高压蒸汽灭菌柜验证中需注意的几个问题

高压蒸汽灭菌柜验证中需注意的几个问题

上海华中药业有限公司张清升河南濮阳457300

摘要：通过对高压蒸汽灭菌柜进行了再验证成功的基础上，提出了验证中的热分布、热穿透和微生物挑战性试验以及仪器、仪表的校验等需注意的几个问题，为进一步更好地做好灭菌柜的再验证工作指明了方向。

关键词：灭菌柜验证热分布热穿透微生物挑战性试验

Few Problem of Needs Consider of V alidation in the Autoclaves Shanghai Central China Pharmaceutical Co., Ltd.. Zhang Qing-sheng Henan Puyang 457300

SUMMARY:Passed to revalidation successful foundation to the autoclaves,put forward a validation in of heat distribute,Bowin-dick test,ACE-test and instrument calibrated etc.needs consider few problems,for further and betterly worked well to put out the revalidation of the autoclaves work to indicate a direction .

KEYWORD: Autoclaves V alidation Heat distribution Bowin-dick test ACE test

大容量注射剂的灭菌是关系到药品质量、保证用药安全的重要工艺步骤之一。所以《药品生产质量管理规范》（1988年修订）要求：5703条：关键设备及无菌药品的验证内容是否包括灭菌设备、药液滤过及灌装系统。我单位自从2000年申请大容量注射剂GMP证书以来，验证已成为日常主要活动。尤其进入2006年，药品生产工艺及其辅助设施的验证要求又明显提高。其中灭菌柜的验证已成为重中之重。原来灭菌柜的验证都是委托灭菌柜生产厂家或专业验证公司去做，导致验证经济成本升高。为了更好地做好日常灭菌柜验证的监测，我单位购进一套智能巡检仪及其配套的铂电阻Pt100，通过三个月的实际生产验证，分别进行了六个灭菌柜100ml规格24批次、500ml规格36批次、250ml规格12批次灭菌效果验证监测，其结果均能达到验证要求。同时也遇到了一些操作、技术上的问题，并且都一一解决。现将A号灭菌柜作为代表，其验证过程和结果报告如下：

1．仪器与试药

1.1仪器：PSM7200型卧式矩形水浴式灭菌柜（山东新华医疗器械股份有限公司），JCJ500B智能巡检仪及Pt100铂电阻（北京九纯健科技发展有限公司），HH数显恒温油浴锅（金坛市正基仪器有限公司），槽形冰浴锅（北京市光明医疗器械厂），电热恒温培养箱（天津市实验仪器厂）

1.2试药：规格为500ml∶50g玻瓶装葡萄糖注射液

1.3指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌ACTT7953，103CFU/支；批号：060707（上海鸿雍生物科技有限公司）

2.方法：

2.1仪器、仪表的校验：灭菌柜系统压力表、温度表已经过校验，校验结果合格。Pt100铂电阻探头分别在0℃、121℃、115℃校验，结果均符合规定，可以进行下一步的验证。

2.2热分布试验方法：由于是灭菌柜的再验证，直接采用满载热分布试验，根据探头分布图（见图1探头分布，表1探头位置），将16只铂电阻探头均匀分布在灭菌腔室内，正常生产灭菌，确定灭菌室内可能存在的冷点，并将试验连续进行三次，以检查其重现性。

图1 灭菌柜探头头分布位置图

表1铂电阻探头位置点

2.3热穿透试验方法：热穿透试验探头位置分布同热分布试验方法，检查灭菌过程热穿透力，用F 0值表示。

2.4生物指示剂试验：选用嗜热脂肪芽孢杆菌为生物指示剂进行微生物挑战试验。其操作与热穿透试验同时进行。把生物指示剂放入玻瓶内，并盖上盖。其放置位置按热分布结果平均温度比较低的位置，并与探头放在一起。运行结束后，将指示剂取出，立即送中心化验室于60℃培养48小时，并另取一支未经灭菌的生物指示剂一起培养，作为阳性对照。

3.结果：

3.1.灭菌柜系统校验结果：灭菌柜系统有关的压力表、温度表、标准水银温度计已经过校验，结果均符合规定。16只铂电阻探头在0℃、121℃、115℃校验，分别在0℃±0.2℃、121℃±0.3℃、115℃±0.3℃范围内波动，均符合规定。

3.2.热分布试验结果：运行程序进入灭菌阶段后，各点温度均在115.0℃-116.8℃之间，并能保持30min ，运行曲线如图2所示：运行结果总结如下：

第一次满载 柜号：A

16点平均温度：115.52 ℃ 冷点温度：115.1℃ 冷点位置： 1 与平均温度差值：0.42℃

冷点位置： 1 与平均温度差值：0.43℃

第三次满载柜号：A

冷点位置： 1 与平均温度差值：0.44℃

3.3.热穿透试验结果：热穿透试验结果中F0值均在8.92-10.90范围内，结果均符合规定。热穿透试验运行曲线如图3所示。

图2满载热分布运行曲线

图3热穿透试验运行曲线

热穿透结果总结如下：

第一次热穿透柜号：A

16点平均F0值：9.74 冷点F0值：8.92

冷点位置： 1 与平均F0值差值：0.82

冷点位置： 1 与平均F0值差值：0.91

第三次热穿透柜号：A

冷点位置： 1 与平均F0值差值：0.78

3.4.满载微生物挑战试验结果：运行过程同满载热穿透试验。其运行曲线如图3。灭菌结束以及在恒温箱培养后，嗜热脂肪芽孢杆菌均被杀死，而阳性对照均呈阳性。

5.讨论：

5.1.仪器、仪表及验证用智能巡检仪系统的校验：

验证前要进行灭菌柜系统所用压力表、温度表、温度计等的校验，并且结果合格。这是验证的前提条件。通常压力表可在本地区质量技术监督检验测试中心校验，并出具检定证书；温度计须在省级计量科学研究院校验，并出具检定证书；智能巡检仪器的校验及其Pt100铂电阻探头电阻值的校验，均须由其生产厂家校验并出具合格证书，并定期再校验。Pt100传感器是利用铂电阻的阻值随温度变化而变化，并呈一定函数关系的特性来进行测温，应选用具有抗振动、稳定性好、准确度高、耐高压的Pt100温度传感器。其探头的质量好坏是作好灭菌柜验证成功与否的关键。Pt100铂电阻探头在验证使用前和验证结束后均须先在0℃冰点槽中校验，后在121℃和115℃恒温油浴锅中校验，共使用16只铂电阻探头，误差均应在±0.5℃以内。探头阻值的温差可由智能巡检仪软件系统来校正。校验合格后，方可进行下一步的验证工作。

5.2.空载热分布试验：

空载热分布是指柜内不放任何玻瓶，只放空的灭菌车进入腔体，Pt100铂电阻探头须分布选择16个点，其中包括可能的高温度点（如蒸汽入口处）及低温度点（如冷凝水排放口），灭菌柜温度控制探头处也要放置，其余探头均匀分布腔室内，以使温度监测具有代表性。并画出探头分布图。注意：热电阻探头不能与灭菌车金属相接触。一般情况下，新购进灭菌柜初次使用前须做空载热分布，灭菌柜再验证可以不做这一项。张可畏等［1］实验后认为，湿热蒸汽灭菌柜设备不必做空载热分布测试。

5.3.满载热分布试验：

满载热分布是指按灭菌柜最大装载量把玻璃瓶放满灭菌车中，然后探头只放于瓶外，来测试瓶子周围的温度变化。验证过程中，灭菌柜还没有装载的情况下，16只温度探头从灭菌柜验证孔穿入后，验证孔要密封严密，防止漏气！同时，灭菌柜内的信号传输线要防止在装载灭菌车过程中擦伤、挂断。信号传输线要求外包装应为耐高温的聚四氟乙烯包皮，耐高温（≥200℃）、耐高压（≥0.25MPa），探头密封要严密，防止灭菌运行过程中高温、高压下水汽进入铂电阻内芯，进而影响温度测定，从而导致验证失败！灭菌时严格按照灭菌生产工艺操作进行，各个产品灭菌工艺参数均为115℃、30min；通过满载热分布不同规格、品种连续三批测定，确定装载热分布中的“最冷点”与“最热点”，为下一步热穿透验证提供