任务一大肠杆菌病实验室诊断所需培养基的制备实训指导.

任务一大肠杆菌病的实验室诊断所需培养基的制备

实训指导

实训目标熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH 。

仪器及材料高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、烧杯、玻棒、胶头滴管、试管、培养皿、营养琼脂、伊红美兰琼脂、麦康凯琼脂、SS 琼脂、三糖铁琼脂，蒸馏水等

方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH →过滤→分装→灭菌→冷却→无菌检验→冷藏备用。

一、营养琼脂平板的制备

1. 配料参照营养琼脂瓶上的说明书，跟据所需制备的营养琼脂平板个数，按照15~20mL/平板的量计算出所需营养琼脂和蒸馏水的量，称取营养琼脂粉加入适量蒸馏水中。

2. 溶化在电炉上煮沸，边加热边用玻璃棒搅拌，使营养琼脂粉完全溶解于蒸馏水中。

3. 分装将融化好的培养基分装于玻璃平皿中（15~20mL/个），使培养基覆盖整个平皿底部，平皿内培养基厚度为2~3mm。

4. 灭菌将装有培养基的平皿放到高压锅中，采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，灭菌条件为121℃灭菌15min。

5. 冷却凝固凝固点大约在40℃。

6. 无菌检验把制备好的培养基倒置于37 ℃恒温培养箱培养18~24h，观察培养基内是否有菌生长。若无菌生长，则为合格培养基。若有菌生长，则培养基不合格。

7. 冷藏备用置4℃冰箱内冷藏保存备用。

此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。

二、伊红美兰琼脂平板和麦糠凯琼脂平板的制备

参照营养琼脂平板的制备步骤和包装瓶上的说明书制作。

此培养基为鉴别培养基，常用于肠杆菌科细菌的分离培养。

三、SS琼脂平板的制备

此培养基为选择培养基，成分中含有胆盐，制备时无需灭菌处理，其他步骤参照营养琼脂平板的制备方法。

四、三糖铁试管斜面

主要步骤参照营养琼脂平板的制备方法。区别主要有两点，一是按照5mL/支的量将融化好的培养基分装于试管中，倒入的培养基约占试管高度1/3。二是在冷却凝固时将试管摆成斜面放置。

注：本实验所用琼脂为商品化配方琼脂粉，不需要测定矫正pH和过滤。