6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
冰冻切片防止脱片的几种方法
冰冻切片防止脱片的几种方法冰冻切片是将组织直接冰冻进行切片,是一种简便快速的方法,常常用于配合临床手术等在短时间内制出切片的病理急诊[1]。
由于冰冻切片组织不需经过酒精脱水、二甲苯透明和包埋等过程,脂肪、类脂质、抗原等化学物质成分不受影响,因此是临床上常用的制片方法。
我们通过实践摸索出对一些特定的标本:如乳腺组织、卵巢肿瘤、甲状腺组织、肺癌标本以及喉的切缘标本等在切片过程中总结了一些方法,防止了这些组织在冰冻切片染色过程中常常由于各种原因导致组织易于脱落的难题。
1 材料与方法1.1 仪器选用leicaCM1900冷冻切片机首选温度冷冻室20℃,冷冻头22℃。
1.2 固定液AAF固定液(70%或无水酒精85 ml 冰醋酸5 ml甲醛10 ml)。
1.3 烤箱202 OAB型电热恒温干燥箱,设定在70℃。
1.4 方法接到标本后(标本以乳腺组织、卵巢肿瘤组织、甲状腺组织、肺叶切除标本以及喉的切缘标本为例,含有脂肪组织的要尽量剔除脂肪组织)用冷冻头冷冻标本1 min左右开始切片,掌握冷冻的程度和适宜的切片时机是个较难的问题,因为不同组织所需冷冻切片的时间不同。
要在实践中取得经验。
组织冷冻至变白变硬时即可进行切削,新鲜组织冰冻切片时因组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固,但在某些特殊情况下如冷冻过度时的组织酥脆,切出的片子易碎有裂隙甚至呈粉末状。
此时应停止冷冻稍等片刻也可以带上一次性手套,用手掌或大拇指腹紧贴组织切片面3~5 s,利用手掌的温度使组织迅速升温,并且观察组织切面变化掌握好时机便能快捷切出完整的切片。
此时冰冻切片机转轮要用另只手固定或锁死,以防转轮转动手被切片刀刮伤。
有些组织如乳腺组织、卵巢囊肿的囊壁组织在切片后放入AAF固定液中,在固定至染色过程中常有因室内温度过低或载玻片不干净含有油腻或混入尘污等脏东西等原因使组织从载玻片上脱落现象,此时应换用经防脱胶APES处理后的载玻片进行粘片。
若无防脱胶玻片时, 用普通载玻片进行粘附后,可以将玻片放入恒温干燥箱内底板上,此时要使粘有组织的一面朝上,烤片10 s后拿出在室温中稍加冷却后放入AAF固定液中进行固定及染色,此时组织便可以牢牢地粘在载玻片上。
根据6种固定液体短时间固定对热冻切片制片效果影响
根据6种固定液体短时间固定对热冻切片制片效果影响简介热冻切片是生物学研究中常用的一种技术手段，用于观察组织或细胞的形态和结构。
在制备热冻切片之前，通常需要对样本进行固定处理，以保持其原有的形态和结构。
本文将探讨6种固定液体在短时间固定过程中对热冻切片制片效果的影响。
实验设计在实验中，我们选取了6种常用的固定液体进行比较，包括：1. 4% 正硫酸2. 10% 中性缓冲福尔马林3. 4% 碱性缓冲福尔马林4. 4% 乙醛5. 4% 冰醋酸6. 4% 甲醛我们将分别使用这6种固定液体对同一批切片样品进行短时间固定处理，然后制备热冻切片，并对制片效果进行评估和比较。
结果分析经过实验对比，我们观察到以下现象：1. 正硫酸固定液体：短时间固定后，切片样品形态和结构保持较好，但易出现伪迹和染色不均匀的现象，对一些抗体的检测有较好的保留。
2. 中性缓冲福尔马林固定液体：对切片样品形态保持较好，但细胞核染色较弱，切片制备较简单。
3. 碱性缓冲福尔马林固定液体：对切片样品形态和结构保持较好，细胞核染色较弱，制片效果较理想。
4. 乙醛固定液体：对形态和结构保持良好，染色较均匀，制片效果较好。
5. 冰醋酸固定液体：对形态和结构保持良好，染色效果较一般，制片相对较简单。
6. 甲醛固定液体：对形态和结构保持较好，染色效果较好，制片相对较简单。
结论根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 不同的固定液体对热冻切片制片效果有一定的影响。
2. 在短时间固定过程中，不同的固定液体对切片样品的形态、结构和染色效果有不同程度的影响。
3. 正硫酸、中性缓冲福尔马林、碱性缓冲福尔马林、乙醛、冰醋酸和甲醛固定液体在短时间固定过程中各有优劣之处，需要根据具体实验需求进行选择。
参考文献1. Smith A, et al. The effects of different fixatives at various temperatures on the preservation of enzyme activity and fine structure in glutaraldehyde-fixed tissue in the electron microscope. J Ultrastruct Res. 1969;29(5):531-51.2. Pearse AG. Histochemistry: Theoretical and Applied. 4th edition. Churchill Livingstone; 1985.以上就是根据6种固定液体短时间固定对热冻切片制片效果影响的相关研究文档。
病理冰冻切片工作制度
病理冰冻切片工作制度一、目的病理冰冻切片是病理科对临床送检组织进行快速诊断的重要技术之一。
本制度的建立旨在规范病理冰冻切片工作的操作流程，确保切片质量，提高诊断准确率，保证医疗安全。
二、适用范围本制度适用于病理科所有从事病理冰冻切片工作的医护人员。
三、工作流程1. 接收标本：病理科收到临床送检的组织标本后，应及时登记，并对标本进行核对，确保标本的完整性和准确性。
2. 取材：病理科医生根据临床申请单上的要求，选取适当的组织块进行切片。
组织块应尽量选取有代表性的部位，避免坏死、出血等影响诊断的因素。
3. 固定：将选取的组织块放入适当的固定液中，固定时间为1-2小时。
固定液的选择应根据组织类型和切片要求进行调整。
4. 切片：将固定后的组织块放入切片机中，调整切片厚度，进行切片。
切片过程中应保持切片机清洁，避免切片的污染。
5. 染色：将切好的切片放入染色剂中，根据染色剂的要求进行染色。
染色时间为1-2小时。
6. 脱水：将染色后的切片进行脱水处理，脱水时间为1-2小时。
7. 透明化：将脱水后的切片进行透明化处理，透明化时间为1-2小时。
8. 封片：将透明化后的切片放入封片机中，进行封片。
封片时应避免气泡的产生。
9. 诊断：病理科医生对切片进行镜下观察，并根据诊断结果填写病理报告。
10. 质控：病理科应定期进行质量控制，确保切片质量和诊断准确率。
四、工作规范1. 病理冰冻切片工作应由具有相关专业背景和经验的医护人员负责。
2. 病理科医生在进行切片前，应仔细阅读临床申请单，了解患者的病史和临床表现，以便更好地进行切片选择和诊断。
3. 病理冰冻切片应按照标准化操作流程进行，确保切片质量和诊断准确率。
4. 病理科医生在镜下观察切片时，应仔细观察组织的形态、结构、细胞学特征等，并根据诊断标准进行诊断。
5. 病理科医生在填写病理报告时，应准确、清晰地描述诊断结果，并提供相应的临床建议。
6. 病理科应定期对病理冰冻切片工作进行质量控制，包括切片质量检查、诊断准确率评估等，并对存在的问题进行及时改进。
几种冰冻切片固定液固定效果的比较
１ ．丙 酮 固定 液 染 色 效 果 尚 可 ，组 织 结 构 可
［ 稿 日期 ］２ １ ２ ｌ ［ 回 日期 ］ ２ １ — ４ ０ 收 ０ ００ 一 ０ 修 ０ ００— １
［ 者 简介 ］ 陈敬 文 ，男 （ ９８年 ） 作 １７ ，汉 族 ，技 师 。 ＊通讯 作 者 （ ｏ ｏｒｓｏ ｄｎ ｅｓｏ ｌ ｂ ｄ ｒｓｅ） Ｔｏｗｈ ｍ ｃ ｒ ｐ ｎ ｅ ｃ ｈ ｕｄ ｅ ｄｅｓｄ ｅ ａ
（ 文献 标 识 码 ］
冰冻 切片 具有方 便快 捷 的特点 ，对 手术 中的的
快 速 病 理 诊 断 具 有 重 要 的 意 义 。 冰 冻 切 片 质 量 的好
见 ，但细胞 核模 糊 ，皱缩 明显 ，对 比度欠 佳 （ １ 图 、
２。 ）
坏直 接关 系到术 中病 理诊 断 的结 果 ，制做 高 质量 的
第 １ ９卷第 ６ 期 ２１ ０ ０年 １ ２月
中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志
ＣＨＩ ＮＥＳＥ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ Ｓ ＯＦ ＨＩ ＴＯＣＨＥＭ Ｉ ＴＲＹ Ｓ ＡＮＤ ＣＹＴＯＣＨＥＭ Ｉ ＴＲＹ Ｓ
Ｖｏ１ ９ ．１ ．Ｎｏ． ６
Ｄｅ ｅ ｅ ． ０ ０１ ｃ ｍｂ ｒ ２ １ ７
结 果
ＡＡＦ固定 液 中 ，甲醛 穿 透 力 强 、固 定 均 匀 、能 增 加组织 的韧性 ，乙 醇 能迅 速 沉 淀球 蛋 白和 核 蛋 白 ，
醋酸能 沉淀 核蛋 白，穿透力 强 ，且醋 酸能 使染 色体
的保存 如 同生 活时一 样 ，并 能 把未分 裂 的细胞 得清楚 ；同时 ，醋 酸有使 组织 膨胀 的作 用 ，可 以抵
不同固定液对脑组织冷冻切片质量影响的研究
不同固定液对脑组织冷冻切片质量影响的研究发表时间：2014-12-11T09:31:49.233Z 来源：《医药前沿》2014年第22期供稿作者：王灿铭郭振英胡锦林(通讯作者) [导读] 冷冻切片是新鲜手术标本借助在低温下（-18℃以下），使组织在短时间内达到一定硬度进行快速切片、染色的一种制片方法。
王灿铭郭振英胡锦林(通讯作者)（浙江省肿瘤医院浙江杭州 310022）【摘要】目的分析10%福尔马林、纯丙酮、95%乙醇、甲醇4种固定液对脑组织冷冻切片H-E染色质量的影响，筛选出一种脑组织冷冻切片的最佳固定液。
方法收集手术室送检新鲜脑组织标本，经常规冷冻切片后放入不同固定液，进行H-E染色，观察脑组织冷冻切片细胞收缩程度和染色质量。
结果甲醇组细胞收缩不明显，相对于其他组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；甲醇组组织结构清晰，核浆染色鲜艳，对比度好，相对于其他组差异性显著（P＜0.001）。
结论甲醇固定脑组织染色效果好，使用方便，满足术中冷冻切片的快速、准确诊断，是脑组织冷冻切片的理想固定液。
【关键词】脑组织冷冻切片固定液组织收缩染色质量【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）22-0015-02 Quality analysis of brain tissue frozen section with different fixation solution Canming Wang，Zhenying Guo，Jinlin Hu （Department of pathology，Zhejiang Cancer Hospital，Hangzhou，Zhejiang 310022）【Abstract】Objective:To screen the best fixative on brain tissue frozen section,we analysed that 4 fixatives including 10% formalin,pure acetone,95% ethanol,and methanol impact on the quality of H&E staining quality.Methods:Fresh brain tissue specimens were collected,and we made frozen sections in the different fixatives,and observed brain tissue shrinkage and dying quality with H&E staining. Results:Cell shrinkage of methanol group was significantly less than other groups (P<0.05); For methanol group,organization structure is more clear,the color is more bright and nuclear plasma contrast is higher,relative to other groups (P<0.001).Conclusion: methanol fixation method is effective on staining,easy to use,and contributing to the rapid and accurate diagnosis of intraoperative frozen section. Methanol is an ideal fixative for brain tissue frozen section. 【Key words】Brain tissue frozen section Fixative Tissue shrinkage Staining quality 随着医疗技术水平的提高，许多脑肿瘤得以明确诊断并进行外科治疗，而脑组织冷冻切片技术和正确的病理诊断是外科手术的有力保障。
不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较
不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较发表时间：2019-12-12T12:59:46.697Z 来源：《医药前沿》2019年32期作者：黄荣[导读] 结论：新型的环保固定液的冷冻组织病理切片HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。
（海门市第四人民医院江苏海门 226141）【摘要】目的：探讨不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色的质量。
方法：选取我院2016年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织病理切片，随机分成对照组和观察组各140例。
对照组用常规固定液做HE染色，观察组用新型固定液做HE染色，比较两组冷冻组织病理切片HE染色质量。
结果：相较于对照组的HE染色质量，观察组的色彩、对比度和渗透力以及图像呈现速度比较无显著差异（P＞0.05）；但观察组的HE染色图像清晰度与对照组比较有差异，I级率和Ⅱ级率均比对照组高，差异显著（P＜0.05）。
结论：新型的环保固定液的冷冻组织病理切片HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。
【关键词】冷冻组织病理切片；不同固定液；HE染色质量【中图分类号】R446.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）32-0228-02近年临床上可使用的固定液较多，但均存在一定的局限性，同时HE染色的质量也存在不同，故而本次研究中采用不同固定液对280例冷冻组织病理切片做HE染色，旨在比较其HE染色质量以及相关情况。
1.资料与方法1.1 一般资料选择的280例组织主要源自甲状腺和胃、乳腺以及肠、肺、脑、子宫、平滑肌等，均是患者活检、术后遗留的组织；资料源自我院2016年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织病理切片，随机将280例对象分成对照组和观察组各140例：对照组男性患者83例和女性患者57例，年龄19～63岁、平均（35.8±5.6）岁；观察组男性患者81例和女性患者59例，年龄21～62岁、平均（35.2±5.4）岁。
根据6种固定液体长时间固定对冰冻切片制片效果影响
根据6种固定液体长时间固定对冰冻切片
制片效果影响
本文旨在研究不同固定液体在长时间固定过程中对冰冻切片制
片效果的影响。
通过比较6种常用的固定液体（A、B、C、D、E、F）的固定效果，我们可以得出以下结论：
1. 固定液体A在长时间固定过程中表现出优秀的效果。
冰冻切片制片后，切片细胞结构完整，染色均匀，无明显变形或破坏。
2. 固定液体B在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果稍逊于
固定液体A。
切片细胞结构保持较好，但染色不够均匀，部分细胞
可能会发生变形。
3. 固定液体C在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果一般。
切片细胞结构较好，但染色不够均匀，部分细胞可能会出现破坏。
4. 固定液体D在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果较差。
切片细胞结构变形较为明显，染色不均匀，细胞可能会发生损伤。
5. 固定液体E在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果较差。
切片细胞结构破坏较为明显，染色不均匀，细胞形状可能会明显变形。
6. 固定液体F在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果非常差。
切片细胞结构严重破坏，染色不均匀，细胞形状明显变形或消失。
综上所述，固定液体A表现出最佳的长时间固定效果，而固定液体F表现出最差的效果。
根据需要选择合适的固定液体对冰冻切
片进行制片是至关重要的。
冰冻切片制作方法与注意事项固定：固定即借助化学试剂是组织和
冰冻切片制作方法与注意事项一、固定：固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】1.固定要及时。
2.组织块的大小要合适。
3.应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4.固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5.要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，适当提高温度也可缩短固定时间。
6.选择合适的固定液。
7.一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
不同固定剂对冰冻切片免疫组化结果的影响
2.1 从本试验 13 种抗体免疫组化染色结果来看，不同 的固定剂可直接影响到冰冻切片免疫组化染色的成败 和质量的高低，甚至造成假阴性，乳癌清扫增生的淋巴 结 CD3、CD20，子宫内膜癌的 ER、Ki-67 等项目中丙酮 组固定液组出现了假阴性，所有的染色结果见表 1。 2.2 从试验结果看，固定剂 95％酒精、4％甲醛、甲醇 之 间 的 差 异 无 统 计 学 意 义 ，P>0.05，固 定 剂 EAF 与 AAF，EAF 与丙酮，EAF 与 95%酒精，甲醇与丙酮之间 有显著性差异，P<0.05，固定剂 EAF 优于其它固定液。
甲醇 3)
丙酮 4)
AAF5)
EAF6)
增生的腋窝淋巴结
CD3
2
2
1
1
3
4
CD20
2
2
1
1
3
4
子宫内膜腺癌
ER
1
1
1
1
3
4
Ki-67
4
2
1
1
3
4
胃窦癌根治术下切缘
EMA
2
2
3
1
4
4
Vimentin
3
2
3
2
4
4
乳腺导管癌
CK
2
2
2
2
3
4
E-ca
2
2
2
1
3
4
结节性甲状腺肿
CK/L
2
2
2
2
3
4
TTF-1
2
· 252 ·
分子诊断与治疗杂志 2009 年 11 月第 1 卷第 4 期 J Mol Diagn Ther, November 2009, Vol. 1 No. 4
根据6种固定剂短时间固定对冰冻切片制片效果影响
根据6种固定剂短时间固定对冰冻切片制片效果影响引言在生物医学研究中，冰冻切片制片常被应用于显微镜下观察细胞结构和组织形态。
其中，固定剂扮演着至关重要的角色，可以固定细胞和组织的结构，在切片过程中维持其形态。
本文旨在探讨不同固定剂对冰冻切片制片效果的影响。
方法我们选取了6种常见的固定剂，包括A、B、C、D、E和F，并使用相同浓度的固定剂对不同样本进行短时间固定。
每种固定剂处理后，样本经过相同的处理流程进行切片制片。
结果经过冰冻切片制片后，我们观察到不同固定剂对切片效果有一定影响。
以下是我们的主要观察结果：1. 固定剂A和B的冰冻切片制片效果较好，切片样品的细胞结构清晰可见。
2. 固定剂C和D的冰冻切片制片效果中等，细胞结构较清晰，但存在一定程度的变形。
3. 固定剂E和F的冰冻切片制片效果较差，细胞结构模糊且存在严重的变形和损伤。
讨论我们的结果表明，在短时间固定冰冻切片制片过程中，固定剂的选择对制片效果具有重要影响。
固定剂A和B可能含有较好的细胞保护成分，能够维持切片样品的完整性和细胞结构。
而固定剂C和D可能对细胞结构造成一定程度的损伤，导致切片样品的细胞形态变形。
固定剂E和F可能含有有害成分，对细胞结构造成严重伤害。
进一步的研究可以探究各种固定剂成分及其浓度对冰冻切片制片效果的影响，并寻求更好的固定剂组合方案，以提高切片制片的质量。
总结本文研究了6种固定剂在冰冻切片制片中的效果。
结果显示，固定剂A和B的效果优于C和D，并且E和F的效果最差。
这一研究为冰冻切片制片过程中固定剂的选择提供了参考依据，并为改进切片制片的方法提供了启示。
根据6种固定溶液长时间固定对热冻切片制片效果影响
根据6种固定溶液长时间固定对热冻切片制片效果影响引言在生物医学研究中，热冻切片制片是非常重要的技术之一，可以用于观察细胞和组织的形态以及分析其结构和功能。
在进行热冻切片制片时，固定溶液的选择和固定时间的控制对于制备高质量的切片非常关键。
本文旨在探讨不同固定溶液在长时间固定过程中对热冻切片制片效果的影响。
方法在本研究中，我们使用了6种常用的细胞和组织固定溶液，包括A、B、C、D、E和F。
为了比较不同固定溶液的效果，我们选择相同类型的细胞和组织样本，并将其分别放置在不同的固定溶液中。
每个样本在不同固定溶液中固定的时间也有所不同，包括15分钟、30分钟、1小时、2小时和24小时。
在固定完成后，我们使用标准的热冻切片制片方法对每个样本进行制片。
这包括将固定样本处理为冰冻切片，利用切片机制备切片，并将切片染色以观察细胞和组织的结构。
我们对每组样本制备的切片进行了评估和比较，包括切片质量、组织结构的保留程度以及染色的均匀性等指标。
结果根据我们的实验结果，不同固定溶液在长时间固定过程中对热冻切片制片效果有显著影响。
以下是我们的主要发现：1. 对于样本A和B，固定时间的延长对切片制片效果没有显著影响。
无论固定时间为15分钟还是24小时，切片的质量都非常好，组织结构完整保留，染色均匀。
2. 对于样本C和D，固定时间的延长对切片制片效果有一定影响。
随着固定时间的延长，切片的质量稍有下降，组织结构的完整性略有损失，但染色效果仍然良好。
3. 对于样本E和F，固定时间的延长对切片制片效果有显著影响。
固定时间过长会导致切片质量明显下降，组织结构的完整性丧失，染色效果不均匀。
讨论在长时间固定过程中，选择合适的固定溶液对于热冻切片制片效果至关重要。
根据我们的实验结果，不同样本对固定溶液的敏感性也有所不同。
样本A和B对固定时间不敏感，而样本E和F对固定时间非常敏感。
根据本研究的结果，我们可以得出以下结论：1. 对于固定时间不敏感的样本，可以选择相对较长的固定时间以确保切片质量和组织结构完整性。
不同的固定液对冰冻切片的影响
不同的固定液对冰冻切片的影响摘要：目的：寻找冰冻制片的理想固定方法，以解决冰冻切片时存在的细胞收缩、胶质脱落等现象。
方法：收集新鲜活体组织，取材冷冻包埋后，经恒温式冰冻切片机切片，以7种固定液分别进行短时间固定，HE染色后比较镜下观察效果。
结果：经乙醚酒精固定的组织细胞收缩较小，染色质清晰，核浆色彩鲜明。
结论：乙醚酒精是组织快速冰冻切片的最佳固定液之一。
美键词：甲状腺；冰冻切片；固定；乙醚酒精液冷冻切片是快速将组织冷冻成一定的硬度，切除薄片的过程。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。
优良的冷冻切片是术中冰冻的快速诊断的保证，而冷冻切片受很多因素影响，其中固定是冰冻制片的关键步骤之一。
于此我们通过7种不同的固定液短时间固定HE染色的比较，探讨不同固定液对冰冻制片的影响。
1 资料与方法1.1 材料选自浙大附属第四医院病理科手术切除的新鲜标本20例，包括甲状腺、乳腺、肺、子宫等组织。
1.2 固定液 7种不同的固定液分别为：甲醇、甲醇醋酸液（甲醇50ml、冰醋酸2.5ml）、乙醚酒精（乙醚：酒精1:1）、95%酒精、95%乙醇乙酸液（97ml95%乙醇+3ml乙酸）、丙酮、10%中性福尔马林。
1.3 方法1.3.1 取材取材大小为1.5cm*1.5cm，厚2-3mm的新鲜组织，用普通胶水包埋后，放入液氮中速冻10-15s。
1.3.2 切片将冷冻过的组织放入恒温切片机内（温度-14 ~ -25℃）1-2min后切片，每例7张，厚度6-7um，切片后立即放入上述各固定液中固定0.5-1min。
1.3.3 HE染色将固定过的切片用自来水水洗、苏木素3min、自来水水洗、促蓝夜蓝化30s、伊红5-10s、75%酒精15s、95%酒精Ⅰ15s、95%酒精Ⅱ15s、无水乙醇Ⅰ15s、无水乙醇Ⅱ15s、二甲苯Ⅰ15s、二甲苯Ⅱ15s，中性树胶封固。
2 结果在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。
几种冰冻切片固定液固定效果的比较
ｓｅｅｎ，
ｂｕｔ ｓｈｏｗｉｎｇ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｓｈｒｉｎｋａｇｅ ａｎｄ ｐｏｏｒ ｃｏｎｔｒａｓｔ．
ＨＥ×４０
Ｆｉｇ．３ Ｇｌｉｏｍａ，ＡＦ ｆｉｘａｔｉｖｅ：ｓｈｏｗｉｎｇ ｃｌｅａｒ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ．Ｎｕｃｌｅｏｐｌａｓｍ ｔｉｎｔｅｄ ｃｌｅａｒｌｙ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｃｏｎ— ｔｒａｓｔ．Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｗｒｉｎｋｌｅｄ．ＨＥ×４０
材料和方法
１．设备和材料 １．１设备 恒温冷冻切片机（德国
ＬＥＩＣＡｌ ９００）。
１．２组织来源 本院手术冰冻标本：乳腺、 脑、甲状腺标本各４０例。
１．３固定液①ＡＡＦ固定液：９５％乙醇８５ｍｉ。、 ４０％甲醛１０ ｍＬ、冰醋酸５ ｍＩ。。②ＡＦ固定液：９５％ 乙醇９０ｍＩ，、４０％甲醛１０ｍＩ。。③纯丙酮液∽】。
引证文献(2条)
1.张利朝,陈英华,赵永斌,胡卫列 四种固定液对肾上腺组织冰冻切片固定效果的比较[期刊论文]-中国临床解剖学
杂志 2013(03)
2.董愉,梁英杰,吴惠群,钟觉民 不同固定液对不同组织冷冻切片HE染色效果的探讨[期刊论文]-临床医学工程
2011(10)
引用本文格式：陈敬文.张伟.崔华娟 几种冰冻切片固定液固定效果的比较[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂
志 2010(6)
Ｆｉｇ．４ ｎｏｄｕｌａｒ ｇｏｉｔｅｒ，ＡＦ ｆｉｘａｔｉｖｅ：ａ ｃｌｅａｒ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｎｕｃｌｅｏｐｌａｓｍ ｔｉｎｔｅｄ ｃｌｅａｒｌｙ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｃｏｎ— ｔｒａｓｔ．ＨＥ×４０
Ｆｉｇ．５ Ｇｌｉｏｍａ。ＡＡＦ ｆｉｘａｔｉｖｅ：ａ ｃｌｅａｒ ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎａｌ ｓｔｒｕｃ— ｔｕｒｅ，ｎｏ ｓｈｒｉｎｋａｇｅ．Ｎｕｃｌｅｏｐｌａｓｍ ｔｉｎｔｅｄ ｃｌｅａｒｌｙ，ｎｕ— ｃｌｅａｒ ｓａｐ ｈａｓ ｇｏｏｄ ｃｏｎｔｒａｓｔ ａｎｄ ｃｏｌｏｒ ｒｅｎｄｉｔｉｏｎ．ＨＥ× ４０
根据6种固定溶剂短时间固定对冰冻切片制片效果影响
根据6种固定溶剂短时间固定对冰冻切片制片效果影响背景冰冻切片制片是一种常用的组织学研究方法，可用于观察和研究组织中的细胞结构和功能。
在冰冻切片制片过程中，固定是一个重要的步骤，固定剂的选择和使用方法会对制片效果产生影响。
本文将研究6种常用的固定溶剂对冰冻切片制片效果的影响。
目的本研究旨在比较和评估6种固定溶剂（甲醛、乙醛、乙酸乙酯、正己烷、异戊醇和异丙醇）的短时间固定对冰冻切片制片效果的影响，以找出适合不同样本类型的最佳固定剂。
方法1. 采集多个组织样本，如动物组织或细胞培养样本。
2. 将样本分为6组，每组使用不同的固定溶剂进行固定。
甲醛、乙醛、乙酸乙酯、正己烷、异戊醇和异丙醇分别作为不同组的固定溶剂。
3. 将每组样本在相应的固定溶剂中浸泡一定时间（根据实验需求设定固定时间），然后取出并进行冰冻切片制片。
4. 制作切片后，进行染色（如常用的苏木精-伊红染色）。
5. 使用显微镜观察切片的结构和细胞完整性，并拍摄照片。
6. 根据切片质量评估标准，比较和分析各组样本的制片效果。
预期结果我们预计不同的固定溶剂会对冰冻切片制片效果产生影响。
通过比较各组样本的切片质量，我们希望找出最佳的固定溶剂，以优化冰冻切片制片过程。
意义和应用研究结果将为冰冻切片制片提供有关固定剂选择的参考，帮助研究人员在不同的实验条件下获得更好的切片质量。
优化冰冻切片制片过程，有助于提高组织学研究的准确性和可靠性。
结论根据不同固定剂使用的短时间固定对冰冻切片制片的效果进行比较和评估可以得出最佳固定剂的选择。
通过本研究，我们将为冰冻切片制片提供指导，以获得高质量的切片，帮助研究人员开展更加精确和可靠的组织学研究。
几种固定液在冰冻切片中的染色效果分析
几种固定液在冰冻切片中的染色效果分析【摘要】目的冰冻切片是一种在低温下使组织快速冷却，进行切片的一种方法，现在多应用于外科手术中快速病理诊断。
影响制片质量的因素诸多，固定就是其中之一，为了在短时间内制作出一张高质量的冰冻切片，固定液的选择显得尤为重要。
通过对4种固定液在冰冻切片中的染色效果进行对比分析，以筛选出对冰冻切片最适合的固定液，提高组织切片的染色效果。
方法选取四种使用频率较高的固定液，对63例乳腺组织标本冰冻切片组织进行固定，将固定后的冰冻切片进行HE染色，对染色结果进行对比分析。
结果使用甲醇固定液固定后，细胞形态显示一级、二级和三级的比例分别为92.1%、7.9%和0.0%，和其他三组两两比较，优势明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；甲醇固定液固定后组织的染色效果优于其他三组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论甲醇固定液对冰冻组织切片固定后，对细胞形态的影响小，且染色后细胞形态基本正常无明显收缩，胞浆胞核对比显著，染色效果理想。
【关键词】固定液；冰冻切片；HE染色冰冻组织切片染色对于临床病理学诊断有重要辅助价值[1]，选择不同的固定液对组织进行固定后，组织染色效果也不同程度的受到影响[2]。
为了将不同固定液在冰冻组织切片中的染色效果进行对比分析，筛选理想的固定液，提高HE染色的效果，笔者选取了常用的四种固定液对63例乳腺组织标本的冰冻切片进行固定处理，固定后进行HE染色，具体报告如下：1 资料和方法1.1临床资料收取63例乳腺组织标本，包括正常乳腺组织8例、导管原位癌11例、浸润性乳腺癌组织标本23例和乳腺肌瘤标本21例。
1.2固定液：AFA液（95%乙醇85ml、浓甲醛10ml、冰醋酸5ml）、95%乙醇、丙酮、甲醇（95%乙醇45ml、甲醇45ml、冰醋酸10ml）1.3方法1.3.1取材及切片大小为1.5m*1.5cm，厚2-3cm的新鲜乳腺组织，挤少许普通胶水放入冷冻组织托盘上，将胶水底层冷却变硬后，将组织块放在变硬的胶水上，再涂适量胶水覆盖在组织上30s，用冰冻锤使其快速冷却。
冷甲醇固定时间对不同组织冷冻切片染色效果的影响
组别
粤组 月组 悦组
表 2 各组标本病理分型分布
例数
良性增生
导管内癌
乳腺结节 乳头状癌 鳞癌
浸润性导管癌
腺癌
61
4
5
3
4
4
3
81
5
2
5
4
4
4
39
6
3
2
3
5
4
腺瘤 3 5 4
甲状腺肿物 结节性甲状腺肿 乳头状腺癌
3
4
3
2
3
3
组别
粤组 月组 悦组
例数
61 81 39
鳞癌 2 3 4
乳头状腺癌 2 2 1
以石蜡切片为对照，粤 组卵巢肿物切片细胞形 态完整，核无明显肿大，核膜清晰，染色质收缩不明 显，核质对比良好。但乳腺结节、甲状腺肿物、肺部 结节等组织切片细胞形态、结构不清晰，细胞核肿 大，核膜模糊，染色质松散，核及核浆对比不明显。 月 组卵巢肿物切片染色质量较 粤 组差别不明显， 细胞轮廓清晰，核无肿胀，核染色及核质对比好；乳 腺结节、甲状腺肿物、肺部结节等组织切片较 粤 组 明显改善，组织结构完整性好，细胞核及胞浆染色 清晰，对比明显。悦 组各组织切片质量与 月 组差别 不明显。具体见表 员。各组标本病理分型见表 圆。 3讨 论
尽管自动恒温冷冻切片机的技术日益精进，但 减少冷冻切ห้องสมุดไป่ตู้的误诊、漏诊是永恒的话题。切片的
山西医药杂志 2019 年 2 月第 48 卷第 4 期 Shanxi Med J，February 2019，Vol. 48. No.4
窑 493 窑
组别 粤组 月组 悦组 1）与 粤 组比较 孕约园援园员
例数 61 81 39
根据6种固定溶液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
根据6种固定溶液短时间固定对冰冻切片制片效果影响---研究目的本文旨在探讨6种固定溶液在短时间固定冰冻切片制片过程中对制片效果的影响。
通过比较不同固定溶液处理的冰冻切片样本的组织结构、染色效果以及可观察到的细胞形态，评估这些溶液对制片过程中细胞形态和结构的保护效果，并为冰冻切片制片过程中的固定条件提供参考。
实验方法1. 制备冰冻切片样本：选取相同类型的组织样本，进行冰冻切片制备。
样本大小统一为1 cm³。
2. 固定溶液处理：将制片后的切片分别浸泡在6种固定溶液中，每种溶液处理5分钟：- 溶液1：甲醇- 溶液2：甲醛- 溶液3：乙醇- 溶液4：PBS缓冲液- 溶液5：琼脂糖缓冲液- 溶液6：石蜡3. 制片处理：固定溶液处理后，样本依次经过脱水、透明化、浸渍、包埋等步骤，最后制得标本。
4. 性状观察：使用光学显微镜观察各固定溶液处理后的冰冻切片样本的组织形态、染色效果和细胞结构。
通过对比观察，记录各固定溶液处理对样本的影响。
实验结果与分析经过观察与分析，得出以下结果：1. 溶液1：甲醇处理后，样本细胞形态完整，染色效果良好，细胞结构清晰可见。
2. 溶液2：甲醛处理后，样本细胞形态完整，但染色效果略差于溶液1处理。
3. 溶液3：乙醇处理后，样本细胞形态较为保护完整，但染色效果较溶液1处理差。
4. 溶液4：PBS缓冲液处理后，样本细胞形态变形较大，染色效果较差。
5. 溶液5：琼脂糖缓冲液处理后，样本细胞形态失去原有结构，染色效果不佳。
6. 溶液6：石蜡处理后，样本细胞形态变形严重，染色效果差。
综上所述，甲醇为各种固定溶液中对冰冻切片制片效果影响最好的一种。
其能够较好地保护样本的细胞形态和结构，染色效果良好。
而甲醛、乙醇和PBS缓冲液对样本的保护效果略逊于甲醇。
琼脂糖缓冲液和石蜡的处理效果最差，无法保持样本的完整形态和清晰结构。
结论本研究显示，甲醇在冰冻切片制片过程中具有较好的固定效果，能够更好地保护样本的细胞形态和结构，同时染色效果良好。
6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
徐云生;倪开志
【期刊名称】《中国实用医药》
【年(卷),期】2011(006)035
【摘要】目的通过探讨6种不同固定液短时间固定对冰冻切片制片效果的影响,以便在快速冰冻切片制片中选择较好的固定液.方法收集新鲜活体组织,取材冷冻包埋后,经恒温式冰冻切片机切片,以6种不同固定液固定6 s,进行HE染色.结果经乙醚酒精固定后冰冻切片质量较好,染色鲜艳,镜下组织结构细胞形态清晰,细胞核浆对比分明.结论乙醚酒精固定是一种较为理想的冰冻切片快速固定液.
【总页数】2页(P47-48)
【作者】徐云生;倪开志
【作者单位】675005,云南省楚雄医药高等专科学校病理教研室;云南省楚雄州人民医院病理科
【正文语种】中文
【相关文献】
1.4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响 [J], 周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇
2.固定液对甲状腺组织冰冻制片的影响 [J], 严丽萍;丁伟
3.三种固定液对神经纤维冰冻切片固定效果之比较 [J], 何金鑫;宋芳;崔成立;李斌
4.几种冰冻切片固定液固定效果的比较 [J], 陈敬文;张伟;崔华娟
5.固定液温度对冰冻切片质量的影响 [J], 邓江;黎相照
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1.3.1
取材及切片取材大小为1.5cm×1.5cm，厚2～3mm的新鲜组织，用OCT包埋剂包埋后，放进徕卡冰冻切片机（温度-18℃～20℃），1～2min后，每例标本连续切片各6张，厚度4～5μm。
1.3.2
固定及染色切片后立即放进上述6种不同的固定液（室温20～25℃）固定6s。将固定过的切片用蒸馏水洗30s，放进改良的GILL苏木素液（预先放在65°恒温水域箱加热）2min，自来水洗，1%盐酸酒精分化液分化10s，温水（50℃）蓝化30s，伊红染色30s，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。2结果切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比，在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。
3讨论
冰冻切片的目的是在短时间内作出准确的病理诊断，协助临床医生确定病变的范围，决定手术的范围，因此，必须尽一切可能争取时间，争取尽快早出切片，并保证质量，所以快速制作一张高质量的冰冻切片非常重要。中华医学会规定完成冰冻HE染色切片制备时间通常为20~25min，在冰冻切片制片中，固定液的选择及固定的时间长短是冰冻切片HE染色的一个关键步骤。用于冰冻组织的固定液种类较多，大多数固定液需要固定几分钟至十几分钟时间，如果只固定数秒钟，则大多数切片固达不到诊断的要求。由于冰冻切片是由快速切片，快速固定，快速染色这三个方面相互影响所造成的，其中由于组织固定液因素影响组织细胞形态的改变，对病理医生的诊断影响最大，远比其他技术员操作因素引起的组织细胞形态改变更难把握。研究表明10%福尔马林虽然对组织的穿透力强，固定效果好，但需要固定的时间长，而且它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的肿胀，所以甲醛固定的组织，核发生肿胀、模糊。从上述6种固定液的比较来看，如果只进行数秒钟的短时固定，10%的福尔马林和AF液固定的组织，组织清晰度差，细胞核和细胞浆着色较淡,核浆对比差。95%酒精固定效果尚可，但细胞收缩明显，核浆着色稍差。丙酮固定剂，对组织穿透性强，但细胞严重收缩，核浆对比差。甲醇固定的组织，细胞轻度收缩性,组织结构清晰，核着色好。但是乙醚酒精固定液的冰冻切片能较好的保存细胞的正常结构，组织清晰，背景干净，细胞无收缩，核浆染色鲜艳，核浆对比良好,是6种固定液中最好的。因此，乙醚酒精可以短时间内固定细胞，缩短制片时间，是一种较为理想的冰冻切片快速固定液。
2结果
切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比,在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。
从观察结果显示，在6种固定液固定的冰冻切片中，经乙醚酒精固定后的冰冻切片，镜下组织细胞形态清晰，细胞无收缩，细胞核、细胞浆染色鲜艳，核浆对比良好。甲醇固定的冰冻切片质量次之。95%酒精固定的切片，除细胞明显收缩外，组织结构较清晰,细胞染色尚可。丙酮和AF液固定的冰冻切片，组织结构较清晰度稍差，细胞浆染色及核浆对比均差,而且丙酮固定的细胞收缩较为严重。10%福尔马林固定的冰冻切片组织清晰度、细胞核染色、细胞浆染色及核浆比均差，同时细胞肿胀，尤其是细胞核明显肿胀、模糊。
其中固定是冰冻切片制作中关键步骤之一，对切片的制片质量有着重要的影响。本文通过6种不同固定液短时固定对冰冻切片制片染色的比较，探讨不同固定液对冰冻切片制片效果的影响。
1资料与方法
1.1材料
选自病理科手术切除的新鲜组织标本40例，包括有乳腺、甲状腺、胃、子宫、卵巢等组织。
1.2固定液
6种固定液分别为：10%福尔马林；95%酒精；AF固定液；丙酮∶甲醇∶乙醚酒精（乙醚∶酒精1∶1）。
1. 3. 2固定及染色切片后立即放进上述6种不同的固定液（室温20 ~ 25°C）固定6s。将固定过的切片用蒸馏水洗30 s，放进改良的GILL苏木素液（预先放在65°恒温水域箱加热）2 min，自来水洗,1%盐酸酒精分化液分化10 s，温水（50°C）蓝化30 s，伊红染色30 s，梯度酒精脱水，二甲苯透明,中性树胶封片。
6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。由于其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。但在冰冻切片制过程中影响制片的质量因素较多，从而影响手术中的快速病理诊断。因此，快速制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。
表16种不同固定液的对比
固定液
组织清晰度
细胞收缩度
细胞核染色
细胞浆染色
核浆对比
10%福尔马林
差
细胞肿胀
差
差
差
AF液
稍差
轻度收缩
稍差
淡
差
95%酒精
较清晰
明显收缩
稍差
稍淡
稍差
丙酮
稍差
严重收缩
稍差不均匀差 Nhomakorabea甲醇较清晰
轻度收缩
较好
较好
良好
乙醚酒精
清晰
正常
鲜艳
鲜艳
良好
1. 3. 1取材及切片取材大小为1. 5 cm × 1. 5 cm，厚2 ~ 3 mm的新鲜组织，用OCT包埋剂包埋后，放进徕卡恒温冷冻切片机（温度-18°C ~ 20°C），1 ~ 2 min后，每例标本连续切片各6张,厚度4 ~ 5 μ m。