任务一大肠杆菌病实验室诊断所需培养基的制备实训指导.
(完整版)大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告大肠杆菌实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体没有害处，但某些菌株可能引起食物中毒和其他健康问题。
本实验旨在探究大肠杆菌的特性和其对环境的适应能力。
实验目的：1. 了解大肠杆菌的形态和结构特征；2. 探究大肠杆菌的生长条件和适应能力；3. 研究大肠杆菌在不同环境下的生长情况。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌移液管- 微量移液器- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验步骤：1. 准备培养基：将大肠杆菌培养基按照说明书配制好，并灭菌处理。
2. 接种：使用微量移液器，将大肠杆菌接种到灭菌培养皿中。
3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度和湿度条件。
4. 观察生长情况：每隔一段时间，观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。
5. 形态和结构观察：取一部分培养物放在载玻片上，使用显微镜观察大肠杆菌的形态和结构特征。
实验结果：1. 大肠杆菌的形态和结构特征：在显微镜下观察，大肠杆菌呈现为短杆状，长度约为2-4微米，直径约为0.5微米。
细菌的表面有许多纤毛，这些纤毛有助于细菌的运动和附着。
大肠杆菌呈现为革兰阴性菌，其细胞壁主要由脂多糖和蛋白质组成。
2. 大肠杆菌的生长条件和适应能力：大肠杆菌在适宜的环境条件下能够迅速生长和繁殖。
它对温度、pH值和营养物的要求较为宽容。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37摄氏度，pH值在6.5-7.5之间。
此外，大肠杆菌对葡萄糖等简单糖类具有较高的利用能力，能够利用这些营养物进行代谢和生长。
3. 大肠杆菌在不同环境下的生长情况：大肠杆菌在不同环境条件下的生长情况可能有所不同。
例如，在高温环境下，大肠杆菌的生长速度会加快，而在低温环境下则会减慢。
此外，在酸性环境中，大肠杆菌的生长可能受到抑制。
然而，尽管大肠杆菌对环境的适应能力较强，但在极端条件下，如高温、高盐度等，它的生长可能会受到抑制或甚至死亡。
大肠杆菌实习报告
实习报告：大肠杆菌的实验室检测一、实习背景与目的本次实习在老师的指导下，对大肠杆菌进行了实验室检测。
实习的主要目的是了解大肠杆菌的基本特性，掌握实验室检测方法，提高自己的实验操作能力。
二、实习内容与过程1. 培养基配置在实验室检测大肠杆菌之前，首先需要配置LB液体培养基。
LB培养基是一种常用的营养丰富的培养基，适用于大肠杆菌的生长。
配置过程包括称量、溶解、灭菌等步骤。
2. 菌株接种将大肠杆菌菌株取出，用无菌水冲洗后，用接种环取一定量的菌株，均匀地涂抹在LB液体培养基上。
然后将培养皿放入培养箱中，保持适宜的温度和时间，让菌株在培养基上生长。
3. 观察与记录在菌株生长过程中，需要定期观察并记录菌落的大小、形状、颜色等特征。
这些特征可以作为判断大肠杆菌生长状况的依据。
4. 生化试验为了进一步确认大肠杆菌的身份，需要进行生化试验。
主要包括糖类发酵试验、乳糖发酵试验、尿素分解试验等。
通过观察试验结果，可以判断大肠杆菌的生化特性。
5. 药物敏感试验为了了解大肠杆菌对各种抗生素的敏感性，进行了药物敏感试验。
将大肠杆菌菌株均匀涂抹在含有不同抗生素的培养基上，观察菌落的生长情况，从而判断大肠杆菌对各种抗生素的敏感性。
三、实习心得与体会通过本次实习，我对大肠杆菌的实验室检测有了更深入的了解。
在实验操作过程中，我学会了如何配置培养基、接种、观察菌落特征、进行生化试验和药物敏感试验等。
同时，我还明白了实验操作的严谨性和规范性对于实验结果的重要性。
此外，本次实习也让我认识到了团队合作的重要性。
在实习过程中，我和同学们一起讨论实验问题、分享实验心得，共同解决实验中遇到的困难。
这种团队合作的精神对我今后的学习和工作中具有很大的启示。
四、实习总结本次大肠杆菌实验室检测实习，使我掌握了实验操作技能，提高了自己的实验能力。
同时，我也认识到了团队合作的重要性。
在今后的学习和工作中，我将不断努力，争取更好地将所学知识运用到实际工作中。
大肠杆菌自动诱导培养基配方及操作方法
大肠杆菌自动诱导培养基配方及操作方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是实验室中常用的菌种之一、下面是大肠杆菌自动诱导培养基的配方及操作方法。
一、自动诱导培养基配方：1.碳源：-葡萄糖（10g/L）：作为主要的碳源供给菌体能量。
-乳糖（5g/L）：用于诱导乳糖酶的表达。
2.氮源：-酵母粉（5g/L）：提供菌体生长所需的氮源。
3.盐类：-氯化钠（5g/L）：维持培养基的渗透压和离子平衡。
4.调节剂：-草酸二钠（1.36g/L）：调节培养基的pH值，保持适宜的生长环境。
5.其他添加剂：-磷酸二氢钾（5g/L）：提供磷酸盐的源，促进菌体生长。
-氯化钾（0.25g/L）：提供钾盐的源，满足菌体对钾的需求。
-氯化镁（0.5g/L）：提供镁盐的源，满足菌体对镁的需求。
配方中的所有化学品都可以在实验室常见试剂供应商处购买得到。
二、自动诱导培养基操作方法：1.准备培养基：a.根据配方将所需的化学品称量并溶解在适量的去离子水中。
b.用自动滤器（pH7.0）滤过溶液以去除可能存在的微生物污染。
c.调节培养基的pH至7.0，再用去离子水补足总体积至所需浓度。
2.灭菌：a.将调好pH的培养基倒入适量的培养瓶中。
b.放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌。
3.菌种接种：a.选取一株适宜的大肠杆菌菌株，用无菌技术将其接种至培养基中。
b. 将接种好的培养基培养瓶放入恒温摇床中，以28°C恒温、200 rpm的条件下培养。
4.观察生长：a.在培养过程中，定期取一部分培养基进行测量分析。
b.测量菌液的光密度（OD值），以评估菌体生长情况。
5.收获细胞：a.在菌液达到一定浓度后，用无菌操作将菌液转移到离心管中。
c.将沉淀用缓冲液重悬。
6.文库构建：a.从收获的菌体中提取DNA，并使用合适的方法构建文库。
以上即为大肠杆菌自动诱导培养基的配方及操作方法。
在实验过程中，要注意使用无菌技术，尽量避免微生物污染。
大肠杆菌培养实验报告
一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。
2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。
3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。
本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。
四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。
2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。
（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。
（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。
（4）用无菌滤膜过滤除菌。
3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。
（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。
（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。
（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。
5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。
实验1 大肠杆菌的培养和分离实验教学提纲
实验1 大肠杆菌的培养和分离教学提纲实验目的1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的划线培养。
3.说明大肠杆菌的培养条件和操作要求的原理。
实验材料1.配制LB液体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL溶解。
2.配制LB固体培养基，蛋白胨0.5g，酵母提取液0.25g，氯化钠0.5g，琼脂1g，加水50mL溶解（配制LB固体培养基是用来倒平板和倒试管斜面）。
实验步骤1.培养基灭菌。
在两个150mL的三角瓶中分别装入50mL LB液体培养基和50mL LB固体培养基（刚配好，尚未凝固），加上封口膜(一种塑料薄膜，中间有小孔的滤膜。
既可以通气，又不使细菌进入。
)。
将培养皿用牛皮纸包好，放入高压灭菌锅中，1kg压力灭菌15min（有压力时开始计时）。
同时将需要灭菌使用的培养皿、试管、三角瓶等和所用器械（接种环、镊子等）等一块灭菌。
2.倒平板，倒斜面。
灭菌后。
待高压锅压力与大气压相同时，打开锅盖，将有培养基的三角瓶、试管、培养皿等放在灭菌后的超净工作台上。
超净工作台操作：打超净工作台的紫外灯（注意：打开紫外灯后人必须离开），持续30min，关闭紫外灯，打开过滤风和白炽灯。
将有培养基的三角瓶和培养皿放在灭菌后的超净工作台上后，点燃酒精灯，用镊子夹出酒精棉球擦拭桌面，并用酒精棉球擦手。
待固体培养基冷却到60℃时（手放上还有些热的时候），在酒精灯火焰旁，以右手无名指及小指夹持含有固体培养基的三角瓶的封口膜，右手其他三个手指拿着三角瓶；左手拿着培养皿，并打开上盖的一边，将三角瓶的培养基约10～20mL倒入1 个培养皿中。
倒入后立即置于水平位置上，轻轻摇晃，使培养基铺满培养皿底，待凝，使之形成平面。
倒斜面（试管内空白斜面），用玻璃漏斗倒入试管内，每试管2mL。
试管斜靠在平放的铅笔上，冷却凝固。
3.液体培养基用于大肠杆菌的扩大培养。
任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备教案.
任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备教案
授课内容大肠杆菌病实验室诊断方案设
计及所需培养基的制备
授课时数 2
授课教师授课班级
授课类型技能课授课场地教学做一体化实验室教学材料PPT及各种试验器材教学方法举例、讲授、示教、操作教学重点相关实训的操作及结果判定
教学难点培养基的灭菌
教学目标会制备实验室常用的培养基
教学内容及过程 导入新课：（0.5学时）
组织学生汇报大肠杆菌病的实验室诊断方案，并进行讨论。
教学内容（约17学时）
任务一大肠杆菌病实验室诊断方案设计及所需培养基的制备（约2学时）
一、大肠杆菌病实验室诊断方案设计介绍
二、实习周作业：提交综合试验论文---大肠杆菌病的实验室诊断报告
1.事先讲清楚综合试验论文的书写要求，提交电子版，实验结果拍照片并插入论文相应位置
2.强调对试验结果的记录和分析
三、所需培养基的制备
（一）说明所需制备的培养基类型及用途，布置任务
1.细菌分离培养---麦糠凯琼脂平板（1个/人）
2.细菌的纯培养---普通营养琼脂平板（1个/人）
3.细菌的生化试验---H
2
S试管斜面（1支/人）
4.细菌的敏感药物筛选---MH琼脂平板（1个/人）
5.菌种保存---营养琼脂试管斜面（1支/人）
（二）讲授各类培养基制备的方法并示教
配料→溶化→分装灭菌→冷却→无菌检验→冷藏备用。
（三）学生操作该试验
（四）点评各实验组培养基制备情况，收集培养基冷藏保存
习题作业 1.试述普通营养琼脂平板的制备步骤？
课后反思事先给各实验组分配好制作的培养基类型及数量注：标记★的内容为重点，标记◎的内容为难点。
大肠杆菌实验室实习报告
一、实习背景大肠杆菌（Escherichia coli），是常见的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于自然界和人体肠道中。
作为一种重要的模式生物，大肠杆菌在生物学、医学、食品科学等领域具有广泛的应用。
本次实习旨在通过实验室操作，加深对大肠杆菌的认识，掌握其培养、鉴定、分离等基本技能。
二、实习目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性及在各个领域的应用。
2. 掌握大肠杆菌的培养、鉴定、分离等基本技能。
3. 提高实验室操作能力，培养严谨的科学态度。
三、实习内容1. 大肠杆菌的培养（1）培养基的配制：称取适量的LB培养基粉末，加入蒸馏水溶解，调整pH值至7.0，分装于锥形瓶中，高压蒸汽灭菌。
（2）培养：将灭菌后的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌接种环挑取适量菌种接种于培养基上，置于37℃恒温培养箱中培养。
2. 大肠杆菌的鉴定（1）革兰氏染色：将培养好的菌落涂片，进行革兰氏染色，观察菌体的形态和颜色。
（2）生化实验：进行葡萄糖发酵、乳糖发酵、氧化酶试验等生化实验，以鉴定菌种。
3. 大肠杆菌的分离（1）平板划线法：将培养好的菌液用无菌接种环涂布于平板上，进行平板划线，观察菌落的生长情况。
（2）稀释涂布平板法：将培养好的菌液进行梯度稀释，取适量稀释液涂布于平板上，进行分离。
四、实习结果与分析1. 大肠杆菌的培养通过培养，成功获得了大肠杆菌菌落，菌落呈圆形、光滑、湿润、透明，边缘整齐。
2. 大肠杆菌的鉴定革兰氏染色结果显示，大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，呈短杆状。
生化实验结果显示，大肠杆菌能发酵葡萄糖，不发酵乳糖，氧化酶试验阴性。
3. 大肠杆菌的分离平板划线法和稀释涂布平板法均成功分离出大肠杆菌菌落，菌落特征与培养得到的菌落一致。
五、实习体会1. 通过本次实习，我对大肠杆菌的生物学特性、培养、鉴定、分离等基本技能有了更深入的了解。
2. 实验室操作过程中，我学会了无菌操作、微生物培养、显微镜观察等基本技能，提高了自己的动手能力。
大肠杆菌培养基制备过程
大肠杆菌培养基制备过程
制备大肠杆菌培养基的过程如下：
1. 准备培养基成分：大肠杆菌培养基的成分包括碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物。
常用的
碳源有葡萄糖、蔗糖等；氮源可以选择氨基酸、氨基酸类化合物等；矿物质盐可以选择无机盐、有机盐等。
添加剂有pH调节剂、辅因子等。
2. 杀菌处理：将所需的碳源、氮源、矿物质盐及其他添加物加入适量的蒸馏水中，经过高温高
压灭菌处理。
3. 酶解处理：将培养基中添加的蛋白质进行酶解处理，以提供大肠杆菌生长所需的氮源。
4. 调整pH值：使用pH调节剂调整培养基的pH值，常见的调节剂有氢氧化钠和氢氧化钾等。
5. 分装和灭菌：将制备好的培养基分装到培养瓶或培养皿中，然后进行高温高压灭菌处理，以
保证培养基的无菌状态。
6. 储存和使用：将灭菌后的培养基在低温下储存，以延长其使用寿命。
使用时，将培养基回溶，配制成适当浓度的液态培养基，用于大肠杆菌的培养和研究。
需要注意的是，大肠杆菌培养基的制备过程可能存在一定的差异，具体的制备步骤和成分比例
可根据实验需求进行调整。
此外，操作过程中需要注意无菌操作，并保持培养基的无菌状态，
以避免杂菌污染。
大肠杆菌培养步骤方法
大肠杆菌培养步骤方法一、目的大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水源、动植物体内等。
大肠杆菌对人类和动物具有一定的致病性，因此了解如何进行大肠杆菌的培养对于食品安全、生物安全和公共卫生等方面具有重要意义。
本方法旨在提供一种简单、快速、有效的大肠杆菌培养方法，帮助实验室和研究人员准确地进行大肠杆菌的检测和鉴定。
二、材料1.培养基：大肠杆菌培养基是专门用于培养大肠杆菌的特殊培养基。
常用的有大肠杆菌培养基（EMB培养基）、麦康凯培养基等。
这些培养基通常含有大肠杆菌所需的营养物质，如碳源、氮源、维生素和矿物质等，以及能够选择性区分大肠杆菌的抑制剂。
2.接种环：用于将菌种接种到培养基上的金属环。
3.显微镜：用于观察细菌的形态和生长情况。
4.灭菌锅：用于消毒和灭菌器具和材料，保证实验结果的准确性和实验过程的安全性。
5.恒温培养箱：用于在适宜的温度下培养细菌。
三、步骤方法1.准备培养基：根据所选择的培养基配方，将所需的成分混合在一起，加入适量的水，搅拌均匀后加热煮沸，然后倒入灭菌的培养皿中，待其冷却凝固。
2.灭菌：将所有实验器具和材料放入灭菌锅中进行消毒灭菌，确保无菌操作，避免杂菌污染。
3.接种：从保存菌种的冰箱中取出接种环，在火焰上加热接种环并灭菌。
用接种环蘸取少量菌种，轻轻划线或点涂在培养基表面，尽量分散开接种点。
将接种环放回原处。
4.培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，设定适宜的温度（一般为37℃）进行培养。
根据需要培养的时间不同，一般培养18-24小时后即可观察结果。
5.观察与记录：观察培养好的培养皿中大肠杆菌的生长情况，记录菌落特征、颜色、形态等信息。
如有需要，可以进行进一步的生化鉴定或分子生物学鉴定。
6.实验后处理：实验结束后，将使用过的器具、材料进行消毒处理，防止交叉污染和疾病传播。
同时，对实验产生的废物进行无害化处理，保护环境安全。
四、注意事项1.实验操作应在无菌条件下进行，避免杂菌污染。
大肠杆菌培养操作规程
大肠杆菌培养操作规程大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性细菌，广泛存在于土壤、水体、动植物体内等环境中，是一种重要的实验菌株。
在分子生物学和遗传工程的研究中，常用大肠杆菌作为宿主进行DNA重组、蛋白表达等操作。
下面是大肠杆菌培养操作规程，详细介绍了培养基配制、无菌操作和培养条件的要点。
一、培养基配制1.LB培养基配制：-将10g/L的蛋白胨和5g/L的酵母粉加入1000mL的蒸馏水中，搅拌溶解。
-加入5g/L的氯化钠和15g/L的琼脂糖，搅拌均匀。
-调节pH值为7.0，并用蒸馏水补足到1L。
-装入适量培养瓶中，用自吸过滤器过滤杂质后，压紧玻璃瓶盖。
-在121°C高压蒸汽灭菌器中高压下蒸煮30分钟。
-冷至50°C左右后，即可使用。
2.青霉素抗生素的添加：- 使用10mL 的β-内酰胺抗生素青霉素钾盐（100mg/mL）。
-在室温下将药物滴入培养基中。
-搅拌使药物均匀分布于培养基中。
二、无菌操作1.无菌操作区域：-使用无菌柜进行操作，以保证培养物中不受到外界的细菌污染。
-操作前将无菌柜的工作区域用75%酒精喷雾消毒。
2.培养物接种操作：-取一支培养物的试管，用无菌匙蘸取培养物碰触到无菌培养基，轻轻搅拌均匀。
-取一支无菌的移液管，将含有培养物的液体尽量缓慢地加入到培养基中。
-在接种完成后，用无菌铝箔封好培养基表面，以防止进一步的细菌污染。
三、培养条件1.温度与时间：-大肠杆菌在常规情况下在37°C下生长最好。
而对于一些特殊要求的实验，也可在30°C或42°C下培养。
-培养时间根据实验不同而定，通常在12-16小时为一个周期。
2.培养环境：-培养过程中应控制氧气的供应量，通常可以使用摇床培养。
-pH值控制在6.8-7.2之间，以便细菌生长繁殖。
3.培养密度：-通常使用100-1000mL培养基装入培养瓶中，以便细菌有足够的空间进行生长。
-在培养过程中需要适时摇晃培养瓶，以帮助培养物进行氧气和营养物的均匀供应。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方（胰化蛋白胨（Trypton）：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5 g/L；NaCl：10 g/L；pH 7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠 10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解，并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7.4左右，定容至1L，调pH 7.4（若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中，每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右。
如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2%的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸，用皮筋捆好。
所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期。
4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上，将培养基倒入培养皿内，每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm），在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用，灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时，微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板。
四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上，用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养基配制及培养方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的细菌，广泛用于分子生物学实验和基因工程研究中。
为了成功培养大肠杆菌，我们需要配制适合其生长繁殖的培养基，并采用正确的培养方法。
以下是大肠杆菌培养基的配制及培养方法的详细介绍。
一、大肠杆菌培养基的配制1. Luria-Bertani（LB）培养基LB培养基是最常用的培养基之一，其成分包括三个主要组成部分：氮源、碳源和盐类。
氮源：用于提供细菌所需的氮元素，可以使用氨基酸、含氮化合物等。
常用的氮源有氨基酸混合物、酵母提取物和酪蛋白水解物等。
碳源：用于提供细菌所需的碳元素，可以使用单糖、复糖、酒精、醇等。
常用的碳源有葡萄糖和乳糖等。
盐类：培养基中加入适量的盐类，以提供维持细菌生长所需的离子平衡，常用的盐类有氯化钠、磷酸二氢钠、氯化镁等。
将氮源、碳源和盐类按照一定比例混合，加入适量的蒸馏水中，调节pH值至7.0左右，然后用高压蒸汽灭菌。
2.M9培养基M9培养基是一种突变细菌筛选培养基，其主要成分是无机盐和碳源。
无机盐：使用硫酸铵、磷酸二氢钾、氯化钠等无机盐调配而成。
碳源：使用葡萄糖、蔗糖、乳糖等单糖或多糖。
按照一定比例混合无机盐和碳源，加入适量的蒸馏水中，调节pH值至7.0左右，然后用高压蒸汽灭菌。
二、大肠杆菌的培养方法1.培养前的预处理将所需的培养基配制好，装入洁净的培养皿或试管中，然后用高压蒸汽灭菌。
在培养大肠杆菌前，需要将冻存的菌株从-80℃的冰箱中取出，快速化解并接种至预先准备的LB或M9培养基中。
2.培养条件大肠杆菌的适宜生长温度为37℃，因此在培养过程中需要将培养皿放在37℃恒温培养箱中。
同时，还需控制培养时间和培养瓶内的氧气含量。
3.培养方法（1）液体培养将培养基加热至适温后，接种所需菌株，一般取两根菌体悬浮液放入新鲜的培养基中，使得初始菌体数约为10^7个/毫升。
随后放入37℃恒温培养箱中培养，每隔一段时间取样进行检测。
大肠杆菌微生物实验步骤
大肠杆菌微生物实验步骤嘿，朋友们！今天咱来唠唠大肠杆菌微生物实验的那些事儿。
你想想看，这大肠杆菌就像是一群小小的调皮鬼，咱们得想办法抓住它们的小辫子，好好研究研究。
首先呢，咱得准备好实验的家伙什儿。
就像战士上战场得有称手的兵器一样，咱得有干净的培养皿、合适的培养基，还有各种小滴管、小镊子啥的。
这培养皿就好比是小调皮鬼们的家，得给它们准备得舒舒服服的。
然后呢，咱得去弄点大肠杆菌的样本。
这就像是去抓小调皮鬼，得找对地方。
可以从一些可能有它们的地方，比如污水啊、土壤啊之类的地方弄一点回来。
拿到样本后，就可以开始接种啦！这就像是把小调皮鬼们放进它们的新家。
用小滴管小心翼翼地把样本滴到培养基上，可别太粗鲁了，把它们吓跑了可不行。
接下来，把培养皿放进合适的温度环境里。
哎呀呀，这就像是给小调皮鬼们创造一个它们喜欢的气候。
温度不能太高也不能太低，不然它们可不乐意生长。
在等待的过程中，你可别闲着。
时不时去看看这些小调皮鬼们有没有乖乖长大呀。
你说这像不像看着自己种的花儿一点点发芽长大？过了一段时间，你就会看到培养基上出现了一些小点点或者小菌落。
哈哈，这就是大肠杆菌们的聚集地啦！就像小调皮鬼们聚在一起玩耍一样。
这时候，咱可以进一步观察它们呀。
看看它们的形状、颜色，研究研究它们的特性。
这可是很有趣的呢，就好像你在探索一个神秘的小世界。
要是你还想更深入地了解它们，还可以做一些其他的实验呢。
比如检测它们对不同药物的反应，这就像是给小调皮鬼们出难题，看看它们怎么应对。
做大肠杆菌微生物实验啊，真的是既好玩又能学到好多知识。
你可以看到这些小小的微生物是怎么生活、怎么生长的。
这难道不是一件很神奇的事情吗？总之，做这个实验就像是一次奇妙的冒险。
你要细心、耐心，还要有好奇心。
这样你就能在这个小小的微生物世界里发现大大的乐趣和惊喜啦！。
大肠杆菌的治疗实验报告
一、实验目的本实验旨在通过实验研究，探究针对大肠杆菌感染的有效治疗方法，为临床治疗提供理论依据和实践指导。
二、实验材料1. 实验菌株：大肠杆菌（Escherichia coli）标准菌株ATCC 259222. 实验试剂：抗生素、培养基、生理盐水、无菌水等3. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、显微镜、移液器、培养皿等三、实验方法1. 菌株培养将大肠杆菌标准菌株ATCC 25922接种于LB培养基中，37℃恒温培养过夜，备用。
2. 抗生素敏感性试验（1）将过夜培养的大肠杆菌菌液进行稀释，制成不同浓度的菌悬液。
（2）将菌悬液分别接种于含有不同抗生素的琼脂平板上，37℃恒温培养24小时。
（3）观察并记录细菌生长情况，根据抑菌圈直径判断抗生素对大肠杆菌的敏感性。
3. 抗生素治疗效果试验（1）将大肠杆菌标准菌株ATCC 25922接种于LB培养基中，37℃恒温培养过夜。
（2）将过夜培养的大肠杆菌菌液稀释至一定浓度，备用。
（3）将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
（4）实验组小鼠腹腔注射稀释的大肠杆菌菌液，对照组小鼠腹腔注射等体积的生理盐水。
（5）观察并记录小鼠的病情变化，包括精神状态、食欲、体温等。
（6）在第3天和第5天，分别对实验组和对照组小鼠进行抗生素治疗，剂量为抗生素最大安全剂量。
（7）观察并记录小鼠的病情变化，包括精神状态、食欲、体温等。
（8）在第7天，处死小鼠，无菌操作下采集心血和肝、脾等组织样本，进行细菌培养和鉴定。
四、实验结果1. 抗生素敏感性试验实验结果显示，大肠杆菌对以下抗生素敏感：利福平、青霉素、多西环素、诺氟沙星、氧氟沙星、链霉素等。
2. 抗生素治疗效果试验实验结果显示，在第3天和第5天，实验组小鼠病情明显改善，与对照组相比，实验组小鼠体温下降、食欲增加、精神状态好转。
在第7天，实验组小鼠心血和肝、脾等组织样本细菌培养结果均为阴性，表明抗生素治疗有效。
五、讨论1. 本实验结果表明，大肠杆菌对多种抗生素敏感，为临床治疗提供了参考。
大肠杆菌的接种培养及抗菌实验
大肠杆菌的接种培养及抗菌实验大肠杆菌的接种培养及抗菌实验一、培养基的制备本次实验的主要抗菌是采用抗大肠杆菌，那么首先是做培养基。
我们团队使用的培养基是牛肉膏蛋白胨固体培养基，其成分为：牛肉膏3g，蛋白胨 10g，Nacl5g，琼脂18g，水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：1、称药品首先称取氯化钠15g，将其倒入1000ml的大烧杯中。
然后称取牛肉膏，牛肉膏是种粘附性很高的膏状物，所以放在表面皿中称取，称取后用事先准备好的10g的热水溶解后倒入盛有氯化钠的大烧杯中。
蛋白胨是泛有淡黄色的肉粉，它极易吸潮，称量时需要很迅速，然后将其倒入上述的大烧杯中。
称量琼脂18g，将其放在小烧杯中以待用。
准备工作已经完成。
2、加热溶解在上述准备的烧杯倒入少量的水，放在石棉网上，小火加热，并用玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后，先将水补充到1000ml,再将已经准备好的琼脂放入大烧杯中，再继续加热融化，期间要用玻璃棒不停的搅拌，防止琼脂糊底或者溢出，最后补足缺失的水分。
3、调解PH值检测培养基的PH值，我们团队制作的培养基PH在6.7，需要加1mol/l NaOH，共加10滴，又滴加1mol/l HCl 3滴，使PH到7.4。
4、制作棉塞试管用普通棉花，制作的棉塞。
棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。
5、分装根据本次实验要求,将配制的培养基分装入5支试管。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量:牛肉蛋白胨培养基约为试管高度的l/5。
6、加棉塞将已经制作好的棉塞分别将已装好培养基的试管上。
7、包扎由于培养基分装于试管中，将5支试管放在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好。
然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期。
8、灭菌将标记捆绑好的试管，放入蒸汽式高压锅中灭菌，温度一般可以达到160度左右，灭菌时间为2小时。
大肠杆菌实习报告
大肠杆菌（Escherichia coli），是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性菌，也是人畜共患病的主要病原菌之一。
为了深入了解大肠杆菌的生物学特性，提高实验室检测能力，我于近日在老师的指导下，进行了大肠杆菌的实验室检测实习。
二、实习目的1. 掌握大肠杆菌的实验室检测方法；2. 了解大肠杆菌的生物学特性；3. 提高实验操作技能，为今后的科研工作打下基础。
三、实习内容1. 样品采集与处理实习过程中，我们采集了含有大肠杆菌的污水样品。
首先，将样品进行初步的过滤处理，去除较大的杂质。
然后，用无菌水对样品进行稀释，以便后续的检测。
2. 培养基配置为了培养大肠杆菌，我们配置了LB液体培养基。
按照培养基配方，将各成分溶解后，用无菌水定容至1000ml。
然后将培养基分装到无菌试管中，121℃高压灭菌20分钟。
3. 菌落计数将稀释后的样品接种到LB固体培养基上，放入37℃恒温培养箱中培养24小时。
观察菌落生长情况，并用菌落计数器进行计数。
通过计算，得出样品中大肠杆菌的数量。
4. 鉴定实验为了进一步鉴定大肠杆菌，我们进行了以下实验：（1）革兰氏染色：将菌落涂片，进行革兰氏染色。
通过显微镜观察，观察菌体的染色情况，判断其为革兰氏阴性菌。
（2）生化试验：对分离出的菌株进行生化试验，包括葡萄糖发酵、乳糖发酵、氧化酶试验等。
通过试验结果，进一步确认菌株为大肠杆菌。
通过本次实习，我掌握了大肠杆菌的实验室检测方法，了解了其生物学特性。
在实验过程中，我学会了如何配置培养基、接种、培养、计数和鉴定菌株。
同时，我还提高了实验操作技能，为今后的科研工作打下了基础。
在实习过程中，我认识到以下几点：1. 实验操作要严谨，确保实验结果的准确性；2. 注意实验室安全，严格遵守操作规程；3. 培养良好的实验习惯，提高实验效率。
总之，本次实习让我受益匪浅，为我今后的学习和工作奠定了基础。
在今后的工作中，我将继续努力，不断提高自己的实验技能和科研水平。
大肠杆菌培养基配制及培养方法
大肠杆菌培养一、菌种冻存液的制备含有足量细菌的液体培养基离心后在沉淀中加入等量40%甘油，-80o C冻存。
二、培养基制备LB培养基配方(胰化蛋白胨（Trypton)：10 g/L；酵母提取物（Yeast Extract）：5g/L；NaCl：10g/L;pH7.4）液体培养基胰化蛋白胨 10.0g酵母粉 5.0g氯化钠10.0g水 1000mlpH 7.4固体培养基在液体培养基的基础上再加入1.5％－2.0％的琼脂三、平板的制备1）称取胰化蛋白胨10。
0g，酵母粉5.0g,NaCl 10.0g，加入800mL二次水溶解,并用玻璃棒搅拌均匀，用1mol/L的NaOH调pH至7。
4左右，定容至1L，调pH 7。
4(若溶液pH大于7.4，用1mol/L HCl回调）。
2）分装在锥形瓶中,每瓶量不宜太多，没过瓶底一指左右.如需固体培养基在分装后的液体培养基内加入约2％的琼脂（150mL液体培养基加入2.5g琼脂）。
3）在锥形瓶口依次覆盖带滤纸通气小孔的塑料膜和硬质纸,用皮筋捆好.所有锥形瓶如上述操作。
用记号笔注明培养基名称、配制日期.4）高压蒸汽灭菌锅121 oC灭菌15min。
5）灭菌后的培养基取出置电热鼓风干燥器内60oC烘干，待锥形瓶的封口纸干燥后取出。
液体培养基可直接保存或使用，此时加有琼脂的培养基不会凝固，可在预先紫外杀菌30min以上的无菌操作台上,将培养基倒入培养皿内,每个培养皿培养基约10-15mL（直径90mm）,在培养皿中厚度大约4mm左右。
将平皿叠放在无菌操作台上，放置10min左右，待琼脂基本凝固可涂平板。
6）若平板不直接使用,灭菌后将培养基在锥形瓶中保存，待需制备平板时,微波炉中火加热约3min，使琼脂熔化，室温冷却20min至不烫手可制备平板.四、接种大肠杆菌1）取实验室储备的大肠杆菌BL21冻存液，管口用酒精灯灼烧，打开离心管。
2）接种方法一：用灭菌枪头蘸取冻存液在平板边缘上划横条，每三道为一组，旋转平皿一圈，最后中间划之字；接种方法二：用移液枪吸取100uL溶液于平板上,用酒精灯灭菌厚的涂抹棒划十字，涂布平板。
大肠杆菌实验室实习报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的基本特性，掌握实验室大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
2. 学习国标法测定食品中大肠杆菌的数量，评估食品卫生安全。
二、实验原理1. 大肠杆菌是一种革兰氏阴性菌，具有特定的生理和生化特性。
2. 国标法测定大肠杆菌数量，主要采用滤膜法，即将样品过滤后，将滤膜贴于伊红美蓝培养基上，经培养后计数具有典型特征的大肠杆菌菌落。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、伊红美蓝培养基、大肠杆菌标准菌株、实验用食品样品等。
2. 仪器：高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、生物显微镜、PH计、电子天平、移液器、培养皿、试管、滴定管等。
四、实验步骤1. 制备LB培养基：按照配方称量牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加蒸馏水溶解后，调节PH值，分装到锥形瓶中，高压蒸汽灭菌。
2. 分离纯化大肠杆菌：将食品样品稀释一定倍数，取0.1mL涂布于LB培养基，37℃培养24h。
挑取具有典型特征的菌落，纯化培养。
3. 鉴定大肠杆菌：观察菌落形态、革兰氏染色、生化反应等特征，确定为大肠杆菌。
4. 计数大肠杆菌：将纯化后的大肠杆菌液按一定倍数稀释，取0.1mL涂布于伊红美蓝培养基，37℃培养24h。
计数具有典型特征的大肠杆菌菌落。
5. 计算样品中大肠杆菌的数量：根据稀释倍数和计数结果，计算样品中大肠杆菌的数量。
五、实验结果与分析1. 实验结果：通过分离纯化，从食品样品中成功获得大肠杆菌。
经过计数，样品中大肠杆菌的数量为XCFU/g。
2. 分析：本次实验成功分离纯化了大肠杆菌，并对其进行了计数。
结果表明，该食品样品中大肠杆菌的数量符合我国食品安全标准。
然而，在实验过程中，可能存在操作不当、样品污染等因素，导致实验结果略有偏差。
在今后的实验中，需加强操作规范，提高实验准确性。
六、实验总结通过本次实验，掌握了实验室大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法，学会了国标法测定食品中大肠杆菌的数量。
实验结果表明，该食品样品中大肠杆菌的数量符合我国食品安全标准。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
任务一大肠杆菌病的实验室诊断所需培养基的制备
实训指导
实训目标熟悉培养基制备的基本程序，会制备常用的培养基，会测定并矫正培养基的pH 。
仪器及材料高压蒸气灭菌器、电热干燥箱、电炉、天平、量筒、烧杯、玻棒、胶头滴管、试管、培养皿、营养琼脂、伊红美兰琼脂、麦康凯琼脂、SS 琼脂、三糖铁琼脂，蒸馏水等
方法与步骤培养基制备的基本程序配料→溶化→测定及矫正pH →过滤→分装→灭菌→冷却→无菌检验→冷藏备用。
一、营养琼脂平板的制备
1. 配料参照营养琼脂瓶上的说明书，跟据所需制备的营养琼脂平板个数，按照15~20mL/平板的量计算出所需营养琼脂和蒸馏水的量，称取营养琼脂粉加入适量蒸馏水中。
2. 溶化在电炉上煮沸，边加热边用玻璃棒搅拌，使营养琼脂粉完全溶解于蒸馏水中。
3. 分装将融化好的培养基分装于玻璃平皿中（15~20mL/个），使培养基覆盖整个平皿底部，平皿内培养基厚度为2~3mm。
4. 灭菌将装有培养基的平皿放到高压锅中，采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，灭菌条件为121℃灭菌15min。
5. 冷却凝固凝固点大约在40℃。
6. 无菌检验把制备好的培养基倒置于37 ℃恒温培养箱培养18~24h，观察培养基内是否有菌生长。
若无菌生长，则为合格培养基。
若有菌生长，则培养基不合格。
7. 冷藏备用置4℃冰箱内冷藏保存备用。
此培养基可供一般细菌的分离培养、纯培养，观察菌落特征及保存菌种等，也可作特殊培养基的基础。
二、伊红美兰琼脂平板和麦糠凯琼脂平板的制备
参照营养琼脂平板的制备步骤和包装瓶上的说明书制作。
此培养基为鉴别培养基，常用于肠杆菌科细菌的分离培养。
三、SS琼脂平板的制备
此培养基为选择培养基，成分中含有胆盐，制备时无需灭菌处理，其他步骤参照营养琼脂平板的制备方法。
四、三糖铁试管斜面
主要步骤参照营养琼脂平板的制备方法。
区别主要有两点，一是按照5mL/支的量将融化好的培养基分装于试管中，倒入的培养基约占试管高度1/3。
二是在冷却凝固时将试管摆成斜面放置。
注：本实验所用琼脂为商品化配方琼脂粉，不需要测定矫正pH和过滤。