发酵工业培养基 ppt课件
发酵学 第3章 培养基
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3.粘度适中,具有适当的渗透压
4. 主产物合成达到最高速率,发酵后所形成的副产物尽可 能的少。
5.生产过程中既不影响通气与搅拌的效果,又不影响或少 影响产物的分离精制和废物处理。
6.大规模生产时要考虑材料的成本。
第二节
培养基的成分
碳源 氮源 无机离子 生长因子 前体 促进剂和抑制剂
水分
一、碳源
凡是用于构成微生物细胞和代谢产物中碳素的营养物 质均称为碳源。它既是构成菌体细胞和代谢产物的主要元 素,又是提供微生物生命活动中所需能源的原料。
维生素B12 钴化物
青霉素V 苯氧乙酸
链霉素 金霉素色氨酸 Nhomakorabea吲哚、氨茴酸
2-羟基-4-甲基硫代丁 酸 D-苏氨酸
肌醇、精氨酸等 蛋氨酸 氯化物等 异亮氨酸
红霉素
丙酸、丙醇等
苏氨酸
高丝氨酸
灰黄霉素 氯化物
六、产物促进剂
所谓产物促进剂是指那些非细胞生长所必须的营养物, 又非前体,但加入后却能提高产量的添加剂。
一些维生素生长因子及其生理功能
维生素 生理功能 维生素B1(硫胺素) 脱羧酶辅酶,与酮基转移有关 维生素B2(核黄素) 构成黄素单核苷酸和黄素腺嘌呤二核苷酸, 作为电子传递链中的递H体 维生素B3(泛酸) 维生素B5(烟酸) 辅酶A(CoA)的前体物质之一,递酰基体, 是细胞内多种酶的辅酶 又称尼克酸,是辅酶I,辅酶II的前体,参与 细胞内很多氧化还原反应
促进剂提高产量的机制:
有些促进剂本身是酶的诱导物; 有些促进剂是表面活性剂,可改善细胞的透性,改善 细胞与氧的接触从而促进酶的分泌与生产, 也有人认为表面活性剂对酶的表面失活有保护作用; 有些促进剂的作用是沉淀或螯合有害的重金属离子。
第三章 工业培养基
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所以选择合适的无机氮源有两层意义:
满足菌体生长
稳定和调节发酵过程中的pH
2、有机氮源
来源: 一些廉价的原料:花生饼粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、 玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕 蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟。
成分复杂:除提供氮源外,有些有机氮源还 提供大量的无机盐及生长因子,少量糖类、 脂肪。 例 玉米浆: ①可溶性蛋白、生长因子(生物素)、苯乙酸 ②较多的乳酸 ③硫、磷、微量元素等
例:地衣牙孢杆菌生产α-淀粉酶 碳源对生长和产酶的影响 碳源 葡萄糖 蔗糖 糊精 淀粉 细胞浓度(OD值) 4.2 4.02 3.06 3.09 α-淀粉酶 0 0 38.2 40.2
二、氮源
氮源主要用于构成菌体细胞物质(氨基 酸,蛋白质、核酸等)和含氮代谢物。 常用的氮源可分为两大类: 有机氮源和无机氮源
第二节 工业培养基的成分及来源
一、碳源 1、作用 a.提供微生物菌种的生长繁殖所需 的碳成分
b.提供合成目的产物所必须的碳成分
2、来源
糖类 油脂 有机酸 其他碳氢化合物
3、工业上常用的糖类
a. 葡萄糖 b. 糊精、淀粉及其水解物 c.糖蜜(蔗糖、乳糖、麦芽糖)
3、工业上常用的糖类 a. 葡萄糖 所有的微生物都能利用葡萄糖 工业上常用的葡萄糖由淀粉水解制备
1、无机氮源 种类:氨盐、硝酸盐和氨水
特点: 吸收快 引起pH的变化 如: (NH4)2SO4 → 2NH3 + 2H2SO4 NaNO3 + 4H2 → NH3 + 2H2O + NaOH
无机氮源被菌体作为氮源利用后,培养 液中就留下了酸性或碱性物质,这种经微生 物生理作用(代谢)后能形成酸性物质的无 机氮源叫生理酸性物质,如硫酸胺 若菌体代谢后能产生碱性物质的则此种 无机氮源称为生理碱性物质,如硝酸钠。正 确使用生理酸碱性物质,对稳定和调节发酵 过程的pH有积极作用。
发酵工程培养基
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糖蜜使用的注意点:
除糖份外,含有较多的杂质,其中有些是有用的, 但是许多都会对发酵产生不利的影响,需要进行预 处理。
例:谷氨酸发酵
有害物资:胶体成分(起泡、结晶)、钙盐(结 晶)、生物素(发酵控制)。
预处理:澄清→脱钙→脱除生物素 例:柠檬酸发酵 有害物质:铁离子含量高(导致异柠檬酸的生成)。 预处理:→黄血盐
但过多的初始葡萄糖会抑制微生物生长,引 起葡萄糖效应,这主要是葡萄糖的分解代谢 阻遏造成。
另外过多葡萄糖会过分加速菌体呼吸,以致 溶解氧不能满足需要,使一些中间代谢物积 累,pH下降,影响微生物生长和产物合成。
2.糖蜜 又称糖浆,俗称糖稀。
生物发酵工业所用的糖蜜,主要是指制糖工 业上的废糖蜜,它是甘蔗糖厂或甜菜糖厂的 一种副产品。
又如肠膜状明串珠菌的生长需要补充10种维 生素、19种氨基酸、3种嘌呤及嘧啶等。
2.前体
能直接结合到产物中,而自身结构没有多大 变化,但是产物产量却有较大提高。
青霉素:分子量356
苯乙酸:分子量136
如青霉素生产中,加入玉米浆,产量增加, 原因是玉米浆含有苯乙酸,被优先结合到青 霉素分子中去。
速效氮源。
无机氮源的迅速利用会引起pH的变化。 生理酸性物质:硫酸铵。 生理碱性物质:硝酸钠。
正确使用生理酸碱性物质,对稳定和调节发 酵过程的pH有积极作用。
氨水:
在发酵中除可以调节pH外,它也是一种容易 被利用的氮源,在许多抗生素的生产中得到 普遍使用。
氨水因碱性较强,因此使用时要防止局部过 碱,加强搅拌,并少量多次地加入。
铁:
发酵基础知识ppt课件
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相同搅拌功率下,三者的粉碎气泡的能力:
微观湍动
– 平叶>弯叶>箭叶
相同搅拌功率下,三者翻宏动观流翻体动 的能力:
– 平叶<弯叶<箭叶
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31 31
轴向式搅拌器 桨叶式 旋桨式
Lightnin式
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32 32
工厂多采用在同一搅拌轴上安装不同叶形 的搅拌器
HL ha
封
Hb
装料的液面高度
封头凸出部分的高度,标准椭圆 头有: ha =0.25D
封头直边高度,据壁厚一般取25、 40、 50mm
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24 24
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25 25
公称容积:V0
V0定义为:罐圆筒部分容积+底封头容积 能装液的体积
罐中实际装料体积:V 则有: v/v0=0.7-0.8, 即 装料系数
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39 39
7. 空气分布器
空气分布装置的作用是吹入无菌空 气,并使空气均匀分布。
分布装置的形式有单管及环形管等。
常用的分布装置是单管式,单管式 管口对正罐底中央,装于最低一挡
搅拌器下面,喷口朝下,管口与罐 低的距离约40mm
通常通风管的空气流速取20米/秒。
为了防止吹管吹入的空气直接喷击
进料管路有时配在罐体上封头,有时位于罐体下部与放料 管路共用一个管口
有时取样、放料、接种使用一个口
有没有蒸汽进口?
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44 44
实罐灭菌: “三路进汽”、 “非进即出”
– “三路进汽”就是在对培养基灭菌时,让蒸汽从空 气进口、排料口、取样口进入罐内,由于这三个管
都是插入到发酵醪中,若不进蒸汽就会形成灭菌死 角。
发酵工程第三章培养基
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培养基:广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长 繁殖 所需的一组营养物质和原料。同时培养基也为微
葡萄糖效应
这是大肠杆菌首先利用葡萄糖进展生长繁殖,在 葡萄糖耗尽后,过一段时间菌体才开场利用乳糖 再生长繁殖。后来的酶学试验证实,当葡萄糖存 在时,细菌不利用其他糖。在上述培养基中即使 参加乳糖酶诱导物,葡萄糖没耗尽,利用乳糖的 酶系也不能合成。
葡萄糖效应是由葡萄糖的某种分解代谢物引起的, 这种代谢物阻遏了细菌能够利用其他糖的酶的生 成。
气搅拌性能以及发酵产物的后期处理。
3.1 发酵工业培养基的根本要求
必须提供合成微生物细胞和发酵产物的根 本成分;
有利于减少培养基的单耗,即提高单位营 养物质的转化率;
有利于提高产物的浓度,以提高单位容积 发酵罐的生产能力;
有利于提高产物的合成速度,缩短发酵周 期;
尽量减少副产物的形成,便于产物的别离 纯化,并尽可能减少产生“三废〞物质;
次参加,并强强搅拌; 二是氨水中含有多种嗜碱性微生物,因此在使用前要用石棉等
过滤介质进展过滤除菌,防止因通氨而引起的染菌。
毛霉产蛋白酶的研究
陈涛,中国酿造,2004
初始pH的影响: pH偏酸比较好,中性蛋白酶影响大
无机氮源的影响: 硫酸铵>硝酸铵>硝酸钠>尿素
2、有机氮源
来源:工业上常用的有机氮源都是一些廉价的原料,花生饼 粉、黄豆饼粉、棉子饼粉、玉米浆、玉米蛋白粉、
发酵工业培养基设计 (2)
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第三节 发酵培养基的成分及来源
一、碳源
1、作用
提供微生物菌种的生长繁殖所需的能源和合成菌体所必需 的碳成分 提供合成目的产物所必须的碳成分
2、来源
糖类、油脂、有机酸、正烷烃
3、工业上常用的糖类
① 葡萄糖 所有的微生物都能利用葡萄糖 但是会引起葡萄糖效应
工业上常用淀粉水解糖,但是糖液必须达到一定的
①富含有机氮源,少含或不含糖分。有机氮有利于菌体
的生长繁殖,能获得更多的细胞。
②对于放线菌或霉菌的产孢子培养基,则氮源和碳源不
宜太丰富,否则易长菌丝而少形成孢子。
③斜面培养基中宜加入少量无机盐类,供给必要的生长 因子和微量元素。
种子培养基特点
– 营养丰富完全,氮源和维生素等生长因子的含量高些; – 供孢子萌发的培养基中,加入一些易于吸收利用的C、N 源,便于孢子发芽生长; – pH要稳定; – 最后一级尽可能接近发酵培养基,常加入少量发酵合成
有机氮源成分复杂,可以从多个方面
对发酵过程进行影响,而另一方面有机氮
源的来源具有不稳定性。所以在有机氮源
选取时和使用过程中,必须考虑原料的波
动对发酵的影响
氮源使用的一些相关问题:
有机氮源和无机氮源应当混合使用
化生产 原料质量等方面不加控制会影响生产稳定性
培养大肠杆菌常用两种培养基
M培养基(1L): Na2HPO4 6g,KH2PO4 3g, NaCl
0.5g, NH4Cl 1g, MgSO4.7H2O 0.5g, CaCl2 0.011g,葡萄糖 2-10g, pH 7.0 YPS培养基:酪蛋白胨 10g,酵母提取物 5g, NaCl 10g,PH 7.2
NaNO3 + 4H2 → NH3 + 2H2O + NaOH
发酵工业培养基PPT课件
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1、孢子培养基(也称为斜面培养基)
用途:供微生物生长繁殖孢子或保藏菌种之用,
提供细胞生长繁殖所需的各类营养物质。
措施:①培养基营养不能太丰富,碳、氮源不宜
过多,否则易长菌丝而少产孢子。
②无机盐浓度应适量,否则影响孢子的颜
色和数量。
③ 注意培养基的pH和湿度,并供给必要 的生长因子和微量元素。
生产上常用的有:麸皮培养基、大米培养基等
.
17
2、种子培养基
用途:供孢子发芽、生长和繁殖大量菌丝体,
并使菌丝长得粗壮,成为活力强的种子。
措施:①有较完全和丰富的营养物质,特别是
充足的氮源和生长因子。
②碳源和氮源应提供一些易于利用的成
分。
③各种营养物浓度不必太高,有利于溶
氧,且最后一级种子培养基的成分应 较
接近发酵培养基,以便种子进入发酵
常用的油脂类有:豆油、菜籽油、棉 籽油、鱼油、猪油等。
.
6
(3)有机酸
有机酸的利用常会引起发酵体系pH上升, 尤其是有机酸盐氧化时,常伴随有碱性物质 的产生,使pH进一步上升。
常用的有机酸有:乳酸、醋酸、柠檬酸 等。
(4)烃和低碳醇类
正烷烃以用于有机酸、氨基酸、抗生素、
维生素和酶制剂发酵中,甘油也常用作抗生
微生物细胞的含水量约占细胞鲜重的 70~90%。
.
11
水对微生物的生理作用:
①起到溶剂与运输介质的作用,营养物质的吸 收与代谢产物的分泌以水为介质才能完成
②参与细胞内一系列生化反应
③维持蛋白质等生物大分子稳定的天然构象
④水的比热高,热的传导性好,能有效地吸收 代谢过程中放出的热,并将吸收的热散发出 去,避免导致细胞内温度陡然升高;
第三章 发酵培养基

米糠
13 45 13 14 16 91 2.64 22 23.2 297 1250 0.5 0.1 0.9 0.2 0.4 0.6 0.5 0.4
酵母 膏
50 0 3 10 95 3.3 1.4 1.6 5.5 6.2 6.5 2.1
无机氮源和尿素、玉米浆等可被迅速利用,为速效氮;
蛋白质氮则需先水解成肽和氨基酸后才能被吸收利用, 属迟效氮
二、氮源
有机氮源 豆饼(粕)粉、花生饼粉、鱼粉、蚕蛹粉、酵母粉、玉米 浆、尿素等
无机氮源 铵盐、硝酸盐等 (由于细胞内的含氮物质都以氨基或亚氨基的形式存在,故
铵态氮可以直接用于合成细胞物质;而硝态氮需还原成氨后 才能被利用)
成分
蛋白质/% 碳水化合物/% 脂肪/% 纤维/% 灰分/% 干物/% 核黄素/(mg/kg) 硫胺素/(mg/kg) 泛酸/(mg/kg) 尼克酸/(mg/kg) 吡哆 醇/(mg/kg) 生物素/(mg/kg) 胆碱/(mg/kg) 精氨酸/% 胱氨酸/% 甘氨酸/% 异亮氨酸/% 亮氨酸/% 赖氨酸/% 甲硫氨酸/% 苯丙氨酸/%
糖蜜主要含有蔗糖,总糖可达50%-75%。
糖蜜分甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜,二者在糖的含量和无机盐 的含量上有所不同,即使同一种糖蜜由于加工方法不同其成 分也存在差异,因此使用时要注意。
淀粉糊精 多糖,也是常用的碳源; 需经胞外酶水解成单糖后再被吸收利用; 使用淀粉可克服葡萄糖代谢过快的弊病,价格也比较低廉, 在发酵工业中被普遍使用。 常用的淀粉为玉米、甘薯、马铃薯、木薯淀粉。
5)其他 牛肉膏、蛋白胨、动物心、肝等组织浸液等都含 有丰富的生长因子
五、水
生理功能:
1)是微生物机体的重要组成部分 2)进行代谢反应的介质 3)营养物、代谢物、氧气等必须溶解于水后才能通过细胞表 面进行正常的活动;
发酵工业的培养基及原料处理jiang
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(2)总旳灭菌时间比分批灭菌大为降低,缩短发酵罐 旳生产周期。
(3)蒸气负荷均衡,提升了锅炉效率。
(4)适应于自动化控制。
连续灭菌旳缺陷: 1、易产生泡沫 2、大颗粒物料易造成管道堵塞 3、大颗粒物料会造成局部灭菌不彻底 4、需要增长设备
有机氮源:
豆饼粉、花生饼粉、棉子饼粉、酵母粉、 酵母膏、蛋白胨、玉米浆、鱼粉、蚕蛹 粉、尿素等
无机氮源:
铵 盐:如硫酸铵(生理酸性盐) 硝酸盐:如硝酸钠(中性盐)
无机盐:磷、硫、镁、钾、钙、铁、钠 等元素一般以无机盐旳形式加入。
微量元素:铜、锌、钴、锰、钼等微量 元素一般在复合培养基中都存在,无需 单独加入,某些特殊需要旳都是以无机 盐旳形式加入。
水解罐升温糖化
开始蒸汽压力0.3~0.5kg/cm2,进 料完毕后升压至2.8~3.0kg/cm2
保持15~30分钟
水解糖液 (DE=90~92%)
冷却至70℃
接下页
加NaOH中和至pH4.0~4.5
加0.1%活性炭脱色(60℃)
过滤
水解糖液
还原糖 DE = 干物质×100%
(二)、淀粉酶法水解工艺过程:
另外大型发酵罐采用这种措施,不甚合理, 因为发酵罐本身旳夹套或蛇管传热面积有限,做 不到高温度短时间旳原则。
夹层或蛇管加热至90℃, 开搅拌。
停搅拌,罐内进汽至要 求旳温度,维持1~2个 小时。
连续灭菌:是将培养基在发酵罐外连续不断进行加 热,维持和冷却,最终进入发酵罐。
连续灭菌适合于大规模工厂,它旳优点如下:
-淀粉酶:
又称液化酶,它对直链淀粉旳作 用是将直链旳淀粉分子-(1,4)-键任意 地、不规则旳分解为若干短链旳糊精, 糊精继续分解,最终反应产物为13% 旳葡萄糖及87%麦芽糖,但是糊精变 为糖旳速度是极缓慢旳。
第3章 发酵工业培养基的设计
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明确试验目的与要求 试验方案设计:
选定试验指标
选因素、定水平 因素、水平确定 选择合适正交表 表头设计 列试验方案 试验结果分析
进行试验,记录试验结果 试验结果分析: 试验结果极差分析 试验结果方差分析
绘 制 因 素 指 标 趋 势 图
计 算 K 值
计 算 k 值
计 算 极 差 R
计算各列偏差平方和、 自由度 列方差分析表, 进行F 检验 分析检验结果, 写出结论
甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜中主要含蔗糖。
糖蜜中干物质的浓度很大,含5%~12%的胶体物质以 及10%~12%的灰分,如果不进行预处理,则微生物无法生 长和发酵。 1. 糖蜜的预处理
预处理步骤包括稀释、澄清、脱钙调pH、调节金属离 子浓度等。
2. 谷氨酸发酵的糖蜜预处理 一般谷氨酸发酵培养基以含生物素1μg·L-1 ~ 5μg·L -1为宜。 糖蜜中的生物素含量为0.04μg·L-1 ~10μg·L-1,如配 成含糖10%的培养基,每升培养基的生物素含量将达 8μg~2000μg。 解决的主要方法包括:糖蜜预处理法、添加化学药剂 法、追加糖蜜法及营养缺陷型变异株法等四种方法。
二、培养基的分类
①合成培养基
按组成分
②天然培养基
③半合成培养基 ①固体培养基
按物理状态分
②液体培养基 ③半固体培养基
①孢子培养基
按用途分 ②种子培养基 ③发酵培养基
第二节 淀粉水解糖的制备及糖蜜原料的处理
一、 淀粉水解糖的制备 淀粉在酸或酶的作用下水解成葡萄糖的过程称为糖化, 制得的水解糖液叫淀粉水解糖。 根据原料淀粉的性质及采用的水解催化剂的不同,水 解淀粉转化为葡萄糖有三种方法。
有些促进剂是表面活性剂,可改善细胞的透性,改善细胞 与氧的接触从而促进酶的分泌与生产,也有人认为表面活 性剂对酶的表面失活有保护作用; 有些促进剂的作用是沉淀或鳌合有害的金属离子。
发酵工程 ppt课件

Louis Pasteur 1822-1895
• Paster最终使科学界信服在发酵过程中酵母所遵循的规律
• 其后不久,科赫(Koch)建立了单种微生物分离和纯培养技 术,利用这些技术研究炭疽病时,发现动物的传染病是由 特定的细菌引起的。从而得知,微生物也和高等植物一样, 可以根据它们的种属关系明确地加以区分,从此以后,各 种微生物纯培养技术获得成功。单种微生物分离和纯培养 技术的建立,是食品发酵与酿造技术发展的一个转折点。
• 18世纪后期,Ha nsen在Calsberg 酿造厂建立了酵 母纯种培养技术
发酵工程 ppt课件
科赫 (Koch)
科赫的主要贡献
➢ 发明了固体培养基并用其纯化微生物等一系列研究方法的创立。
➢ 创造了细菌染色方法。 ➢ 发现了许多病原菌,为以后研究药物和寻找治疗方法提供了依据。
证实炭疽病因 — 炭疽杆菌 发现结核病原菌—结核杆菌
spirillum (螺旋菌 )
spirochaeta 发酵工程 ppt课件 (螺旋体 )
Some particular bacteria morphology
亮发菌的形态 示丝状特殊形态
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细菌分裂方式是裂殖,根据其核的分 裂方式不同分无丝分裂核有丝分裂等。
❖生存环境:温暖潮湿、富含有机物的地方,都有大量细菌活
它描述酵母作用于果汁 或麦芽浸出液时产生气泡 的现象。产生气泡的现象 是由浸出液中的糖在缺氧 条件下降解而产生的二氧 化碳所引起的。
发酵工程 ppt课件
发酵工程
发酵工程(fermentation engineering):研究发酵工业生产过程 中,各个单元操作的工艺和设备的一门科学。具体包括菌种选 育、菌体生产、代谢产物的发酵以及微生物机能的利用等。
第四章 发酵工业培养基与原料处理
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第四章发酵工业培养基与原料处理培养基就是人工配制的供微生物细胞生长、繁殖、代谢和合成所需产物的营养物质和原料,除此之外,培养基也为微生物提供合适的生长环境条件。
优良的培养基可以充分发挥微生物细胞的生物合成能力,产生最好的效果。
认识各种不同类型的微生物的营养特性和共性,研究并配制适合各种微生物生长和代谢的工业培养基,将大大有助于微生物菌体的培养及提高发酵产物的质量和产量。
因此,设计和改进培养基,使之与其他培养条件相适应,是保证微生物的发酵和产物的生成的关键步骤第一节微生物细胞的化学组成和胞外代谢产物第二节微生物的营养物质和类型第三节微生物培养基的分类、选择和配制原则第四节工业发酵的培养基及配比原则第五节工业发酵培养基的原料处理第六节培养基的灭菌第一节微生物细胞的化学组成和胞外代谢产物一、微生物细胞的化学组成微生物营养物质的确定,主要依据细胞的化学组成及其所代谢产物的化学组成。
因此,分析微生物细胞的化学组成是了解微生物营养的基础。
见下表。
二、微生物细胞的胞外代谢产物微生物在生长过程中,除利用外源营养物质合成新的细胞外,还会产生一些有机化合物分泌到微生物的体外,这些胞外代谢产物的种类繁多,且因微生物的种类各异,因此,了解这些代谢产物的化学组成,极有助于微生物培养时的营养物质的选择和代谢产物的积累。
一般来说,微生物的胞外代谢产物主要包括下面四个部分。
1、代谢副产物这类产物主要是指伴随微生物细胞正常代谢作用所产生的一些小分子化合物,通常是指嫌气培养过程的产物。
这类物质包括①、CO2、H2、CH4等气体②、乙醇、丙酮、丁醇、丙酸、乳酸等低分子量的醇类③、脂肪酸类和酮类其中许多物质是重要的化工原料。
见下表2、中间代谢产物中间代谢产物是指细胞在代谢途径中产生的用于合成蛋白质、核酸、类脂和多糖等细胞物质的一些小分子物质,如氨基酸、核苷酸、有机酸和单糖的衍生物。
中间代谢产物一般不必分泌到微生物体外,而只有当微生物细胞生物合成受阻或外源碳源浓度较高的情况下,才会有大量的积累和外流。
【发酵工程】第三章 发酵培养基3

灭菌
在大规模发酵中应该尽可能的采取连续灭菌的操作, 而且保证灭菌条件的稳定是保证发酵稳定的前提 有时避免营养物质在加热的条件下,相互作用, 可以将营养物质分开消毒。 Na2HPO4+CaCO3→CaHPO4+Na2CO3 有些物质由于挥发和对热非常敏感,就不能采用湿 热的灭菌方法
第四节、重组产品培养基的介绍
13.在实验中我们所用到的淀粉水解培养基是一种( ) 培养基 A 基础培养基 B加富培养基 C选择培养基 D鉴别培养基
15.要从多种细菌中分离某种细菌,培养基要用( )
A.加入青霉素的培养基 B.加入高浓度食盐的培
养基 C.固体培养基
D.液体培养基
C
16.根据培养基的物理状态,划分的发酵种类
是
(
)
第一节第一节发酵培养基的要求和种类发酵培养基的要求和种类第二节第二节发酵培养基的成分及来源发酵培养基的成分及来源第三节第三节发酵培养基的设计原理与优化发酵培养基的设计原理与优化第二节发酵培养基的成分及来源一碳源1作用2来源有机氮源和无机氮源二氮源1作用2来源三无机盐及微量元素糖类油脂有机酸烃和醇类四生长因子前体和产物促进剂从广义上讲凡是微生物生长不可缺少的微量的有机物质如氨基酸嘌呤嘧啶维生素等均称生长因子
pH控制摇床:反应器水平上的摇瓶研究
五、培养基设计时注意的一些相关问题
原料及设备的预处理 原材料的质量
发酵特性的影响
在抗生素发酵生产中往往喜欢所谓的“稀配方”,因 为它既降低成本、灭菌容易、且使氧传递容易而有利 于目的产物的生物合成。如果营养成分缺乏,则可通 过中间补料方法予以弥补。
单因子实验
多因子实验:均匀设计、
正交实验设计、 响应面分析等。
3-工业发酵培养基
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如以醋酸盐为碳源时,反应如下: CH3COONa + 2O2 2CO2 + H2O + NaOH
4、烃和醇类
随着石油工业的发展,微生物工业的碳源也有所扩大。
正烷烃(一般指从石油裂解中得到的14-18碳的直链烷烃混 合物)已用于有机酸、氨基酸、维生素、抗生素和酶制剂的工 业发酵中。
代谢途径。一般5μg/L。
过量
不足
不产或少产 谷氨酸
产乳酸或琥 珀酸
长菌快, pH低,尿 素消耗多
菌体生长
生
不好
物
谷氨酸产
素
量低弱
发酵向乳 酸发酵转 换
2)维生素B1:对某些菌种发酵有促进作用。 3)天然原料:玉米浆, 0.4-0.8%
麸皮水解液, 1% 糖蜜, 0.1-0.4% 酵母
提供生长因子的农副产品原料
1)合成培养基
所用原料的化学成分明确、稳定 如葡萄糖、硫酸 2)天然铵培养基
原料适是于一研些究天菌然种动基、本植代物谢产和品过程如的花物生质饼粉变、化蛋等白科胨研等 工 作;在生产某些疫苗的过程中,为了防止异性蛋白质
来等源杂广质泛掺(入大,多也为常农用副合产成品培)养、基营;养丰富、价格低廉、 适于工营业养化单生一产、价格较高,不适于大规模生产
4) 酵母 酵母膏、酵母浸出液、酵母粉
5)其他 牛肉膏、蛋白胨、动物心、肝等组织浸液等都含 有丰富的生长因子
五.前体
❖ 某些化合物被加到培养基后,能够直接在生物合成过 程中结合到产物分子中去,而自身的结构并未发生太大的 变化,却能提高产品的产量。这类小分子物质称为前体。
六.促进剂和抑制剂
发酵工业培养基设计35页PPT
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酒精、简单的有机酸、烷烃等含碳物质也可作为碳源。
甲醇作为底物生产单细胞蛋白(SCP) 用烷烃进行有机酸、维生素等的生产
❖ 葡萄糖:最容易利用,但过多会加快呼吸,导 致溶氧不足、pH下降,抑制生长与产物合成
❖ 糖蜜:含糖(蔗糖)、氮类化合物、无机盐、 维生素等,常用于丙酮丁醇生产
❖ 淀粉糊精:需经胞外酶水解后才能利用,可克 服葡萄糖代谢过快的弊端,价格低廉,常用玉 米淀粉、小麦淀粉、甘薯淀粉
4③. ②微不是但量许影元多响素酶基的质激的活氧剂化;,还影响蛋白质的合成
① ②
一Zn般、③作C促为o、进碳M糖、n代氮、谢源Cu的等农元副素产大品部天分然作原为料酶中的,辅本基身和就激含活有剂某;些微量元素,不必
另加;
③ 特例:VB12的生产,由于钴是其组成成分,Co的需要量随产物的增加而增加, 因此在培养基中需加入氯化钴以补充钴
如以糖质原料为碳源的谷氨酸生产菌均为生物素缺陷型, 以生物素为生长因子。
有机氮源是生长因子的重要来源,最具 代表性的是玉米浆。
❖ 2、前体 P47
❖ ※是指加到发酵培养基中,能直接被微生物 在生物合成过程中结合到产物分子中去, 而其自身的结构并没有多大变化, 但是产 物的产量却因其加入而有较大的提高的一 类化合物。
发现:
最早是从青霉素的生产中被发现的。
加入玉米浆后,青霉素单位可从20U/ml增加 到100U/ml;
玉米浆中含有苯乙胺,它能被优先合成到青霉 素分子中,从而提高青霉素G的产量。
发酵过程中常用的一些前体物质
产物
青霉素G 青霉素V 金霉素 灰黄霉素 红霉素
前体
产物
苯乙酸及其衍生物 核黄素
苯氧乙酸
发酵培养基
12.5 0.5-0.8
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活性物质 矿质养分 生长因子
氮源 碳源
成分与 功能
水 前体
多 快 好 省
概念与 共性
培养基
类型
固态发酵 液态发酵 半固态发酵
斜面培养基
对底物的 利用速率 C/N 原料 pH 浓度
设计配制 与原则
灭菌
5点注意事项 组成确定
种子培养基 发酵培养基
连续灭菌 分批灭菌
第4章:发酵工业培养基
§4.1 发酵工业培养基概述
只考虑细胞繁殖数量,不考虑产物合成
三.发酵培养基!!! 用于发酵产品生产的培养基 1.作用:两大功能 ①.提供菌体生长繁殖所需各种营养成分: ②.提供发酵产品生物合成所需原料: 2.要求 ①能满足细胞快速繁殖的需要:短时间得到大量细胞 培养基成分适当丰富、完全、具特异性:“因菌而异” 适合于该菌种的生理特性,菌体生长、繁殖迅速、健 壮,能在较短周期内得到大量的细胞数。 ②含有目标代谢产物合成必需的前体、活性因子: ③培养基要适当丰富与完全: 防止 “大量速效养分抑制次级代谢产物合成”
二.种子培养基
1.制备发酵“种子”(发酵剂)的目的
提高发酵罐的利用率:为了增加发酵罐的接种量, 往往先将斜面菌种在种子罐中繁殖到一定数量,以缩 短菌体在发酵罐内生长繁殖所需时间,缩短延滞期, 提高发酵罐的设备利用率。
2.发酵级数
菌种从种子罐到发酵罐扩大的次数。 二级发酵=1个种子罐+1个发酵罐; 三级发酵=2个种子罐+1个发酵罐; 在三级发酵中,将小种子罐(一级种子罐)的菌剂 接入到较大的二级种子罐中培养,繁殖后再接入发酵 罐中。
适于微生物快速生长繁殖与目的产物合成; ②不需另加微量元素、维生素: ③来源广泛,价格低廉: 缺点:组分复杂,不易重复→影响生产稳定性。
(二).按状态分 1.固态:用途:菌种分离、保存;真菌子实体生
产;真菌酶制剂生产;放线菌活菌制剂生产等 2.半固态:琼脂:0.5%~0.8%。 ①菌种鉴定:细菌“运动特征”观察; ②小曲酒生产:糖化、酒化并行; 3.液体培养基:!!发酵工业最重要的培养基, O2与养分传递容易。
4.对种子的3大要求: 纯:无杂菌; 壮:健壮,活力旺盛,繁殖快; 多:有足够的数量。
5.对种子培养基成分的要求: 目的:菌种繁殖快;数量多 ①丰富、完全、特异、浓度适当:繁殖快 ②易被菌体吸收利用:速效 ③尽量与发酵培养基接近:减少延滞期, “宾至如归” ④C/N控制合理: 过大,产酸,→pH稳定 ⑤非连动型产物之发酵:
一.概念 1.培养基 提供微生物生长、繁殖及代谢需要的营养基质。 2.发酵工业培养基: 能用于工业生产的微生物培养基
二.确定培养基组成的原则!! 有利于细胞快速繁殖;有利于积累大量的发酵产物。
三.培养基的成分、配比对发酵的影响 1.微生物生长: 2.发酵产品的生物合成量、速度及提取的难易程度: 3.产品的产量、质量:
种子培养基不需添加形成产物所需前体等特殊物质
6.注意事项 ①种子扩大条件与发酵条件一致: 种子培养基的主要成分和培养条件: 应尽可能与 发酵培养基及发酵条件一致,以减少菌种转入发酵罐 后菌体为适应新环境而进行的酶诱导等生理适应,使 菌种迅速转入旺盛生长繁殖; ②不考虑产物合成所需的特殊成分: 对于非生长连动型产物的发酵,种子培养基不需 要添加用于形成产物的前体等特殊物质(次生代谢产 物形成所需的物质),以节约生产成养基组成时,除了营养要求外,还 要考虑:原料来源与生产成本
工业培养基原料选择3原则: A.营养特性:营养丰富 B.原料来源:来源广泛 C.生产成本:价格低廉
原料类型: 6种 普通原料:碳源,氮源,矿质养分,生长因子; 特殊原料:前体,活性因子
一、碳源及其主要功能 (一).生理功能 A.菌体生长、繁殖:提供碳源、能源 B.目的产物合成:提供C架、能源 (二).常用碳源 ①糖类(淀粉) ②油脂 ③有机酸 ④低碳醇等 在碳源严重缺乏时,Pr水解物AA亦可作为C源。 工业发酵所用天然C源(玉米粉,薯干粉、野生植
3.设计发酵级数依据的3大原则:
①菌种的性质(孢子数、孢子发芽率及生长率): 单位体积或重量的孢子浓度大、发芽快、生长快
的菌种,发酵级数少,否则,级数多; ②发酵罐中种子的最低接种量: 接种量少者,级数少;否则,级数多(多次繁殖才
能得到足够的接种量); ③种子罐容积(V1)与发酵罐的容积(V2)比: 容积差异或V2/V1比值愈大,级数愈多。
3.目的 “两快、两多” 菌体:生长快而健壮,细胞数量多: 目的:代谢产物合成速度快,数量多:
四.培养基类型的其他分法 (一).按纯度划分
1.合成培养基:生理研究,用化学试剂配; 2.天然培养基:用植物、动物或微生物等天然有机 材料或农副产品下脚料配制。发酵工业最重要
优点:“不纯” →①营养丰富:
物淀粉、纤维及半纤维素等)中亦含有大量AA、维 生素和矿质养分,即C、N、矿质养分同时存在
1.糖类 A.葡萄糖(G):最易利用之糖,速效糖 注意两点副作用:
①产酸:G过多,呼吸作用过强,耗氧量过大, →溶解氧不能满足需要 ,培养体系处于厌氧发酵状态: →中间产物不能通过呼吸作用完全氧化,积累在菌体 或培养基中,如丙酮酸、乳酸、乙酸等导致pH下降 →影响酶活性,抑制微生物生长与产物合成;
§4.2 发酵生产的培养基类型 根生产工艺的要求及用途可分为3类: 一.斜面培养基 1.作用:供菌种活化、保存、繁殖用。 2.对斜面培养基的要求:
①使菌体生长快、繁殖快、健壮; ②不易引起菌种变异。 3.组成特点: ①C、N源物质:
不宜过多,尤其是C源,多了易引起pH波动; ②无机盐浓度:
亦要适当控制,以免引起菌种特性变化。
②“葡萄糖效应”:抑制次级产物合成!!
G分解产物阻遏或抑制某些目的产物合成所必需的 酶的形成与酶的活性:导致某些次级代谢产物(抗生 素等)不能合成
B.糖蜜!!! 糖厂生产糖时的结晶母液,副产物,含有丰富 的糖,氮素化合物,矿质元素,维生素,是发酵工 业价廉物美的原料。 糖蜜主要含蔗糖,含糖量达50%-70%(W/V)。 糖蜜分为甘蔗糖蜜和甜菜糖蜜两种,成分不同, 使用时要查阅有关资料。 糖蜜常用于酶母的酒精发酵、丙酮丁酮生产及 抗生素发酵。