动物细胞培养技术

. . 大孔微载体
人们为了解决微载体培养系统中细胞易受机械损伤
的缺陷以及能最大限度地扩大比表面积, 开发了具有完 全连通沟回的大孔微载体。
大孔微载体将细胞固定在孔内生长, 因而与其他方 法相比具有一系列优点: ①比表面积大,是实心微载体的 几倍甚至几十倍; ②细胞在孔内生长, 受到保护, 剪切 损伤小; ③与包埋法相比, 传质尤其是传氧效果好 ; ④ 两种类型细胞都适用;⑤细胞三维生长, 细胞密度是实心 微载体的 倍以上, 有的可达 个 ; ⑥适用于长期维持培 养,细胞生长情况依然良好; ⑦微载体浓度高, 实心载体 在培养液中浓度增大到一定时, 细胞密度反而下降; 而 大孔微载体在浓度较高时, 表面碰撞增加, 能促使细胞 在孔内生长; ⑧最适合于蛋白质生产和产物分泌。因此 有人预言, 大孔微载体质生产和产物分泌。因此有人预 言, 大孔微载体技术将成为动物细胞大规模培养的一种 常用方式。
微载体的直径在～μ , 由天然葡聚糖、凝胶或 各种合成的聚合物组成, 如聚苯乙烯、聚丙烯酰 胺等。由这些材料及其改良型制成的微载体主要 参考了细胞的粘附特性, 在其表面带有大量电荷 及其他生长基质物质, 因而有利于细胞的粘附、 铺展和增殖。采用微载体培养具有以下优点: ① 比表面积大, 单位体积培养液的细胞产率高; ②采 用均匀悬浮养, 无营养物或产物梯度; ③可用简单 显微镜观察微载体表面的生长情况; ④细胞收获 过程相对简单, 劳动强度小; ⑤培养基利用率高, 占地面积小; ⑥放大容易, 国外已有公司以 规模
. . 微载体 微载体细胞培养法是一种用于培
养锚地依赖性细胞的大规模培养技术。 这种培养技术是在生物反应器内加入 培养液和一种对细胞无毒害作用的材 料支撑的颗粒(微载体) , 使细胞在微 载体表面附着和生长, 并通过不断搅拌 使微载体保持悬浮状态。培养液中大 量的微载体为细胞提供了极大的附着 表面, 微载体其比表面积可达 , 从 而可实现细胞的高密度培养。
. . 海藻酸钙凝胶
海藻酸钙凝胶包埋法是将动物细胞与一定量 的海藻酸钠溶液混合均匀, 然后滴到一定浓度的 氯化钙溶液中形成直径约 内含动物细胞的海藻 酸钙胶珠, 分离洗涤后即可用于培养。此法操作 时条件温和, 对活细胞损伤小。但固定后机械强 度不高。为了大量制备海藻酸钙凝胶包埋的固定 化细胞, 国外已有专门的振动喷嘴设备可供使用。
动物细胞的特点及生长特性:
动物细胞虽可像微生物细胞一样, 在人工控制 条件的生物反应器中进行大规模培养, 但其细胞 结构和培养特性与微生物细胞相比, 有显著差别 : ①动物细胞比微生物细胞大得多, 无细胞壁, 机械 强度低, 对剪切力敏感, 适应环境能力差; ②倍增 时间长, 生长缓慢, 易受微生物污染, 培养时须用 抗生素; ③培养过程需氧量少(氧传质系数 大于 即可满足每毫升 个细胞的生长) ; ④培养过程中 细胞相互粘连以集群形式存在; ⑤原代培养细胞 一般繁殖 代即退化死亡; ⑥代谢产物具有生物活 性, 生产成.本高, 但附加值也高。
. 吸附
. . 多孔陶瓷
美国某公司开发了一种完全自动化的细胞培养系统。该系
统的核心是陶质矩形蜂窝状生物反应器。反应器构型是一圆筒内 装置有许多陶质矩形通道的蜂窝状圆柱体，可提供. 的生长表面 积。既可用于培养悬浮生长的细胞,又可用于培养贴壁依赖性细 胞。该系统可以连续化生产蛋白质。由于产物直接分泌到培养基 中, 给分离纯化带来方便。而且细胞不用从培养基中分离, 所以不 必考ຫໍສະໝຸດ Baidu梯度问题; 当培养基高速循环时, 可以保持相对恒定的营 养物和氧浓度。增加套数即可实现放大.
动物细胞培养技 术
动物细胞培养技术
.固定化动物细胞大规模培养技术 . 动物细胞的灌注养方法 . 动物细胞无血清培养技术 . 动物细胞培养生物反应器
一. 前言
动物细胞培养开始于本世纪初 年, 其规模开始扩大, 发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用 的技术方法, 利用动物细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等, 已成为医药生物高技术 产业的重要部分。利用动物细胞培养技术生产的生物制品已占世界生物高技术产品市场份额的 。 动物细胞大 规模培养技术是生物技术制药中非常重要的环节。目前, 动物细胞有悬浮培养和贴壁培养.技术水平的提高主要 集中在培养规模的进一步扩大、优化细胞培养环境、改变细胞特性、提高产品的产率与保证其质量上。
. 包埋
将动物细胞包埋在各种多聚物多孔载体
中而制成固定化动物细胞的方法称为包埋 法。此法步骤简便, 条件温和, 负荷量大, 细 胞泄露少。因细胞嵌入在高聚物网格中而 受到保护, 细胞能抗机械剪切。但该法也有 一定缺点, 如扩散限制, 并非所有细胞都处 于最佳营养物浓度。包埋法一般适用于非 锚地依赖型细胞的固定化。多孔凝胶是最 常用的载体, 用于动物细胞固定化的凝胶主 要有海藻酸钙、琼脂糖、血纤维蛋白等。
一. 固定化动物细胞大规模培养技术
. 固定化培养方法
在动物细胞培养中, 培养细胞的目的不仅仅 要求催化活细胞培养中, 培养细胞的目的不仅仅 要求催化活力, 更重要的是利用细胞来合成和分 泌蛋白, 因此如何保持细胞的活性显得尤为重要。 由于动物细胞的极度敏感性, 上述这些固定化方 法会对动物细胞产生毒性, 另外多糖(如卡拉胶等) 由于具有很高的离子强度也会对细胞产生毒害。 故在动物细胞培养中要考虑使用较温和的固定化 方法, 如吸附、包埋、中空纤维或胶囊化。
. . 琼脂糖凝胶
琼脂糖凝胶可用二相法制得。将含有细胞的 琼脂糖溶液分散到一个水不溶相中(如石蜡油) , 形成直径. 凝胶珠珠, 移去石蜡油后, 细胞即可 进行培养。同海藻钙一样, 琼脂糖更适于培养悬 浮细胞。尽管凝胶珠形成过程很复杂, 目前放大 体积不超过 。但琼脂糖凝胶无毒性, 具有较大的 空隙, 可以允许大分子物质自由扩散, 因此该法特 别适用于蛋白产物的连续生产。有人曾用琼脂糖 包埋杂交瘤细胞和淋巴细胞生产单克隆抗体和白 细胞介素 。