实验室细胞培养基本知识ppt课件
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动物细胞培养技术ppt课件
常用的排除微生物污染的方法
抗生素排除法：采用5～10倍于常用量的冲击法，加入高浓 度抗生素后作用24～48h，再换入常规培养物，有时可能奏 效。
加温除菌：根据支原体不耐热的特点，可将受支原体污染的 细胞至于41摄氏度作用5～10h（最长可达18h），以杀灭支 原体。
动物体内接种：受污染的肿瘤细胞可接种在同种动物皮下或 腹腔内，利用动物的免疫功能消灭污染的微生物，而肿瘤细 胞却能在动物体内继续生长，待一定时间后从体内取出肿瘤 细胞进行培养
2、上皮型细胞：
名称：仅形态上似体内，实际上不完全相同
来源：来源于外胚层、内胚层细胞, 如：皮肤及其衍 生物,消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤
形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形， 中有圆形核
生长特点：易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层— 铺石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个 活动
3、游走细胞型：
呈散在生长，一般不连成片，胞质常 突起，呈活跃游走或变形运动，方向不规 则。此型细胞不稳定，有时难以和其他细 胞相区别。
4、多型细胞型：
有一些细胞，如神经细胞难以确定其 规律和稳定的形态，可统归于此类。
（二）悬浮型：
见于少数特殊的细胞，如某些类型的癌细胞及白血病细胞。 胞体圆形，不贴于支持物上，呈悬浮生长。这类细胞容易 大量繁殖。
(二) 细胞的营养
培养基：合适的细胞培养基是体外细胞生长增 殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞 营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还 提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
血清：血清是细胞培养液中最重要的成分之一， 含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养 成分 。
其它成分（条75%酒精泡2—3秒钟 （时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再 用碘酒消毒腹部，将鼠带入超净台内解剖取肝脏，置 平皿中。
《细胞培养培训》课件
细胞培养过程中产生的废液和 废弃物不可随意处理。实验室 应该制定废物处理计划并妥善 处理、处置，确保环保。
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
结
1 细胞培养中的安全问题
在进行细胞培养操作时需要注意一些安全问题，如在安全柜操作，穿戴实验外套和化、功能化和量化方向发展，国内企业正加紧提升技术水 平和产业化水平。
细胞培养培训
细胞培养是生物技术和医学研究中不可或缺的重要技术之一。在本次培训中， 我们将全面介绍细胞培养的基本概念、操作流程和常见问题解决方法。欢迎 大家踊跃参与！
介绍
1 定义
2 重要性
细胞培养是指通过在无菌 环境下加入合适的营养液， 使人类或动物细胞在体外 的人工环境中生长和繁殖 的技术。
细胞培养是研究生命科学 和药物研发不可缺少的技 术。它能够帮助我们理解 细胞的生长、分化、凋亡 和信号传导等基本生理过 程。
2
殖，以获得足够的细胞数量用于实验。 细胞传代技术可以使细胞连续繁殖多代
细胞凋亡是指由一系列信号调控的正常
并保持生物学特性。
细胞死亡程序。在细胞培养中凋亡的部
分或全部细胞可能会影响实验结果。因
此，细胞凋亡检测技术成为了细胞培养
3
细胞培养蛋白表达技术
的重要技术方法。
细胞培养蛋白表达技术是指通过转染外
源性质粒或病毒载体进入细胞，使细胞
3 应用场景
细胞培养技术广泛应用于 基础研究、药物筛选、生 物材料研究、环境毒理学 等领域。
细胞培养的基本概念
细胞种类
主要包括原代细胞、细胞株、酶处理细胞等。不 同种类的细胞具有不同的生长要求，因此对于细 胞的选择要根据科学研究的需要作出选择。
细胞培养的条件
温度、CO2浓度和通气等条件对于细胞培养的影 响非常大。合理的培养条件是保证细胞生长和繁 殖的前提。
细胞培养知识
细胞培养基础知识细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
实验室细胞培养基本知识
• 引进的培养物（如购买的细胞系）是高危污染源，要先经过检 疫，并坚持用不含抗生素的培养基培养直至证明没有污染。
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞培养箱的无菌
• 培养箱是主要的污染源，应每学期做彻底清洁（箱体、架子、 隔板、托盘），可用70%酒精充分擦拭，并完全挥发晾干。
• 培养箱使用时底部湿盘要加入1%硫酸铜。 • 培养细胞时，尽可能选购带渗透盖的培养瓶，不仅可以在CO2
环境中迅速达到平衡，而且不会有污染的危险。
细胞培养中的无菌操作
• 紫外灭菌：洁净台使用前、使用中的间隙、使用后都要用紫外灭菌，但 光束的有效性有限，因为它不能达到缝隙中。
• 70%酒精擦拭：洁净台使用前、使用中有溢出物、使用后都要擦拭，各 种试剂瓶、储液瓶、培养瓶、培养板和培养皿，放入洁净台之前，必须 用 70% 乙醇擦拭其外部，注意要选用抗乙醇的记号笔。
细胞培养中的无菌操作
• 加盖：所有试剂瓶子要用深螺旋的聚丙烯盖子，使用时要将盖 子口朝下放置在工作区域，不用时要及时盖好，但可以不用旋 紧。
• 灼烧：开放工作台才需要灼烧，细胞培养用的洁净台中不需要 也不建议灼烧、明火既破坏了层流又难以除去生物危害物质， 还带来了火灾隐患，明火带来的高温还会影响HEPA过滤的寿命。
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
准备与灭菌
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
细胞生物学实验PPT课件
细胞生物学实验ppt课件
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
目录
• 引言 • 细胞生物学基础知识 • 实验操作流程 • 实验结果分析 • 结论
01 引言
实验目的
01
02
03
04
掌握细胞生物学的基本 实验技能
了解细胞的结构和功能
学习细胞培养和细胞转 染技术
探究细胞信号转导的机 制
实验背景
细胞是生命的基本单位，是生物体结 构和功能的基础
能量转换
细胞中的线粒体和叶绿体 可以将光能或化学能转换 为细胞可利用的ATP等能 量形式。
信息传递
细胞通过分泌化学信号和 电信号传递信息，协调各 种生理活动。
细胞的生命活动
细胞分裂
通过有丝分裂和减数分裂，细胞 可以复制自身并产生新的子细胞。
细胞分化
在发育过程中，细胞会逐渐失去其 全能性，并获得特定的功能和形态。
定性分析
根据实验结果，对实验现象进行解释 和推理，探究可能的机制和影响因素 。
结果解读与讨论
结果解读
根据实验结果，结合理论知识，对实验结果进行解释和解读，明确实验目的和 结论。
结果讨论
对实验结果进行深入讨论，探讨实验的局限性和改进方向，提出可能的假设和 研究方向。
05 结论
实验总结
实验目的
通过实验，学生能够掌握细胞生物学的基本实验技能，了 解细胞的结构和功能，以及细胞的生命活动规律。
实验步骤
实验包括细胞培养、显微观察、细胞计数等步骤，每个步 骤都有详细的操作说明和注意事项。
实验原理
实验涉及细胞培养、显微观察、细胞计数等技术，通过这 些技术，学生可以深入了解细胞的结构和功能，以及细胞 分裂、分化等生命活动过程。
实验结果
实验结果清晰，学生能够观察到细胞的形态、结构和功能 ，并得出准确的实验结论。
细胞培养技术_第一讲
消化液
(1) 胰蛋白酶溶液 主要作用是使细胞间的蛋白质水解，从而使贴壁细胞从瓶壁上脱落
并使细胞游离分散开来 常用浓度为0.25%或5%胰蛋白酶。
(2) EDTA溶液 作用机制是破坏细胞间的连接。 对于一些贴壁特别牢固的细胞，可用EDTA和胰酶的混合液 EDTA溶液的使用浓度为0.02%，配制时应加碱助溶
克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距 离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。
群体培养（左）和克隆培养（右）
原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集 落形成，细胞围绕中心漩涡状排列﹙×100﹚
原代培养第7天，多个集落形成并融合﹙×100﹚
细胞系：500元/每株
菌种准备时间 一般情况CCTCC收到订购人的汇款后的3-4天寄出，每周寄送 二次（周一，周五）。
二、细胞的生长条件 细胞的营养
碳水化合物、氨基酸和脂类三大类 也需要一定量的无机盐、维生素和微量元素
细胞培养常用液体
水 平衡盐溶液 pH调节液 消化液 抗生素溶液 培养基
近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术， 各国建立细胞库
我国组织培养的发展
20世纪30年代传入我国。
20世纪50年代起步。
20世纪70年代，成为医学和生物学研究 中普遍应用的手段。
细胞培养的优点
1、活细胞： 能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、 生命活动。
2、可控制： 选择对象：均一性、重复性（类型、性质、阶段） 调节条件：各种因素（物理、化学、生物等因素） 利用方法：研究技术、记录方法
常用培养器皿及清洗消毒
玻璃器皿的清洗 一般经过浸泡、刷洗、浸酸、和清洗四个步骤
细胞培养基本技术
研究生实验技能培训讲座 －－细胞培养基本知识
医学实验中心 闾宏伟
主要内容
细胞培养的基本概念 细胞培养的基本条件 细胞培养用液的配制 细胞培养的基本方法 培养细胞活力测定 细胞冻存和复苏 细胞培养的污染和检测
一、基本概念
细胞培养(cell culture)：在体外条件下，模 拟体内的生理环境，用培养液维持细胞生 长与增殖的技术。 组织培养 (Tissue culture)：把活体的一小 片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵 育，细胞自其周围移出并生长。 器官培养 (Organ culture)：将活体中整个 器官或一部分器官取出，置于体外生存、 生长并同时保持其一定的结构和功能特征。
血清解冻步骤
逐步解冻法
–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室 温下全溶后再分装，一般用50 ml无菌离心管可 分装40～45 ml。
勿直接由–20℃至37℃解冻，因温度改变 太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
无机盐
CaCl2 、KCl 、MgSO4、 NaCl 、 NaHCO3 、NaH2PO4 对调节细胞渗透压、某些酶的活性 及溶液的酸碱度都是必须的。
酶液等均采用滤过法除菌。
安装滤膜时注意：滤膜光滑一面是正面，要朝
上，否则起不到过滤的作用。
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2 使用CO2培养箱应注意的问题：
。
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，
以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。 ③箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000 毫升，以保持箱内湿度。
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗 溶液”。
医学实验中心 闾宏伟
主要内容
细胞培养的基本概念 细胞培养的基本条件 细胞培养用液的配制 细胞培养的基本方法 培养细胞活力测定 细胞冻存和复苏 细胞培养的污染和检测
一、基本概念
细胞培养(cell culture)：在体外条件下，模 拟体内的生理环境，用培养液维持细胞生 长与增殖的技术。 组织培养 (Tissue culture)：把活体的一小 片组织（O.5～1立方毫米）置于底物上孵 育，细胞自其周围移出并生长。 器官培养 (Organ culture)：将活体中整个 器官或一部分器官取出，置于体外生存、 生长并同时保持其一定的结构和功能特征。
血清解冻步骤
逐步解冻法
–20℃ 或–70℃至4℃冰箱溶解一天，至室 温下全溶后再分装，一般用50 ml无菌离心管可 分装40～45 ml。
勿直接由–20℃至37℃解冻，因温度改变 太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
无机盐
CaCl2 、KCl 、MgSO4、 NaCl 、 NaHCO3 、NaH2PO4 对调节细胞渗透压、某些酶的活性 及溶液的酸碱度都是必须的。
酶液等均采用滤过法除菌。
安装滤膜时注意：滤膜光滑一面是正面，要朝
上，否则起不到过滤的作用。
CO2培养箱
CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2 使用CO2培养箱应注意的问题：
。
①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，
以保证通气。 ②保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。 ③箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000 毫升，以保持箱内湿度。
抗生素溶液
通常是青霉素和链霉素联合使用，俗称“双抗 溶液”。
高中生物选修1微生物的实验室培养ppt(共54张PPT)
稀释涂布平板法
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结 合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想， 第2步应如何进行无菌操作？
应从操作的各个细节保证“无菌”。例如， 酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触 任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
微生物的恒温培养
3类。
（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后
分装前，要进行的是
。 调整pH
（6）右表中各成分重量确定的原则
是 依微生物的生长需要确定 。 （7）若右表培养基用于菌种鉴定，应该
增加的成分
琼脂（或凝固。剂）
一、课题目标：
了解有关微生物及培养基的基础知识，进 行无菌技术的操作，进行微生物的培养。
二、课题重点和难点：
如图是酵母菌电子显微 镜下的形态结构
青霉
生殖 孢子生殖
直立菌丝 营养菌丝
腐生生活
（二）培养基
培养基（培养液）是由人工方法配制
而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养
液。
1.培养基的类型
（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、
半固体培养基。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。
（3）按成分分：天然培养基和合成培养基。
芽孢又小又轻，可以随风飘散。
平板划线的操作方法
C是正确的，因为与发酵有关的所有设备和物质都要灭菌；
且体内一般不含有叶绿素.
寄生菌 大部分病原菌
消毒与灭菌的概念及两者的区别
（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。
有的碳源同时是能源，如葡萄糖；
掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功地培养微生物。
细胞培养的基本技术原理
第一章细胞培养的基本原理与技术现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。
比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。
基因工程乙肝疫苗很多是以CHO 细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。
正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。
总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。
第一节体外培养的概念一、基本概念体外培养（in vitro culture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。
●组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。
●细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。
●器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。
二、体内、外细胞的差异和分化1、差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化：分化现象减弱；形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡；或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。
因此，培养中的细胞可视为一种在特定的条件下的细胞群体，它们既保持着与体内细胞相同的基本结构和功能，也有一些不同于体内细胞的性状。
实际上从细胞一旦被置于体外培养后，这种差异就开始发生了。
2、分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同。
细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend 细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。
细胞培养基础知识
细胞培养基础知识细胞培养呀，就像是在一个小小的世界里创造生命的奇迹！咱就说，细胞可是生命的基本单位呢，培养它们就像是在照顾一群娇贵的小宝贝。
想象一下，你要有一个超级干净的“家”给它们住，这个“家”就是培养皿啦。
培养皿得干净得像刚洗过的脸一样，不能有一点儿脏东西，不然细胞宝宝们可不高兴啦。
然后呢，你得给它们准备好吃的，这就是培养液啦。
培养液就像是细胞的大餐，里面有它们需要的各种营养成分。
就好比咱人得吃米饭、蔬菜、肉一样，细胞也需要它们特定的营养来茁壮成长呀。
温度也很重要哦！不能太冷也不能太热，得刚刚好，就像咱们睡觉要盖合适的被子一样。
要是温度不合适，细胞可就不开心啦，可能就长不好咯。
还有哦，你得时刻关注它们的成长情况。
这就像家长关注孩子的成长一样，看看它们有没有长大呀，有没有生病呀。
要是发现有不对劲的地方，就得赶紧想办法解决。
培养细胞也得有耐心呀！不能着急，得慢慢等它们长大。
有时候可能等了好几天也看不到明显的变化，但别灰心，说不定它们正在偷偷努力呢。
而且呀，培养细胞可不能粗心大意。
就像你照顾小婴儿，一点小疏忽都可能带来大问题。
比如说不小心污染了培养皿，那可就糟糕啦，细胞可能就全军覆没了。
你说这细胞培养神奇不神奇？通过我们的努力，能让这些小小的细胞在我们的眼皮子底下成长、分裂，就好像看着一个小生命在慢慢绽放。
这感觉，真的很奇妙呀！培养细胞的过程中也会遇到各种挑战呢。
有时候细胞就是不长，你就得绞尽脑汁想办法，是培养液有问题？还是温度不合适？或者是其他什么原因。
这就像是解一道难题，得不断尝试、探索，直到找到答案。
细胞培养可不只是在实验室里玩玩哦，它对医学、生物学等好多领域都有着非常重要的意义呢。
通过培养细胞，我们可以研究疾病的发生机制，可以测试药物的效果，还可以为再生医学提供帮助呢。
总之呢，细胞培养是一件既有趣又有意义的事情。
虽然有时候会遇到困难，但只要我们有耐心、细心，就一定能让这些小细胞在我们的手中绽放出绚丽的光彩！难道不是吗？原创不易，请尊重原创，谢谢!。
细胞培养必备知识
注意：
1.打开培养箱时尽量不要说话； 2.步骤9中培养瓶放入培养箱时，应把盖子拧开少许。
30
传代
1.把细胞培养瓶从培养箱中拿出，拧紧盖子； 2.观察瓶内培养基的颜色，是否浑浊等；放在 倒置显微镜下观察细胞生长状况。 3.放入超净工作台内，点燃酒精灯，拿培养瓶 口在酒精灯火焰上转两圈以上，至少三秒。 4.取下盖子，烧瓶口；倒掉培养基，烧瓶口； 5.拿出PBS瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞 子取出，烧瓶口（至少10圈）。
10
三、在肿瘤学中的应用
11
肿瘤细胞生物特性学研究
–比较肿瘤细胞与正常细胞在体外培养条件下生 长行为的差异，研究肿瘤细胞生物学特性的改 变，对于建立诊断标准有益。 肿瘤细胞体外生长形态学研究 肿瘤细胞生长特性 细胞接触抑制实验
12
肿瘤发病机制研究
–肿瘤产生诱发因素的研究 –肿瘤细胞侵润机制和过程的研究 –肿瘤与正常细胞 共同培养法
研究肿瘤药物筛选
13
异种移植研究
裸鼠发现与应用 建立了动物移植瘤模型
抗肿瘤药物筛选
研究肿瘤细胞调亡以及肿瘤细胞体外分化 又成为新热点
14
生物治疗
–活细胞---体细胞---体内
–活化细胞（LAK）---患者
–组织---悬液---培养---回输机体
15
细胞培养：
一、原代培养
二、传代培养
16
一
原代培养
38
6. 烧瓶口，镊子和盖子；盖上盖子， 在倒置显微镜下观察。 7. 用酒精棉球擦瓶口及瓶身，放入培养箱内. 注意： 步骤2中，蒸馏水不要没过冻存管口 所有步骤结束过24小时后一定要换液；
31
6.用吸管吸取3ml的PBS，打入培养瓶内。烧培养 瓶口，来回晃动PBS100次后到掉PBS。重复此 操作一次。 7.拿出胰酶瓶子，烧瓶口和镊子；用镊子将塞子取 出，烧瓶口（至少10圈）。 8.用吸管吸取1ml的胰酶，打入培养瓶内，烧培养 瓶口和盖子，盖上盖子； 9.拿出工作台外，在倒置显微镜下观察细胞，然后 用酒精棉球擦瓶口及瓶身，放入培养箱内；5分钟 后取出；
细胞培养基本知识基本技术
细胞培养的基本知识、 基本技术
医学院 中心实验室 谷景义 85225841
主要内容： •1、细胞培养基本知识 •2、培养细胞生长环境 •3、细胞培养基本技术
•4、培养细胞质量控制
一、 细胞培养
• 把取得的组织用机械或消化的方法分 散成单个细胞，用培养基制成细胞悬 液，在体外适宜条件下，使细胞生长 繁殖，并保留其一定的结构和功能特 性。
二、培养细胞生长环境
Cell Culture Environment
Substrate Gas Medium Serum Supplements
Glass ﹠ Plastic Culture Vessels ……
O2 CO2
……
pH Osmolality Temperature ……
Hormones FBS Growth factors NCS Antibiotic ……
培养细胞的特性1 -生长方式及类型
• 贴附型、悬浮型
培养细胞的特性2 - 增殖特点
• 体外培养的细胞既保持了一定的体内细 胞的基本特性，但也具有本身的一些特 点。 • 贴附-伸展 • 接触抑制-增殖的密度抑制
贴附-伸展
接触抑制
• 当一个细胞被其他细胞围绕导致无处 可去而保持接触时，细胞不再移动， 在接触区域的细胞膜活动将停止。 • 因此，一般正常细胞并不相互重叠于 其上生长。
• 应用： • 软骨和骨组织（软骨细胞和干细胞，再生损伤的软骨、骨） • 循环系统和心脏（有目的地改变血管形成）
细胞培养技术的特点及应用
优点：
1）研究的条件可以人为控制 2）研究的样本均一 3）研究内容方便观察、检测、记录 4）研究的费用相对于经济
缺点：体外培养的细胞不能完全Байду номын сангаас同于体 内的细胞。
医学院 中心实验室 谷景义 85225841
主要内容： •1、细胞培养基本知识 •2、培养细胞生长环境 •3、细胞培养基本技术
•4、培养细胞质量控制
一、 细胞培养
• 把取得的组织用机械或消化的方法分 散成单个细胞，用培养基制成细胞悬 液，在体外适宜条件下，使细胞生长 繁殖，并保留其一定的结构和功能特 性。
二、培养细胞生长环境
Cell Culture Environment
Substrate Gas Medium Serum Supplements
Glass ﹠ Plastic Culture Vessels ……
O2 CO2
……
pH Osmolality Temperature ……
Hormones FBS Growth factors NCS Antibiotic ……
培养细胞的特性1 -生长方式及类型
• 贴附型、悬浮型
培养细胞的特性2 - 增殖特点
• 体外培养的细胞既保持了一定的体内细 胞的基本特性，但也具有本身的一些特 点。 • 贴附-伸展 • 接触抑制-增殖的密度抑制
贴附-伸展
接触抑制
• 当一个细胞被其他细胞围绕导致无处 可去而保持接触时，细胞不再移动， 在接触区域的细胞膜活动将停止。 • 因此，一般正常细胞并不相互重叠于 其上生长。
• 应用： • 软骨和骨组织（软骨细胞和干细胞，再生损伤的软骨、骨） • 循环系统和心脏（有目的地改变血管形成）
细胞培养技术的特点及应用
优点：
1）研究的条件可以人为控制 2）研究的样本均一 3）研究内容方便观察、检测、记录 4）研究的费用相对于经济
缺点：体外培养的细胞不能完全Байду номын сангаас同于体 内的细胞。
细胞培养基本知识
3.2 用于基因治疗
细胞培养在基因治疗方面也有很大作用。本实验室利用 培养的SY5Y细胞，通过将早老素基因PS-1转染入SY5Y细胞；而后，用RT-PCR证明转染有PS-1基因的细胞内部有PS-1 mRNA转录，用单抗检测细胞PS-1蛋白的表达。而后可用以检测细胞是否有早老现象。再用类似方法，我们可以研究细胞的钙通道以及其它药物作用的膜通道，从而指导临床药物应用，并据此来研究新的药物。
1.2 细胞培养的实验室要求
细胞培养要求较高，目的是使细胞能在无菌条件下存活。提取细胞的手术器具在每次使用之前应高温、高压消毒，配培养液的水要求用灭菌双蒸水并加入双抗。所用培养瓶、离心管等器皿最好为一次性。要在无菌室超净台上操作。每次操作之前，要用紫外灯照射工作台20-30min，然后将手洗干净，换拖鞋进入无菌间，将手用新洁尔灭喷洗一遍再操作。
2 以人血管内皮细胞为例说明细胞培养
由于细胞本身性质不同，其分离和培养方法也会有差异。其来源一般是新鲜脐带的脐静脉（来自于产后24h以内），具体的分离方法是：取新生儿脐带血(25 cm左右)，放入含青、链霉素各100U/mL的灭菌PBS中，4C保存，24h内进行实验。
2.1. 取材和原代培养
2009-05-29 17:35回复
白港人 ☆Gabri液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~ 一年。
2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ?C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-20?C保存。
细胞培养在基因治疗方面也有很大作用。本实验室利用 培养的SY5Y细胞，通过将早老素基因PS-1转染入SY5Y细胞；而后，用RT-PCR证明转染有PS-1基因的细胞内部有PS-1 mRNA转录，用单抗检测细胞PS-1蛋白的表达。而后可用以检测细胞是否有早老现象。再用类似方法，我们可以研究细胞的钙通道以及其它药物作用的膜通道，从而指导临床药物应用，并据此来研究新的药物。
1.2 细胞培养的实验室要求
细胞培养要求较高，目的是使细胞能在无菌条件下存活。提取细胞的手术器具在每次使用之前应高温、高压消毒，配培养液的水要求用灭菌双蒸水并加入双抗。所用培养瓶、离心管等器皿最好为一次性。要在无菌室超净台上操作。每次操作之前，要用紫外灯照射工作台20-30min，然后将手洗干净，换拖鞋进入无菌间，将手用新洁尔灭喷洗一遍再操作。
2 以人血管内皮细胞为例说明细胞培养
由于细胞本身性质不同，其分离和培养方法也会有差异。其来源一般是新鲜脐带的脐静脉（来自于产后24h以内），具体的分离方法是：取新生儿脐带血(25 cm左右)，放入含青、链霉素各100U/mL的灭菌PBS中，4C保存，24h内进行实验。
2.1. 取材和原代培养
2009-05-29 17:35回复
白港人 ☆Gabri液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？
要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月~ 一年。
2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用及使用方法。
几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ?C冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4 ?C 冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。基础医学细胞中心在其服务项目中配制分装了高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培养基中，其终浓度为2mM/ml培养基。包装为粉红色，-20?C保存。
细胞培养基本知识技术
自塑料瓶的有机物质或来自玻璃的离子等。 • 3．大气中离子类或大分子类（微生物类的内毒素）
物质溶解其中。 • 4．大气的CO2溶解 （二）纯化水制备应注意事项： • 在准备室选择一处洁净、无尘、清静的地方放置纯
化水的装置。 • 所得的纯化水贮备在专用的干净玻璃瓶内，最好用
硼砂硅玻璃瓶内，标记上制备的日期。
• CO2培养箱是培养细胞的专用设备. • CO2培养箱培养细胞必须满足细胞生长的
三个条件. • 稳定的温度. • 大于95%的相对湿度. • 稳定的CO2浓度 • 三气培养箱是从CO2培养箱基础上发展出来
的新品种,它可同时控制O2浓度.
注意事项
• 1 用螺旋口瓶培养细胞时需将瓶盖微松，以保证 通气。但瓶口过松，易污染。
倒置显微镜
工作原理
一般情况下,人眼只能在光波的波长(颜色)和振幅(亮 度)发生变化时,才能看到被检测物体.但生活状态下的细胞 都呈无色透明,光线通过这些物体时波长和振幅并不发生 变化，因此用普通显微镜无法看清活细胞的形态和结构。 相差显微镜是利用细胞内各结构密度的不同而对光产生折 射率有差异的原理，即光波在折射率大的物体中比在折射 率小的物体中前进的距离较短，此距离叫光程差，由于光 程差引起光的相位变化称为相位差或相差。使用相差显微 镜可使肉眼不能分辨的相位差变为可分辨的振幅差（即明 暗差），使无色透明的物体在镜下反差显著、影像清晰。
（三）纯化水的常用制备方法
• 1.去离子法和石英双重玻璃蒸馏器法结合
• 水中含有溶解或不溶解的矿物盐、油脂及酸类， 以及O2,CO2,H2S,Cl2等。这些物质通过离子交换 树脂除去。
• 采用阳离子树脂或阴离子树脂处理。常使用强酸 性阳离子交换树脂和强碱基性阴离子交换树脂， 将水流通过离子交换柱即得纯净的去离子水。
物质溶解其中。 • 4．大气的CO2溶解 （二）纯化水制备应注意事项： • 在准备室选择一处洁净、无尘、清静的地方放置纯
化水的装置。 • 所得的纯化水贮备在专用的干净玻璃瓶内，最好用
硼砂硅玻璃瓶内，标记上制备的日期。
• CO2培养箱是培养细胞的专用设备. • CO2培养箱培养细胞必须满足细胞生长的
三个条件. • 稳定的温度. • 大于95%的相对湿度. • 稳定的CO2浓度 • 三气培养箱是从CO2培养箱基础上发展出来
的新品种,它可同时控制O2浓度.
注意事项
• 1 用螺旋口瓶培养细胞时需将瓶盖微松，以保证 通气。但瓶口过松，易污染。
倒置显微镜
工作原理
一般情况下,人眼只能在光波的波长(颜色)和振幅(亮 度)发生变化时,才能看到被检测物体.但生活状态下的细胞 都呈无色透明,光线通过这些物体时波长和振幅并不发生 变化，因此用普通显微镜无法看清活细胞的形态和结构。 相差显微镜是利用细胞内各结构密度的不同而对光产生折 射率有差异的原理，即光波在折射率大的物体中比在折射 率小的物体中前进的距离较短，此距离叫光程差，由于光 程差引起光的相位变化称为相位差或相差。使用相差显微 镜可使肉眼不能分辨的相位差变为可分辨的振幅差（即明 暗差），使无色透明的物体在镜下反差显著、影像清晰。
（三）纯化水的常用制备方法
• 1.去离子法和石英双重玻璃蒸馏器法结合
• 水中含有溶解或不溶解的矿物盐、油脂及酸类， 以及O2,CO2,H2S,Cl2等。这些物质通过离子交换 树脂除去。
• 采用阳离子树脂或阴离子树脂处理。常使用强酸 性阳离子交换树脂和强碱基性阴离子交换树脂， 将水流通过离子交换柱即得纯净的去离子水。
《细胞基本知识》课件
细胞学技术用于疾病的诊断和治 疗。
细胞治疗
细胞治疗利用干细胞等治疗疾病。
结论
细胞的重要性
细胞是生命的基本单位，研 究和应用广泛。
科学和医学应用
细胞研究在科学和医学上有 重要应用。
未来发展方向
细胞生物学是未来科学和医 学的发展方向。
细胞通过代谢作用进行能量转 化和物质合成。
生物合成
细胞通过生物合成生成复杂有 机物质。
分化和增殖
细胞可以分化成不同类型的细 胞，并通过增殖维持生命活动。
细胞的研究方法
1 细胞培养
通过培养细胞在实验室中进行研究。
3 细胞分离
将细胞分离为单个细胞以观察其行为。
2 细胞融合
将不同类型细胞融合以研究其特性。
4 细胞显微镜技术
使用显微镜观察细胞结构和功能。
细胞的重要性
1
生物学研究
细胞是生物学研究的基础，揭示了生命
医学应用
2
现象的机制。
细胞在医学上应用于细胞治疗和疾病诊
疗。
3
未来发展
细胞生物学的研究将推动科学和医学的 未来发展。
细胞相关的疾病
疾病的细胞学特点
细胞学揭示了疾病的细胞变化和 特征。
细胞学诊疗法
《细胞基本知识》PPT课 件
细胞是生命的基本单位，具有多种功能。本课程将介绍细胞的定义、基本结 构、种类，以及细胞的功能、研究方法、重要性和相关疾病。
什么是细胞
细胞定义
细胞是生物体的基本结构和功能单位。
细胞的种类
包括原核质和细胞核组成。
细胞的功能
代谢作用
细胞治疗
细胞治疗利用干细胞等治疗疾病。
结论
细胞的重要性
细胞是生命的基本单位，研 究和应用广泛。
科学和医学应用
细胞研究在科学和医学上有 重要应用。
未来发展方向
细胞生物学是未来科学和医 学的发展方向。
细胞通过代谢作用进行能量转 化和物质合成。
生物合成
细胞通过生物合成生成复杂有 机物质。
分化和增殖
细胞可以分化成不同类型的细 胞，并通过增殖维持生命活动。
细胞的研究方法
1 细胞培养
通过培养细胞在实验室中进行研究。
3 细胞分离
将细胞分离为单个细胞以观察其行为。
2 细胞融合
将不同类型细胞融合以研究其特性。
4 细胞显微镜技术
使用显微镜观察细胞结构和功能。
细胞的重要性
1
生物学研究
细胞是生物学研究的基础，揭示了生命
医学应用
2
现象的机制。
细胞在医学上应用于细胞治疗和疾病诊
疗。
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未来发展
细胞生物学的研究将推动科学和医学的 未来发展。
细胞相关的疾病
疾病的细胞学特点
细胞学揭示了疾病的细胞变化和 特征。
细胞学诊疗法
《细胞基本知识》PPT课 件
细胞是生命的基本单位，具有多种功能。本课程将介绍细胞的定义、基本结 构、种类，以及细胞的功能、研究方法、重要性和相关疾病。
什么是细胞
细胞定义
细胞是生物体的基本结构和功能单位。
细胞的种类
包括原核质和细胞核组成。
细胞的功能
代谢作用
第三章 细胞培养专用微载体
4．以上三个层次的培养，又可统称之为体外培养。
5．细胞培养技术：就是选用最佳生存条件对活细胞 进行培养和研究的技术。 6．动物细胞培养技术：从动物体内取出细胞或者组 织，分散成单个细胞，模拟体内的生理环境，在 无菌、适温和丰富的营养条件下，让其在体外的 培养瓶或培养基上继续生长和增殖的技术 。
动物细胞培养技术的发展史
萌芽实验：
（1）1885年，德国人W Roux把鸡胚组织放在温热的盐 水中维持其存活了10天。
（2）1887年，Arnold把白细胞收集在盛有盐水的小碟 子里，观察到白细胞的运动，并存活了一段时间。
实验缺陷：由于当时的培养基不理想，实验难以重复， 不能断定观察到的是真正存活的健康组织或细胞。
细胞培养技术的快速发展阶段
（1）20世纪40年代抗生素的发展、无菌技术的 成熟，为动物细胞规模化的培养奠定了基础。
（2）1962 年，以Capstick等成功进行BHK细胞 （幼年仓鼠肾细胞）的悬浮培养为标志，动物细 胞进入了规模化生产阶段， 发展至今已成为生物、 医学研究和应用中广泛采用的技术方法。
第三章 细胞培养专用微载体
有关细胞培养的基本概念
1．细胞培养(Cell culture) ：细胞（包括单个细胞）在体外条 件下的生长。 2．组织培养（Tissue Culture）：是指从体内取出组织和细 胞，模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定营养条件 下，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。 3．器官培养（Organ Culture）：指的是应用和组织培养相 似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官， 使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法。
使用较多的反应器有两种：贝朗公司的BIOSTAT B反应器，使 用双桨叶无气泡通气搅拌系统；NBS公司的CelliGen、CelliGen PlusTM和Bioflo3000反应器，使用Cell-lift双筛网搅拌系统。两 种系统都能实现培养细胞和收获产物的有效分离。
第十一章动物细胞培养基础知识
液、促进细胞贴壁得胶原类物质在培养某些特殊细胞时也不可缺 少。
(一)、培养基
▪ (1)、天然培养基
▪ 血清得种类 :主要就是牛血清,在培养某些特殊细胞 时也用人血清、马血清等。
▪ 牛血清还分为小牛血清、新生牛血清与胎牛血清。 一般使用得为小牛血清,小牛血清取自出生10～30 天得小牛。
(一)、培养基
倍浓缩液,配制时应加温至30℃,完全溶解后过滤除菌,分 装至小瓶,储存于-20℃。
(三)、其她培养用液
▪ 4、抗生素液
▪ 常用得就是青链霉素,俗称“双抗溶液”。青霉素主要 对革兰阳性菌有效,链霉素主要对革兰阴性菌有效。
▪ 青霉素使用得终浓度为100000U/L,链霉素使用得终浓 度为0、1g/L。一般配制成100倍浓缩液,可用PBS或 培养基配制。
▪ 用过得橡胶制品:同玻璃器材得清洗
二、常用器具得清洗消毒方法
▪ 1、清洗
▪ (3)塑料器皿
▪ 2%NaOH浸泡过夜 2~5% HCl 浸泡 30min 蒸馏水洗
▪ (4)金属器皿
▪ 洗衣粉洗涤 蒸馏水洗
酒精棉球擦拭晾干
二、常用器具得清洗消毒方法
▪ 2、消毒 ▪ 物理:热力灭菌 、电离辐射、紫外灭菌
度较低、生长较困难得情况
▪ RPMI1640
(一)、培养基
▪ (2)、合成培养基
▪ ②无血清培养基
▪ 虽然基础培养基加少量血清所配制得完全培养基可以满足大 部分细胞培养实验得要求,但对有些实验却不适合,如观察一种 生长因子对某种细胞得作用,又如测定某种细胞在培养过程中 分泌某种物质(抗体、生长因子)得能力。
▪ NaHCO3 ＋H2O ←→ Na++HO-+H2O+CO2 ↑
(一)、培养基
▪ (1)、天然培养基
▪ 血清得种类 :主要就是牛血清,在培养某些特殊细胞 时也用人血清、马血清等。
▪ 牛血清还分为小牛血清、新生牛血清与胎牛血清。 一般使用得为小牛血清,小牛血清取自出生10～30 天得小牛。
(一)、培养基
倍浓缩液,配制时应加温至30℃,完全溶解后过滤除菌,分 装至小瓶,储存于-20℃。
(三)、其她培养用液
▪ 4、抗生素液
▪ 常用得就是青链霉素,俗称“双抗溶液”。青霉素主要 对革兰阳性菌有效,链霉素主要对革兰阴性菌有效。
▪ 青霉素使用得终浓度为100000U/L,链霉素使用得终浓 度为0、1g/L。一般配制成100倍浓缩液,可用PBS或 培养基配制。
▪ 用过得橡胶制品:同玻璃器材得清洗
二、常用器具得清洗消毒方法
▪ 1、清洗
▪ (3)塑料器皿
▪ 2%NaOH浸泡过夜 2~5% HCl 浸泡 30min 蒸馏水洗
▪ (4)金属器皿
▪ 洗衣粉洗涤 蒸馏水洗
酒精棉球擦拭晾干
二、常用器具得清洗消毒方法
▪ 2、消毒 ▪ 物理:热力灭菌 、电离辐射、紫外灭菌
度较低、生长较困难得情况
▪ RPMI1640
(一)、培养基
▪ (2)、合成培养基
▪ ②无血清培养基
▪ 虽然基础培养基加少量血清所配制得完全培养基可以满足大 部分细胞培养实验得要求,但对有些实验却不适合,如观察一种 生长因子对某种细胞得作用,又如测定某种细胞在培养过程中 分泌某种物质(抗体、生长因子)得能力。
▪ NaHCO3 ＋H2O ←→ Na++HO-+H2O+CO2 ↑
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新鲜培养基，为其提供更多继续生长的空间。 • 细胞系：首次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。 • 细胞株：如果将细胞系的一个细胞通过克隆或者其他方法从培养物中
明确地选择出来，就成为一个细胞株。
2
细胞培养基本概念
• 有限细胞系与连续细胞系：正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后 就会丧失增殖的能力，这是一个由遗传决定的事件，被称为衰老；这 种只能分裂有限的次数的细胞系被称为有限细胞系。但是，一些细胞 系会通过“转化”的过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生， 也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力 后，就成为连续细胞系。
细胞培养基本知识
1
细胞培养基本概念
• 细胞培养：从动物或植物中取出细胞，使其在合适的人工环境中生长。 • 细胞来源：细胞可直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，
也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 • 原代培养：是指将细胞从组织中分离后，使其在合适的条件下增殖，
直到占据所有可用基质(即：汇合) 的培养阶段。 • 传代培养：在细胞生长至汇合，必须将细胞转移到新的容器中并更换
22
PBS的制备
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水； • 放在磁力搅拌器上，设定转速200r/min； • 打开PBS干粉（1L装）加入烧杯中； • 搅拌至完全溶解； • PH计检测PH为7.4，变化＜0.1； • 分装至灭菌的储液瓶中，盖子只轻旋一圈，放入灭菌锅中湿热灭菌； • 自然冷却后盖紧，4℃或室温保存。
湿热灭菌121℃，20min（高速离心管尤其注意灭菌时要直立 放置）； • 自然冷却后置于烘箱中烘干。
21
水的制备和灭菌
• 细胞培养需要用超纯水（UPW）； • 第一：反向渗透或蒸馏；第二：碳过滤去除有机或无机胶
体（总有机碳TOC ≤10ug/L）；第三：去离子（电阻 ≥10MΩ/cm）； • 高压灭菌121℃，20min，自然冷却。
18
灭菌方式的选择
项目
消毒方式
玻璃器皿
干热
金属制品
干热
带螺口盖的玻璃品 高压灭菌，将盖悬 松
玻璃移液管
干热
枪头
高压灭菌
离心管(5ml，15ml， 高压灭菌，直立放
50ml)
置
EP管(1.5ml，2ml， 高压灭菌 5ml，10ml)
试管
干热
艾本德移液器（新） 高压灭菌，整支
高压灭菌
过滤
琼脂
氨基酸
蛋白胨
却后使用； • 100目和600目的筛网需要超声清洗。
20
塑料制品的清洗和灭菌
• 将塑料制品放入含有消毒剂（次氯酸钠）和清洁剂（Decon） 的洗液中浸泡30min，自来水冲洗干净；
• 置于超声清洗器中清洗30min； • 用自来水充分清洗后用去离子水清洗（塑料制品要用专用的刷
子或者将自来水连上胶管伸进塑料管内部冲洗）； • 将离心管的盖子和管体分开用图纸包起来，直立放入灭菌锅中
7
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
8
910Βιβλιοθήκη 111213
14
15
16
准备与灭菌
17
灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
• 热稳定的液体：水、盐溶液和适度热稳定的塑料制品：硅 树 脂 、 尼 龙 、 聚 丙 烯 、 聚 碳 酸 酯 用 湿 热 灭 菌 ： 121 ℃ ， 20min；
• 不耐热液体：过滤除菌； • 不耐热物品：射线灭菌30min，70%乙醇擦拭。
5
细胞培养实验室
隔间
走廊
二更
一间
二间
三间
一更
准备室
6
细胞培养设备
• 基本设备：
• 细胞培养通风橱 (即：层 流通风橱或生物安全柜)
• 培养箱 (推荐使用湿式二 氧化碳培养箱)
• 水浴锅
• 离心机
• 冰箱和冰柜 (–20°C)
• 细胞计数器 (例如： Countess® 自动细胞计数 器或血球计数器)
果）、经济、规模和机械化；
4
细胞培养的应用
• 细胞培养是细胞和分子生物学中最重要的一项技术，可为细胞正常生 理和生化 (例如：代谢研究、衰老研究)、药物和毒性化合物对细胞的 作用以及致突变和致癌研究提供上佳的模型系统。细胞培养还可用于 药物筛选和开发以及生物化合物 (例如：疫苗、治疗性蛋白) 的大规模 生产。
抗生素
EDTA
牛血清白蛋白
甘油
胶原酶
HEPES
药物
甲基纤维素 谷氨酸盐
酚红
生长因子
盐溶液
HCL
水
NaHCO3
NaOH
血清
丙酮酸钠
胰蛋白酶
19
玻璃器皿、金属器皿的清洗和灭菌
• 将玻璃和金属器皿放入含有消毒剂（次氯酸钠）和清洁剂 （Decon）的洗液中，侵泡过夜或至少2h（铝、铜制品不得浸 泡）;
• 试管刷清洗，自来水冲洗4次，去离子水冲洗3次； • 倒置于烘箱中烘干； • 铝箔封口保存； • 使用前24~48h，放入干热灭菌箱中，160℃灭菌1h，自然冷
23
配置完全培养基
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水，置于磁力搅拌器上，设定200r/min，边 搅拌边加入1袋DMEM或DMEM/F12干粉（已含L-谷氨酰胺和丙酮酸 钠）；
• 用注射器吸取超纯水，将包装袋内残留培养基洗下；
• 干粉溶解后加入2.438g NaHCO3，搅拌至完全溶解；
• 用HCl和NaOH调节PH为7.2，过滤除菌后（PH接近7.4）4℃保存；
• 倒置显微镜
• 液氮 (N2) 冷冻柜或冻存 容器
• 灭菌器 (即：高压灭菌器)
• 扩增设备： • 抽吸泵 (蠕动泵或真空泵) • pH 计 • 共聚焦显微镜 • 流式细胞仪
• 其他用品： • 细胞培养容器 (例如：培 养瓶、培养皿、滚瓶、 多孔板) • 吸管和移液器 • 注射器和针头 • 废物容器 • 培养基、血清和试剂 • 细胞系
• 培养条件：细胞培养的人工环境必须包括合适的容器，容器中含有一 定的基质或介质，为细胞提供必需的营养素 (氨基酸、碳水化合物、 维生素、矿物质)、生长因子、激素和气体 (O2、CO2)，并可调节其 物理化学环境 (pH、渗透压、温度)。
3
为什么要细胞培养？
• 避开机体自身调节和实验应激的整体因素的影响； • 环境控制、均一性（可以使用一批同源细胞获得稳定、可重复的结
明确地选择出来，就成为一个细胞株。
2
细胞培养基本概念
• 有限细胞系与连续细胞系：正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后 就会丧失增殖的能力，这是一个由遗传决定的事件，被称为衰老；这 种只能分裂有限的次数的细胞系被称为有限细胞系。但是，一些细胞 系会通过“转化”的过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生， 也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力 后，就成为连续细胞系。
细胞培养基本知识
1
细胞培养基本概念
• 细胞培养：从动物或植物中取出细胞，使其在合适的人工环境中生长。 • 细胞来源：细胞可直接从组织中取出并采用酶或机械方法进行解离，
也可来自已经建立的细胞系或细胞株。 • 原代培养：是指将细胞从组织中分离后，使其在合适的条件下增殖，
直到占据所有可用基质(即：汇合) 的培养阶段。 • 传代培养：在细胞生长至汇合，必须将细胞转移到新的容器中并更换
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PBS的制备
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水； • 放在磁力搅拌器上，设定转速200r/min； • 打开PBS干粉（1L装）加入烧杯中； • 搅拌至完全溶解； • PH计检测PH为7.4，变化＜0.1； • 分装至灭菌的储液瓶中，盖子只轻旋一圈，放入灭菌锅中湿热灭菌； • 自然冷却后盖紧，4℃或室温保存。
湿热灭菌121℃，20min（高速离心管尤其注意灭菌时要直立 放置）； • 自然冷却后置于烘箱中烘干。
21
水的制备和灭菌
• 细胞培养需要用超纯水（UPW）； • 第一：反向渗透或蒸馏；第二：碳过滤去除有机或无机胶
体（总有机碳TOC ≤10ug/L）；第三：去离子（电阻 ≥10MΩ/cm）； • 高压灭菌121℃，20min，自然冷却。
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灭菌方式的选择
项目
消毒方式
玻璃器皿
干热
金属制品
干热
带螺口盖的玻璃品 高压灭菌，将盖悬 松
玻璃移液管
干热
枪头
高压灭菌
离心管(5ml，15ml， 高压灭菌，直立放
50ml)
置
EP管(1.5ml，2ml， 高压灭菌 5ml，10ml)
试管
干热
艾本德移液器（新） 高压灭菌，整支
高压灭菌
过滤
琼脂
氨基酸
蛋白胨
却后使用； • 100目和600目的筛网需要超声清洗。
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塑料制品的清洗和灭菌
• 将塑料制品放入含有消毒剂（次氯酸钠）和清洁剂（Decon） 的洗液中浸泡30min，自来水冲洗干净；
• 置于超声清洗器中清洗30min； • 用自来水充分清洗后用去离子水清洗（塑料制品要用专用的刷
子或者将自来水连上胶管伸进塑料管内部冲洗）； • 将离心管的盖子和管体分开用图纸包起来，直立放入灭菌锅中
7
• 气流可以呈水平方向，与工作 台面平行吹过，或者也可呈垂 直方向，从通风橱上方吹向工 作台面。
• 细胞培养通风橱通过维持工 作区域上方稳定、单向的 HEPA过滤空气流动，保护工 作环境免受灰尘及其他空气 污染物污染。
8
910Βιβλιοθήκη 111213
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15
16
准备与灭菌
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灭菌方式的选择
• 热稳定的物品（玻璃器皿、金属）用干热灭菌：160℃， 1h；
• 热稳定的液体：水、盐溶液和适度热稳定的塑料制品：硅 树 脂 、 尼 龙 、 聚 丙 烯 、 聚 碳 酸 酯 用 湿 热 灭 菌 ： 121 ℃ ， 20min；
• 不耐热液体：过滤除菌； • 不耐热物品：射线灭菌30min，70%乙醇擦拭。
5
细胞培养实验室
隔间
走廊
二更
一间
二间
三间
一更
准备室
6
细胞培养设备
• 基本设备：
• 细胞培养通风橱 (即：层 流通风橱或生物安全柜)
• 培养箱 (推荐使用湿式二 氧化碳培养箱)
• 水浴锅
• 离心机
• 冰箱和冰柜 (–20°C)
• 细胞计数器 (例如： Countess® 自动细胞计数 器或血球计数器)
果）、经济、规模和机械化；
4
细胞培养的应用
• 细胞培养是细胞和分子生物学中最重要的一项技术，可为细胞正常生 理和生化 (例如：代谢研究、衰老研究)、药物和毒性化合物对细胞的 作用以及致突变和致癌研究提供上佳的模型系统。细胞培养还可用于 药物筛选和开发以及生物化合物 (例如：疫苗、治疗性蛋白) 的大规模 生产。
抗生素
EDTA
牛血清白蛋白
甘油
胶原酶
HEPES
药物
甲基纤维素 谷氨酸盐
酚红
生长因子
盐溶液
HCL
水
NaHCO3
NaOH
血清
丙酮酸钠
胰蛋白酶
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玻璃器皿、金属器皿的清洗和灭菌
• 将玻璃和金属器皿放入含有消毒剂（次氯酸钠）和清洁剂 （Decon）的洗液中，侵泡过夜或至少2h（铝、铜制品不得浸 泡）;
• 试管刷清洗，自来水冲洗4次，去离子水冲洗3次； • 倒置于烘箱中烘干； • 铝箔封口保存； • 使用前24~48h，放入干热灭菌箱中，160℃灭菌1h，自然冷
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配置完全培养基
• 烧杯中加入1L灭菌超纯水，置于磁力搅拌器上，设定200r/min，边 搅拌边加入1袋DMEM或DMEM/F12干粉（已含L-谷氨酰胺和丙酮酸 钠）；
• 用注射器吸取超纯水，将包装袋内残留培养基洗下；
• 干粉溶解后加入2.438g NaHCO3，搅拌至完全溶解；
• 用HCl和NaOH调节PH为7.2，过滤除菌后（PH接近7.4）4℃保存；
• 倒置显微镜
• 液氮 (N2) 冷冻柜或冻存 容器
• 灭菌器 (即：高压灭菌器)
• 扩增设备： • 抽吸泵 (蠕动泵或真空泵) • pH 计 • 共聚焦显微镜 • 流式细胞仪
• 其他用品： • 细胞培养容器 (例如：培 养瓶、培养皿、滚瓶、 多孔板) • 吸管和移液器 • 注射器和针头 • 废物容器 • 培养基、血清和试剂 • 细胞系
• 培养条件：细胞培养的人工环境必须包括合适的容器，容器中含有一 定的基质或介质，为细胞提供必需的营养素 (氨基酸、碳水化合物、 维生素、矿物质)、生长因子、激素和气体 (O2、CO2)，并可调节其 物理化学环境 (pH、渗透压、温度)。
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为什么要细胞培养？
• 避开机体自身调节和实验应激的整体因素的影响； • 环境控制、均一性（可以使用一批同源细胞获得稳定、可重复的结