基因工程实验考试试题(答案)
基因工程试题及答案.doc
基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术:按照人们的愿望,进行严密的设计,通过体外DNA 重组和转移等技术,有目的地改造生物种性,使现有物种在较短的时间内趋于完善,创造出新的生物类型。
2.感受态细胞:受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后,细胞膜的通透性发生了暂时性改变,成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库:从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板,利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段,与适当载体连接后导入受体菌内,扩增,构建cDNA文库。
4.鸟枪法:指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段,分别连接到载体DNA上,转化受体细胞,形成一套重组兑隆,从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’),它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合,将mRNA定位于核糖体上,从而启动翻译。
6.包涵体:胞内高效表达时,工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子:是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交:是将菌落或噬菌斑转到固相膜上,原位裂解细胞后使核酸固定在膜上,然后与探针杂交。
用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射检测体系,在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE:是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术,是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5,端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵:即在连续发酵反应器中,细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定,前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
基因工程练习试题带答案
1.在基因工程中,切割载体和含有目的基因的 DNA 片段中,普通需使用A. 同种限制酶B.两种限制酶C. 同种连接酶D.两种连接酶2.基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A. ①②③④B. ①②③C. ②③④D.①②④3.有关基因工程的表达正确的选项是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的构造成份为合成目的基因提供资料4.以下哪项不是基因工程中时常使用的用来运载目的基因的载体 A.细菌质粒 B.噬菌体 C.动植物病毒 D.细菌核区的 DNA5.基因工程是在 DNA 份子水平上发展设计施工的。
在基因操作的根本步骤中,不发展碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B. 目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D. 目的基因的检测表达6.不是基因工程法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D. 乙肝疫苗7.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8.以下哪项表达不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或者多个限制酶切点9.水母发光蛋白由 236 个氨基酸构成,其中有三种氨基酸构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中,这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达 10.应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才干到达检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或者荧光份子等标记的 DNA 份子C.合成β—球蛋白的 . DNA .D.合成苯丙氨酸羟化酶的 DNA 片段11.基因工程第一步的一种法是把所需的基因从供体细胞别离出来,这要利用限制性切酶。
基因工程试题及答案解析
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。
答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
基因工程试题与答案
基因工程试题与答案1、转基因动物的安全性问题正面观点:(1)转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。
(2) 转基因食品的功效: 改良植物的食用品质;增加果蔬贮藏、保鲜性能;生产特殊食品——食品疫苗。
(3)迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。
如果转基因生物技术得不到社会支持,这一研究将被扼杀。
反面观点:转基因的潜在危害:转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性,食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。
环境安全性分析包括:(1)生存竞争性:转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少,影响了生物多样性;(2)生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性;与近缘野生种的可交配性:外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中,从而破坏自然生态平衡;(3)对非靶生物的影响:转基因植物花粉通过风,雨,鸟,昆虫,真菌,细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸,从而造成基因污染。
(4)病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性:自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。
(5)对农业和生态环境的影响,生态平衡. 如产生超级杂草的可能性;种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”;食品安全性:(1)转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能,美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境;(2)人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素,痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
(3)实质等同性的原则,即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。
如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较,并且发现具有实质同等性,便能用现产品安全性同种方法对待它。
转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质,在部分人中可能发生食物过敏,特别是幼儿和某些过敏体质的人。
【HUNAU】基因工程试题 (附答案)
名词解释1.Restriction Endonuclease限制性内切核酸酶。
一类能够识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列,并由此切割DNA双链结构的核酸水解酶。
特异性识别序列上的位点,并对其进行切割。
第一个核酸内切酶,Boyer实验室在1972年发现,它能特异性识别GAATTC序列,水解双链DNA分子。
2.EcoR Ⅰ(酶切位点)限制性内切酶的一种,酶切识别位点为G/AATTC。
3.PCR 聚合酶链式反应。
通过变性、延伸和退火三个步骤的循环。
扩增DNA片段。
4.Vector载体可以运载外源DNA或者基因进入宿主细胞进行自主复制,上有抗性基因以及多克隆位点,可用于制备载体。
5.Plasmid质粒存在于多种宿主细胞中独立于染色体外的可自主复制的闭合环状DNA分子。
一种环形分子,可以不依靠宿主细胞自主复制,上有抗性基因以及多克隆位点,可用于制备载体。
6.Agarose gel electrophoresis琼脂糖凝胶电泳。
以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳方式,可分离DNA片段,且通过DNA Marker判断出其分子量大小,7.Transgenic bio-reactor转基因生物反应器。
将基因转入细胞或动植物体,利用细胞增殖或者动植物代谢制备外源基因的表达产物的技术叫转基因技术。
转入外源基因的动植物或细胞称为转基因生物反应器。
8.pBR322 一种质粒载体9.Genomic library基因组文库。
把某种生物的基因组DNA切成适当大小,分别与载体组合,导入微生物细胞,形成克隆、汇集包含基因组中所有DNA序列的克隆,这样的克隆片段的总汇,称为基因组文库。
将某一种生物基因组DNA片段化并全部克隆后所获得的重组子群体的总称。
10.T-DNA Ti-质粒上的可以转移至植物细胞内的一个片段。
11.PUC18 质粒载体的一种,由PBR322改造而来,其上有多克隆位点,lac Z基因。
12.Cosmid黏粒载体,可用氯霉素扩增。
基因工程实验(答案)
——凯1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程(实验题目的总结)答:①基因组DNA的提取;②PCR扩增目的基因;③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接;④重组质粒的转化及转化子的筛选;⑤重组质粒的抽提;⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器(自己写的)答:①选取合适量程的移液器;②根据取液量设定量程;③安装(吸液)枪头;④按至第一档,将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液;⑤按至第二档将液体打入容器;⑥弃掉枪头;⑦将量程调至最大,放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时,DNA通常和什么试剂混匀,其主要成分和作用是什么答:loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝,二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用;甘油加大样品密度,从而沉降于点样孔中,以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
(题目有歧义)答:①取琼脂粉置于锥形瓶,量取50ml 1×TBE溶液于瓶中,微波炉加热至琼脂溶解;②将移胶板放入胶室中,选取合适梳子垂直安插在移胶板上方,待琼脂降温至55℃下后,缓慢导入该胶室里;③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽,并正确插好电泳线;④等凝胶凝固后,将梳子垂直拔出;⑤点样;⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置;⑦打开电泳仪的开关,调好参数,开始电泳;⑧一定时间后,停止电泳,取出凝胶板,然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响(实验书P75)答:①样品DNA的大小和构象;②琼脂糖浓度;③电泳电场;④温度;⑤缓冲液;⑥嵌入染料的存在与否;6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么(实验书P31)答:注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂,它们各有什么作用答:酚——是蛋白质变性,抑制DNA酶的降解作用;氯仿——除去脂类,同时加速有机相与水相的分层;异戊醇——降低表面张力,从而减少气泡的产生。
大学基因工程试题及答案
大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶?A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案:A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案:D3. 基因工程中常用的运载体有哪些?A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案:D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。
答案:PCR2. 基因工程中,_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
答案:转化3. 在基因工程中,_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。
答案:克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。
答案:目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。
四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。
答案:基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。
可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。
2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。
答案:目的基因表达调控在基因工程中至关重要,它决定了基因工程产品的功能和产量。
调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。
基因工程试题与答案
1、转基因动物的安全性问题正面观点:(1)转基因工程是不可阻挡的.基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等.保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。
(2)转基因食品的功效: 改良植物的食用品质;增加果蔬贮藏、保鲜性能;生产特殊食品——食品疫苗。
(3)迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。
如果转基因生物技术得不到社会支持,这一研究将被扼杀。
反面观点:转基因的潜在危害:转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性,食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。
环境安全性分析包括:(1)生存竞争性:转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少,影响了生物多样性;(2)生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性;与近缘野生种的可交配性:外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中,从而破坏自然生态平衡;(3)对非靶生物的影响:转基因植物花粉通过风,雨,鸟,昆虫,真菌,细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸,从而造成基因污染。
(4)病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性:自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。
(5)对农业和生态环境的影响,生态平衡. 如产生超级杂草的可能性;种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”;食品安全性:(1)转基因毒性.如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能,美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境;(2)人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素,痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
(3)实质等同性的原则,即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。
如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较,并且发现具有实质同等性,便能用现产品安全性同种方法对待它。
转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质,在部分人中可能发生食物过敏,特别是幼儿和某些过敏体质的人。
基因工程试题及答案
基因工程试题及答案# 基因工程试题及答案## 一、选择题1. 基因工程中常用的工具酶是:A. 限制性内切酶B. DNA聚合酶C. 逆转录酶D. DNA连接酶2. 基因工程中,用于目的基因的克隆通常使用:A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 转座子3. 下列哪项不是基因工程的应用领域?A. 农业改良B. 疾病治疗C. 能源开发D. 武器制造## 二、填空题1. 基因工程中,常用的宿主细胞包括________、________和________。
2. 基因枪法是一种________技术,可以将目的基因直接导入植物细胞。
## 三、简答题1. 简述基因工程的基本操作步骤。
2. 基因工程在医药领域的应用有哪些?## 四、论述题1. 论述基因工程对现代农业的影响及其潜在风险。
## 参考答案### 一、选择题1. 答案:A, D。
限制性内切酶和DNA连接酶是基因工程中用于切割和连接DNA片段的常用工具酶。
2. 答案:A。
质粒是基因工程中常用的载体,用于克隆和表达目的基因。
3. 答案:D。
基因工程的应用领域广泛,但武器制造不属于其应用范围。
### 二、填空题1. 答案:大肠杆菌、酵母菌、哺乳动物细胞。
这些是基因工程中常用的宿主细胞,用于表达外源基因。
2. 答案:基因转移。
基因枪法是一种基因转移技术,通过高速微粒子将DNA射入细胞内。
### 三、简答题1. 答案:基因工程的基本操作步骤包括:目的基因的获取、载体的选择与构建、目的基因与载体的连接、转化宿主细胞、筛选含有目的基因的细胞、目的基因的表达与检测。
2. 答案:基因工程在医药领域的应用包括:生产重组蛋白药物、基因治疗、疫苗开发、疾病诊断等。
### 四、论述题1. 答案:基因工程对现代农业的影响主要体现在作物改良、提高产量、增强抗病虫害能力等方面。
通过基因工程,可以培育出抗旱、抗盐碱、抗病的作物新品种,提高作物的适应性和产量。
然而,基因工程也存在潜在风险,如基因流可能导致非目标物种的基因改变,以及转基因作物对生态环境的影响等。
高考生物《基因工程》真题练习含答案
高考生物《基因工程》真题练习含答案1.[2024·山东卷]关于“DNA的粗提取与鉴定”实验,下列说法正确的是()A.整个提取过程中可以不使用离心机B.研磨液在4 ℃冰箱中放置几分钟后,应充分摇匀再倒入烧杯中C.鉴定过程中DNA双螺旋结构不发生改变D.仅设置一个对照组不能排除二苯胺加热后可能变蓝的干扰答案:A解析:研磨后,可以将研磨液过滤到烧杯中,在4 ℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液,可以不使用离心机,A正确,B错误。
鉴定过程中的沸水浴加热可使DNA双螺旋结构发生改变,C错误。
该实验中,为排除二苯胺加热后可能变蓝对实验结果造成干扰,可设置加二苯胺不加DNA的对照组,D错误。
2.[2023·新课标卷]某同学拟用限制酶(酶1、酶2、酶3和酶4)、DNA连接酶为工具,将目的基因(两端含相应限制酶的识别序列和切割位点)和质粒进行切割、连接,以构建重组表达载体。
限制酶的切割位点如图所示。
下列重组表达载体构建方案合理且效率最高的是()A.质粒和目的基因都用酶3切割,用E.coli DNA连接酶连接B.质粒用酶3切割、目的基因用酶1切割,用T4 DNA连接酶连接C.质粒和目的基因都用酶1和酶2切割,用T4 DNA连接酶连接D.质粒和目的基因都用酶2和酶4切割,用E.coli DNA连接酶连接答案:C解析:只用一种限制酶切割质粒和目的基因,会使质粒和目的基因发生自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,A错误;用酶1切割目的基因,产生的是黏性末端,用酶3切割质粒,产生的是平末端,无法连接,B错误;质粒和目的基因都用酶1和酶2切割后,可使用T4 DNA连接酶连接,使目的基因定向插到质粒中,C正确;酶2和酶4切割后产生的黏性末端相同,易导致目的基因和质粒自身环化或者使目的基因在质粒中反向连接,并且用酶4切割会破坏标记基因,D错误。
3.[2023·浙江6月]某研究小组利用转基因技术,将绿色荧光蛋白基因(GFP)整合到野生型小鼠Gata3基因一端,如图甲所示。
生物选修基因工程试题及答案
生物选修基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中,常用的运载体不包括以下哪一项?A. 质粒B. 噬菌体C. 病毒D. 染色体答案:D2. 基因枪法是一种用于将外源基因导入植物细胞的方法,它主要利用了什么原理?A. 电穿孔B. 显微注射C. 基因重组D. 粒子轰击答案:D3. 在基因工程中,PCR技术的主要作用是什么?A. 基因测序B. 基因克隆C. 基因扩增D. 基因编辑答案:C二、填空题4. 基因工程中,常用的限制性内切酶能够识别特定的_______序列,并在这些序列的特定位置切割DNA分子。
答案:核苷酸5. 基因工程中,将目的基因插入到运载体中后,需要通过_______技术将重组DNA导入宿主细胞。
答案:转化三、简答题6. 请简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断等。
例如,利用基因工程技术生产胰岛素、干扰素等生物药物;通过基因编辑技术治疗遗传性疾病;利用基因芯片技术进行疾病相关的基因检测。
四、论述题7. 论述基因工程在农业中的应用及其潜在的伦理问题。
答案:基因工程在农业中的应用主要包括转基因作物的培育、抗病抗虫作物的开发、作物品质改良等。
例如,通过基因工程培育出抗虫害的棉花、抗旱的玉米等。
然而,基因工程也引发了一些伦理问题,如转基因作物对环境的影响、对生物多样性的潜在威胁、以及公众对食品安全的担忧等。
结束语:通过本试题,我们对基因工程的基本概念、技术方法及其在不同领域的应用有了更深入的了解。
同时,我们也认识到了基因工程在实际应用中可能遇到的伦理和环境问题,这需要我们在进行基因工程研究和应用时,更加谨慎和负责任。
基因工程测试题(附解析)
基因工程测试题(附解析)一、基础题点练1.(2019·徐州模拟)已知限制性内切酶Xma Ⅰ和Sma Ⅰ的识别序列分别为C CCGGG 和CCC GGG。
有关这两种酶及应用的叙述,错误的是()A.这两种酶作用的底物都是双链DNAB.DNA 中出现这两种酶识别序列的几率不同C.Xma Ⅰ切割DNA 形成的黏性末端是—GGCCD.使用这两种酶时需注意控制反应温度、时间等解析:选B 限制酶作用的底物是双链DNA 分子;这两种限制酶作用的核苷酸序列相同,所以这两种识别序列在DNA 中出现的的几率相同;根据碱基互补配对原则,CCCGGG 的互补链是GGGCCC,并根据Xma Ⅰ的切割位点可知,切割后的黏性末端是—CCGG;温度能影响酶的活性,所以使用酶时需要注意控制反应温度和时间等。
2.如图表示的是三种黏性末端,下列说法正确的是( ) ↓↓A.图中所示黏性末端是由同种限制酶切割形成B.若图甲中的G 碱基处发生突变,限制酶可能无法识别该切割位点C.图中所示黏性末端是限制酶断开氢键形成D.目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物GAATTC 解析:选B 产生甲黏性末端的限制酶的识别序列为CTTAAG =====,产生乙黏性末端的限制酶CAATTG CTTAAG 的识别序列为GTTAAC =====,产生丙黏性末端的限制酶的识别序列为GAATTC =====,可见甲、乙、丙黏性末端是由3种限制酶作用产生的;限制酶具有专一性,能够识别双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列,如果甲中的G 发生突变,限制酶可能无法识别该切割位点;图中所示黏性末端是限制酶断开磷酸二酯键形成的;质粒是环状DNA 分子,噬菌体和动植物病毒都没有细胞结构,它们都不属于原核生物。
3.下列关于蛋白质工程的叙述,错误的是()A.蛋白质工程的基础是基因工程B.蛋白质工程遵循的原理包括中心法则C.蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作,定向改变分子的结构D.蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子解析:选C 蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成对现有蛋白质进行改造,或合成新的蛋白质,故蛋白质工程的基础是基因工程;蛋白质工程遵循的原理包括中心法则;蛋白质工程是通过改造基因来实现对蛋白质分子的改造的;蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子。
高二生物选修三基因工程测试题(含答案)详细解答
基因工程测试题姓名____________一、选择题1.已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点,如图中箭头所指,如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断,则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。
现在多个上述线性DNA分子,若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断,则从理论上讲,经该酶切后,这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是( c )A.3 B.4C.9 D.122.下图是将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。
已知细菌B细胞内不含质粒A,也不含质粒A上的基因。
判断下列说法正确的是 ( c )A.将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法钙离子处理法B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上,能生长的只是导入了重组质粒的细菌 普通质粒A和重组质粒都含有抗氨苄青霉素基因。
都能生长因为目的基因在四环素C.将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上,能生长的就是导入了质粒A的细菌 导入重组质粒的细菌不能生长,因为目的基因插在抗四环素基因中,抗四环素基因的结构被破坏。
D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的培养基上生长 受体细胞通过转录、翻译合成相应的蛋白质,即人的生长激素。
3.下列关于基因工程的叙述,错误的是(D )A.目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物;常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶;人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性,只有经过一定的物质激活以后,才有生物活性.载体上的抗性基因主要是有利于筛选含重组DNA的细胞,不能促进目的基因的表达.所以D错误.4.将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。
基因工程实验考试试题(答案)
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程?答:①基因组DNA的提取;②PCR扩增目的基因;③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接;④重组质粒的转化及转化子的筛选;⑤重组质粒的抽提;⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器?答:①选取合适量程的移液器;②根据取液量设定量程;③安装(吸液)枪头;④按至第一档,将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液;⑤按至第二档将液体打入容器;⑥弃掉枪头;⑦将量程调至最大,放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时,DNA通常和什么试剂混匀,其主要成分和作用是什么?答:loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝,二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用;甘油加大样品密度,从而沉降于点样孔中,以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
答:①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶,量取50ml 1×TBE溶液于瓶中,微波炉加热至琼脂糖溶解;②将移胶板放入胶室中,选取合适梳子垂直安插在移胶板上方,待琼脂降温至55℃下后,缓慢导入该胶室里;③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽,并正确插好电泳线;④等凝胶凝固后,将梳子垂直拔出;⑤点样;⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置;⑦打开电泳仪的开关,调好参数,开始电泳;⑧一定时间后,停止电泳,取出凝胶板,然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响?(实验书P75)答:①样品DNA的大小和构象;②琼脂糖浓度;③电泳电场;④温度;⑤缓冲液;⑥嵌入染料的存在与否;6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么?(实验书P31)答:注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂,它们各有什么作用?答:酚——是蛋白质变性,抑制DNA酶的降解作用;氯仿——除去脂类,同时加速有机相与水相的分层;异戊醇——降低表面张力,从而减少气泡的产生。
基因工程测试卷及答案
基因工程测试题1、在基因工程中使用的限制性核酸内切酶,其作用是( )A、将目的基因从染色体上切割出来B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列C、将目的基因与运载体结合D、将目的基因导入受体细胞2、基因工程中常用细菌等原核生物作受体细胞的原因不包括( )A、繁殖速度快B、遗传物质相对较少C、多为单细胞,操作简便D、DNA为单链,变异少3、基因工程是DNA分子水平的操作,下列有关基因工程的叙述中,错误的是( )A、限制酶只用于切割获取目的基因B、载体与目的基因可以用同一种限制酶处理C、基因工程所用的工具酶是限制酶,DNA连接酶D、带有目的基因的载体是否进入受体细胞需检测4、运用现代生物技术,将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因整合到棉花细胞中,为检测实验是否成功,最方便的方法是检测棉花植株是否有( )A、抗虫基因B、抗虫基因产物C、新的细胞核D、相应性状5、转基因动物转基因时的受体细胞是( )A、受精卵B、精细胞C、卵细胞D、体细胞6、基因工程中常见的载体是( )A、质体B、染色体C、质粒D、线粒体7、水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中Asp、Gly、Ser构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记,在转基因技术中,这种蛋白质的作用是( ) A、促使目的基因导入宿主细胞中 B、促使目的基因在宿主细胞中复制C、使目的基因容易被检测出来D、使目的基因容易成功表达8、运用现代生物技术的育种方法,将抗菜青虫的Bt基因转移到优质油菜中,培育出转基因抗虫的油菜品种,这一品种在生长过程中能产生特异的杀虫蛋白质,对菜青虫有显著抗性,能大大减轻菜青虫对油菜的危害,提高油菜产量,减少农药使用,据以上信息,下列叙述正确的是( )A、Bt基因的化学成分是蛋白质B、Bt基因中有菜青虫的遗传物质C、转基因抗虫油菜能产生杀虫蛋白是由于具有Bt基因D、转基因抗虫油菜产生的杀虫蛋白是无机物9、人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成,通过转基因技术,可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是( )A、大肠杆菌B、酵母菌C、T噬菌体 D、质粒DNA410、不属于质粒被选为基因运载体的理由是()A.能复制 B.有多个限制酶切点C.具有标记基因 D.它是环状DNA11.下列关于各种酶作用的叙述,不正确的是()A.DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B.RNA聚合酶能与基因的特定位点结合,催化遗传信息的转录C.一种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列,切割出多种目的基因D.胰蛋白酶能作用于离体的动物组织,使其分散成单个细胞12、治疗白化病、苯丙酮尿症等人类遗传疾病的根本途径是A、口服化学药物B、注射化学药物C、利用辐射或药物诱发致病基因突变D、采取基因疗法13.下列与基因工程无关的是( )A、培养利用“工程菌”生产胰岛素B、基因治疗C、产生人胰岛素的大肠杆菌D、杂交育种14.基因工程的设计施工是在什么水平上进行的 ( )A.细胞B.细胞器C. 原子D.分子15.人胰岛细胞能产生胰岛素,但不能产生血红蛋白,据此推测胰岛细胞中()A.只有胰岛素基因B.比人受精卵的基因要少C.既有胰岛素基因,也有血红蛋白基因和其他基因D.有胰岛素基因和其他基因,但没有血红蛋白基因16、能够使植物体表达动物蛋白的育种方法是()A、单倍体育种B、杂交育种C、基因工程育种D、多倍体育种17、要彻底治疗白化病必须采用()A.基因治疗 B.医学手术 C.射线照射 D.一般药物18、下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体()A、细菌质粒B、噬菌体C、动植物病毒D、细菌核区的DNA19、在基因工程中,作为基因运输工具的运载体,下列特征除哪项外,都是运载体必须具备的条件()A、能够在宿主细胞中复制,并稳定地保存B、具有多个限制酶切点C、必须是细菌的质粒或噬菌体D、具有某些标记基因20、1993年,我国科学工作者培育成的抗棉铃虫的转基因抗虫棉,其抗虫基因的来源()A.普通棉花的基因突变B.棉铃虫变异形成的致死基因C.寄生在棉铃虫体内的线虫D.苏云金芽孢杆菌体内的抗虫基因21.正确表示基因操作“四步曲”的是()①提取目的基因②目的基因导入受体细胞③目的基因与运载体的结合④目的基因的检测和表达A.①②③④B.④①③②C.①③②④D.③①②④22.现有一长度为1000碱基对(bp)的DNA分子,用限制性核酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是1000bp,用KpnI单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分子,用EcoRI、KpnI同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分子。
(整理)基因工程答案
基因工程试题答案选择题有多选项,需要同学们自己确定对错,只有几道是多选。
一、单项选择题(共计150题)1.因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( c )(a)A.Kornberg(b)W.Gilbert(c)P.Berg(d)B.McClintock2.第一个作为重组DNA载体的质粒是( c )(a)pBR322(b)ColEl(c)pSCl01(d)pUCl83.关于宿主控制的限制修饰现象的本质,下列描述中只有( b )不太恰当。
(a)由作用于同一DNA序列的两种酶构成(b)这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶(c)这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰(d)不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统4.Ⅱ型限制性内切核酸酶:( b )(a)有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列(b)仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供(c)限制性识别非甲基化的核苷酸序列(d)有外切核酸酶和甲基化酶活性(e)仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供5.下面有关限制酶的叙述哪些是正确的?( bde,c待定)(a)限制酶是外切酶而不是内切酶(b)限制酶在特异序列(识别位点)对DNA进行切割(c)同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的(星活性怎么办???不确定)(d)一些限制酶在识别位点内稍有不同的点切割双链DNA,产生黏末端(e)一些限制酶在识别位点内相同的位置切割双链DNA,产生平末端6.第一个被分离的Ⅱ类酶是:( c )(a)EcoK(b)HindⅢ(c)HindⅡ(d)EcoB7.在下列进行DNA部分酶切的条件中,控制哪一项最好:( b )(a)反应时间(b)酶量(c)反应体积(d)酶反应的温度8.在下列试剂中,那一种可以螯合Ca2+离子?( d )(a)EDTA (b)柠檬酸钠(c)SDS (d)EGTA9.在下列工具酶中,那一种可以被EGTA抑制活性?( d )(a)S1单链核酸酶(b)末端转移酶(c)碱性磷酸酶(d)Bal 31核酸酶(钙离子依赖酶)10.限制性内切核酸酶可以特异性地识别:( b )(a)双链DNA的特定碱基对(b)双链DNA的特定碱基序列(c)特定的三联密码(d)以上都正确11.限制性核酸内切酶切割DNA后产生:aA.5′磷酸基和3′羟基基团的末端B.5′磷酸基和3′磷酸基团的末端C.5′羟基和3′羟基基团的末端D.3′磷酸基和5′羟基基团的末端E.以上都不是12. cDNA是指:aA.经逆转录合成的与RNA互补的单链DNAB.经逆转录合成的与DNA互补的单链RNAC.经逆转录合成的与DNA互补的DNAD.经转录合成的与DNA互补的RNAE.经转录合成的与DNA互补的DNA13.有关质粒的描述错误的是:eA.小型环状双链DNAB.小的只有2-3 kb,大的可达数百kbC.能在宿主细胞能自主复制D.多数带有一些抗药性基因E.只有一个限制性核酸内切酶位点14.可识别并切割特异DNA序列的称:bA.非限制性核酸外切酶B.限制性核酸内切酶C.限制性核酸外切酶D.非限制性核酸内切酶E.DNA酶(DNase)15.对基因载体的描述,下列哪个不正确:A.都可以转入宿主细胞B.都有限制性核酸内切酶的识别位点C.都可以连接目的基因D.都是环状双链DNA分子E.都有筛选标志16.在已知某一序列信息的情况下,获取该目的基因最快捷的方法是:A.基因组文库法B.化学合成法C.cDNA文库法D.PCR法(需要有目的片段才行)E.序列测定17.在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指:A.建立多克隆抗体B.建立单克隆抗体C.有性繁殖DNAD.无性繁殖DNAE.构建重组DNA分子18.下列哪种方法不能作为表达载体导入真核宿主的方法:A.电穿孔B.磷酸钙转染C.脂质体转染D.氯化钙转染E.显微注射19.表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是:A.酵母表达体系B.原核表达体系C.E.coli表达体系D.昆虫表达体系E.哺乳类细胞表达体系20.某一生物的基因组是指:A.该生物整套遗传信息B.该生物可转录基因C.该生物非转录部分D.该生物特定的遗传信息E.该生物可表达的基因21.下列不是细菌基因转移与重组方式的是:A.接合B.转化C.转导D.细胞融合(真核)E.转换22. Ti质粒:( )(a)可从农杆菌转到植物细胞中(b)作为双链DNA被转移(c)在植物中导致肿瘤(d)介导冠瘿碱的合成,作为细菌的营养物和植物的生长激素(e)需要细菌的vir基因帮助转移(f)在植物细胞中作为染色体外质粒23.黏粒(cosmid)是一种人工建造的载体,( )(a)它具有COS位点,因而可进行体外包装(b)它具有质粒DNA的复制特性(c)进入受体细胞后,可引起裂解反应(d)进入受体细胞后,可引起溶源化反应24.有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。
基因工程测试题及答案
基因工程测试题及答案一、选择题(每题2分,共10分)1. 基因工程中常用的限制酶主要来源于:A. 病毒B. 细菌C. 真菌D. 植物答案:B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的降解答案:D3. 基因工程中常用的载体不包括:A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 病毒答案:D4. 基因工程中,用于连接目的基因和载体的酶是:A. 限制酶B. DNA连接酶C. DNA聚合酶D. 反转录酶答案:B5. 基因工程中,用于将重组DNA导入受体细胞的方法不包括:A. 转化B. 转染C. 转导D. 转录答案:D二、填空题(每题2分,共10分)1. 基因工程中,将外源基因导入植物细胞的方法主要有______和______。
答案:农杆菌介导法;基因枪法2. 在基因工程中,______是将目的基因插入到载体DNA分子中的关键步骤。
答案:克隆3. 基因工程中,______是将重组DNA导入受体细胞的常用方法。
答案:转化4. 基因工程中,______是将目的基因表达成蛋白质的步骤。
答案:表达5. 在基因工程中,______是检测目的基因是否成功表达的重要手段。
答案:分子杂交三、简答题(每题5分,共20分)1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的获取方法。
答案:目的基因的获取方法包括从基因文库中筛选、利用PCR技术扩增、人工合成等。
3. 解释基因工程中载体的作用。
答案:载体在基因工程中的作用是携带目的基因进入受体细胞,并在其中复制和表达。
4. 阐述基因工程中转化过程的重要性。
答案:转化过程是将重组DNA导入受体细胞的关键步骤,它决定了目的基因能否在受体细胞中稳定存在和表达。
四、论述题(每题10分,共20分)1. 论述基因工程在农业领域的应用及其可能带来的问题。
基因工程试题库及答案
基因工程习题集一、名词解释:(20×4/)1、基因2、克隆3、基因定位4、PCR5、基因工程工具酶6、组织培养7、限制性核酸内切酶8、受体细胞9、生物技术 10、基因沉默11、重组DNA技术12、逆转录酶13、单克隆抗体14、核移植技术15、细胞融合16、胞内酶17、凝胶过滤18、固定化酶 19、蛋白质工程20、生物反应器二、单项选择题:(60×2/)1.下列关于基因工程应用的叙述,正确的是()A.基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B.基因诊断的基本原理是DNA分子杂交C.一种基因探针能检测水体中的各种病毒D.原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良2.在已知某小片段基因碱基序列的情况下,获得该基因的最佳方法是()A.用mRNA为模板逆转录合成DNA B.以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C.将供体DNA片段转入受体细胞中,再进一步筛选 D.由蛋白质的氨基酸序列推测mRNA 3.我国科学家运用基因工程技术,将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导人棉花细胞并成功表达,培育出了抗虫棉。
下列叙述不.正确的是()A.基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少B.重组DNA分子中增加一个碱基对,不一定导致毒蛋白的毒性丧失C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物,从而造成基因污染D.转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的4.采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵,培育出转基因羊。
但是,人凝血因子只存在于该转基因羊的乳汁中。
以下有关叙述,正确的是()A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目,等于凝血因子氨基酸数目的3倍B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵C.在该转基因羊中,人凝血因子基因存在于乳腺细胞,而不存在于其他体细胞中D.人凝血因子基因开始转录后,DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA5.科学家通过基因工程的方法,能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。
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1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程?
答:①基因组DNA的提取;②PCR扩增目的基因;③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接;④重组质粒的转化及转化子的筛选;⑤重组质粒的抽提;⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器?
答:①选取合适量程的移液器;②根据取液量设定量程;③安装(吸液)枪头;④按至第一档,将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液;⑤按至第二档将液体打入容器;⑥弃掉枪头;⑦将量程调至最大,放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时,DNA通常和什么试剂混匀,其主要成分和作用是什么?
答:loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝,二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用;甘油加大样品密度,从而沉降于点样孔中,以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
答:①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶,量取50ml 1×TBE溶液于瓶中,微波炉加热至琼脂糖溶解;②将移胶板放入胶室中,选取合适梳子垂直安插在移胶板上方,待琼脂降温至55℃下后,缓慢导入该胶室里;③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽,并正确插好电泳线;
④等凝胶凝固后,将梳子垂直拔出;⑤点样;⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置;⑦打开电泳仪的开关,调好参数,开始电泳;⑧一定时间后,停止电泳,取出凝胶板,然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响?(实验书P75)
答:①样品DNA的大小和构象;②琼脂糖浓度;③电泳电场;④温度;⑤缓冲液;⑥嵌入染料的存在与否;
6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么?(实验书P31)
答:注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂,它们各有什么作用?
答:酚——是蛋白质变性,抑制DNA酶的降解作用;氯仿——除去脂类,同时加速有机相与水相的分层;异戊醇——降低表面张力,从而减少气泡的产生。
8.提取DNA实验中,通常可选用哪些试剂沉淀DNA?
答:冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1~0.25mol/L 的NaCl
9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用(SDS,EDTA,酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇,70%乙醇)。
答:SDS——破坏细胞膜,解聚核蛋白;EDTA——整合金属离子,抑制DNase活性;酚/氯仿/异戊醇——见第7题;无水乙醇——沉淀DNA;70%乙醇——洗涤DNA沉淀。
10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用(Mg2+,dNTP,引物,DNA,缓冲液,Taq DNA聚合酶)。
答:(1)利用半保留复制的原理,以待扩增的DNA为模板,通过一系列酶在体外引物介导下,
经高温变性,低温退火,适温延伸三个步骤合成特异DNA片段。
(2)Mg2+:TaqDNA聚合酶的活性需要;dNTP:作为底物;引物:作为延伸的出发点;DNA:模板;缓冲液:维持反应环境的pH值;TaqDNA聚合酶:催化DNA的合成。
11.PCR循环次数是否越多越好,为什么?
答:否。
因为PCR产物的积累存在平台效应。
12.降低退火温度,延长变性时间对PCR结果有什么影响?
答:前者会使非特异性产物增多;后者会导致酶的活性降低。
13.如果检测的PCR结果中出现很多非特异性条带,可能有哪些原因导致?
答:①引物特异性不强;②Mg2+浓度过高;③引物二聚体形成;④退火温度过低;⑤循环次数过多。
14.简述DNA片段回收纯化的原理。
(?)
答:各DNA片段的大小不同,则经琼脂糖凝胶电泳后得到了分离,从而收集含有DNA的凝胶部位,通过溶解凝胶、使DNA与硅胶柱结合、再通过洗涤杂质、最后DNA洗脱,通过新的EP管收集等,最终得到纯化的目的。
15.为什么DNA体外连接反应反应要设在16℃?
答:因为此温度下能最大限度的发挥连接酶的活性,同时有助于维持短暂配对结构的稳定。
16.简述TA克隆试剂盒进行体外连接的原理。
(实验书P149)
答:经DNA聚合酶得到的PCR产物——双链DNA片段的末端具有一个突出“A”碱基,而T载体每条链的3’端带有一个突出“T”碱基,则其两端可以与PCR产物的两端进行正确的T--A配对,再在连接酶的催化下,即可将目的片段连接到载体上,形成重组载体。
17.简述氯化钙制备感受态细胞的原理。
(实验书P153)
答:将受体细胞置于低温预处理的低渗CaCl2溶液中,则可是细胞的通透性增大,这样的细胞在转化的时候,极易与外源DNA相黏附并在细胞表面形成复合物,然后经42℃短暂热击,外源DNA则可进入细胞内。
18.重组质粒的转化方法有哪些?
答:CaCl2法,电击法,农杆菌转染法;花粉管通道法,基因枪法等。
19.当质粒加入宿主细胞进行转化,再涂布在含有Amp的LB培养基平板前,为什么要在LB 培养基上培养1h?
答:使感受态细胞复苏,同时让重组质粒在感受态细胞中适应并复制,以便于表达产物,使受体细胞具抗性能力。
20.什么情况下转化平板上会出现卫星菌落,为什么会出现卫星菌落?
答:涂布后的培养基培养时间过长。
因为载体上的抗性基因的表达产物由于培养时间过长而得到积累,使加入的抗生素失效,从而让不含质粒的空菌落的一大量生长,故出现卫星菌落。
21.碱裂解细胞抽提质粒的基本原理是什么?
答:当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解后,DNA和蛋白都发生变性。
当加入中和液后,由于构象上的区别,质粒DNA能较快的复性呈溶解状态,离心时留在上清液中,而染色体DNA不能较好的复性,从而形成缠绕的网状结构并与蛋白凝聚,因离心沉淀。
22.电泳检测提取的质粒是会看到三条带,这三条带分别代表了什么?
答:碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA,得到的三条带是以电泳速度的快慢排序的,分别是超螺旋、开环和复制中间体(即没有复制完全的两个质粒连在了一起)。
如果你不小心在溶液II加入后过度振荡,会有第四条带,这条带泳动得较慢,远离这三条带,是20-100kb 的大肠杆菌基因组DNA的片断。
23.质粒抽提中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用是什么?
答:溶液Ⅰ——使沉淀重新悬浮;溶液Ⅱ——让染色体DNA和质粒DNA变性;溶液Ⅲ——中和碱,使质粒DNA复性。
24.什么是限制性内切酶的星号活性?
答:在某些条件下,一种特异性识别序列的限制酶在酶切同一种DNA片段时会产生新的酶切位点而得到不同的酶解片段的酶活性。
25.细菌产生的限制性内切酶,为什么不对自己的DNA进行切割?
答:因为细菌能通过甲基化酶的甲基化作用保护自身的DNA不被相应的限制酶降解。
26.影响限制性内切酶的因素有哪些?使用工具酶时应注意什么?
答:(1)DNA样品中的污染物,如有机溶剂等;缓冲体系;温度;样品量。
(2)①酶量使用少,确认样品是否加入反应体系;②吸取各试剂时使用不同枪头,避免交叉污染;③控制反应体系中甘油量在10%以下,以防止星号活性;④保证取酶的操作在冰浴条件下进行。
操作考试:
1.制胶
2.点样电泳
3.依照给定的PCR参数,在PCR仪上设置程序。
4.切胶
5.超净工作台接种(切记:最后封膜)。