常见微生物培养基

常见微生物培养基

培养基 Medium 是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料 一般都含有碳水化合物、含氮

物质、无机盐 包括微量元素 以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。

按所用原料不同 可分为两类 应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的 称为天然培养基 应用化学药品配成并标

明成分的 称为合成培养基或综合培养基。化学试剂中的培养基 大多为合成培养基。由于液体培养基不易长期保

管 现在均改制成粉末。培养基由于配制的原料不同 使用要求不同 而贮存保管方面也稍有不同。一般培养基在

受热、吸潮后 易被细菌污染或分解变质 因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。对一些需严格灭菌的培

养基 如组织培养基 较长时间的贮存 必须放在2~6。C的冰箱内。

常见培养基有

1、细菌培养基

配方一牛肉膏琼脂培养基

牛肉膏0.3克 蛋白胨1.0克 氯化钠0.5克 琼脂 1.5克

水100毫升

在烧杯内加水100毫升 放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠 用蜡笔在烧杯外作上记号后 放在火上加热。待烧杯内各

组分溶解后 加入琼脂 不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水 用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH

值到7.2 7.6,分装在各个试管里 加棉花塞 用高压蒸汽灭菌30分钟。

配方二马铃薯培养基

取新鲜牛心 除去脂肪和血管 250克 用刀细细剁成肉末后 加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好

记号 煮沸 转用文火炖2小时。过滤 滤出的肉末干燥处理 滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升

肉汤和少量碎末状的干牛心 灭菌 备用。

配方三根瘤菌培养基

葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克

碳酸钙3克硫酸镁0.2克

酵母粉0.4克琼脂20克

水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升

先把琼脂加水煮沸溶解 然后分别加入其他组分 搅拌使溶解后 分装 灭菌 备用。

2、放线菌培养基

配方一淀粉琼脂培养基 高氏培养基

可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克

磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克

硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克

琼脂2克水100毫升

先把淀粉放在烧杯里 用5毫升水调成糊状后 倒入95毫升水 搅匀后加入其他药品 使它溶解。在烧杯外做好

记号 加热到煮沸时加入琼脂 不停搅拌 待琼脂完全溶解后 补足失水。调整pH值到7.2 7.4 分装后灭菌

备用。

配方二面粉琼脂培养基

面粉60克琼脂20克

水1000毫升

把面粉用水调成糊状 加水到500毫升 放在文火上煮30分钟。另取500毫升水 放入琼脂 加热煮沸到溶解后

把两液调匀 补充水分 调整pH值到7.4 分装 灭菌 备用。

3、真菌培养基

配方一萨市 Sabouraud’s 培养基

蛋白胨10克琼脂20克

麦芽糖40克水1000毫升

先把蛋白胨、琼脂加水后 加热 不断搅拌 待琼脂溶解后 加入40克麦芽糖 或葡萄糖 搅拌 使它溶解

然后分装 灭菌 备用。

本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。

配方二马铃薯糖琼脂培养基

把马铃薯洗净去皮 取200克切成小块 加水1000毫升 煮沸半小时后 补足水分。在滤液中加入10克琼脂

煮沸溶解后加糖20克 用于培养霉菌的加入蔗糖 用于培养酵母菌的加入葡萄糖 补足水分 分装 灭菌 备

用。

把这培养基的pH值调到7.2 7.4 配方中的糖 如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。

配方三黄豆芽汁培养基

黄豆芽100克琼脂15克

葡萄糖20克水1000毫升

洗净黄豆芽 加水煮沸30分钟。用纱布过滤 滤液中加入琼脂 加热溶解后放入糖 搅拌使它溶解 补足水分到

1000毫升 分装 灭菌 备用。

把这培养基的pH值调到7.2 7.4 可用来培养细菌和放线菌。

配方四豌豆琼脂培养基

豌豆80粒琼脂5克

水200毫升

取80粒干豌豆加水 煮沸1小时 用纱布过滤后 在滤液中加入琼脂 煮沸到溶解 分装 灭菌 备用。

4、食用菌菌种培养基

配方一马铃薯—蔗糖--琼脂培养基

20%马铃薯煮汁1000毫升

蔗糖20克琼脂18克

把马铃薯洗净去皮后 切成小块。称取马铃薯小块200克 加水1000毫升 煮沸20分钟后 过滤。在滤汁中补

足水分到1000毫升 即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖 煮沸 使它溶解后 补足水分 分

装 灭菌 备用。使用该培养基对pH值要求不严格 可以不测定。

配方二综合马铃薯培养基

20%马铃薯煮汁1000 毫升

磷酸二氢钾3克硫酸镁1.5克

葡萄糖20克维生素10毫克

琼脂18克

先配制20%马铃薯煮汁 方法同上。在煮汁中加入上述各种组分 加热溶解后补足水分 调整pH值到6。分装

灭菌 备用。该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。

5.烟草的培养基

在植物组织培养时,通过调节IAA和CTK的比值能影响愈伤组织分化出根或芽.CTK/IAA高时,愈伤组织分化芽

CTK/IAA低时,分化根;CTK/IAA比例适中维持愈伤组织不分化

愈伤组织诱导培养基制备

以MS培养基母液为基础,向洁净铝锅中顺序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,铁盐100×母

液20mL ,维生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS 培养基后,再加入0.5m

g·L-1的BA8mL,0.5mg·L-1的NAA8mL.然后加入实际配制培养基体积约2/3-3/4的蒸馏水,加入40g蔗糖后搅拌使

其溶化,用0.5mol·L-1的NaOH和0.5 mol·L-1的HCl调整pH值至5.8-6.0.加入14g琼脂,将铝锅置于电炉上,搅拌

加热使琼脂完全溶化,然后用蒸馏水定容至终体积2L,继续加热几分钟使之混合均匀后分装于三角瓶中.

烟草叶片愈伤组织诱导

取一无菌培养皿,用解剖刀切取1-2片无菌苗叶片置于无菌培养皿中,并用解

剖刀将叶片切成2mm2左右的小片,然后将其接种于准备好的培养基上,每瓶接种

5小片,一共接种6瓶.接种后的三角平置于24条件下黑暗培养1周,然后在同

样温度下有光照和全黑暗下培养3周直至愈伤组织形成(两种情况各置3瓶).观

察愈伤组织诱导结果,统计愈伤组织诱导率.

器官分化及植株再生培养

将诱导的愈伤组织按类型分别转入分化培养基上,置于连续光照,温度20-22 C条件下培养3周,统计愈伤组织再生植

株情况.

愈伤组织诱导的总体情况

烟草愈伤组织诱导培养4周后,愈伤组织基本形成,即排除因生长时间不够而

未形成愈伤的情况.具体情况见表一中所示,6瓶培养物均有愈伤形成,且都未发

生污染,但诱导率几乎各不相同.其中, 在光照条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为

60.0℅, 在黑暗条件下培养的3瓶平均愈伤诱导率为46.7%.由于实验过程中,外植

体即烟草叶片取得偏小,接种时可能已有部分外植体的大部分细胞脱水死亡,使整

个实验的愈伤组织诱导率偏低,愈伤块偏小.

特殊培养基

一选择性培养基

1酵母菌富集培养基