northern印迹杂交
Southern&northern&western杂交原理
Southern杂交Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。
一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。
由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。
Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。
该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。
Northern 印记杂交Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot 的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。
原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。
Western杂交原理：是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。
其原理是：生物中含有一定量的目的蛋白。
先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。
Northern印迹杂交技术
5.酶联免疫染色 5.酶联免疫染色
• 室温，用缓冲液Ⅰ洗膜 1-5 min，缓冲液 室温，用缓冲液Ⅰ min， min，再用缓冲液Ⅰ Ⅱ洗膜 30 min，再用缓冲液Ⅰ洗膜 1-5 min。 min。 • 用缓冲液Ⅰ稀释抗体缓冲液（1：2000）， 用缓冲液Ⅰ稀释抗体缓冲液（ 2000）， 稀释后的抗体溶液在4℃只能稳定12 h。 4℃只能稳定 稀释后的抗体溶液在4℃只能稳定12 h。室 温下将膜在抗体稀释液中浸泡30 min。 温下将膜在抗体稀释液中浸泡30 min。 • 缓冲液Ⅱ洗膜2次，每次15 min，以除去未 缓冲液Ⅱ洗膜2 每次15 min， 结合的抗体复合物。再用20 mL缓冲液 缓冲液Ⅲ 结合的抗体复合物。再用20 mL缓冲液Ⅲ平 衡膜2 min。 衡膜2-5 min。
• Northern 杂交是用于RNA定量和定性分析的常用 杂交是用于RNA RNA定量和定性分析的常用 技术，它是将RNA RNA分子从电泳凝胶转移到硝酸纤维 技术，它是将RNA分子从电泳凝胶转移到硝酸纤维 素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上， 素滤膜或其他化学修饰的活性滤纸上，再进行核 酸分子杂交的一种实验方法。 酸分子杂交的一种实验方法。 • 可以鉴定总RNA或poly(A)+RNA样品中同源RNA的存 可以鉴定总RNA RNA或 RNA样品中同源RNA的存 样品中同源RNA 在与否、测定样品中特定mRNA分子的大小和丰度， mRNA分子的大小和丰度 在与否、测定样品中特定mRNA分子的大小和丰度， 是分子生物学中研究基因表达在转录水平上的调 节以及cDNA合成的重要手段。 节以及cDNA合成的重要手段。 cDNA合成的重要手段
浸泡在 250 ml tris*NaCI 室温、 室温、30r/min 30min。 。
Northern blot技术
Northern杂交试验指导手册－Northern 印迹杂交A．探针准备DIG标记的RNA探针与DNA探针相比，显示较强的杂交信号和较地的非特异性背景，因此，只要可能选用RNA探针可以比DNA探针获得更好的杂交结果。
如果必须使用DNA探针，建议使用高SDS杂交缓冲液或DIG Easy Hyb以减少背景。
在正式杂交试验之前，优化杂交探针浓度是避免颜色背景所必须的。
探针浓度的确定可通过模拟杂交进行。
取一小片空白膜，将其浸入不同探针浓度的溶液中（如：1μl/ ml、3μl/ ml、5μl/ ml …），可观察到背景颜色的浓度即可作为杂交探针浓度。
在采用荧光检测或采用CSPD 化学发光检测时，建议试验探针浓度50－100ng/ml，如果采用CDP-Star化学发光检测，由于灵敏度很高，在此探针浓度下会产生很高的背景，因此，要适当降低探针浓度。
B. 印迹条件对于1%的变性琼脂糖胶向尼龙膜上印迹转膜，在10×和20×的SSC盐浓度下可以获得相同的结果，转膜时间是在4℃或室温下过夜。
C. 试剂及其配制MOPS缓冲液（10×）: 200mmol/L MOPS ( pH 7.0 )50mmol/L NaAc10mmol/L EDTA上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA，0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝甲醛（37%溶液，13.3mol/L）染液：0.5mol/L NaAc(pH 5.2)中含0.04%的亚甲蓝甲酰胺（去离子）70%乙醇SSC(20×)：3mol/L NaCl (175g/L)0.3mol/L 柠檬酸三钠•2H2O (88g/L)用1mol/L HCl调整至pH 7.0Denhardt溶液（100×)：10g Ficoll 400 + 10g PVP + 10g BSA(Penta x组分V)用DSPC处理水溶解，定容至500ml，过滤后分装成每份25ml于-20℃保存。
Northern印迹杂交技术教案资料
northern 印迹杂交流程图
所用材料、试剂及仪器 方法与步骤 参考书籍及文献
材料
总RNA样品或mRNA样品、 探针模板DNA、随机引物、地高 辛-dUTP、klenow酶、硝酸纤维 素虑膜等。
试剂
• 10*MOPS缓冲液、DEPC水、6*RNA上样 缓冲液、37%甲醛、甲酰胺、 20*ssc(pH7.0) 杂交缓冲液、2*洗膜缓冲液 (2*ssc)、预杂交液、杂交缓冲液、缓冲液 Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ、NBT(硝基四氮唑蓝 )、 BCIP(5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸盐) 、TE缓冲液、 显色液、琼脂糖等。
上样
用标尺测量加样 孔与条带的距离
，拍照
切去凝胶一角，用 用SSC冲洗并浸泡 胶板，以除去甲醛
。
电泳：用1*MOPS缓冲液 ，先用20V使样品进胶， 再用5V/cm电泳1 h ，停 止电泳。
2.转膜
浸泡在250 ml 50 Mmol/l NaOH ,室 温、30r/min 30 min。
浸泡在 250 ml
仪器
• 恒温水浴箱，电泳仪，杂交袋，真空转移 仪，真空泵，杂交炉，恒温摇床，脱色摇 床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液 器，电炉（或微波炉），离心机，烧杯， 量筒，三角瓶，紫外灯等。
1.RNA电泳
琼脂糖与纯水一定 比例于微波炉内混 匀、冷却到75°C
加mops缓冲液、 甲醛，混匀。
制备成电泳用胶 待胶凝过程中， 准备RNA样品。
tris*NaCI 室温、30r/min 30min。
浸泡在250ml 10*SSC约1min
。
RNA转膜前的处理
转膜的 方法
毛细管洗脱法 真空转移法 电印迹法
叠放的滤纸，凝胶和膜之间不能有气泡，转膜约 10 h。
Northern Blot 实验 Protocol
Northern Blot（Northern印迹杂交）是一种用于检测RNA表达水平的方法，它通过将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上，然后与特定基因互补配对的探针进行杂交，从而检测目的片段。
实验原理：Northern Blot利用了RNA的分子量大小不同，通过电泳方法将其按照大小分离，然后转移至硝酸纤维素膜上。
探针与特定的基因互补配对，当探针与目标RNA片段杂交时，可以检测到特定基因的表达情况。
所需试剂和耗材：1.RNA样品或mRNA样品。
2.探针模板DNA。
3.尼龙膜。
4.NorthernMax Kit（Cat. # 1940,Ambion, Inc.）等试剂。
实验仪器：1.恒温水浴箱。
2.电泳仪。
3.凝胶成像系统。
4.真空转移仪和真空泵。
5.UV交联仪。
6.杂交炉。
7.恒温摇床。
8.脱色摇床。
9.漩涡振荡器。
10.分光光度计。
11.微量移液器。
12.电炉或微波炉。
13.离心管。
14.烧杯。
15.量筒。
16.三角瓶等。
准备工作：1.准备好所需的试剂和耗材，确保它们在有效期内，并按照要求储存和使用。
2.确保实验区域干净整洁，并无菌操作。
3.了解和掌握实验步骤，以及如何解决可能出现的问题。
4.使用DEPC水处理相关玻璃器皿，保证无RNA酶的污染。
实验方法：1.将RNA样品进行电泳分离，根据分子量大小将RNA分子分离至琼脂糖凝胶中。
2.将凝胶中的RNA分子转印到硝酸纤维素膜上。
3.将硝酸纤维素膜上的RNA与特定基因的探针进行杂交。
4.通过底片暗盒制作X光底片，以检测RNA的表达情况。
5.对硝酸纤维素膜进行脱色处理，以便进一步检测和分析。
6.通过分光光度计测定X光底片的吸光度，以定量分析RNA的表达水平。
7.根据定量分析结果进行数据分析，绘制图表等。
注意事项：1.在实验过程中，要注意防止污染，尤其是避免交叉污染，因为这会对实验结果产生极大的影响。
2.所有溶液都应该是新鲜的，并且在使用之前应该进行充分的过滤和离心处理。
northern印迹杂交原理
northern印迹杂交原理北方印迹杂交（Northern blot）是一种用于检测和分离特定RNA序列的实验技术。
它是南方印迹技术的衍生物，南方印迹技术是用于检测和分离DNA序列的一种实验技术。
北方印迹技术常用于研究基因的表达调控机制和RNA水平的变化。
北方印迹杂交的原理基本上与南方杂交的原理相似，但有一些具体差异。
北方印迹的主要步骤包括RNA提取、转印到膜上、固定RNA到膜上、杂交和检测。
首先，从细胞或组织中提取总RNA。
通常使用酚-氯仿法或商业RNA 提取试剂盒进行提取。
在提取过程中，应严格遵循消毒和无RNase污染的条件。
接下来，将提取的RNA样品加载到琼脂糖凝胶中进行电泳分离。
通过电泳可以将RNA按分子大小进行分离，从而得到RNA带。
在电泳结束后，在凝胶上用碱性溶液溶解凝胶，将RNA转移到尼龙或硝酸纤维膜上。
然后，固定RNA到膜上。
这通常是通过使RNA与膜上的阳离子进行静电相互作用来实现的。
可以使用UV交联来增强RNA与膜的结合。
在固定RNA后，开始进行杂交。
杂交是将与目标RNA序列具有互补序列的DNA或RNA探针与膜上的RNA进行配对。
探针可以是标记有荧光物质或放射性同位素的分子探针。
探针的选择应根据研究的具体目的来确定。
杂交的条件包括温度、时间和杂交液的组成。
温度通常选择在50-65摄氏度之间，时间通常在几小时到一夜之间。
杂交液中通常包含盐、DENHART's溶液、聚丙烯醇等。
最后，进行检测。
检测的方法可以是放射自显影、化学发光或荧光检测。
如果使用放射性标记的探针，可以使用放射自显影技术来检测。
如果使用化学发光或荧光标记的探针，可以使用相应的检测仪器进行检测。
北方印迹杂交技术可以用于许多研究领域，例如研究基因表达的调控机制、RNA的稳定性和降解等。
它的优点包括对RNA分子的特异性检测和分离，以及对研究RNA变化的敏感性和定量性。
它的局限性在于需要较长的处理时间和较大的RNA样品量，以及需要较高的实验技术要求。
Northern-Blot印迹杂交
杂交信号弱或无信号的问题及解决方案
• 转录水平低：考虑使用其他组织 或细胞类型进行实验，以确定目 标基因是否在所选样本中表达。
杂交信号弱或无信号的问题及解决方案
解决方案
2. 使用更高效的RNA提取方 法，确保获得高质量的RNA 样品。
样本电泳
01
02
03
选择合适的胶浓度
根据RNA的大小选择适合 的琼脂糖凝胶浓度，确保 RNA片段能够充分分离。
点样与电泳
将处理好的RNA样品点在 凝胶上，并进行电泳分离。
检测RNA条带
通过染色或放射自显影等 技术观察电泳结果，确保 RNA片段已成功分离。
样本转移
制备滤纸
选择适合的硝酸纤维素膜 或印迹膜，并将其固定在 滤纸上。
northern-blot印迹杂交
contents
目录
• northern-blot技术概述 • northern-blot实验原理 • northern-blot实验材料与设备 • northern-blot实验步骤 • northern-blot实验结果分析 • northern-blot实验问题与解决方案
01 northern-blot技术概述
定义与特点
定义
Northern-blot印迹杂交是一种用于 检测RNA在样本中的表达水平的分 子生物学技术。
特点
具有高灵敏度、高特异性和高分辨率 ，能够检测出微量的RNA分子，并可 对RNA分子进行定性、定量和定位分 析。
northern-blot技术的应用范围
1. 重新设计探针并进行验证， 确保与目标基因完全匹配。
3. 优化实验条件，如延长杂 交时间和提高探针浓度。
northern印迹杂交操作步骤
northern印迹杂交操作步骤标题：Northern印迹杂交技术的操作步骤详解Northern印迹杂交是一种研究基因表达的分子生物学技术，主要用于检测细胞中特定mRNA的存在和数量。
其基本原理是利用核酸之间的碱基配对原则，将放射性或非放射性的DNA探针与固定在硝酸纤维素膜上的RNA进行杂交，然后通过显影、放射自显影或者化学发光等方式显示结果。
以下是Northern印迹杂交的基本操作步骤：1. RNA的提取：首先从待测样本中提取总RNA。
常用的RNA提取方法有酚氯仿法、Trizol法等。
提取后的RNA需要进行定量和质量检查，以确保后续实验的准确性。
2. RNA的电泳分离：将提取到的总RNA通过琼脂糖凝胶电泳进行分离。
根据RNA的大小不同，会在凝胶上形成不同的条带。
通常情况下，28S rRNA的迁移速度比18S rRNA慢，因此可以根据这两个条带的位置和强度来判断RNA的质量。
3. RNA的转移：将电泳分离后的RNA通过毛细管作用转移到硝酸纤维素膜上。
这个过程称为“转膜”。
转膜时需要注意的是，硝酸纤维素膜的正反两面不能混淆，因为转膜后要进行的杂交反应只在膜的一面上进行。
4. RNA的固定：转膜后的RNA需要被固定在硝酸纤维素膜上，防止其在后面的杂交过程中脱落。
常用的固定方法是在高盐溶液中进行热处理。
5. 杂交：将标记好的DNA探针与固定的RNA进行杂交。
杂交过程一般在恒温水浴中进行，温度应设定在Tm值以下5℃左右。
杂交的时间视探针的长度和浓度而定，一般为过夜。
6. 洗脱：杂交后的硝酸纤维素膜需要进行洗涤，目的是洗去未与RNA杂交的游离探针。
常用的洗涤液是SSC缓冲液，洗涤次数视具体情况而定。
7. 显影：将洗涤后的硝酸纤维素膜用X光片覆盖，并放置在暗盒中曝光一段时间，然后进行显影。
如果使用的是放射性标记的探针，则需要进行放射自显影；如果是非放射性标记的探针，则可以采用化学发光的方式进行显影。
总的来说，Northern印迹杂交是一种相对传统的分子生物学技术，虽然操作步骤较为繁琐，但因其能够直接反映mRNA的存在和量的变化，因此在基因表达的研究中仍具有重要的地位。
northern印迹杂交
简介
简介
Northern印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似，只是在上样前用甲基氢氧化银、乙 二醛或甲醛使RNA变性，而不用NaOH，因为它会水解RNA的2'-羟基基团。RNA变性后有利于在转印过程中与硝酸纤 维素膜结合，它同样可在高盐中进行转印，但在烘烤前与膜结合得并不牢固，所以在转印后用低盐缓冲液洗脱， 否则RNA会被洗脱。在胶中不能加EB，因为它会影响RNA与硝酸纤维素膜的结合。为测定片段大小，可在同一块胶 上加分子量标记物一同电泳，之后将标记物切下、上色、照相，样品胶则进行Northern转印。标记物胶上色的方 法是在暗室中将其浸在含5μg/ml EB的0.1mol/L醋酸铵中10min，光在水中就可脱色，在紫外光下用一次成像相 机拍照时，上色的RNA胶要尽可能少接触紫外光，若接触太多或在白炽灯下暴露过久，会使RNA信号降低。
northern印迹杂交
将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法
01 简介
目录
02
RNA甲醛凝胶电泳和 吸印方法
基本信息
Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA 印迹技术由Southern于1975年创建，称为Southern印迹技术，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为 Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。
琼脂糖凝胶中分离功能完整的mRNA时，甲基氢氧化银是一种强力、可逆变性剂，但是有毒，因而许多人喜用 甲醛作为变性剂。所有操作均应避免RNase的污染。
原理：
整合到植物染色体上的外源基因如果能正常表达，则转化植株细胞内有其转录产物——特异mRNA的生成。将 提取的植物总RNA或mRNA用变性凝胶电泳分离，则不同的RNA分子将按分子质量大小依次排布在凝胶上；将他们原 位转移到固定膜上；在适宜的离子强度及温度条件下，用探针与膜杂交；然后通过探针的标记性质检测出杂交体。
northern印迹杂交步骤
northern印迹杂交步骤英文回答：Northern blotting is a molecular biology technique used to investigate RNA expression by detecting specific RNA sequences within a sample. It involves the following steps:1. RNA extraction: RNA is extracted from the sample using a suitable method, such as Trizol or RNA isolation kits.2. RNA electrophoresis: The extracted RNA is separated by size on an agarose gel using electrophoresis. This step allows the separation of different RNA species based on their molecular weight.3. Northern transfer: The RNA is transferred from the gel to a nitrocellulose or nylon membrane by capillary action. This process involves placing the membrane on top of the gel and allowing the RNA to migrate from the gel tothe membrane.4. Cross-linking: The RNA is cross-linked to the membrane using ultraviolet (UV) light. This step helps to permanently bind the RNA to the membrane and prevent itfrom being washed away during subsequent steps.5. Pre-hybridization: The membrane is incubated in apre-hybridization solution to block any non-specificbinding sites and to prepare the membrane for hybridization.6. Hybridization: A labeled RNA probe that is complementary to the target RNA sequence is added to the membrane. The probe binds to the complementary RNA sequences on the membrane, forming RNA-RNA hybrids.7. Stringent washing: The membrane is washed under stringent conditions to remove any probe that is not specifically bound to the target RNA. The stringency of the washing conditions can be adjusted to control thespecificity of the hybridization.8. Detection: The hybridized probe is detected using an appropriate method, such as chemiluminescence or autoradiography. This step allows the visualization of the target RNA bands on the membrane.中文回答：注意事项，本回答基于英文回答进行翻译，以下回答不包含任何来自提示的信息。
northern印迹杂交操作步骤
northern印迹杂交操作步骤
Northern 印迹杂交是一种用于检测 RNA 的技术，以下是一般的 Northern 印迹杂交操作步骤：
1. RNA 提取：从样品中提取 RNA，可以使用适当的 RNA 提取方法，如苯酚-氯仿提取或商业化的 RNA 提取试剂盒。
2. RNA 质量评估：通过琼脂糖凝胶电泳或分光光度计等方法，评估 RNA 的完整性和浓度。
3. RNA 变性：将 RNA 样品在加热的缓冲液中进行变性，使其变成单链形式。
4. 凝胶电泳：将变性的 RNA 样品加载到琼脂糖凝胶上进行电泳，根据 RNA 的大小分离不同的 RNA 分子。
5. 转膜：将电泳后的 RNA 转移到固相支持物上，通常使用硝酸纤维素膜或尼龙膜。
6. 杂交：将带有 RNA 的膜与放射性或荧光标记的探针进行杂交，探针是与目标 RNA 互补的核酸序列。
7. 洗膜：在杂交后，进行洗膜步骤，以去除未结合的探针，降低背景信号。
8. 信号检测：使用放射性自显影或荧光检测方法，检测杂交信号，并进行图像分析。
9. 数据分析：根据杂交信号的强度和分布，分析 RNA 的表达水平和特异性。
需要注意的是，Northern 印迹杂交是一项技术要求较高的实验方法，操作过程中需要严格控制实验条件和避免 RNA 的降解。
此外，探针的设计和选择也对实验结果有重要影响。
在进行 Northern 印迹杂交实验之前，建议详细阅读相关的实验方案和参考文献，并根据具体的实验需求进行适当的优化和改进。
如果你对具体的实验操作有更详细的问题，建议参考相关的实验手册或向专业的实验室技术人员咨询。
希望这些信息对你有所帮助！如果你还有其他问题，欢迎随时提问。
northern印迹法原理
northern印迹法原理Northern印迹法原理引言：Northern印迹法是一种在分子生物学研究中常用的技术，它可以用来检测DNA或RNA序列的特定区域。
本文将重点介绍Northern 印迹法的原理及其在科研中的应用。
一、Northern印迹法的原理Northern印迹法是根据亲和性的原理来实现的。
它利用DNA或RNA的亲和性与亲和剂结合，通过电泳将目标分子分离并转移到膜上，然后用探针与目标分子进行特异性的杂交，最后通过染色或放射性探针的探测来检测目标序列的存在。
1. 样本制备需要从细胞或组织中提取总RNA，并将其转录成cDNA。
这个步骤可以使用反转录酶来完成，反转录酶可将RNA转录成互补的DNA 链。
2. 准备RNA样品接下来，需要将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，以获取目标RNA序列。
这一步骤是通过将RNA样品与琼脂糖溶液混合后，加热并加载到琼脂糖凝胶槽中进行电泳分离。
3. 转移RNA到膜上分离完成后，需要将RNA从琼脂糖凝胶上转移到膜上。
这一步骤可以通过将膜放置在琼脂糖凝胶上，并应用电流使RNA迁移到膜上。
4. 探针杂交在膜上进行杂交的目的是检测特定的RNA序列。
为了实现这一步骤，需要用探针标记的DNA序列或放射性同位素探针与RNA序列进行杂交反应。
探针的选择应该是与目标序列互补的序列。
5. 探测目标序列在探针杂交反应发生后，需要用染色剂或放射性探针来检测目标序列的存在。
这一步骤可以通过染色或使用放射性探针的放射性测量来完成。
二、Northern印迹法的应用Northern印迹法在分子生物学研究中有着广泛的应用。
以下是一些常见的应用领域：1. 基因表达分析Northern印迹法可以用来研究特定基因的表达水平。
通过检测目标基因的mRNA在不同组织或条件下的表达情况，可以了解该基因在生物体内的功能和调控机制。
2. 疾病诊断与治疗Northern印迹法在疾病的诊断和治疗中也起到了重要的作用。
northern印迹原理和步骤
northern印迹原理和步骤Northern印迹是一种常用的分子生物学技术，用于研究RNA的存在和表达量。
其原理基于互补配对的特性和电泳的分离效应，可以准确检测目标RNA的存在和表达情况。
步骤如下：1. 根据研究需要选择适当的细胞、组织或生物样品，并在合适的条件下提取总RNA，保证RNA质量和纯度。
2. 将RNA经过甲醛缩合处理，使RNA中的核苷酸形成共价交联，避免其受到外界的酶降解和脱失。
3. 制备探针：制备DNA探针，用于与目标RNA靶点区域互补杂交。
探针一般使用同样长度的cDNA序列，但这需要穿过RNA反转录产生。
再用放射性、化学荧光或染料等方法加标记，在杂交反应中可快速和准确检测目标RNA的存在和表达量。
4. Northern杂交：在杂交反应的过程中，将RNA和DNA探针混合，在一定的温度和盐度下引发杂交反应。
随后将样品脱去无关核酸后，进行电泳分离。
将RNA在琼脂糖凝胶上分离、定量、转移、烘干后，使用辐射计数器与基带仪等检测仪器读取辐射信号及光信号，即可得到RNA的存在性和定量水平。
5. 数据分析：根据北方杂交后探针与RNA核酸的比例，再结合标准曲线，可以定量测定RNA表达量，用以比较样本之间的差异或验证RNA在各种生物过程中的变化情况。
总之，Northern印迹作为分子生物学的基础技术手段，被广泛应用于RNA研究领域。
通过一定的实验操作，能够检测目标RNA是否存在、表达水平的高低及变化规律，以便进一步推断其在生长发育、生理代谢和疾病发生发展等方面的作用和机制。
同时，随着生物技术的发展，也对Northern印迹技术进行了不断地改进和完善，进一步拓宽了其应用范围和提高了实验效率和精准度。
Nouthern杂交实验
实验五十五 Nouthern杂交【实验原理】Northern杂交是研究真核细胞基因表达的基本方法。
与Southern印迹杂交相对应，故被称为Northern印迹杂交。
Northern杂交是用来检测真核生物RNA的量和大小及估计其丰度的实验方法，可从大量的RNA样本中同时获得这些信息。
这是其它实验方法无法比拟的。
其基本原理是通过变性琼脂糖凝胶电泳将RNA样品进行分离，再转移到尼龙膜等固相膜载体上，用放射性同位素标记的DNA或RNA特异探针对固定于膜上的RNA进行杂交，洗膜去除非特异性杂交信号，经放射自显影，对杂交信号进行分析。
将杂交的mRNA分子在电泳中的迁移位置与标准分子量分子进行比较，即可知道细胞中待定的基因转录产物的大小；对杂交信号的强弱比较，可以知道该基因表达mRNA的强弱。
【实验用品】（一）器材电泳仪，电泳槽，恒温水浴箱，恒温干烤箱，同位素探测仪，自动光密度扫描仪，核酸转移装置，紫外照相装置，X光胶片盒(带增感屏)，1.5ml、0.5ml离心管，移液器，玻璃刻度吸管(1ml、5ml、10ml)，塑料封口机，紫外检测仪。
（二）试剂1．5×甲醛凝胶电泳缓冲液0.1mol/L 3-[N—玛琳代]丙磺酸MOPS(PH 7.0) 40 mmol/L NaAC 5 mmol/L EDTA(PH 8.0)将20.6gMOPS溶于800ml经0.1％DEPC(焦碳酸二乙酯)处理的50 mmol/L乙酸钠溶液。
用2 mol/L NaoH将溶液的PH调至7.0，加10ml用DEPC处理的0.5 mol/L EDTA(PH 8.0)，用DEPC处理的三蒸水补足溶液总体积为l L。
上述溶液用0.2µmol 微孔滤膜过滤除菌，避光保存于4℃。
溶液见光变为深黄色不能再用。
2．甲醛凝胶加样缓冲液50％甘油 1mmol/L EDTA(PH8.0) 0.25％溴酚蓝用0.1％DEPC 37℃处理过夜．高压灭菌，保存与室温。
Northern杂交
Northern 杂交（Northern blotting）1979年，J.C.Alwine等提出：将电泳凝胶中的RNA转移到叠氮化的或其他化学修饰的活性滤纸上，通过共价交联作用使它们结合，因其方法同Southern杂交十分相似，故称之为Northern杂交。
1 原理Northern杂交是利用DNA可以与RNA进行分子杂交来检测特异性RNA的技术，首先将RNA混合物按它们的大小和分子量通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，分离出来的RNA转至尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与放射性标记的探针杂交，通过杂交结果可以对表达量进行定性或定量。
2实验流程RNA混合物进行琼制糖凝胶电泳→分离得到的RNA转膜→与放射性标记的探针杂交→结果分析3 特点Northern杂交与Southern杂交相比，条件要严格些，特别是RNA容易降解，前期制备和转膜过程易受RNase污染，要获得较好结果，需用稳定性最差的mRNA与DNA进行杂交，对实验条件要求严格；然而有些应用中Northern杂交避免用复杂探针筛选cDNA文库的繁琐4应用Northern杂交技术应用于特定性状基因在mRNA水平上的动态表达研究。
如应用于定位克隆中寻找新基因，寻找染色体特定区域的表达序列使大多数人类遗传疾病连锁分析和定位克隆的主要限速步骤，Northern杂交作为寻找这些序列的有效方法，有助于这些疾病候选基因的筛选；Northern杂交分析【操作】1．RNA的提取见前。
2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至60℃时加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。
待胶凝固后，置于1×甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。
3．样品制备取总RNA4.5 ，加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6 、甲酰胺10、于65℃温浴15分钟,水浴冷却。
加入上样缓冲液2 。
northern印迹杂交名解
northern印迹杂交名解【northern印迹杂交名解】IntroductionIn the world of plants and gardening, hybridization is a common practice to create new variations and improve desirable traits in different species. One such hybrid variety that stands out is the Northern Impression hybrid. In this article, we will delve into the concept of hybridization, understand what traits this particular hybrid possesses, and explore its significance in the world of horticulture.I. Understanding Hybridization1. Definition and Process of HybridizationHybridization refers to the process of cross-breeding two different plant varieties to create a new hybrid variety. The aim is to combine the desirable traits of both parent plants into the offspring. This process includes controlled pollination and subsequent breeding to stabilize the hybrid's characteristics.2. Objectives of HybridizationHybridization is undertaken for various reasons, including:a. Enhancing specific traits, such as disease resistance, yield, or aesthetics.b. Developing new plant varieties to meet market demands.c. Broadening the genetic diversity of cultivated plants.II. Characteristics of the Northern Impression Hybrid1. ParentageThe Northern Impression hybrid is a result of crossing two distinct parent plants, namely, the Northern variety and the Impression variety. By combining the genetic material of these two plants, breeding experts aimed to create a new variety that showcased the best attributes of both parents.2. AppearanceThe Northern Impression hybrid is easily recognizable by its distinct foliage and flower structure. Its leaves are medium-sized, ranging from light green to dark green, with a unique pattern of serrated edges. The flowers come in a variety of colors, including shades of pink, purple, and blue. They are characterized by anintricate pattern of lines and dots, which add to their visual appeal.3. Growth HabitThis hybrid variety exhibits a bushy growth habit, with a compact and well-rounded form. It has a moderate growth rate, reaching a typical height of 1-2 feet. Its compact size makes it suitable for both garden beds and containers, adding versatility to its appeal.4. Environmental ToleranceThe Northern Impression hybrid possesses a commendable level of tolerance to different environmental conditions. It can thrive in both full sun and partial shade, making it adaptable to various garden settings. Moreover, it exhibits good resistance to common plant diseases and pests, thereby reducing the need for intensive maintenance and chemical intervention.III. Significance of the Northern Impression Hybrid1. Aesthetics in LandscapingThe unique foliage and flower patterns of the Northern Impression hybrid make it a visually striking plant. Its vibrant colorsand distinct form add depth and interest to garden landscapes, making it a popular choice among gardeners and landscape designers.2. Low Maintenance RequirementsThis hybrid variety's ability to withstand different environments and resist common diseases and pests significantly reduces the need for intensive care. This makes it an attractive option for gardeners who desire visually appealing plants without the hassle of constant maintenance.3. Enhanced Genetic DiversityThe creation of the Northern Impression hybrid contributes to the expansion of genetic diversity within the realm of cultivated plants. This is crucial in ensuring the long-term viability and resilience of plant species in the face of changing environmental conditions and evolving pests and diseases.ConclusionIn conclusion, the Northern Impression hybrid is a remarkable example of the wonders of hybridization. By combining thedesirable traits of its parent plants –the Northern and Impression varieties –this hybrid brings forth a visually appealing,low-maintenance plant that thrives in various environmental conditions. Its significance lies not only in its aesthetic qualities but also in its contribution to expanding genetic diversity. As hybridization continues to shape the world of horticulture, the Northern Impression hybrid stands as a testament to the successful creation of new plant varieties with improved characteristics.。
northern印迹杂交名解
northern印迹杂交名解北方印迹杂交名解北方印迹杂交是一种在北方地区广泛种植的杂交植物。
它是由不同品种的印迹植物杂交而成的，具有丰富的花色和花形，极富观赏价值。
下面我将为大家解析一些常见的北方印迹杂交的名字和它们的含义。
1. 冰雪之吻：这个名字给人一种冰雪世界的感觉，形容花朵纯洁美丽，如同冰雪之吻一般。
这种北方印迹杂交通常有白色的花朵，花瓣之间带有淡淡的粉红色，给人一种清新的感觉。
2. 金色之舞：这个名字形容花朵的颜色如同金色的舞蹈，给人一种热烈、奔放的感觉。
这种北方印迹杂交通常有金黄色的花朵，花瓣簇拥在一起，形成了一个饱满的花朵。
3. 春之梦：这个名字给人一种梦幻的感觉，形容花朵美丽如梦。
这种北方印迹杂交通常有粉红色或淡紫色的花朵，花瓣之间有一丝淡淡的香气，给人一种温柔的感觉。
4. 紫色妖姬：这个名字给人一种神秘、妖娆的感觉，形容花朵紫色的花瓣如同一个妖姬的身影。
这种北方印迹杂交通常有深紫色的花朵，花瓣上有一些淡淡的纹理，给人一种神秘的感觉。
5. 蓝色之梦：这个名字形容花朵的颜色如同蓝色的梦境，给人一种神奇、迷人的感觉。
这种北方印迹杂交通常有浅蓝色或淡紫色的花朵，花瓣之间有一些淡淡的纹理，给人一种梦幻的感觉。
6. 火焰之舞：这个名字形容花朵的颜色如同燃烧的火焰，给人一种热烈、激情的感觉。
这种北方印迹杂交通常有红色或橙色的花朵，花瓣之间有一些深红色的斑点，给人一种热情洋溢的感觉。
7. 深夜之星：这个名字给人一种神秘、夜幕降临的感觉，形容花朵在黑暗中闪烁如星星一般。
这种北方印迹杂交通常有深紫色或深红色的花朵，花瓣上有一些亮丽的斑点，给人一种神秘的感觉。
以上是一些常见的北方印迹杂交的名字和它们的含义。
每个名字都有自己独特的形容词和意象，给人一种美丽、神秘的感觉。
北方印迹杂交的种植和养护也需要一定的技巧，要注意水肥管理和病虫害防治，以保证花朵的生长和开放。
希望通过这篇文章，大家对北方印迹杂交的名字有了更深的了解，并对北方印迹杂交的种植有一些启发。
northern印迹杂交名解 -回复
northern印迹杂交名解-回复Norther印迹杂交名解引言：近年来，园艺植物领域中出现了一个新的名词——"Norther印迹杂交"。
这一名词不仅引起了园艺爱好者们的关注，也受到了广大植物学家的研究。
那么，什么是Norther印迹杂交？为什么它受到了如此多的关注？本文将一步一步回答这些问题。
第一部分：Norther印迹杂交的定义Norther印迹杂交是一种植物繁育技术，它在传统杂交的基础上，加入了新的技术和方法。
这种繁育方式是由园艺学家John Norther于二十一世纪初提出的，旨在提高植物的生长能力、抗病能力和抗逆性。
第二部分：Norther印迹杂交的原理Norther印迹杂交的原理基于对植物基因组的深入研究。
通过分析植物基因组的序列和结构，我们可以了解到一些基因与植物性状之间存在的关系。
Norther印迹杂交通过混合两个具有不同性状的亲本，使它们的基因组发生重组，形成一种新的植物。
这种新的植物结合了亲本的优点，并在某些方面表现出更强的性状。
第三部分：Norther印迹杂交的优点Norther印迹杂交的最大优点是提高了植物的生长能力和适应环境的能力。
通过选择适宜的亲本进行杂交，能够增加植物的抗逆性，使其能够更好地适应气候变化、病虫害等外界环境的影响。
此外，Norther印迹杂交还可以提高植物的产量和品质，满足人们对农作物的需求。
第四部分：Norther印迹杂交的应用Norther印迹杂交在园艺植物领域的应用非常广泛。
它被广泛应用于粮食作物、果树、蔬菜等农作物的繁育中。
通过Norther印迹杂交，可以培育出更耐旱、耐寒、抗病虫害的农作物品种，提高农作物的产量和质量。
此外，Norther印迹杂交在园艺植物的观赏价值提升方面也有着广泛的应用。
通过Norther印迹杂交，可以培育出更加美丽、耐看的花卉和观叶植物。
这些新品种不仅迎合了人们对美的追求，也丰富了园林植物的种类和样貌。
northern印迹杂交原理
northern印迹杂交原理北方印迹杂交是一种分离和分析DNA的方法，通常用于分离和分析基因组和DNA样品的特定序列。
这种方法基于DNA的电泳运动和杂交化学，使得DNA序列的特定区域可以被形成的杂交分子所识别和捕获。
在这篇文章中，我们将探讨北方印迹杂交的原理和应用。
一、北方印迹杂交的基本原理北方印迹杂交的过程可以被分为以下几个步骤：1. DNA提取：从样品中提取出所需DNA序列。
2. DNA切割：使用限制性内切酶将DNA切割成所需的片段。
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳：将DNA片段通过凝胶电泳进行分离。
4. DNA转移：使用电泳将DNA分离到含有纤维素醇和盐的膜上。
5. DNA杂交：在膜上加入标记了所需DNA序列的探针，使其与目标DNA序列形成杂交。
6. 暴露于X光片：将膜暴露在X光片上，使得探针与目标DNA序列形成的杂交分子被记录下来。
由于DNA的电泳运动特性，分离的DNA片段可以根据其分子量在凝胶上定位，这使得这种方法可以大规模分析DNA样品中特定的序列。
而加入标记的DNA探针可以识别特定的目标DNA序列，从而使得这种方法具有很高的专业性和灵敏性。
二、北方印迹杂交的应用北方印迹杂交主要用于以下几种应用：1. 分析基因表达：通过北方印迹杂交可以分离出RNA序列，从而分析某个基因是否被表达和其表达的水平。
2. 检测基因突变：通过北方印迹杂交可以检测DNA序列中的特定突变，从而判断某一基因是否存在突变表达。
3. 确定DNA序列：通过北方印迹杂交可以进一步分析和确定DNA 序列中的某些特定区域。
总之，北方印迹杂交是一种比较常用的分子生物学方法，其原理简单，操作方便，可以用于基因表达和突变检测等多种应用。
在人类基因组研究和分析中有着广泛的应用价值。
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northern印迹杂交
Northern印迹杂交（Northern blot）。
这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。
DNA印迹技术由Southern于1975年创建，称为Southern 印迹技术，RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交，与此原理相似的蛋白质印迹技术则被称为Western blot。
Northern 印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似，只是在进样前用甲基氢氧化银、乙二醛或甲醛使RNA变性，而不用NaOH，因为它会水解RNA的2'-羟基基团。
RNA变性后有利于在转印过程中与硝酸纤维素膜结合，它同样可在高盐中进行转印，但在烘烤前与膜结合得并不牢固，所以在转印后用低盐缓冲液洗脱，否则RNA会被洗脱。
在胶中不能加EB，因为它会影响RNA与硝酸纤维素膜的结合。
为测定片段大小，可在同一块胶上加分子量标记物一同电泳，之后将标记物切下、上色、照相，样品胶则进行Northern转印。
标记物胶上色的方法是在暗室中将其浸在含5μg/ml EB的0.1mol/L醋酸铵中10min，光在水中就可脱色，在紫外光下用一次成像相机拍照时，上色的RNA胶要尽可能少接触紫外光，若接触太多或在白炽灯下暴露过久，会使RNA信号降低。
琼脂糖凝胶中分离功能完整的mRNA时，甲基氢氧化银是一种强力、可逆变性剂，但是有毒，因而许多人喜用甲醛作为变性剂。
所有操作均应避免RNase的污染。
RNA甲醛凝胶电泳和吸印方法。
<1>试剂：
10×MSE缓冲液：0.2mol/L吗啉代丙烷磺酸（MOPS），pH7.0，50mmol/L醋酸钠，1mmol/L EDTA pH8.0。
5×载样缓冲液：50%甘油，1mmol/L EDTA，0.4%溴酚蓝。
甲醛：用水配成37%浓度（12.3mol/L），应在通风柜中操作，pH高于4.0。
20×SSC；
去离子甲酰胺；
50mmol/L NaOH(含10mmol/L NaCl)；
0.1mol/L Tris，pH7.5。
<2>步骤：
[1]40ml水中加7g琼脂糖，煮沸溶解，冷却到60℃，加7ml10×MSE缓冲液，11.5ml
甲醛，加水定容至70ml，混匀后倒入盛胶槽。
[2]等胶凝固后，去掉梳子和胶布，将盛胶槽放入1×MSE缓冲液的电泳槽。
[3]使RNA变性（最多20μg），RNA4.5ml,10×MSE缓冲液20ml，甲醛3.5ml，去离子甲酰胺10ml。
[4]55℃加热15min，冰浴冷却。
[5]加2ml5×载样缓冲液。
[6]上样、同时加RNA标记物。
[7]60伏电泳过夜。
[8]取出凝胶，水中浸泡2次，每次5min。
[9]室温下将胶浸到50mmol/L NaOH和10mmol/L NaCl中45min，水解高分子RNA，以增强转印。
[10]室温下将胶浸到0.1mmol/L Tris HCl(pH7.5)中45min,使胶中和。
[11]20×SSC洗胶1h。
[12]20×SSC中过夜转印到硝酸纤维素膜上。
[13]取出硝酸纤维素膜，80℃真空烘烤2h。