论，采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率 高和操作自动化，这种色谱技术称作高效液相色谱法。
恒压泵：输出压力恒定，但流速随系统阻力变化 恒流泵：流速恒定，压力随阻力变化
要求：流量稳定
精度在1～2%之间
压力平稳无脉动
往复泵压力有波动，所以柱前设缓冲装置（压力脉 动阻力器）
流速可调
一般分析仪器：1～2mL/min 制备仪器：10～20mL/min
进样系统
1.注射器进样（隔膜进样） 带压进样 停流进样
本实验：固定相：ODS-C18，流动相：甲醇－水混合溶液 分离组分：苯和甲苯的混合溶液
高效液相色谱仪
DSC000017 HPLC
液相色谱流程图
PUMP
Detector
W
Data station (Recorder)
or Collection
高压输液系统
储液瓶 高压泵 （核心） 过滤器 压力脉动阻力器
K
组分在固定相中物质的浓度 组分在流动相中物质的浓度
Cs Cm
流动相为非极性而固定相为极性物质的色谱称正相液相 色谱法，以流动相为极性而固定相为非极性的色谱称反相液 相色谱法。将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定 相。若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基 质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极 性或弱极性的化合物。据此，采用反相液相色谱法可分离烷 基苯类化合物。
方法原理
选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相， 分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。除了 有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热 稳定性差的试样。
根据使用的固定相及分离原理不同，一般将高效液相 色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排 斥色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它 们在固定相和流动相之间的分配系数K：
2、按下述色谱条件设定色谱仪： 柱温：室温； 流动相流速：A泵：甲醇，0.9 mL/min B泵：蒸馏水，0.1 mL/min 泵最大压力：15 MPa 检测波长：254 nm 时间：6 min
3、根据仪器操作条件，待基线稳定后，分别进标准样品和 未知样品各10uL，获得标准样品和未知样品的谱图。
4、以标准样品谱图为基准，作单点标准曲线，然后求出未 知溶液中苯和萘的浓度。
分类
分配色谱（partition chromatography） 吸附色谱(adsorption …) 离子交换色谱(ion exchange …) 尺寸排阻色谱(size exclusion …)又称凝胶色谱
实验目的
1. 学习高效液相色谱仪的操作
2. 了解反相液相色谱法分离非极性化合物的基本原理 3. 掌握用反相液相色谱法分离芳香烃类化合物
要求：灵敏度高 噪音低 线性范围宽 响应快 死体积小，对温度和流速变化不敏感
分类
溶质型 总体型
紫外 荧光 电化学
示差折光 介电常数 激光散射
对组分的物理或物理化学特 性有响应
通用型
对试样和洗脱液总的物理 或物理化学特性有响应
本实验采用紫外光度检测器
实验步骤
1、用甲醇配成浓度分别为 30ug/mL和10 ug/mL 的混合标准 溶液。
泵
泵
柱
柱
排放 进样
排放 进样
百度文库
图 六通进样阀
色谱柱
标准柱型： 4.6mm或 3.9mm L: 15-30cm 填料粒度：5-10m
发展趋势： 填料粒度小 柱径小
装柱技术：干法：填料粒度大于20m时可用。
湿法（匀浆法）：配成悬浮液。高压泵压入 色谱柱，洗净备用
检测系统
用反相高效液相色谱法 分离芳烃
预备知识
与气相色谱法的比较： 流动相：由气相液相
气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而 HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性 强、具有生物活性、热稳定性差的物质。
与经典的液相色谱法的比较：
在经典的液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论，采用了 高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器，实现了分析速度快，分离效率 高和操作自动化，这种色谱技术称作高效液相色谱法。
恒压泵：输出压力恒定，但流速随系统阻力变化 恒流泵：流速恒定，压力随阻力变化
要求：流量稳定
精度在1～2%之间
压力平稳无脉动
往复泵压力有波动，所以柱前设缓冲装置（压力脉 动阻力器）
流速可调
一般分析仪器：1～2mL/min 制备仪器：10～20mL/min
进样系统
1.注射器进样（隔膜进样） 带压进样 停流进样
本实验：固定相：ODS-C18，流动相：甲醇－水混合溶液 分离组分：苯和甲苯的混合溶液
高效液相色谱仪
DSC000017 HPLC
液相色谱流程图
PUMP
Detector
W
Data station (Recorder)
or Collection
高压输液系统
储液瓶 高压泵 （核心） 过滤器 压力脉动阻力器
K
组分在固定相中物质的浓度 组分在流动相中物质的浓度
Cs Cm
流动相为非极性而固定相为极性物质的色谱称正相液相 色谱法，以流动相为极性而固定相为非极性的色谱称反相液 相色谱法。将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定 相。若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基 质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离非极 性或弱极性的化合物。据此，采用反相液相色谱法可分离烷 基苯类化合物。
方法原理
选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相， 分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。除了 有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热 稳定性差的试样。
根据使用的固定相及分离原理不同，一般将高效液相 色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱和空间排 斥色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它 们在固定相和流动相之间的分配系数K：
2、按下述色谱条件设定色谱仪： 柱温：室温； 流动相流速：A泵：甲醇，0.9 mL/min B泵：蒸馏水，0.1 mL/min 泵最大压力：15 MPa 检测波长：254 nm 时间：6 min
3、根据仪器操作条件，待基线稳定后，分别进标准样品和 未知样品各10uL，获得标准样品和未知样品的谱图。
4、以标准样品谱图为基准，作单点标准曲线，然后求出未 知溶液中苯和萘的浓度。
分类
分配色谱（partition chromatography） 吸附色谱(adsorption …) 离子交换色谱(ion exchange …) 尺寸排阻色谱(size exclusion …)又称凝胶色谱
实验目的
1. 学习高效液相色谱仪的操作
2. 了解反相液相色谱法分离非极性化合物的基本原理 3. 掌握用反相液相色谱法分离芳香烃类化合物
要求：灵敏度高 噪音低 线性范围宽 响应快 死体积小，对温度和流速变化不敏感
分类
溶质型 总体型
紫外 荧光 电化学
示差折光 介电常数 激光散射
对组分的物理或物理化学特 性有响应
通用型
对试样和洗脱液总的物理 或物理化学特性有响应
本实验采用紫外光度检测器
实验步骤
1、用甲醇配成浓度分别为 30ug/mL和10 ug/mL 的混合标准 溶液。