斐林试剂热滴定定糖法
实验八糖类的定量测定1
1
实验目的
1、了解3，5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原 理。 2、掌握还原糖及总糖测定的操作方法。
糖类包括多糖、寡糖、单糖。还原糖是指含有 自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单 糖和某些双糖（如乳糖和麦芽糖）。多糖和蔗 糖等为非还原性糖。 糖类的测定方法有物理方法和化学方法两类。 物理法是通过糖的折光率、比旋度的变化、比 重计进行测定。化学测定法主要是利用自由醛 基或酮基的还原性质，与试剂（氧化剂）进行 氧化还原反应作为测定基础。由于化学方法比 较精确，常常用于还原糖和总糖的测定。
（3）砷钼酸比色法（Somogyi铜试剂比色法） 还原糖将铜试剂还原生成氧化亚铜，在浓硫酸存在 下，砷钼酸试剂可与氧化亚铜生成蓝色复合物，蓝色 产物砷钼酸在560nm下的吸光度与还原糖含量呈正比关 系，适用于测定测定范围为25-200ug的还原糖含量。 （4）蒽酮比色法 糖类遇浓硫酸脱水生成糠醛或其衍生物，该衍生物 与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有 最大吸收。该法灵敏度高、简便快速，适用于测定动 物组织中糖原、葡萄糖的含量，也可用于测定植物材 料中可溶性糖的含量。 （5）3，5一二硝基水杨酸比色定糖法 该法是半微量定糖法，操作简便、快速，杂质干扰较 少，是糖定量测定的一种基本方法。
二、标准葡萄糖浓度梯度和样品待测液的测定
取10根25 ml比色刻度管，从0-9编号后，按下表顺序操作
空 白 管号 1mg/ml葡萄糖标 准液 样品待测液（ml） 蒸馏水（ml） DNS试剂 2.0 2.0 1.8 2.0 1.6 2.0 1.4 2.0 1.2 2.0 1.0 2.0 0 0 还原糖 （A） 5 1.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 1.0 1.0 2.0 6 7 总糖 （B2） 8 9
总糖和还原糖的测定——斐林氏法
总糖和还原糖测定方法较多，如3，5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。
这里只介绍斐林氏法。
一、目的学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。
二、原理还原糖在碱性溶液中能将Ag+，Hg+，Cu2+，Fe（CN）3-等金属离子还原，而糖本身则氧化成各种羟酸，利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。
本实验采用斐林试剂热滴定法，氧化剂是斐林试剂，它是由甲乙两种溶液组成，甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝；乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾（黄血盐）。
当甲乙两液混合时，硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀，由于溶液中存在酒石酸钾钠，它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。
酒石酸络铜（Ⅱ）钾钠盐在与还原糖共热时，二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。
此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜（Ⅰ）钾盐斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强，因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原，只有当二价铜被还原完毕后，才能使次甲基蓝（甲烯蓝）还原为无色，测定中以此作为滴定终点。
在测定时先做一对照管（不加样品），用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量，即测定对照管消耗的标准葡萄糖量（A）。
再做样品管，样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜，剩余的量再用标准葡萄糖来滴定，即样品消耗的标准葡萄糖量（B）。
将（A）减去（B）就可求得样品中还原糖量。
三、器材及试剂：1．器材：①山芋粉②广范试纸pH1～12。
③吸管5毫升（×4），10毫升（×2）④容量瓶100毫升（×3）⑤烧杯150毫升（×1），100毫升（×1）⑥三角烧瓶250毫升（×6）⑦滴定管25毫升（×1）⑧双孔橡皮塞⑨电炉300W（×1）⑩天平。
斐林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法xx 生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
【实验原理】1. 还原糖还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 CuO的沉淀。
托伦斯试剂被还2原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。
分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
2. 费林试剂费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
3. 实验方法本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。
【实验仪器】1. 移液管(5、10 毫升)2. 100 毫升容量瓶3. 水浴锅4. 铁架台5. 胶头滴管【实验材料】1.面粉2. 酚酞试剂3. 菲林试剂（甲、乙液）4. 10%氢氧化钠5. 标准葡萄糖（1mg/ml）6. 6M HCl7. 烧杯8. 玻璃棒9. 碱式滴定管10. 电炉11. 分析天平【实验操作】1. 总糖的提取准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。
总糖含量的测定方法
总糖含量的测定方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊总糖含量的测定方法。
这可真是个有趣又重要的事儿呢！你想想看，糖在我们生活中那可是无处不在呀！从甜甜的糖果到美味的糕点，从可口的饮料到日常的食物，哪哪儿都有糖的影子。
那怎么知道这里面到底有多少糖呢？这就需要我们掌握测定总糖含量的方法啦！常用的一种方法就是斐林试剂法。
这就好像是一个神奇的魔法，能把看不见的糖给变出来让我们看到。
先把样品处理好，然后加入斐林试剂，经过一系列反应，就能根据产生的现象来推算出糖的含量啦。
就像侦探在破案一样，通过一点点线索找到真相！还有一种方法是蒽酮比色法呢！这个方法也很有意思，就好像是给糖穿上了一件特别的“衣服”，让它在特定的条件下显现出来。
通过测量颜色的变化，就能知道糖有多少啦。
另外啊，还有一些其他的方法呢，就像武林中有各种不同的武功秘籍一样，各有各的厉害之处。
测定总糖含量可不仅仅是为了好玩哦，它的用处大着呢！比如在食品行业，厂家得知道自己生产的东西里糖有多少，这样才能保证产品的质量和口感呀。
不然，太甜了或者不够甜，那可不行！在科研领域，研究人员也需要准确测定总糖含量来进行各种研究，这就像是给他们的研究搭起了一座坚实的桥梁。
那有人可能会问了，测这个难不难呀？其实呀，只要掌握了方法，也没那么难啦！就像学骑自行车一样，一开始可能会摇摇晃晃，但多练习几次就熟练啦。
咱就说，要是不知道这些测定方法，那不是像在黑暗中摸索吗？所以呀，了解总糖含量的测定方法真的很重要呢！这能让我们更清楚地了解我们吃的东西，也能在很多方面帮助我们做出更好的选择。
总之，总糖含量的测定方法是个很实用的知识，大家可得好好记住哦！学会了它，就像是掌握了一把打开甜蜜世界大门的钥匙，能让我们更深入地了解糖这个奇妙的东西呢！怎么样，是不是很有意思呀？赶紧去试试吧！。
斐林试剂知识点总结
斐林试剂知识点总结一、斐林试剂的原理斐林试剂包含的化学成分为磷钼酸铵和磷钼酸六水合物，其工作原理是基于这两种物质和还原性实验物质发生反应。
当斐林试剂与蛋白质、葡萄糖等还原性物质发生反应时，会产生一种蓝色物质，其吸光度与被测物质的浓度成正比。
这种蓝色物质的形成是由于还原性物质在碱性条件下与磷钼酸铵和磷钼酸六水合物发生反应，生成了一种可溶的蓝色化合物。
斐林试剂作为一种常用的生化分析试剂，其工作原理是基于还原性物质和酸性条件下进行的化学反应。
因此，在使用斐林试剂进行实验时，需要注意保持酸性条件和避免有色干扰物质的干扰。
此外，还需要根据被测物质的性质选择合适的实验条件和操作方法。
二、斐林试剂的应用由于斐林试剂具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点，因此被广泛应用于生化学领域的蛋白质、葡萄糖、总胆固醇等物质的测定。
下面将对其应用进行详细介绍。
1. 蛋白质测定斐林试剂可以用于测定蛋白质的含量，其原理是基于蛋白质与碱性条件下发生的化学反应。
当蛋白质溶液与斐林试剂发生反应后，会生成一种蓝色物质，其吸光度与蛋白质的浓度成正比。
这种方法具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此被广泛应用于测定蛋白质的含量。
2. 葡萄糖测定斐林试剂也可以用于测定葡萄糖的含量，其原理是基于葡萄糖在酸性条件下与斐林试剂发生的化学反应。
当葡萄糖溶液与斐林试剂发生反应后，会生成一种蓝色物质，其吸光度与葡萄糖的浓度成正比。
这种方法同样具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此被广泛应用于测定葡萄糖的含量。
3. 总胆固醇测定斐林试剂还可以用于测定总胆固醇的含量，其原理是基于总胆固醇在酸性条件下与斐林试剂发生的化学反应。
当总胆固醇溶液与斐林试剂发生反应后，会生成一种蓝色物质，其吸光度与总胆固醇的浓度成正比。
这种方法同样具有灵敏度高、稳定性好等优点，因此被广泛应用于测定总胆固醇的含量。
以上介绍了斐林试剂在生化分析中的应用，其原理和操作方法。
斐林试剂具有灵敏度高、稳定性好、操作简便等优点，因此被广泛应用于蛋白质、葡萄糖、总胆固醇等物质的测定。
总糖含量的测定方法
总糖含量的测定方法嘿，朋友们！今天咱们就像探险家一样，去探寻一下总糖含量的测定方法，这可就像是在糖果王国里寻找宝藏的秘密地图哦。
首先呢，有一个超级经典的方法，就是斐林试剂法。
这斐林试剂啊，就像是一个超级侦探，专门去揪出那些藏起来的糖分子。
把斐林试剂和含有糖的溶液混合在一起，就像是一场盛大的舞会开始了。
溶液里的糖分子就像一个个穿着华丽舞裙的舞者，迫不及待地要和斐林试剂中的铜离子共舞呢。
然后通过加热，这个舞会就进入了高潮，糖分子和铜离子在热热闹闹的氛围中发生反应，最后生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
这沉淀就像是舞会后留下来的精美纪念品，我们根据这个沉淀的量就能大致算出总糖的含量啦，是不是很神奇呢？就好像通过舞会后的垃圾量能算出来了多少宾客一样夸张。
还有一个方法是蒽酮比色法。
蒽酮就像是一个有着神奇魔法的小巫师，它能把糖变成有色的物质。
当把蒽酮试剂加入到含糖溶液里，就像是小巫师挥动魔法棒一样，溶液瞬间就发生了变化。
糖分子就像是被施了魔法的小木偶，乖乖地变成了一种有着特殊颜色的化合物。
然后我们把这个有色溶液放到比色计里，就像是把小木偶放在舞台上展示一样。
比色计通过检测颜色的深浅，就能知道糖的含量了，这感觉就像是看木偶戏的观众通过木偶的大小来判断它的年龄一样有趣。
另外，DNS法也很有趣哦。
DNS试剂就像是一个超级贪婪的大胃王，它遇到糖分子就“吃”个不停。
糖分子和DNS试剂发生反应后会变色，这就好比大胃王吃了不同的食物后脸上会沾上不同颜色的酱料一样滑稽。
我们再根据颜色的变化来确定总糖的含量，就像是通过大胃王脸上酱料的颜色来判断他吃了多少食物呢。
在这些测定方法里，每一个步骤都要小心翼翼的，就像走钢丝一样。
要是哪个环节出了差错，那就像是在演奏交响乐的时候突然弹错了一个音符，整个结果就会变得乱七八糟。
比如说加热的温度不对，就像是把烤箱的温度调错了，烤出来的蛋糕要么没熟要么焦了，测出来的总糖含量也就不准了。
总糖含量的测定虽然听起来有点复杂，但是当我们把它想象成一场有趣的游戏或者一个奇妙的故事，就会觉得充满乐趣啦。
葡萄酒酿制过程中糖酸和酒精度的检测
葡萄酒酿制过程中还原糖、总酸及酒精度的测定方法一、还原糖的测定在葡萄酒发酵前，测定葡萄的还原糖含量，以确定要添加的糖含量；发酵之后测定酒中的残糖含量。
1、测定方法：裴林试剂热滴定法（1）裴林氏A 、B 液标定预备试验：取裴林氏A 、B 液各5.00mL 于250mL 三角瓶中，加50mL 水，摇匀，在电炉上加热沸，在沸腾状态下用制备好的葡萄糖标准溶液滴定，当溶液的蓝色将消失呈红色时，加2滴甲基蓝指示液，继续滴至蓝色消失，记录消耗的葡萄糖标准溶液的体积(V1ml)。
正式试验：取裴林氏A 、B 液各5.00mL 于250mL 三角瓶中，加50mL 水和比预备试验少1ml 葡萄糖标准溶液，加热至沸，并保持2min ，加2滴次甲基蓝指示液，在沸腾态下于1min 内用葡萄糖标准溶液滴至终点(消耗葡萄糖标准液，记录消耗的葡萄糖标准溶液的总体积。
（2）样品的测定预备试验：裴林试剂A 、B 液各5ml 250ml 三角瓶中 加水50ml 加入7.5ml 试样 在沸腾状态下用5g/l 的葡萄糖标液滴定至 蓝色消失成红色时 加2滴亚甲基兰指示剂 继续滴定至蓝色消失，记录体积。
正式试验：裴林试剂A 、B 液各5ml 250ml 三角瓶中 加水50ml 加入7.5ml 试样＋比预备试验少1ml 的葡标液，在沸腾状态下用5g/l 的葡萄糖标液滴定至 蓝色消失成红色时 加2滴亚甲基兰指示剂 继续滴定至蓝色消失，记录体积。
结果计算：总糖或还原糖含量g/l ＝稀释倍数）（取样体积测定试样消耗的葡标液标定消耗的葡标液葡标液⨯-⨯V V V C 2、试剂的配制及仪器需求（1）斐林试剂配制方法将36.4g CuSO4.5H2O 溶于200mL 水中，用0.5mL 浓硫酸酸化，再用水稀释到500mL 待用；取173g 酒石酸钾钠KNaC4H4O6.4H2O ，71g NaOH 固体溶于400mL 水中，再稀释到500mL ．使用时取等体积两溶液混合。
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
斐林试剂热滴定定糖法
费林试剂热滴定定糖法xx 生科四班201100140120 同组者：xx【实验目的】1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
【实验原理】1. 还原糖还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 CuO的沉淀。
托伦斯试剂被还2原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。
分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
2. 费林试剂费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
3. 实验方法本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。
【实验仪器】1. 移液管(5、10 毫升)2. 100 毫升容量瓶3. 水浴锅4. 铁架台5. 胶头滴管【实验材料】1.面粉2. 酚酞试剂3. 菲林试剂（甲、乙液）4. 10%氢氧化钠5. 标准葡萄糖（1mg/ml）6. 6M HCl7. 烧杯8. 玻璃棒9. 碱式滴定管10. 电炉11. 分析天平【实验操作】1. 总糖的提取准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。
糖类测定实验报告
一、实验目的1. 掌握糖类检测的基本原理和方法。
2. 学习使用化学试剂对糖类进行定量和定性分析。
3. 了解糖类在生物体中的重要性及检测方法在生物学研究中的应用。
二、实验原理糖类是一类生物大分子，广泛存在于自然界中，是生物体的重要营养物质。
本实验采用化学试剂法对糖类进行检测，主要利用糖类与特定试剂发生颜色变化的原理。
1. 斐林试剂法：还原糖在斐林试剂的作用下，加热后生成砖红色沉淀，根据沉淀的量可以定量分析还原糖的含量。
2. 苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂法：脂肪在苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂的作用下，呈现红色或橙色，可以定性检测脂肪的存在。
3. 双缩脲试剂法：蛋白质与双缩脲试剂反应，产生紫色复合物，可以定性检测蛋白质的存在。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：待测生物组织样品、斐林试剂、苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂、双缩脲试剂、蒸馏水、移液器、试管、酒精灯、烧杯、显微镜等。
2. 实验仪器：分析天平、恒温水浴锅、显微镜、电子天平等。
四、实验步骤1. 糖类检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入2 mL斐林试剂，混合均匀。
（3）将试管放入50-65℃的恒温水浴锅中加热2分钟。
（4）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
2. 脂肪检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入3滴苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂，混合均匀。
（3）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
3. 蛋白质检测（1）取待测生物组织样品，研磨成匀浆。
（2）取2 mL匀浆于试管中，加入1 mL双缩脲试剂A液，摇匀。
（3）加入4滴双缩脲试剂B液，摇匀。
（4）观察试管中溶液的颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖类检测实验结果显示，待测生物组织样品在斐林试剂的作用下，溶液呈现砖红色沉淀，说明其中含有还原糖。
2. 脂肪检测实验结果显示，待测生物组织样品在苏丹Ⅲ/Ⅳ试剂的作用下，溶液呈现红色，说明其中含有脂肪。
3. 蛋白质检测实验结果显示，待测生物组织样品在双缩脲试剂的作用下，溶液呈现紫色，说明其中含有蛋白质。
实验一总糖的测定
实验一总糖的测定—斐林试剂比色法摘要斐林试剂比色法是热滴定的一个改进前言：斐林试剂是由甲、乙二种溶液混合而成，甲溶液含有硫酸铜，乙液含有氢氧化钠和酒石酸钾钠。
硫酸铜与氢氧化钠作用生成天蓝色的氢氧化铜沉淀（CuSO4 + 2NaOH→Cu(OH)2+Na2SO4）而酒石钾钠在碱性溶液中使氢氧化铜溶解生成复杂的化合物（一种络合物）。
其反应如下：CuSO4 + 2NaOH→Na2SO4 + Cu(OH)2 （天蓝色）醛基式酮基，在碱性条件下煮沸后，Cu2+→Cu2O使斐林试剂褪色从复杂的化合物具有与普通铜盐略有不同的天蓝色，但仍有铜盐所有的普通反应单糖和多糖的水解物都含有醛基或是酮基，在碱性条件下煮沸能使斐林试剂中的二价铜离子还原为一价的氧化亚铜，而使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比。
此法的优点是操作简便，斐林试剂可不作定量配制测定误差在±0.02%，但须经常作标准曲线校正。
本法的测定范围在0.1～0.5毫克/毫升还原糖，如果含糖量超过本范围，误差显著增大。
试剂和器材1、斐林试剂甲40克硫酸铜（CuSO2．5H2O）溶解于蒸馏水并定容至1升2、斐林试剂乙：200克酒石酸钾钠（C4H4O6KNa.4H2O）与150克氢氧化钠溶于蒸馏水并定容至1升。
注：在使用前取20毫升甲液，加入等体积的乙液混匀。
3、0.1%葡萄糖标准液：取105℃干燥2小时的恒重葡萄糖0.1克，加蒸馏水溶解并定容至100毫升。
4、可见分光光度计方法与步骤：标准曲线制作：在各试管中分别加入0.1%葡萄糖标准液0，0.5,1,1.5,2.0,2.5,3.0毫升，每管各含葡萄糖各为0,0.5,1.0,1.5,2.0,2.5,3.0毫克，分别在各管中各加入2毫升斐林试剂，其他按下表操作，混和后，在试管口用玻璃球盖好，放入沸水浴加热15分钟，取出后在流水中冷却，再经1500转/分离心5分钟，取上清液在590毫微米波长处进行比色测定，蒸馏水作比色时的对照，读取不同浓度的糖的各管的光密度值和空管的光密度值。
斐林氏试剂滴定法
斐林氏试剂滴定法斐林试剂(Fehling's solution)是一种可以鉴别还原性物质的试剂，一般由氢氧化钠与硫酸铜溶液配成，由德国化学家赫尔曼·冯·斐林在1849年发明的。
斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在，可与还原性糖反应生成砖红色沉淀。
定义1849年，德国化学家斐林（Hermann vonFehling，1812年-1885年）发明了斐林试剂。
它是由氢氧化钠的含量为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的含量为0.05 g/mL的溶液，还有含量为0.2g/mL酒石酸钾钠配制而成的，其本质是铜离子和酒石酸形成的配合物——酒石酸合铜（高中认为是新制的氢氧化铜）。
斐林试剂是二价铜离子的酒石酸钾钠配合物，可以被脂肪醛或还原性糖还原为氧化亚铜。
斐林试剂为深蓝色溶液，在与脂肪醛或还原性糖共热时，蓝色消失，析出红色的氧化亚铜沉淀。
在氧化亚铜析出过程中，反应液的颜色可能经过由蓝色→绿色→黄色→红色沉淀的逐渐变化，反应较快时，直接观察到红色沉淀。
它与可溶性的还原性糖（葡萄糖、果糖和麦芽糖）在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
[2]配制方法配制方法：0.1 g/mL NaOH（甲液）和0.05 g/mL CuSO4（乙液）。
甲液配制方法是将50g氢氧化钠和137g酒石酸钾钠溶于500 mL蒸馏水中（贮于带橡皮塞的瓶中）。
乙液配制方法是将34.5g结晶硫酸铜溶于500mL水中，加0.5 mL硫酸。
混合均匀。
斐林试剂的使用方法：一般将斐林试剂甲液和乙液等体积混合（或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液），再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热（高中人教版生物必修一中为60℃水浴加热）。
如待测液中存在还原糖，则呈现砖红色沉淀；如待测液中不存在还原糖，则仍然呈蓝色。
还原糖实验1、向试管内注入2mL待测组织样液。
2、向试管内注入1mL斐林试剂（甲乙液混合均匀，甲液量较多，乙液只需少量。
高考生物常用的试剂知识汇总
高考生物常用的试剂知识汇总高考生物常用的试剂1、斐林试剂：成分：0.1g/mlnaoh(*液)和0.05g/mlcuso4(乙液)。
用法：将斐林试剂*液和乙液等体积混合，再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热，如待测液中存在还原糖，则呈砖红*。
2、班氏糖定*试剂：为蓝*溶液。
和葡萄糖混合后沸水浴会出现砖红*沉淀。
用于尿糖的测定。
3、双缩脲试剂：成分：0.1g/mlnaoh(*液)和0.01g/mlcuso4(乙液)。
用法：向待测液中先加入2ml*液，摇匀，再向其中加入3-4滴乙液，摇匀。
如待测中存在蛋白质，则呈现紫*。
4、苏丹Ⅲ：用法：取苏丹Ⅲ颗粒溶于95%的酒精中，摇匀。
用于检测脂肪。
可将脂肪染成橘黄*(被苏丹Ⅳ染成红*)。
5、二苯*：用于鉴定dna.dna遇二苯*(沸水浴)会被染成蓝*。
6、*基绿：用于鉴定dna.dna遇*基绿(常温)会被染成蓝绿*。
7、50%的酒精溶液：在脂肪鉴定中，用苏丹Ⅲ染液染*，再用50%的酒精溶液洗去浮*。
8、75%的酒精溶液：用于杀菌消毒，75%的酒精能渗入细胞内，使蛋白质凝固变*。
低于这个浓度，酒精的渗透脱水作用减弱，杀菌力不强;而高于这个浓度，则会使细菌表面蛋白质迅速脱水，凝固成膜，妨碍酒精透入，削弱杀菌能力。
75%的酒精溶液常用于手术前、打针、换*、针灸前皮肤脱*消毒以及机械消毒等。
9、95%的酒精溶液：冷却的体积分数为95%的酒精可用于凝集dna.10、15%的盐*：和95%的酒精溶液等体积混合可用于解离根尖。
11、龙胆紫溶液：(浓度为0.01g/ml或0.02g/ml)用于染*体着*，可将染*体染成紫*，通常染*3-5分钟。
(也可以用醋*洋红染*)12、20%的肝脏、3%的过氧化*、3.5%的*化铁：用于比较过氧化*酶和fe3+的催化效率。
(新鲜的肝脏中含有过氧化*酶)13、3%的可溶*淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液：用于探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用实验。
还原糖检测方法
糖液质量的检测方法1、糖浆OD值的检测方法：1ml糖浆样品（DS%≈30%）＋9ml无水乙醇，迅速混匀后，在650nm下测其OD值。
2、斐林滴定法测DE值淀粉酶将淀粉水解成短链的糊精及少量的葡萄糖。
斐林试剂由甲乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。
平时甲、乙液分别储存，测定时才等体积混合，混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀。
NaOH + CuSO4→Cu（OH）2+NaSO4生成的氢氧化铜和酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠与铜的络合物，使氢氧化铜溶解。
COOK（CHOH）2COONa + Cu（OH）2→COOK（CHO ）2 Cu COONa +2H2O 酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜就是一个氧化剂，能使还原糖氧化，而二价铜被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：2 Cu（OH）2→COOK（CHO）2Cu COONa + CHO（CHOH）4CH2OH +2 H2O→2 COOK（CHOH）2COONa + COOH（CHOH）4CH2OH + Cu2O剩余的二价铜在酸性调价下与碘化钾反应，生成碘，用硫代硫酸钠滴定，I2被还原成I-，随着其缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变成黄色，当呈现淡黄色时，2%的淀粉指示剂，缓慢滴加硫代硫酸钠直至溶液中的蓝色消失，为浅粉色，即为滴定终点。
通过这个反应，能够测量存在于淀粉水解物中的还原糖含量。
用纯水代替样品与斐林试剂反应，所消耗硫代硫酸钠的体积为空白值。
定义：葡萄糖当量浓度（DE）代表淀粉水解的程度，是以葡萄糖计算的还原糖含量占干物质的百分率，其数值的大小与淀粉水解的程度成正比。
化学试剂：Na2CO3C 4H4O6KNa，4H2OCuSO4NaOH葡萄糖（Dextrose）；HPLC级KII2H2SO4Na2S2O35H2O蒸馏水试剂：试剂配置方法有效期斐林试剂：甲液69.3g CuSO45H2O溶解在大约600ml蒸馏水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度线6个月斐林试剂：乙液346g C4H4O6KNa4H2O和100g NaOH溶解在大约800ml蒸馏水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度线。
生物化学实验预习及实验报告范例 还原糖和总糖的测定
实验还原糖和总糖的测定实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法一、实验目的和要求1．初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2．正确掌握滴定管的使用方法和热滴定终点的判断方法。
二、实验原理思考(一)基本原理还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的单糖和某些二糖(如乳糖、麦芽糖)。
在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。
该特性常用于还原糖的定性和定量测定。
(二)本实验反应原理1、Fehling试剂（又称作酒石酸铜溶液）介绍：A液：由硫酸铜和次甲基蓝组成1、硫酸铜的作1、Cu2+用于将来被还原成Cu+是什么？2、次甲基蓝的作用是什么？2、氧化还原指示剂B液：由氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾组成3、氢氧化钠3、一、生成Cu(OH)2↓，二、创造碱性反应环境作用是什么？4、酒石酸钾钠的作用是什么？4、用以生成可溶性络合物酒石酸钠铜5、亚5、生成可溶性复盐，铁氰化钾的作用是什么？以便于观察滴定终点用前将A 、B 两液等体积混合时，依次反应：(1) 2NaOH + CuSO 4 = Cu(OH)2↓ （天蓝色）+ Na 2SO 4 (2) 在碱性溶液中：酒石酸钠铜为可溶性络合物。
2、酒石酸铜与还原糖热滴定时的反应： 红色氧化亚铜沉淀生成：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒Cu(OH)2 +COOK C O H COONaCOHCOOKC OH H COONaCOHHCu + 2H 2O石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解反应生成的氧化亚铜沉淀与斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐：6、为什么要生成可溶性复盐？6、便于观察滴定终点亚甲基蓝为氧化-还原指示剂指示滴定终点 7、为什么亚7、因为亚甲基蓝氧化能力比Cu 2+弱，因此Cu 2+会先COOK C O H COONaCOHCu 6H 2O3Cu 2O ↓H 2CO 3CHO(CHOH)4CH 2OH++COOK C OH H COONaCOHH+(CHOH)4CH 2OHCOOH++CuO 2 + K 4Fe(CN)6 + H 22 Cu 2Fe(CN)6 + 2KOH甲基蓝可为滴定终点指示剂？被还原。
糖分的测定标准
糖分的测定标准一、斐林试剂法斐林试剂法是一种常用的糖分测定方法，其原理是根据糖在加热条件下与斐林试剂发生氧化还原反应，产生砖红色沉淀来指示糖的存在和含量。
该方法具有操作简便、灵敏度高、选择性好等优点，适用于各种糖类的测定。
具体步骤如下：1.试剂准备：准备好斐林试剂，包括甲液（硫酸铜溶液）和乙液（碱性酒石酸铜溶液）。
2.样品处理：将待测样品研磨成粉末状，并加入一定量的蒸馏水，制成样品溶液。
3.加热：将样品溶液放入沸水浴中加热一定时间，使糖与斐林试剂充分反应。
4.沉淀：取出样品溶液，加入一定量的氢氧化钠溶液，使溶液中的铜离子生成氢氧化铜沉淀。
5.比色：将沉淀后的溶液倒入比色管中，与标准糖溶液进行比色，根据颜色深浅计算样品中糖的含量。
二、快速法快速法是一种简便、快速的糖分测定方法，适用于快速测定甜菜糖、蔗糖等可溶性糖的含量。
该方法使用酶法水解样品，然后通过滴定法测定水解产物中葡萄糖的含量。
具体步骤如下：1.试剂准备：准备好所需的试剂和器具，包括酶溶液、酸溶液、葡萄糖标准溶液等。
2.样品处理：将待测样品研磨成粉末状，加入一定量的蒸馏水，制成样品溶液。
3.水解：将样品溶液加入酶溶液中，在适宜的温度下保温一定时间，使样品中的糖类物质充分水解成葡萄糖。
4.滴定：取出一定量的水解产物，用酸溶液中和后，用葡萄糖标准溶液滴定，根据滴定量计算样品中糖的含量。
三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种高效、高分辨率的分离技术，可用于糖分的定性和定量分析。
该方法利用不同糖分子在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现糖类的分离。
具体步骤如下：1.样品处理：将待测样品制成溶液，经过滤膜过滤后注入高效液相色谱仪。
2.分离：在色谱柱中，不同糖分子根据其分配系数在不同时间流出色谱柱。
3.检测：用紫外检测器或其他适宜的检测器检测流出液中的糖类物质。
4.定性定量：根据色谱图上出现的峰及峰面积确定样品中各糖类的含量。
斐林试剂法测定还原糖的误差分析
斐林试剂法测定还原糖的误差分析史建国杨俊慧马耀宏张利群（山东省科学院中日友好生物技术研究中心济南 250014）摘要：本研究根据斐林试剂测定还原糖的基本原理，采用自动控制系统调整反应条件，定量分析了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响。
关键词：还原糖斐林试剂自动滴定仪还原糖是谷氨酸发酵生产中重要的生化控制指标，如何快速而准确地测定还原糖是各生产厂家普遍关心的问题。
目前，我国谷氨酸生产企业主要采用斐林试剂测定法。
由于该法在实际测定过程中易受很多因素的干扰，严重影响测定的准确性［１］。
而不同的操作人员控制反应条件的技术不同，测定误差较大，给生产过程控制和产品质量检验带来很多麻烦，严重影响了生产技术水平的提高。
本文主要研究了加热温度、加热时间、测定速度、搅拌力度对测定结果的影响，确定了误差来源。
为正确掌握斐林试剂滴定法，提高测定的准确度，提供了新的依据。
１试剂与仪器1.1 试剂配制1.1.1斐林甲液：称取35g硫酸铜（CuSO4·5H2O），取1%次甲基蓝溶液5mL，用水共容后定容至1000mL。
1.1.2斐林乙液：称取117g酒石酸钾钠，126.4g氢氧化钠，9.4g亚铁氰化钾，用水共容后定容至1000mL。
1.1.31０％标准葡萄糖溶液：精确称取100g分析纯葡萄糖（105℃干燥2h，恒重），加水溶解，并加10 mL分析纯盐酸，定容至1000mL。
1.1.4 1.0%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液100mL，加水稀释定容至1000mL。
1.1.5 0.1%标准葡萄糖溶液：吸取上述10%标准葡萄溶液10mL，加水稀释定容至1000mL。
1.2仪器设备全自动测定仪（山东省科学院中日友好生物技术研究中心研制生产）：按实验要求分别调整加热温度、加热时间、滴定速度、搅拌力度。
2测定方法2.1开机：按动开/关键、仪器自动清洗一次，开机完成。
2.2定标：按定标键。
用微量进样器注入1.0%的标准葡萄糖液100uL，用0.1%的葡萄糖标准液进行滴定。
斐林试剂配制,标定以及还原糖测定
斐林试剂配制，标定以及还原糖测定糊精溶液中还原糖含量测定(DE值测定)A斐林试剂(碱性酒石酸铜溶液)的制备1)斐林试剂甲液称取69.28g的硫酸铜(CSO.5HO)溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过U42滤2)斐林实际乙液分别称取酒石酸钾钠346g和氢氧化钠100g，溶于水中并稀释至1000ml，静置48h，用滤纸过滤B斐林试剂标定精确称取已在105?下干燥至恒重的分析纯葡萄糖0.8g，用蒸馏水稀释，移入250ml容量瓶并稀释至刻度，摇匀。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中(预备数份)，于电炉上煮沸，用上述葡萄糖溶液(置于25ml滴定管中)滴定至蓝色消失时，加入1%的亚甲基蓝指示剂两滴，继续用糖液滴定至蓝色刚好消失。
此操作在1min内完成。
再重复操作第二次标定过程，取两次葡萄糖溶液消耗体积的平均值(允许误差不大于0.1ml)，按下式计算斐林试剂常数(10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量)。
R=WG/V式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，mlG——葡萄糖的质量，gV——葡萄糖定容体积，250mlC测定步骤称取糊精溶液(液化)15g，移入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。
用移液管分别吸取斐林试剂甲，乙液各5ml和蒸馏水20ml于150ml锥形瓶中。
其余步骤同斐林试剂标定法，即以样品稀释液代替葡萄糖溶液滴定斐林试剂。
计算还原糖含量按下式计算还原糖(%)=100RV/WG式中R——10ml斐林试剂相当于葡萄糖的质量，g;W——葡萄糖溶液消耗的体积，ml;G——样品质量，g;V——葡萄糖定容体积，250ml。
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费林试剂热滴定定糖法
xx 生科四班201100140120 同组者：xx
【实验目的】
1. 初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。
2. 正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。
【实验原理】
1. 还原糖
还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。
大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。
斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu
O的沉淀。
托伦斯试剂被还
2
原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。
分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。
一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。
还原后，自己会变成糖酸。
如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。
2. 费林试剂
费林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。
它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
3. 实验方法
本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用
形成可溶性的络合物。
【实验仪器】
1. 移液管(5、10 毫升)
2. 100 毫升容量瓶
3. 水浴锅
4. 铁架台
5. 胶头滴管
【实验材料】
1.面粉
2. 酚酞试剂
3. 菲林试剂（甲、乙液）
4. 10%氢氧化钠
5. 标准葡萄糖（1mg/ml）
6. 6M HCl
7. 烧杯
8. 玻璃棒
9. 碱式滴定管
10. 电炉
11. 分析天平
【实验操作】
1. 总糖的提取
准确称取面粉 1 克，加入 6mol/L 盐酸 10 毫升，蒸馏水 15 毫升，混匀。
沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。
冷却后用 10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容至100 毫升。
准确吸取该溶液 10ml，移入 100ml容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。
2. 空白测定
准确吸取费林甲、乙液各 5ml 和蒸馏水 5ml 放入 100 毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入6ml 的标准葡萄糖液，混匀后加热，沸腾后，记录下滴定管的起始刻度，每滴 1-2 秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s 内颜色又变成深红色为止。
记录滴定完后滴定管的刻度，并同时记录滴定所需时间。
平行测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。
3. 总糖的测定
准确吸取样品液 5ml 放于 100ml 锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各 5ml，为使测定的时间与空白测定的时间基本一致，向锥形瓶内加入 3ml 的标准葡萄糖液，然后按测定空白同样操作进行滴定（控制流速，使滴定时间与空白滴定的时间基本一致），记下耗用标准葡萄糖的毫升数。
平行测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。
2、3 步中所加试剂如下表：
空白滴定样品滴定
次数 1 2 3 平
均1 2 3 平
均
费林甲/ml 5 5 5 / 5 5 5 /
费林乙/ml 5 5 5 / 5 5 5 /
蒸馏水/ml 5 5 5 / / / / /
样液/ml / / / / 5 5 5 /
预加葡萄
糖/ml
8 8 8 / 4 4 4 /
消耗葡萄
糖/ml
1.75 1.50 1.45 1.57 1.25 1.30 1.15 1.23
【计算】
样品m=1.0025g V1=9.57
V2=5.23
还原糖(或总糖)%=
5
×
)
克
(
称取的
×)
毫升
/
克
(
标准葡萄糖液浓度
×
V2)
-
(V1
样品量
稀释倍数
=86.58%
【分析讨论】
1. 原理分析
本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂由甲、乙两种溶液组成。
甲液
含硫酸铜和次甲基
蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
当甲、乙两溶液混合时，
硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。
在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧
化铜作用形成可溶性的络合物。
热滴定中滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在 30s 内颜色
又变成深红色为止，记录下数据处理即可得面粉中的糖含量。
2. 步骤分析
1) 为使空白测定与样品测定的时间一致，在样品滴定之前应提前加入一定
量的葡萄糖；
2) 在滴定过程中，应注意在颜色由蓝色变为紫色时，应减慢滴速，当颜色
变为土黄色时，立
即停止加入葡萄糖，颜色会再度变回紫色时，不应再滴加葡萄糖；
3) 在水解面粉时应确保面粉完全水解，即加入碘液后不再出现特殊的蓝色，
此外，水解液应
中和为中性。
3. 误差分析
本实验至少有以下几种原因可能导致实验误差的出现：
1) 实验过程中容量瓶定容后，没有摇匀，导致局部浓度过高；
2) 全部滴定过程并没有完全在沸腾状态下快速进行，导致不断的还原、氧
化，而使滴定终点
延后。
3) 各组滴定的时间不一致，空气中的 O
2
对实验结果造成了影响；
4) 对滴定终点的把握不够精确，导致超过滴定终点，使得实验数据产生较
大偏差；
5) 面粉未完全水解成为葡糖，水解后的葡糖溶液不为中性，也会给实验结
果带来一定的实验
误差。
【注意事项】
1. 菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒
石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀；
2. 总糖的提取步骤中，面粉应在液体加入三角瓶之后再加入，因为这样可以使面粉更容易溶解，沸水浴 30min 后检查是否水解完全，若未则应继续加热；
3. 用酚酞作指示剂时用 10%氢氧化钠调 PH 至 7，应先计算大概需加入氢氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，因为此处突变很大，避免加入氢氧化钠过量后再用盐酸调 PH，因为这会使得葡萄糖溶液变得粘稠；
4. 空白滴定中一定以每滴 1-2 秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s 内颜色又变成深红色为止；
5. 平行三次后所得的平均数与各组的差值＜0.05ml。
6.称量面粉后及时记录数据，以免过后遗忘或记错。