茶多酚(TP)检测试剂盒(酒石酸铁比色法)
测定茶多酚含量实验报告
一、实验目的1. 了解茶多酚的化学性质和生理功能。
2. 掌握测定茶多酚含量的实验原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对分光光度法等实验技术的熟练程度。
4. 比较不同茶叶样品中茶多酚含量的差异。
二、实验原理茶多酚是茶叶中的主要活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血脂、降血压等多种保健功效。
本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚的含量。
该方法基于茶多酚与特定试剂发生显色反应，根据吸光度与茶多酚含量成正比的关系，计算样品中茶多酚的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 绿茶、红茶、乌龙茶等茶叶样品- 茶多酚标准品- 乙醇、氢氧化钠、盐酸、硫酸等试剂- pH7.5磷酸盐缓冲液- 酒石酸亚铁溶液- 水为蒸馏水2. 实验仪器：- 分析天平- 分光光度计- 烧杯、试管、移液管、滴定管等玻璃仪器四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 准备一系列已知浓度的茶多酚标准溶液。
- 将标准溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。
- 以茶多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 称取一定量的茶叶样品，用乙醇提取茶多酚。
- 将提取液稀释至适当浓度。
- 将稀释后的样品溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线，计算样品中茶多酚的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 在特定波长下，茶多酚标准溶液的吸光度与浓度呈线性关系。
- 标准曲线的线性回归方程为：A = 0.033C + 0.005，相关系数R² = 0.996。
2. 样品测定：- 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量分别为：27.6%、24.2%、22.8%。
- 不同茶叶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。
六、实验结论1. 本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚含量，方法简便、准确、可靠。
2. 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾水解的物质基本上都属茶多酚物质。
根据消耗1ml0.318g/ml的高锰酸钾相等于5.82mg茶多酚的折算系数，可以排序茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500ml白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50ml，冷却后用蒸馏水定容至1000ml，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50ml，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000ml，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000ml。
3、高锰酸钾标准溶液：称取ar的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水熔化后定容至1000ml。
精确汲取0.630%草酸溶液10ml，放进250ml锥形瓶中（平行3份），重新加入蒸馏水50ml，再重新加入相对密度为1.84的浓硫酸10ml，容器，在70~80℃水浴中保温5分钟，抽出后用高锰酸钾展开电解。
已经开始快几滴，等待红色消失后再几滴第二几滴，以后可以逐渐大力推进，边滴边挥，等待溶液发生淡红色维持1分钟维持不变即为为终点。
排序高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、可供测试液的准备工作：精确称取茶叶切碎样品1g，放到250ml锥形瓶中，重新加入沸蒸馏水80ml，在沸水浴中金属粉末30分钟，然后试液、冲洗，滤液放入100ml容量瓶中，热至室温，最后用蒸馏水定容至100ml，容器。
2、测量：挑200ml蒸馏水放进白瓷皿中，重新加入0.1%靛红溶液5ml，再重新加入可供测试液5ml，停下磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边烘烤边电解，电解速度以1几滴/s为宜，吻合终点时应慢滴。
茶叶中茶多酚含量测定工作方案(精选.)
茶叶中茶多酚含量测定工作方案一、 紫外分光光度法1. 实验原理在一定PH 条件下，酒石酸铁能与多酚类物质反应形成蓝紫色络合物，该络合物在540nm 波长下具有最大吸光度。
用分光光度法测定其含量2. 仪器试剂A. 酒石酸亚铁溶液:称取1.0g 硫酸亚铁(O H FeSO 247•)和5.0 g 酒石酸钾钠(OH KNa O H C 2614144•)，用水溶解并定容至1L （低温保存有效期10天)。
B. PH=7.5 磷酸盐缓冲液1/15mol/L 磷酸氢二钠:称取23.9 g 十二水磷酸氢二钠(O H HPO Na 24212•)，加水溶解后定容至IL 。
1/15 mol/L 磷酸二氢钾:称取经110℃烘干2h 的磷酸二氢钾(42PO KH )9.08 g,加水溶解后定容至1L 。
取上述 1/15mol/L 的磷酸氢二钠溶液85mL 和1/15mol/L 的磷酸二氢钾溶液15mL 混合均匀。
3. 工作步骤1) 试样的制备与测定：称取磨碎茶叶试样0.1g(准确至0.0001g) ，置于小烧杯中，加温水30mL ，溶解冷却，注入100mL 容量瓶中，定容、摇匀、过滤，弃去初滤液约20mL ，剩余的滤液为试液【1】。
取试液【1】 2mL于50mL比色管中，加酒石酸铁10mL摇匀，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液定容。
取2mL蒸馏水于50mL比色管中，加酒石酸铁10mL摇匀，用PH=7.5的磷酸盐缓冲液定容作为空白对照，于540nm处用1cm比色皿测定吸光度值。
2)标准系列溶液的配制与测定：称取茶多酚纯品0.2500g，加水溶解定容至250mL，混匀，即为每毫升含1mg 茶多酚的标准溶液。
分别称取标准溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL于一组50mL比色管中，各加水至10mL，再加酒石酸铁溶液10mL，用PH=7.5的缓冲液定容至刻度，混匀后用1cm比色皿，以试剂空白作参比，于波长540nm处测定吸光度，绘制出标准曲线。
茶多酚的检测方法(行业)
茶多酚检验操作规程1、目的：规定茶多酚检验的操作规程。
2、适用范围：适用于茶多酚的检验。
3、职责：检验人员严格按该操作规程执行。
4、内容：4.1 取样4.1.1 取样器：不锈钢长匙。
4.1.2 取样方法：混合缩分法。
4.1.3 取样量：混合缩分后，取符合检测全项目及留样的样品数量。
4.2 操作方法：4.2.1 样品制备：取混合均匀后的样品适量，于自封塑料袋中备用4.2.2 制备好的留样袋上贴上该产品生产批号、名称、留样时间。
4.3 茶多酚含量测定：4.3.1 依据：QB2154—95。
4.3.3 检验方法：分光光度法。
4.3.3 仪器和用具：分析天平、分光光度仪、移液管、比色皿（1cm）。
4.3.4 试剂和溶液：蒸馏水、酒石酸亚铁溶液、PH7.5磷酸盐缓冲液。
4.3.5 酒石酸亚铁溶液的配制：称取硫酸亚铁1.0g、酒石酸钾钠5.0g、加水溶解并溶至1L。
4.3.6 PH7.5磷酸盐缓冲液配制：a液：1/15moL/L磷酸氢二钠溶液：称取23.877g加水溶解并稀至1L。
b液：1/15moL/L的磷酸二氢钾液：称取经110℃烘干的磷酸二氢钾9.078g，加水溶解1L。
取a液85mL和b液15mL混匀，即待PH7.5缓冲液。
4.3.7 操作方法：4.3.7.1 准确称取样品约100mg，精密称定于100mL容量瓶中，加水溶解后稀至刻度。
4.3.7.2 准确吸取上述试液1mL于25mL容量瓶中，加水4mL，加酒石酸亚铁溶液5mL，充分混匀后，用PH7.5缓冲液稀至刻度。
4.3.7.3以试剂空白液作为参比液，于540mm波长处，测定试液吸光度A。
4.3.8 结果计算：茶多酚含量＝A ×2.884×1001000×W×100％ 4.4 儿茶素中各组成及咖啡碱含量测定：4.4.1 依据：茶多酚中儿茶素、咖啡碱含量高相液谱法4.4.2 方法：面积归一法4.4.3 仪器和用具：（1） P1201高相液相色谱仪、EC2006色谱工作站、100mL 进样器、柱温箱、紫外分光检测器、电子天平。
茶多酚酒石酸亚铁比色法
====Word行业资料分享--可编辑版本--双击可删====多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。
测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取Na2HPO4·12H2O和NaH2PO4·12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。
三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
（二）样品总多酚的提取准确称取磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL。
（二）样品多酚提取液的多酚总量测定吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。
同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用比色皿在540nm波长处测定吸光度。
4.3 测定步骤试液的制备按GB 8305-87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
酒石酸亚铁法测定茶多酚
方法一：酒石酸亚铁法测定茶多酚1.适用范围：茶叶、茶粉及其制品，茶饮料等。
2.原理：在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。
茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。
3.试剂：所用试剂应为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。
3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。
3.2 PH7.5磷酸缓冲溶液：3.2.1 1/15M磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。
3.2.2 1/15M磷酸氢钾：称取经110℃烘干2小时的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15M的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15M的磷酸二氢钾15ml混合均匀。
4.仪器及用具：4.1分光光度计4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径600~1000um的筛子。
5.操作步骤：5.1茶叶：5.1.1试样的制备：（紧压茶以外的各类茶）先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分。
如果水分含量太高，不能磨到2.2所规定的细度，必须将样品预先干燥（烘箱不超过100℃为宜）。
待试样冷却后（置干燥器内），再进行磨碎。
5.1.2试液的制备：（1）称取3g（准确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。
（2）加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中，浸提45min。
若水浴无振动装置则每隔10min 摇动一次。
（3）浸提完毕后，冷却后（自然冷却或于自来水流下冷却）将样液转移到500ml容量瓶内，并定容至刻度。
（4）定容后立即常压过滤，弃去初滤液（5ml以上），收集滤液备用。
（所用滤纸为杭州新华纸业有限公司，双圈牌，定量，慢速滤纸）。
5.2茶粉：茶粉试液的制备：称取一定量的样品，用沸蒸馏水450ml冲泡，冷却后用蒸馏水稀释定容至500ml。
酒石酸铁比色法检测奶茶饮料中茶多酚
酒石酸铁比色法检测奶茶饮料中茶多酚作者：康茂约来源：《食品界》2016年第06期国内外检测茶多酚常用的方法有酒石酸铁比色法、福林酚法、高锰酸钾滴定法、硫酸铈滴定法、原子吸收分光光度法、近红外光谱法、高效液相色谱法等。
其中酒石酸铁比色法是以酒石酸铁能与茶多酚生成紫红色的络合物，显色强度与茶多酚含量成正比的原理，计算出茶多酚含量，该测定方法简便、快速。
但实际操作过程按国标法对奶茶饮料、奶茶粉样品进行处理后无法有效得到澄清滤液，导致比色受影响。
因当今市售奶茶制品中除牛奶、茶汤外，还添加含蛋白质的乳或乳制品、食品添加剂等，影响样液过滤及澄清度。
本文采取了几种不同的处理方式并分析比较来探索研究奶茶饮料中茶多酚的检测。
材料与方法材料市场常见的奶茶饮料、奶茶粉；去离子水、乙醇（95%）、四水合酒石酸钾钠、七水合硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、亚铁氰化钾溶液（106g/L）、乙酸锌溶液（220g/L）、盐酸、丙酮、冰乙酸，均为国产分析纯试剂。
按GB/T21733-2008配制成酒石酸亚铁溶液、pH7.5磷酸缓冲溶液。
仪器电子天平（浙江赛因科学仪器有限公司，BSA224S），紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司，T6新世纪）。
实验方法将奶茶饮料样液充分摇匀后，准确吸取10.0mL于50mL容量瓶中。
加入不同沉淀剂（①法按国标加乙醇，②法加乙酸锌和亚铁氰化钾，③法加盐酸后用丙酮定容，④法加乙酸），充分摇匀，放置15min后定容。
待用。
（奶茶粉包按参照包装要求，冲泡成奶茶溶液，再按上述方法处理。
）之后检测方法和计算方式同国标。
结果与讨论不同处理方法之间的比较分析沉淀效果比较分析。
方法①②③④中的添加物均具沉淀能力，其中①中乙醇能破坏蛋白质胶体性质而使蛋白质沉淀，可改变内相或外相极性产生破乳效果。
②中亚铁氰化钾和乙酸锌共同作用生成氰亚铁酸锌淀来挟走或吸附干扰物质，去蛋白能力强。
③中丙酮可破坏蛋白质的水化膜而使其沉淀，同时兼具破乳能力。
茶多酚的含量
酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量1．原理根据酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色配合物。
配合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比，因此可以用比色方法测定。
该法可避免高锰酸钾滴定法所产生的人为视觉误差。
在一定的操作条件下，光密度为1.00时，供试液中茶多酚浓度为7.826mg/mL 。
2．仪器和试剂仪器：水浴、分光光度计、三角烧瓶、容量瓶、吸管、滴瓶等。
试剂：酒石酸铁溶液、pH7.5的磷酸缓冲溶液。
3．操作步骤（1）样品溶液的制备方法准确称取茶叶麻碎样品1g ，于200 mL 三角烧瓶中，加入沸水80 mL ，在沸水浴中浸提30min ，然后过滤、洗涤，滤液倒入100 mL 容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至刻度，摇匀，备用。
（2）测定吸取样品溶液1 mL 于25 mL 容量瓶中，加蒸馏水4 mL ，加酒石酸铁溶液5 mL ，摇匀，再加入pH7.5磷酸缓冲液稀释至刻度。
以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作为空白。
选择540nm 波长和0.5cm 的比色杯测定光密度。
4．结果计算1001000826.7⨯⨯⨯⨯=mV T A x 式中：x ——茶多酚含量，%；A ——样品溶液的光密度值；T ——样品溶液总量，mL ；V ——吸取的试剂量，mL ；m ——样品质量，g 。
5．注意事项磷酸缓冲液在常温下容易生长霉菌，以冷藏为宜。
酒石酸铁与茶多酚反应时，因连苯酚比邻苯酚显色强，所以没食子酸酯类儿茶素显色深，凡是此类儿茶素含量比例大的，显色就较深。
因此酒石酸铁比色法与高锰酸钾滴定法两者测定的结果会有所出入。
食品中锡的测定1．原理样品经消化后，在弱酸性溶液中，四价锡离子与苯芴酮形成微溶性橙红色配合物，在保护性胶体存在下，与标准系列比较定量。
2．仪器和试剂（1）仪器分光光度计（2）试剂酒石酸溶液（100g/L）；抗坏血酸溶液（10g/L）；动物胶溶液（5g/L）；酚酞指示液（10g/L）；氨水（1+1）；硫酸（1+9）；苯芴酮溶液（0.1g/L）；锡标准储备液（1.0mg/ mL）；锡标准使用液（10.0μg/ mL）。
实验四 茶叶中茶多酚含量的测定
实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作二、原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL mL的高锰酸钾相当于茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、%草酸溶液：准确称取草酸，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
同时做空白测定。
五、结果计算X=)(120.005820.318m V VA B-⨯ω⨯⨯式中：X—茶多酚的含量，% ，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mLA—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL ω--高锰酸钾的浓度，%m—样品的质量g， V1—测定用供测试液的体积，mL ，V2--供测试液的体积，mL实验三茶叶中茶多酚含量的测定——酒石酸铁比色法一、实验目的：1、掌握酒石酸铁比色法测定茶多酚的含量的原理及操作。
茶多酚酒石酸亚铁比色法教学内容
茶多酚酒石酸亚铁比色法多酚类物质的提取与含量测定一、实验原理酒石酸亚铁分光光度比色法的原理：过量的酒石酸亚铁与提取液中多酚反应生成稳定的紫褐色络合物，溶液颜色的深浅与溶液中多酚含量成正比。
测定总多酚时所用的标准物则需根据样品中所含多酚的种类而定，比如测定茶叶中茶多酚含量时，儿茶酚能较好地代表茶多酚，则以儿茶酚作标准物；而测定藤茶多酚时，则以没食子酸作标准物较合适。
二、实验材料、试剂与仪器材料：茶叶；仪器：水浴锅，分光光度计，三角瓶，容量瓶，吸管等；试剂：（1）酒石酸亚铁溶液：称取1.00g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.00g酒石酸钾钠(C4H4O6NaK·4H2O）,混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL；（2）pH 7.5磷酸盐缓冲液：称取60.20gNa2HPO4·12H2O和5.00g NaH2PO4·12H2O，混合后加蒸馏水溶解,定容到1000mL。
三、操作步骤（一）标准曲线的制作或茶多酚含量经验值的应用# 标准曲线的制作参照GB-8313-87《茶—茶多酚测定》方法。
为简化操作，可用在一定操作条件下“吸光度值为1.00时，供试液中茶多酚的浓度为7.826 mg/mL”这一经验值，直接由待测液的吸光度值计算样品中茶多酚的含量。
（二）样品总多酚的提取准确称取1.0g磨碎并混匀的茶叶样品于200mL三角瓶中，加入80mL沸水，并在沸水浴中保温浸提30min，然后过滤、洗涤滤渣，将滤液合并、冷却、加蒸馏水定容至100mL。
（二）样品多酚提取液的多酚总量测定吸取1mL样品多酚提取液于25mL容量瓶中，加入4mL蒸馏水和5mL酒石酸亚铁溶液，摇匀，再用pH 7.5磷酸盐缓冲液稀释至刻度，混匀。
同是以蒸馏水代替样品提取液，加入与样品测定同样的试剂作空白，用0.5cm比色皿在540nm波长处测定吸光度。
4.3 测定步骤4.3.1 试液的制备按GB 8305-87《茶水浸出物测定》中3.4.1的规定,制备试液。
茶多酚的测定
V2*m
*
100%
P=茶多酚含量，g/100mll A=样品溶液的吸光度 V1=样品溶液总含量，ml V2=吸取的试样液，ml M=样品质量，g
说明
磷酸缓冲液在常温下容易生长霉菌，要冷藏 酒石酸亚铁溶液应避光，低温保存，有效期 一个月 ④测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶 液洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的 浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时， 通常都按由稀到浓的顺序测定，以0
V1
*
可以与食物中的铁元素发生反应，生成 难以溶解的新物质，时间一长引起人体 缺铁，甚至诱发贫血症。
酒石酸铁比色法
原理 酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络 合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。 因此可以用比色法测定。
试剂
酒石酸铁溶液 （称取FeSO4·7H2O 1.000g,4结晶水的酒石 酸钾钠5.00g,加蒸馏水溶解，稀释至1000ml) PH=7.5的磷酸缓冲液 (60.2gNa2HPO4·12H2O,5.00gNaH2PO4·2H2O, 加水溶解，稀释至1000ml)
仪器
水浴锅 分光光度计 三角烧瓶 容量瓶 吸管 滴瓶
步骤
样品溶液的制备方法
沸水80ml
茶叶1g 磨碎
三角烧瓶 30min
过滤
洗涤
冷却 备用 定容 100ml容量瓶 滤液
测定
样品液1ml
25ml容量瓶
蒸馏水4ml
蒸馏水
5ml 酒 石 酸 铁
测定
PH=7.5
液
以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂做空 白试验。 选择540nm波长和0.5cm的比色杯测定吸光 度。
茶多酚的测定
茶多酚的测定
茶多酚（Tea Polyphenols） 又称茶鞣或茶单宁，是形成茶 叶色香味的主要成份之一，也 是茶叶中有保健功能的主要成 份之一，是茶叶中多酚类物质 的总称，包括黄烷醇类、花色 苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚 酸类等。
茶多酚含量测定
植物生理学模块实验指导李玲主编科学出版社茶多酚含量的测定方法（分光光度计法）【实验目的】学习用酒石酸铁比色法测定茶多酚含量的方法，了解茶多酚在植物抗氧化活性中的作用。
【实验原理】茶多酚是一类儿茶素为主体的类黄酮化合物，具有C6—C3—C6碳骨架结构，是一种重要的天然抗氧化性物质。
它是超氧阴离子自由基和羟自由基的强捕获剂，能清除自由基。
本实验介绍用酒石酸铁比色法测定植物组织中的茶多酚含量。
【器材与试剂】1.实验仪器与用具分光光度计、离心机、研钵、水浴锅、移液管、烘箱、具塞三角瓶2.实验试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）100μg/ml儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至100m l。
1.5%酒石酸钾铁3.实验材料同抗坏血酸。
【实验操作】1. 称取1g样品，研磨成粉末。
用50ml沸蒸馏水将粉末洗入三角瓶，于沸水浴中浸提20mi n，过滤，滤渣用50m l蒸馏水同样提取一次，合并上清液，5000g离心15mi n，取上清液待用。
2.将儿茶素标准溶液稀释成0、20、40、60、80、100μg/ml，分别吸取1m l，加0.1mol/L 磷酸缓冲液3ml，混匀，加1.5%酒石酸钾铁1m l，用分光光度计测定540nm处的O D值，并绘制浓度-OD标准曲线。
3.取样品提取液1ml，按上述同意方法测定540nm处的OD值。
【实验作业】根据公式，计算植物幼叶和成熟叶中茶多酚的含量，分析原因。
茶多酚含量（μg/g鲜重）=C×（提取液总体积×体积稀释倍数）式中，C为从标准曲线中查得提取液中茶多酚含量（μg/ml）。
【注意事项】提取时间过长，所提的茶多酚会发生氧化反应，转化成其他物质，致使一部分茶多酚丢失。
几种茶多酚测定方法的比
几种茶多酚测定方法的比较陈惠衡施玲（湖南农业大学长沙 410128）摘要用几种不同的测定方法，对不同种茶叶原料提取物中多酚的测定结果进行了比较，提出了几种测定方法之间的差异和规律。
关键词茶多酚、酒石酸铁法、Folin—Denis、HPLC法茶多酚是茶叶中的主要有效成分，茶中多酚含量的多少，可以反映出茶叶品质的优劣。
测定茶多酚的方法很多，但我们所常用的方法有酒石酸铁法和菲林试剂法，特别是前者，以其快速简便，容易掌握重现性好而经常使用。
但是在实验过程中，笔者发现，茶的品种不同，用不同的方法测定出来的多酚结果也不同，并且从大量的分析数据中找出了其中的规律。
1．实验材料与方法1.1 仪器与材料高效液相色谱（美国Beckman公司）754紫外－可见分光光度计（上海分析仪器厂）金农公司生产的速溶绿茶、儿茶素1.2 实验方法1.2.1 酒石酸铁法见GB 8313－871.2.2 Folin－Denis法1.2.2.1 原理：Folin试剂能氧化茶多酚和其它还原性物质并显色。
1.2.2.2 试剂：15%碳酸钠菲林试剂1.2.2.3 实验步骤：（1）绘制标准曲线：吸取标准单宁酸溶液0－10ml一组，分别置于100ml 容量瓶中。
各加水75ml，Folin试剂5ml，15％碳酸钠溶液10ml，加水定容至刻度，混匀。
在30℃条件下，恒温反应30min，于波长760nm处测定吸光度，计算出线性回归方程。
（2）样品的测定：精确称取40.00－120.00mg（视样品的含量多少而定），加水溶解后定容至100ml。
取1ml试液置于100ml容量瓶中，以下步骤同标准曲线绘制。
测定吸光度。
利用回归方程计算含量。
（3）实验注意事项：实验过程中温度和时间对其结果有较大影响，必须恒温、定时。
1.2.3 儿茶素的HPLC分析样品制备：a: 精确称取30mg儿茶素样品于50ml容量瓶中，用水稀释，超声5min，冷却定容；b: 0.45um超滤膜处理后待分析；1.2.4 仪器：美国Beckman公司生产的HPLC，126泵，168检测器1.2.5 色谱条件：色谱柱ODS4.6× 200mm，5um 波长：278cm流速：1.3ml/min 柱温：30℃进样量：10ul流动相：A水；B N，N－二甲基甲酰胺:甲醇:醋酸＝40:2:1梯度洗脱：2．实验结果与讨论2．1 按不同的大小叶种配比所生产的速溶绿茶及茶多酚测定结果见表一。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL mL 的高锰酸钾相当于茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL 白瓷皿。
试剂：1 、% 靛红溶液：称取靛红1g 加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为的浓硫酸50mL ，冷却后用蒸馏水定容至1000mL ，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g ，加浓硫酸50mL ，在80 ℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h ，用蒸馏水定容至1000mL ，过滤后贮于棕色瓶中。
2 、%草酸溶液：准确称取草酸，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR 的高锰酸钾，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取%草酸溶液10mL，放入250ml 锥形瓶中（平行3 份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温 5 分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1 分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL 锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL 容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml 蒸馏水放入白瓷皿中，加入%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1 滴/s 为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
同时做空白测定。
五、结果计算式中：X—茶多酚的含量，% ，B—空白消耗的高锰酸钾毫升数，mL A—样品消耗的高锰酸钾毫升数，mL ω --高锰酸钾的浓度，% ，m—样品的质量g，V1—测定用供测试液的体积，mL ，V2--供测试液的体积，mL酒石酸铁比色法原理：茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20％～35％，由约30 种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。
酒石酸法茶多酚含量测定报告
茶多酚的含量测定实验组员：赵龙飞赵奇慧刘芳陈小丽一、实验原理茶多酚能溶于水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂。
对热、酸较稳定，在碱性条件下易氧化变质。
酒石酸铁能与茶多酚生成紫褐色络合物，络合物溶液颜色的深浅与茶多酚的含量成正比，络合物在540nm处有最佳吸收。
因此可以用比色方法测定。
二、仪器与试剂仪器：分光光度计、天平、1ml移液枪、100ml容量瓶*6、100ml量筒、100ml烧杯*3 10ml EP管试剂：(1)FeSO4•7H2O 1.000g，含4个结晶水的酒石酸钾钠5.000g(2) Na2HPO4•12H2O 6.02g ，NaH2PO4•2H2O 0.50g(3)儿茶素标准品 10mg三、操作步骤（1）酒石酸钾铁溶液：称取FeSO4•7H2O 0.100g，含4个结晶水的酒石酸钾钠0.500g，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至100mL。
（2）pH7.5的磷酸缓冲液：6.020g Na2HPO4•12H2O ，0.500g NaH2PO4•2H2O，加蒸馏水溶解后，用蒸馏水稀释至100mL。
(3) 儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至10ml，浓度为1000μg/ml。
分别稀释到200、400、600、800μg/ml，得5个浓度标准品溶液。
(4) 标准曲线：分别吸取1ml标准液，磷酸缓冲液3ml，酒石酸钾铁1ml混匀，3000转离心10min。
吸取上清液3ml加入玻璃比色皿，用分光光度计测定540nm处的OD值三次求平均值，并绘制浓度-OD标准曲线。
以蒸馏水代替标准品溶液加入同样的试剂作空白对照。
(5) 取提取物10mg，用蒸馏水定容至10ml。
取1ml，按上述同样方法测定540nm处的OD值3次求平均值。
以蒸馏水代替样品溶液加入同样的试剂作空白对照。
四、计算茶多酚含量 W=C/1000×100%C ：所测吸光度带入标准曲线得到样品中茶多酚浓度μg/ml1000：样品浓度μg/m l五、实验结果样品吸光度浓度含量（%）1 2 3 平均有机溶剂萃取法0.45 0.449 0.45 0.449666667 402.6303833 40.26%金属离子沉淀法0.449 0.449 0.449 0.449 402.07015 40.21%打孔树脂30%醇洗脱0.525 0.526 0.525 0.525333333 466.2168667 46.62%打孔树脂50%醇洗脱0.349 0.349 0.348 0.348666667 317.7550333 31.78%打孔树脂80%醇洗脱0.111 0.111 0.111 0.111 118.03185 11.80%六、实验分析由实验结果看出，30%的乙醇提取大孔树脂法提取的茶多酚的含量是最高的，而其余的溶剂提取法、金属离子沉淀法，都相对较低。
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茶多酚(TP)检测试剂盒(酒石酸铁比色法)
简介：
茶多酚(Tea Polyphenols，TP)是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等，是一类儿茶素为主体的黄酮化合物，儿茶素占60~80%，具有C6-C3-C6碳骨架结构，是一种重要的天然抗氧化物质，能够清除自由基。
类物质茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。
研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外。
Leagene 茶多酚(TP)检测试剂盒(酒石酸铁比色法)检测原理是以酒石酸铁为底物，利用茶多酚与酒石酸铁反应，生成稳定化合物，在一定范围内吸光度与颜色深浅的变化成正比，与标准曲线比较，进而计算茶多酚含量。
该试剂盒主要用于测定植物组织、血清等样品中茶多酚含量，尤其适用于测定茶叶中茶多酚含量。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、蒸馏水
2、研钵
3、离心管或试管
4、离心机
5、比色杯
6、分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、配制茶多酚标准：取干净离心管或试管和茶多酚标准(1mg/ml)，按下表进行操作，依
次稀释。
编号
名称
TO120350T Storage
试剂(A):茶多酚标准(1mg/ml)1ml 4℃避光试剂(B):TP Assay buffer 500ml 4℃试剂(C):TP 显色液25ml
4℃避光使用说明书
1份
加入物(ml)12345
茶多酚标准(1mg/ml)0.010.020.030.040.05
TP Assay buffer0.490.480.470.460.45
相当于茶多酚含量(μg/ml)20406080100
2、准备样品：
①植物样品：取植物组织，研磨成粉末。
煮沸l TP Assay buffer，将粉末完全加入TP Assay buffer中，沸水浴，用200目细胞筛或滤纸过滤。
滤渣再继续置于新的煮沸TP Assay buffer 中，沸水浴，用200目细胞筛或滤纸过滤，合并两次滤液。
离心15min，取上清液，即为茶多酚提取液。
4℃避光保存，用于茶多酚的检测。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃避光保存，用于茶多酚的检测。
③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用TP Assay buffer进行适当匀浆，离心15min，取上清液，即为茶多酚提取液。
4℃避光保存，用于茶多酚的检测。
④高浓度样品：如果样品中含有较浓度的茶多酚，可以使用TP Assay buffer进行恰当的稀释。
3、TP加样：按照下表设置空白管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意
避免产生气泡。
如果样品中的TP浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
样品的检测最好能设置2平行管，求平均值。
加入物(ml)空白管标准管测定管
TP Assay buffer2 1.5 1.5
系列茶多酚标准(1-5号)－0.5－
待测样品－－0.5
TP显色液0.50.50.5
4、TP测定：比色杯光径1.0cm，以空白调零，以分光光度计测定处标准管、测定管的吸
光度。
计算：
以系列茶多酚标准浓度(1-5号)(20、40、60、80、100μg/ml)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求得回归方程。
以测定管吸光度代入回归方程求得提取液中TP含量。
组织样本TP含量(μg/g)=(C×V T)/(W×V S)
式中：C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
V T=提取液的总体积(ml)
W=组织样本的重量(g)
V S=测定时所用提取液的体积(ml)
液体样本TP含量(μg/ml)=(C×V T)/V S
式中：C=根据标准曲线求得提取液中茶多酚含量(μg/ml)
V T=提取液的总体积(ml)
V S=测定时所用提取液的体积(ml)
注意事项：
1、提取茶多酚时，注意提前煮沸TP Assay buffer，以便充分提取。
2、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。
3、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。
有效期：6个月有效。
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编号名称
CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)
CM0004LB培养基
DC0032Masson三色染色液
DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)
NR0001DEPC处理水(0.1%)
PS0013RIPA裂解液(强)
TC0733乳酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶比色法)
TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。