HPLC法测定异山梨醇的含量_王飞龙.caj
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
国家药品标准 WS － 464 （ X － 399） － 95 采用旋光法测 定。由于异山梨 醇 结 构 中 没 有 发 光 官 能 团，没 有 紫 外 吸 收， 无法用紫外检测器进行检测，而本法采用蒸发光散射法进行 检测。 1 仪器与试药 1． 1 仪器 检测器为蒸发光散射检测器，型号为 ELSD － 3000，通微（ 上海） 分析技术有限公司，液相泵为 KNAUER － 1000。 1． 2 试药 异山梨醇对照品（ 山东方明药业集团股份有限 公司，110203） ； 甲醇为色谱纯； 水为纯化水； 异山梨醇（ 山东 方明药业集团股份有限公司，110501，110502，110503。） 2 方法与结果
部） ［S］． 北京： 中国医药科技出版社，2010： 49．
·465·
图 1 异山梨醇峰面积对数与浓度对数线性关系
2． 5 精密度试验 精密量取对照溶液 20 μL，按上述液相条 件，Fra Baidu bibliotek 续 进 样 6 次，记 录 色 谱 图 峰 面 积。 结 果 分 别 为： 105 190、106 854、105 851、107 464、104 583、105 556，平 均 105 916． 3，RSD 为 1． 0% 。结果表明，精密度良好。 2． 6 重复性试验 取同一批号（ 110501） 样品适量 5 份，精 密量取，按样品测定项下的方法，测定异山梨醇的含量，RSD 为 0． 84% 。 2． 7 稳定性试验 取重复性实验中的第 1 份溶液，室温下 在 0、2、4、6、8 h 测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温 8 h 内稳定，计算得： RSD = 1． 1% ，n = 5。 2． 8 方法准确度试验 精密称取样品（ 批号 110501） 16 mg、 20 mg、24 mg，各 3 份，分别置于 100 mL 容量瓶中，加流动相 稀释至刻度，精密量取 20 μL，按上述液相条件测定，测得结
Key words： Isosorbide； Determination； HPLC
本品是山梨醇的脱水衍生物，为一口服渗透性脱水利尿 药，作用机制类似于静注甘露醇和山梨醇。通过提高血浆渗 透压，导致组织内（ 包括眼、脑、脑脊液等） 水分进入血管内， 从而减轻组织水肿，降低眼内压、颅内压和脑脊液容量及其 压力。用于治疗脑水肿及青光眼。
咖啡因（ % ） HPLC 法 原方法
99． 2 99． 7 100． 2 99． 3 99． 7 98． 5
马来酸氯苯那（ % ）
HPLC 法 原方法
98． 3
－
99． 2
－
98． 5
－
3． 2 流动相的选择 在很多文献中，将马来酸峰误认为马 来酸氯苯那敏峰，因此我们参照《中国药典》2010 年版［1］收 载的马来酸氯苯那敏片含量测定的流动相，明确了马来酸峰 和氯苯那敏峰，为使马来酸、对乙酰氨基酚和咖啡因峰更好 的分离，同时兼顾氯苯那敏峰的保留时间，将磷酸盐缓冲液 和乙腈的比例调整为 85∶ 15，在该条件下，各色谱峰能实现良 好分离，且分析时间也较适宜。本方法采用 HPLC 法同时测 定三组分含量，与原方法相比，具有简便、快速、准确度高、重 现性好等特点，因此本法更利于氨咖黄敏胶囊的质量控制。 参考文献： ［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版（ 二
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版（ 二
部） ［S］． 北京： 中国医药科技出版社，2010： 附录 V D．
（ 上接第 463 页）
表 3 马来酸氯苯那敏回收率试验结果（ n = 9）
加入量（ mg） 8． 09 8． 98 8． 02
10． 26 11． 02 10． 05 12． 74 12． 62 12． 55
150 71 410 5． 010 635 11． 176 19
200 118 916 5． 298 317 11． 686 17
250 162 278 5． 521 461 11． 997 07
300 245 665 5． 703 782 12． 411 72
果与国家药品标准比较，结果见表 2。
表 2 准确度测定结果比较表
3． 1 检测波长的选择 在氨咖黄敏胶囊中三组分含量相差 较悬殊，其中对乙酰氨基酚含量最大，而马来酸氯苯那敏含
量最小，二者相差 250 倍。因此，我们选择了马来酸氯苯那 敏有较大吸收的波长 225 nm 作为检测波长。
表 4 两种方法含量测定的结果（ n = 3）
样品 对乙酰氨基酚（ % ） 批号 HPLC 法 原方法 111205 98． 9 99． 2 111206 99． 6 98． 7 111207 99． 4 100． 3
2． 9 样品测定 精密量取样品溶液和对照品溶液各 20 μL， 分别进样，按外标法计算含量，测得结果与国家药品标准比
较，结果见表 3。
表 3 样品含量测定结果比较表（ n = 3）
样品批号 本法含量（ % ） 国家标准（ % ）
110501 99． 8 99． 1
110502 99． 6 98． 5
Determination of isosorbide by HPLC WANG Fei-long1 ，ZHAO Hai-qiao1，2 ，LIU Cun-ling1，2 （ 1． Shandong Fangming Pharmaceutical Group Co． ，Ltd． ，Heze 274500，China； 2． School of Pharmacy，Shandong University，Jinan 250012，China）
测得量（ mg） 回收率（ % ） 平均回收率（ % ）
8． 03
99． 3
9． 02
100． 4
8． 00
99． 8
10． 31
100． 5
11． 01
99． 9
99． 8
10． 07
100． 2
12． 74
100． 0
12． 42
98． 4
12． 49
99． 5
RSD（ % ） 0． 65
2． 9 溶液稳定性试验 取重复性试验中的供试品溶液，分 别在 0、2、4、8、10 h 进样，测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来 酸氯苯那敏峰面积，RSD 分别为 0． 18% 、0． 24% 和 0． 12% 。 2． 10 两种方法测定结果的比较 取样品三批，照建立的方 法测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量，并 与原方法测定结果比较，见表 4。 3 讨论
110503 99． 9 99． 4
3 结果与讨论
3． 1 试验表明，本测定方法简单，测定结果准确可靠，重现
性好，可用于异山梨醇的含量测定。
3． 2 流动相的选择 考虑到本法的特殊性，采用甲醇 － 水 （ 50∶ 50） 为流动相，且在该流动相条件下，异山梨醇的保留时 间较为理想，理论塔板数高。
参考文献：
异山梨醇在 100 ～ 300 μg·mL －1 浓度的对数与峰面积对数有良好的线性关系（ R2 = 0． 999 1，n = 5） ，且该方法的平均 回收率为 99． 8% ，RSD 为 0． 08% （ n = 9） 。结论 该方法简便，结果准确，可用于异山梨醇含量的测定。
关键词： 异山梨醇； 含量测定； 高效液相色谱法 中图分类号： R927． 2 文献标识码： A 文章编号： 1672 － 7738（ 2012） 08 － 0464 － 02
Abstract： Objective To establish an HPLC method for the determination of isosorbide． Methods The determination was carried out on Kromsil C18 column（ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ． The mobile phase was methanol － water（ 50： 50） at the flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． The flow rate of the carrier gas （ ELSD） was 2． 5 mL·min －1 ． The temperature of detector drift tube was 30 ℃ ． Results The linear range of isosorbide was 100 ～ 300 μg·mL －1 （ R2 = 0． 999 1，n = 5） ． The average recovery was 99． 8% and the RSD was 0． 08% （ n = 9） ． Conclusion This method was simple，accurate and it can be used for the determination of isosorbide．
·464·
齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Affairs 2012 Vol. 31，No. 8
HPLC 法测定异山梨醇的含量
王飞龙1 ，赵海桥1，2 ，刘存领1，2
（ 1． 山东方明药业集团股份有限公司，山东 菏泽 274500； 2． 山东大学药学院，山东 济南 250012）
摘要： 目的 建立高效液相色谱法测定异山梨醇含量。方法 色谱柱为 Kromasil C18 （ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ，流 动相为甲醇 － 水（ 50∶ 50） ，流速为 1． 0 mL·min － 1 ，ELSD 载气流速为 2． 5 mL·min － 1 ，检测器飘移管温度为 30 ℃ 。结果
齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Affairs 2012 Vol. 31，No. 8
积的对数与浓度的对数呈良好的线性关系，结果见表 1 与
图 1。
表 1 异山梨醇线性关系考察
浓度 C（ μg·mL － 1） 100
峰面积 A
35 449
浓度 C 的对数 4． 605 17
峰面积的对数 10． 475 85
2． 1 色谱条件 色谱柱为 Kromasil C18 柱（ 4． 6 mm × 250 mm， 5 μm） ，流动相为甲醇 － 水（ 50∶ 50） ，流速为 1． 0 mL·min －1 。 ELSD 载气流速为 2． 5 mL·min －1 ，检测器飘移管温度为 30 ℃ ，室温为 25 ℃ 。 2． 2 对照品溶液的制备 取异山梨醇对照品约 40 mg，精密 称定，置 20 mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为 对照品储备液（ 2． 000 0 mg·mL － 1 ） 。精密量取对照品储备 液 1 mL 置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得 异山梨醇对照品溶液。 2． 3 样品溶液的制备 精密称定异山梨醇样品，加流动相 稀释制成每 1 mL 含异山梨醇 0． 2 mg 的溶液。 2． 4 线性关系考察 精密量取上述对照储备液 1． 0、1． 5、 2． 0、2． 5、3． 0 mL，分别置 20 mL 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度，摇匀，按上述液相条件，分别进样 20 μL，记录色谱图峰 面积。以各对照溶液浓度的对数和相应峰面积的对数进行线 性回归，得回归方程为： Y = 1． 720 6X + 2． 552 7，R2 = 0． 999 1。 结果表明异山梨醇在 100 ～ 300 μg·mL － 1 浓度范围内，峰面
部） ［S］． 北京： 中国医药科技出版社，2010： 49．
·465·
图 1 异山梨醇峰面积对数与浓度对数线性关系
2． 5 精密度试验 精密量取对照溶液 20 μL，按上述液相条 件，Fra Baidu bibliotek 续 进 样 6 次，记 录 色 谱 图 峰 面 积。 结 果 分 别 为： 105 190、106 854、105 851、107 464、104 583、105 556，平 均 105 916． 3，RSD 为 1． 0% 。结果表明，精密度良好。 2． 6 重复性试验 取同一批号（ 110501） 样品适量 5 份，精 密量取，按样品测定项下的方法，测定异山梨醇的含量，RSD 为 0． 84% 。 2． 7 稳定性试验 取重复性实验中的第 1 份溶液，室温下 在 0、2、4、6、8 h 测定，结果表明，本品的供试品溶液在室温 8 h 内稳定，计算得： RSD = 1． 1% ，n = 5。 2． 8 方法准确度试验 精密称取样品（ 批号 110501） 16 mg、 20 mg、24 mg，各 3 份，分别置于 100 mL 容量瓶中，加流动相 稀释至刻度，精密量取 20 μL，按上述液相条件测定，测得结
Key words： Isosorbide； Determination； HPLC
本品是山梨醇的脱水衍生物，为一口服渗透性脱水利尿 药，作用机制类似于静注甘露醇和山梨醇。通过提高血浆渗 透压，导致组织内（ 包括眼、脑、脑脊液等） 水分进入血管内， 从而减轻组织水肿，降低眼内压、颅内压和脑脊液容量及其 压力。用于治疗脑水肿及青光眼。
咖啡因（ % ） HPLC 法 原方法
99． 2 99． 7 100． 2 99． 3 99． 7 98． 5
马来酸氯苯那（ % ）
HPLC 法 原方法
98． 3
－
99． 2
－
98． 5
－
3． 2 流动相的选择 在很多文献中，将马来酸峰误认为马 来酸氯苯那敏峰，因此我们参照《中国药典》2010 年版［1］收 载的马来酸氯苯那敏片含量测定的流动相，明确了马来酸峰 和氯苯那敏峰，为使马来酸、对乙酰氨基酚和咖啡因峰更好 的分离，同时兼顾氯苯那敏峰的保留时间，将磷酸盐缓冲液 和乙腈的比例调整为 85∶ 15，在该条件下，各色谱峰能实现良 好分离，且分析时间也较适宜。本方法采用 HPLC 法同时测 定三组分含量，与原方法相比，具有简便、快速、准确度高、重 现性好等特点，因此本法更利于氨咖黄敏胶囊的质量控制。 参考文献： ［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版（ 二
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典 2010 年版（ 二
部） ［S］． 北京： 中国医药科技出版社，2010： 附录 V D．
（ 上接第 463 页）
表 3 马来酸氯苯那敏回收率试验结果（ n = 9）
加入量（ mg） 8． 09 8． 98 8． 02
10． 26 11． 02 10． 05 12． 74 12． 62 12． 55
150 71 410 5． 010 635 11． 176 19
200 118 916 5． 298 317 11． 686 17
250 162 278 5． 521 461 11． 997 07
300 245 665 5． 703 782 12． 411 72
果与国家药品标准比较，结果见表 2。
表 2 准确度测定结果比较表
3． 1 检测波长的选择 在氨咖黄敏胶囊中三组分含量相差 较悬殊，其中对乙酰氨基酚含量最大，而马来酸氯苯那敏含
量最小，二者相差 250 倍。因此，我们选择了马来酸氯苯那 敏有较大吸收的波长 225 nm 作为检测波长。
表 4 两种方法含量测定的结果（ n = 3）
样品 对乙酰氨基酚（ % ） 批号 HPLC 法 原方法 111205 98． 9 99． 2 111206 99． 6 98． 7 111207 99． 4 100． 3
2． 9 样品测定 精密量取样品溶液和对照品溶液各 20 μL， 分别进样，按外标法计算含量，测得结果与国家药品标准比
较，结果见表 3。
表 3 样品含量测定结果比较表（ n = 3）
样品批号 本法含量（ % ） 国家标准（ % ）
110501 99． 8 99． 1
110502 99． 6 98． 5
Determination of isosorbide by HPLC WANG Fei-long1 ，ZHAO Hai-qiao1，2 ，LIU Cun-ling1，2 （ 1． Shandong Fangming Pharmaceutical Group Co． ，Ltd． ，Heze 274500，China； 2． School of Pharmacy，Shandong University，Jinan 250012，China）
测得量（ mg） 回收率（ % ） 平均回收率（ % ）
8． 03
99． 3
9． 02
100． 4
8． 00
99． 8
10． 31
100． 5
11． 01
99． 9
99． 8
10． 07
100． 2
12． 74
100． 0
12． 42
98． 4
12． 49
99． 5
RSD（ % ） 0． 65
2． 9 溶液稳定性试验 取重复性试验中的供试品溶液，分 别在 0、2、4、8、10 h 进样，测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来 酸氯苯那敏峰面积，RSD 分别为 0． 18% 、0． 24% 和 0． 12% 。 2． 10 两种方法测定结果的比较 取样品三批，照建立的方 法测定对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量，并 与原方法测定结果比较，见表 4。 3 讨论
110503 99． 9 99． 4
3 结果与讨论
3． 1 试验表明，本测定方法简单，测定结果准确可靠，重现
性好，可用于异山梨醇的含量测定。
3． 2 流动相的选择 考虑到本法的特殊性，采用甲醇 － 水 （ 50∶ 50） 为流动相，且在该流动相条件下，异山梨醇的保留时 间较为理想，理论塔板数高。
参考文献：
异山梨醇在 100 ～ 300 μg·mL －1 浓度的对数与峰面积对数有良好的线性关系（ R2 = 0． 999 1，n = 5） ，且该方法的平均 回收率为 99． 8% ，RSD 为 0． 08% （ n = 9） 。结论 该方法简便，结果准确，可用于异山梨醇含量的测定。
关键词： 异山梨醇； 含量测定； 高效液相色谱法 中图分类号： R927． 2 文献标识码： A 文章编号： 1672 － 7738（ 2012） 08 － 0464 － 02
Abstract： Objective To establish an HPLC method for the determination of isosorbide． Methods The determination was carried out on Kromsil C18 column（ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ． The mobile phase was methanol － water（ 50： 50） at the flow rate of 1． 0 mL·min －1 ． The flow rate of the carrier gas （ ELSD） was 2． 5 mL·min －1 ． The temperature of detector drift tube was 30 ℃ ． Results The linear range of isosorbide was 100 ～ 300 μg·mL －1 （ R2 = 0． 999 1，n = 5） ． The average recovery was 99． 8% and the RSD was 0． 08% （ n = 9） ． Conclusion This method was simple，accurate and it can be used for the determination of isosorbide．
·464·
齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Affairs 2012 Vol. 31，No. 8
HPLC 法测定异山梨醇的含量
王飞龙1 ，赵海桥1，2 ，刘存领1，2
（ 1． 山东方明药业集团股份有限公司，山东 菏泽 274500； 2． 山东大学药学院，山东 济南 250012）
摘要： 目的 建立高效液相色谱法测定异山梨醇含量。方法 色谱柱为 Kromasil C18 （ 4． 6 mm × 250 mm，5 μm） ，流 动相为甲醇 － 水（ 50∶ 50） ，流速为 1． 0 mL·min － 1 ，ELSD 载气流速为 2． 5 mL·min － 1 ，检测器飘移管温度为 30 ℃ 。结果
齐鲁药事·Qilu Pharmaceutical Affairs 2012 Vol. 31，No. 8
积的对数与浓度的对数呈良好的线性关系，结果见表 1 与
图 1。
表 1 异山梨醇线性关系考察
浓度 C（ μg·mL － 1） 100
峰面积 A
35 449
浓度 C 的对数 4． 605 17
峰面积的对数 10． 475 85
2． 1 色谱条件 色谱柱为 Kromasil C18 柱（ 4． 6 mm × 250 mm， 5 μm） ，流动相为甲醇 － 水（ 50∶ 50） ，流速为 1． 0 mL·min －1 。 ELSD 载气流速为 2． 5 mL·min －1 ，检测器飘移管温度为 30 ℃ ，室温为 25 ℃ 。 2． 2 对照品溶液的制备 取异山梨醇对照品约 40 mg，精密 称定，置 20 mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为 对照品储备液（ 2． 000 0 mg·mL － 1 ） 。精密量取对照品储备 液 1 mL 置 10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得 异山梨醇对照品溶液。 2． 3 样品溶液的制备 精密称定异山梨醇样品，加流动相 稀释制成每 1 mL 含异山梨醇 0． 2 mg 的溶液。 2． 4 线性关系考察 精密量取上述对照储备液 1． 0、1． 5、 2． 0、2． 5、3． 0 mL，分别置 20 mL 容量瓶中，用流动相稀释至 刻度，摇匀，按上述液相条件，分别进样 20 μL，记录色谱图峰 面积。以各对照溶液浓度的对数和相应峰面积的对数进行线 性回归，得回归方程为： Y = 1． 720 6X + 2． 552 7，R2 = 0． 999 1。 结果表明异山梨醇在 100 ～ 300 μg·mL － 1 浓度范围内，峰面