1213硫酸鱼精蛋白生物效价测定法
《中国药典》2020年版第四部通用技术要求主要特点和增修订内容
《中国药典》2020年版第四部通⽤技术要求主要特点和增修订内容主要特点和增修订内容2.1制剂通则论述框架和技术要求进⼀步完善2.1.1系统修订制剂通则整体框架0100制剂通则旨在通过对药物制剂的总体论述来指导医药⼯作者对不同剂型、亚剂型进⾏合理的应⽤。
《中国药典》2015年版制剂通则是《中国药典》2010年版中药、化学药和⽣物制品制剂通则的简单整合，缺少关键考察项的汇总和归纳。
为进⼀步引导⽣产企业全⾯关注制剂⽣产质量控制和整体要求，对0100制剂通则进⾏修订，主要修改包括两个⽅⾯：⾸先完善了叙述结构。
从药物制剂制备的原则“安全、有效、可控、依从性”的⾓度出发，增加对剂量单位均匀性、稳定性、安全性与有效性、剂型与给药途径、包装与贮藏和标签与说明书等部分的分论述；强调中药制剂在整个⽣产过程中的关键质量属性，关注每个关键环节的量值传递规律。
其次，完善了具体内容。
提出剂量单位均匀性的要求，保障制剂⽣产质量的批间和批内药物含量等的⼀致性，体现制剂全过程控制的理念；在稳定性中提出复检期概念，促进⽣产企业根据产品⾃⾝的稳定性特性进⾏前瞻性的质量考察；在安全性与有效性中提出“通过⼈体临床试验证明药物的安全有效性后，药物才能最终获得上市与临床应⽤”，提⽰上市制剂的处⽅和⼯艺不得随意变更。
2.1.2系统修订各制剂通则的框架和表述《中国药典》2020年版制剂通则统⼀了各剂型论述框架及主要制备技术的简单论述。
除0110糊剂及0186膏剂外，其他36个剂型均不同程度修订了体例格式。
为进⼀步统⼀⽬前各剂型的表述问题，规范统⼀“⽣产与贮藏期间应符合下列规定”项下内容，按照原辅料→⼯艺与技术→质量与控制→包装与使⽤→贮存与运输等五⽅⾯的技术要点，着重补充⼤多数剂型缺少的⼯艺与技术⽅⾯的阐述。
增加特殊亚剂型临床使⽤关注点，如泡腾⽚不得直接吞服等，指导临床合理⽤药。
2.1.3收载和整合临床成熟剂型和亚剂型收载和整合临床成熟剂型和亚剂型，体现《中国药典》的先进性和对我国临床成熟新制剂技术的⽀持。
硫酸鱼精蛋白含量标准品
硫酸鱼精蛋白含量标准品(1)原料选择：选用优质鱼类作为原料，如深海鱼、三文鱼等。
(2)鱼精蛋白提取：将鱼类杀死后，将其剥皮去鳞，并去除内脏。
然后将鱼肉切碎，加入适量的水。
混合均匀后，通过破碎和搅拌使鱼肉中的蛋白质溶解在水中。
然后用滤纸过滤，将蛋白质溶液分离出来。
(3)硫酸鱼精蛋白制备：将蛋白质溶液加入适量的浓硫酸中，搅拌均匀后，放置一段时间使反应达到准确度。
然后用水稀释，得到含有硫酸鱼精蛋白的溶液。
(4)标定：用准确浓度的碱溶液进行标定，以确定硫酸鱼精蛋白含量。
(1)制备溶液：根据实验需要选择合适浓度的盐酸或硫酸溶液。
然后将硫酸鱼精蛋白标准品溶解在盐酸或硫酸溶液中，摇匀使其均匀分布。
(2)稀释标准品：根据实验需要，将浓稀释至适当浓度的硫酸鱼精蛋白标准品溶液。
(3)标准曲线绘制：用浓稀释的标准品干预峰面积与其所对应的浓度，绘制标准曲线。
通常采用线性拟合方法绘制标准曲线。
(4)测定待测样品：将待测样品制备成与标准品相同浓度的溶液。
然后测定其对应的峰面积。
(5)计算样品中硫酸鱼精蛋白含量：根据标准曲线中样品的峰面积，通过插值或外推计算出待测样品中硫酸鱼精蛋白的含量。
(1)食品工业：用于鱼类制品的营养价值评估，提供合理的烹饪和食用建议。
(2)医药领域：用于制备鱼精蛋白补充剂，促进人体健康。
(3)科研领域：用于鱼精蛋白的研究与开发，了解其在人体中的作用机制及健康效应。
(4)质检领域：用于食品质量检测，保障食品中鱼精蛋白的含量达到国家标准要求。
总结：硫酸鱼精蛋白含量标准品的制备方法简单且经济，可以用于准确测定鱼精蛋白含量，广泛应用于食品工业、医药领域、科研领域和质检领域。
这对于评估食品的营养价值、促进人体健康以及保障食品质量有着重要的作用。
《中国药典》2020年版第四部通用技术要求的指导思想和编制过程
《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）四部收载了通用技术要求、药用辅料和药包材标准，其中，通用技术要求是药品标准的共性要求，是药典标准的基础[1-2]，包括制剂通则，通用检测方法和指导原则三部分。
《中国药典》2015年版在归纳、验证和规范的基础上，突破性地将《中国药典》2010年版各附录中的制剂通则、通用检测方法和指导原则整合单列成第四部中的通用技术要求部分[3]，首次实现了药典各部共性技术要求和检测方法的协调与统一。
通过五年的实践，《中国药典》2020年版对整合后的通用技术要求进行科学系统的增修订，立足我国国情，注重与国际标准的协调，不断完善药品质量控制要求，借鉴和采用国际先进成熟分析技术，为进一步建立严谨的药品标准，提高药品安全性和有效性奠定基础。
本文对编制情况、主要特点和增修订内容进行了全面介绍。
1 指导思想和编制过程1.1指导思想以编制大纲为指导，以国际标准为参考，以科研课题和研究数据为依托，国家药典委员会持续完善《中国药典》四部通用技术要求体系建设，制定更加严谨合理，与国际标准更加协调，主要开展以下重点工作：制剂通则部分系统调整整体框架，体现制剂全过程控制，突出制剂个性化要求，保证制剂的稳定性和批间一致性。
通用检测方法和指导原则部分进一步扩大先进成熟检测技术的应用，提高分析方法的专属性、灵敏度、可靠性和适用性；加强中药材外源污染控制方法、灭菌工艺验证和环境检测等相关技术要求的制定；提高与国际通用性技术要求的统一性。
1.2编制过程自2017年8月第十一届国家药典委员会成立以来，《中国药典》四部通用技术要求各专业委员会组织开展一系列通用技术要求课题的研究工作，共设立国家药品标准提高、国家药品医疗器械审评审批课题50余项，为提高药典通用技术要求的水平奠定了坚实基础。
同时，把好标准审评和药典准入关，筹办审评会议50次，审议标准草案百余个，审议反馈意见3 000余条。
编制期间，《中国药典》2020年版四部通用技术要求的编制积极贯彻新颁布的《中华人民共和国药品管理法》，在确保适用性的基础上，充分考虑与人用药品注册技术要求国际协调会（I C H）指导原则的协调统一。
《中国药典》2020年版第四部通用技术要求主要特点和增修订内容
主要特点和增修订内容2.1制剂通则论述框架和技术要求进一步完善2.1.1系统修订制剂通则整体框架0100制剂通则旨在通过对药物制剂的总体论述来指导医药工作者对不同剂型、亚剂型进行合理的应用。
《中国药典》2015年版制剂通则是《中国药典》2010年版中药、化学药和生物制品制剂通则的简单整合，缺少关键考察项的汇总和归纳。
为进一步引导生产企业全面关注制剂生产质量控制和整体要求，对0100制剂通则进行修订，主要修改包括两个方面：首先完善了叙述结构。
从药物制剂制备的原则“安全、有效、可控、依从性”的角度出发，增加对剂量单位均匀性、稳定性、安全性与有效性、剂型与给药途径、包装与贮藏和标签与说明书等部分的分论述；强调中药制剂在整个生产过程中的关键质量属性，关注每个关键环节的量值传递规律。
其次，完善了具体内容。
提出剂量单位均匀性的要求，保障制剂生产质量的批间和批内药物含量等的一致性，体现制剂全过程控制的理念；在稳定性中提出复检期概念，促进生产企业根据产品自身的稳定性特性进行前瞻性的质量考察；在安全性与有效性中提出“通过人体临床试验证明药物的安全有效性后，药物才能最终获得上市与临床应用”，提示上市制剂的处方和工艺不得随意变更。
2.1.2系统修订各制剂通则的框架和表述《中国药典》2020年版制剂通则统一了各剂型论述框架及主要制备技术的简单论述。
除0110糊剂及0186膏剂外，其他36个剂型均不同程度修订了体例格式。
为进一步统一目前各剂型的表述问题，规范统一“生产与贮藏期间应符合下列规定”项下内容，按照原辅料→工艺与技术→质量与控制→包装与使用→贮存与运输等五方面的技术要点，着重补充大多数剂型缺少的工艺与技术方面的阐述。
增加特殊亚剂型临床使用关注点，如泡腾片不得直接吞服等，指导临床合理用药。
2.1.3收载和整合临床成熟剂型和亚剂型收载和整合临床成熟剂型和亚剂型，体现《中国药典》的先进性和对我国临床成熟新制剂技术的支持。
效价检测方法
抗菌肽检测方法1、LB培养基配制NaCl：1%胰蛋白胨：1%酵母浸粉：0.5%葡萄糖：0.5%技术琼脂粉：2 %将上述培养基配比，以水为溶剂，调pH值7.0，121度30分钟，灭菌备用。
2、大肠杆菌菌液制备2.1 菌液制备：将大肠杆菌（K12D31）从斜面上刮一环转接于装液量50ml的250ml摇瓶中，置于180rpm、37℃的摇床上培养16-24h。
2.2 分光光度计测定其消光值（OD600nm）：将上述大肠杆菌菌悬液用无菌生理盐水稀释，用无菌生理盐水做空白对照，调整菌液吸光值为1.0。
于4度冰箱中储存备用（菌液储存时间不得超过4天）。
3、试验菌培养基制备将无菌LB培养基置室温待其冷却至48-50度时，按100ml无菌LB培养基中加入100μl菌液（OD600nm =1.0），摇匀。
吸取含菌LB培养基10ml，使在90mm培养皿底内均匀摊布，放置在水平台面上使其凝固备用。
4、样品制备4.1 精密称定待测的试样1.0000g，倒入精准9ml水中震荡溶解，放入100度水浴中温浴10分钟，拿出移入离心管中10000rpm离心15分钟，倒出上清液，用针筒吸取上清液，备用。
4.2 将上述3中制备好的检测培养基上用灭菌的打孔器（2.7mm）打孔，每孔中分别加入5ul 的抗菌肽测试样品溶液，取3个平板每板1空重复3板，置于37度培养箱中培养16-20小时后，测定抑菌圈直径，取平均值。
5、抗菌肽效价测定计算公式：U（单位/克）=2X×1000×稀释倍数；X=（y -2.7）/2.1，其中：Y：抗菌肽抑菌圈直径（mm）取平均值；2.7：孔穴直径（mm）；2.1：抗菌肽浓度与抑菌圈直径的比值常数。
使用时间: 2013年9月26日起。
两种硫酸鱼精蛋白效价测定方法的比较与分析
两种硫酸鱼精蛋白效价测定方法的比较与分析刘萍;顾建琴;孙杰;胡;姜珠慧;郑钊铖;唐黎明【摘要】目的：分析并比较两种硫酸鱼精蛋白的效价测定方法。
方法分别采用肝素-结合力滴定法和生物测定法对5批硫酸鱼精蛋白进行效价测定，滴定法依据国外药典，生物测定法依据《中国药典》施行。
结果肝素结合力-滴定法的滴定终点吸光度值在中（0.10 mg／mL）、高浓度（0.15 mg／mL）相对稳定，效价数据的相对标准偏差（RSD）小于5％。
三种待测液浓度与肝素标准品滴加量呈良好的线性关系，相关系数R2为1.000。
将滴定法与生物测定法效价结果进行比较，两种方法的相关性显著（ P＝0.013），误差水平一致（P＞0.05），但滴定法测得的效价数值略低于生物测定法结果（P＝0.045）。
结论肝素结合力-滴定法的方法可行、操作简便，国内应积极推广。
%Objective To analyze and compare two potency assay methods of protamine sulfate.Methods Heparin titration method was according to foreign pharmacopoeia,while biological assay method was according to China pharmacopoeia(2015).Results The absorbance at the end-point was stable at 0.10 mg/mL and 0.15 mg/mL test solutions.The relative standard deviations(RSDs)of potency results were all less than 5%.Three test solutions and volumes of the titrant had a good linear relationship(R2 =1.000).The results of titration method were significantly related to those of biological assay(P=0.013),with similar RSD(P>0.05).However,the potency of titration method were significantly lower than those of biological assay (P=0.045).Conclusion Heparin titration method is good-using,convenient,and need to be applied widely at home.【期刊名称】《中国生化药物杂志》【年(卷),期】2016(036)008【总页数】4页(P145-148)【关键词】硫酸鱼精蛋白;生物测定法;肝素-结合力滴定法【作者】刘萍;顾建琴;孙杰;胡;姜珠慧;郑钊铖;唐黎明【作者单位】上海市食品药品检验所，上海 201203;上海市食品药品检验所，上海 201203;上海市食品药品检验所，上海 201203;上海市食品药品检验所，上海201203;上海市食品药品检验所，上海 201203;上海市食品药品检验所，上海201203;上海市食品药品检验所，上海 201203【正文语种】中文【中图分类】R927.11;R973.2硫酸鱼精蛋白(protamine sulphate)系适宜的鱼类新鲜成熟精子中提取的一种碱性蛋白质硫酸盐[1]。
硫酸鱼精蛋白生物测定标准研究
ห้องสมุดไป่ตู้
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硫酸鱼精蛋白生物测定标准研究 *
郭玉东，吴彬 **，胡宇驰，曹春然，孙媛媛，左泽平，李丽，高阳
（北京市药品检验所，北京 102206）
摘要 目的：建立肝素结合力 - 滴定法，测定硫酸鱼精蛋白生物活性，用于替代现行药典标准的兔全血法 测定方法。方法：分析国内外硫酸鱼精蛋白生物活性测定法的研究进展，在本试验室开展肝素结合力 - 滴 定法测定生物活性研究，通过方法学研究，并与兔全血法进行一致性考察，确定该方法在本实验室开展的可 行性。结果：本试验室建立了肝素结合力 - 滴定法测定硫酸鱼精蛋白生物活性的方法，该方法重复性和中 间精密良好，并与兔全血法测定结果具有较好的一致性。结论：肝素结合力 - 滴定法测定硫酸鱼精蛋白生 物活性，采用仪器测定，避免人为判定终点造成的误差，方法操作简单，客观性更强，测定结果更准确，测定 效率更高，并与兔全血法测定结果一致性良好，可作为兔全血法的替代方法。 关键词：硫酸鱼精蛋白；抗肝素药；肝素结合力 - 滴定法；兔全血测定法；替代方法；方法学考察；标准研究
GUO Yu-dong，WU Bin**，HU Yu-chi，CAO Cun-ran，SUN Yuan-yuan， ZUO Ze-ping，LI Li，GAO Yang
（Beijing Institute for Drug Control，Beijing 102206，China）
Abstract Objective：The establishment of heparin binding-titration method to determine the biological activity of protamine sulfate，and to determine the method of the rabbit blood test by replacing the current Pharmacopoeia standard．Methods：The domestic and overseas research progress of the determination of the bioactivity of protamine sulfate was studied，and to bioactivity of heparin binding-titration method was studied in this laboratory．Through a methodological study，together with a comformance inve stigation with rabbit blood method，the feasibility of this methed in the lab is determined．Results：The method of biological activity of protamine sulfate was established by heparin binding-titration in our lab，the repeatability and precision of the method was good，and the results were consistent with those in the rabbit whole blood method．Conclusion：the determination of biological activity of protamine sulfate titration of heparin binding force by using instrument measurement to avoid errors caused by man-made judgment is simple，more objective and more accurate，and its efficiency is higher，and the results were in good agreement with the rabbit whole blood method．The method be used as an alternative method of
《中国药典》2020年版四部通则历次增修订目录(共计25批))
0102 注射剂.pdf 0104颗粒剂.pdf 0106 鼻用制剂.pdf
0108 丸剂.pdf 0121贴剂.pdf 0122贴膏剂.pdf 1101无菌检查法-第三次征求意见稿.pdf 9206无菌检查用隔离系统验证指导原则-第三次征求意见稿.pdf 灭菌用生物指示剂指导原则-第三次征求意见稿.pdf 生物指示剂耐受性检查法指导原则-第三次征求意见稿.pdf 1105微生物计数法-第二次征求意见稿.pdf 1121 抑菌效力检查法-第二次征求意见稿.pdf 1143 细菌内毒素检查法-第二次征求意见稿.pdf 1213 硫酸鱼精蛋白效价测定法-第二次征求意见稿.pdf 9203药品微生物实验室质量管理指导原则-第二次征求意见稿.pdf 0109-软膏剂、乳膏剂.pdf 0183-煎膏剂（膏滋).pdf 0184胶剂.pdf 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则.pdf 9014 微粒制剂指导原则.pdf 0105 眼用制剂.pdf 0107 栓剂.pdf 0111 吸入制剂.pdf 0112 喷雾剂.pdf 0113 气雾剂.pdf 0119 涂膜剂.pdf 0181 合剂.pdf 0182 锭剂.pdf 0185 酒剂.pdf 0187 露剂.pdf 0188 茶剂.pdf 1431 生物检定统计法.pdf DNA测序技术指导原则.pdf 标准核酸序列建立指导原则.pdf 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则-第二次公示稿.pdf 1101- 无菌检查法（第二次征求意见稿）.pdf
0123 口服溶液剂 口服混悬剂 口服乳剂.pdf 0124 植入剂.pdf 0125 膜剂.pdf 0126 耳用制剂.pdf 0127 洗剂.pdf 0128 冲洗剂.pdf 0129 灌肠剂.pdf
0512 高效液相色谱法 0601 相对密度测定法振荡型密度计法（第二次征求意见稿）
硫酸鱼精蛋白去除狂犬病疫苗中细胞残余DNA的研究
21 L innen J , et al. M o lecu lar clon ing and d isease association of hep ati2 tis G viru s: A tran sfu sion2tran sm issib le agen t. Science 1996; 271: 505
211 硫酸鱼精蛋白作用浓度的研究 将硫酸鱼精蛋白配成 015 2000, 1 2000, 115 20003 个浓度, 加入 3 份浓缩狂犬疫苗 中, 另有未加鱼精蛋白处理的浓缩样品 1 份。在反复振荡后, 以 1000r m in 离心取上清用凝胶过滤纯化, 测定 4 份样品中残余 DNA 含量。 未经鱼精蛋白处理仅用凝胶过滤柱层析纯化的对 照组为 210×104p g m l, 而 015 2000 组为 200p g m l, 110 2000 组为 20p g m l, 115 2000 组为小于 20p g m l, 可见随浓度增加 其去除 DNA 能力增加, 但 1 2000 浓度我们认为是最佳浓度。 212 该方法在 vero 细胞疫苗试生产中的应用 用 10L 转瓶 常规培养制备 3 批疫苗, 超滤浓缩后用终浓度为 1 2000 的硫 酸鱼精蛋白处理后去除细胞残余 DNA , 用凝胶过滤纯化制备 3 批 中 试 产 品 经 检 定 3 批 疫 苗 效 力 分 别 为 5184IU m l, 7102 IU m l, 6155 IU m l; 而细胞残余 DNA 含量均小于 100p g m l。该 3 批疫苗已通过国家级新药审查, 正进行人体临床观察 实验, 效果良好。 3 讨论
硫酸鱼精蛋白
肝素复合物在体内代谢转化过程尚未被阐明。
鱼精蛋白也是一种弱抗凝剂，过量可引起凝血时间指标短暂轻度延长。
【适应证】主要用于因肝素钠或肝素钙严重过量而致的出血症及自发性出血，如咯血等。
【不良反应】①本品快速静脉注射可引起低血压、心动过缓、肺动脉高压、呼吸困难、短暂面部潮红及温热感。
缓慢静脉注入，10分钟内不超过50mg，可避免上述反应。
②对鱼过敏，过去曾接受过本品或含鱼精蛋白的胰岛素（如中性鱼精蛋白胰岛素）者，易发生抗鱼精蛋白IgE介导的高敏或过敏反应。
③男性不育症或输精管切除者中某些人易发生对鱼精蛋白高敏反应。
在输注本品前给这类患者应用皮质激素或抗组胺药，可防止过敏。
5足量鱼精蛋白中和肝素后8～9小时，个别在18小时后，部分患者可发生肝素反跳和出血。
【禁忌证】对本品有不耐受史或不良反应史者禁用。
【用法用量】抗肝素过量：静注，用量与最后一次肝素的用量及间隔时间有关。
每1mg鱼精蛋白可拮抗100单位肝素。
由于肝素在体内降解迅速，在注射肝素后30分钟，每100单位肝素，只需用鱼精蛋白0．5mg；每次用量不超过50mg，需要时可重复给予。
抗自发性出血：静滴，5～8mg/kg体重/日，分2次，间隔6小时，每次以300～500ml生理盐水稀释后使用，3日后改为半量。
【注意事项】本品仅供静注，应缓慢给药。
给药后即需作凝血功能检查。
①对鱼过敏者慎用本品。
②静注速度过快可致心动过缓、低血压、胸闷、呼吸困难、颜面潮红等。
③妊娠及哺乳妇女应用本药必须有明确指征。
至于本品对生殖能力的影响，是否有致畸、致癌作用，是否经乳汁分泌等问题，均缺乏动物实验资料。
5本品宜单独给药，与某些抗生素（如青霉素、头孢菌素等）理化性质不相容。
硫酸鱼精蛋白Liusuan YujingdanbaiProtamine Sulfate书页号：2005年版二部－742[修订]【检查】干燥失重取本品，在105℃干燥3小时，减失重量不得过5.0%（附录Ⅷ L）。
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》第四部(1)
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》的内容（以下红色标记的内容更需要关注）序号编码目录10100 制剂通则2 0101 片剂3 0102 注射剂4 0103 胶囊剂5 0104 颗粒剂6 0105 眼用制剂7 0106 鼻用制剂8 0107 栓剂9 0108 丸剂10 0109 软膏剂乳膏剂11 0110 糊剂12 0111 吸入制剂13 0112 喷雾剂14 0113 气雾剂15 0114 凝胶剂16 0115 散剂17 0116 糖浆剂18 0117 搽剂19 0118 涂剂20 0119 涂膜剂21 0120 酊剂22 0121 贴剂23 0122 贴膏剂24 0123 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂25 0124 植入剂26 0125 膜剂27 0126 耳用制剂28 0127 洗剂29 0128 冲洗剂30 0129 灌肠剂31 0181 合剂32 0182 锭剂33 0183 煎膏剂（膏滋）34 0184 胶剂35 0185 酒剂36 0186 膏药37 0187 露剂38 0188 茶剂39 0189 流浸膏剂与浸膏剂400200 其他通则41 0211 药材和饮片取样法42 0212 药材和饮片检定通则43 0213 炮制通则44 0251 药用辅料45 0261 制药用水46 0291 国家药品标准物质通则47030048 0301 一般鉴别试验49 0400 光谱法50 0401 紫外-可见分光光度法51 0402 红外分光光度法52 0405 荧光分光光度法53 0406 原子吸收分光光度法54 0407 火焰光度法55 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法56 0412 电感耦合等离子体质谱法57 0421 拉曼光谱法58 0431 质谱法59 0441 核磁共振波谱法60 0451 X射线衍射法610500 色谱法62 0501 纸色谱法63 0502 薄层色谱法64 0511 柱色谱法65 0512 高效液相色谱法66 0513 离子色谱法67 0514 分子排阻色谱法68 0521 气相色谱法69 0531 超临界流体色谱法70 0532 临界点色谱法71 0541 电泳法72 0542 毛细管电泳法730600 物理常数测定法74 0601 相对密度测定法75 0611 馏程测定法76 0612 熔点测定法77 0613 凝点测定法78 0621 旋光度测定法79 0622 折光率测定法80 0631 pH值测定法81 0632 渗透压摩尔浓度测定法82 0633 黏度测定法83 0661 热分析法84 0681 制药用水电导率测定法85 0682 制药用水中总有机碳测定法860700 其他测定法87 0701 电位滴定法与永停滴定法88 0702 非水溶液滴定法89 0703 氧瓶燃烧法90 0704 氮测定法91 0711 乙醇量测定法92 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法93 0713 脂肪与脂肪油测定法94 0721 维生素A测定法95 0722 维生素D测定法96 0731 蛋白质含量测定法970800 限量检查法98 0801 氯化物检查法99 0802 硫酸盐检查法100 0803 硫化物检查法101 0804 硒检查法102 0805 氟检查法103 0806 氰化物检查法104 0807 铁盐检查法105 0808 铵盐检查法106 0821 重金属检查法107 0822 砷盐检查法108 0831 干燥失重测定法109 0832 水分测定法110 0841 炽灼残渣检查法111 0842 易炭化物检查法112 0861 残留溶剂测定法113 0871 甲醇量检查法114 0872 合成多肽中的醋酸测定法115 0873 2-乙基己酸测定法1160900 特性检查法117 0901 溶液颜色检查法118 0902 澄清度检查法119 0903 不溶性微粒检查法120 0904 可见异物检查法121 0921 崩解时限检查法122 0922 融变时限检查法123 0923 片剂脆碎度检查法124 0931 溶出度与释放度测定法125 0941 含量均匀度检查法126 0942 最低装量检查法127 0951 吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法128 0952 黏附力测定法129 0981 结晶性检查法130 0982粒度和粒度分布测定法131 0983 锥入度测定法132 1100 生物检查法133 1101 无菌检查法134 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法135 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法136 1107 非无菌药品微生物限度标准137 1121 抑菌效力检查法138 1141 异常毒性检查法139 1142 热原检查法140 1143 细菌内毒素检查法141 1144 升压物质检查法142 1145 降压物质检查法143 1146 组胺类物质检查法144 1147 过敏反应检查法145 1148 溶血与凝聚检查法1461200 生物活性测定法147 1201 抗生素微生物检定法148 1202 青霉素酶及其活力测定法149 1205 升压素生物测定法150 1206 细胞色素C活力测定法151 1207 玻璃酸酶测定法152 1208 肝素生物测定法153 1209 绒促性素生物测定法154 1210 缩宫素生物测定法155 1211 胰岛素生物测定法156 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法157 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法158 1214 洋地黄生物测定法159 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法160 1216 卵泡刺激素生物测定法161 1217 黄体生成素生物测定法162 1218 降钙素生物测定法163 1219 生长激素生物测定法164 1401 放射性药品检定法165 1421 灭菌法166 1431 生物检定统计法1672000 中药其他方法168 2001 显微鉴别法169 2101 膨胀度测定法170 2102 膏药软化点测定法171 2201 浸出物测定法172 2202 鞣质含量测定法173 2203 桉油精含量测定法174 2204 挥发油测定法175 2301 杂质检查法176 2302 灰分测定法177 2303 酸败度测定法178 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法179 2322 汞和砷元素形态及其价态测定法180 2331 二氧化硫残留量测定法181 2341 农药残留量测定法182 2351 黄曲霉毒素测定法183 2400 注射剂有关物质检查法1843000 生物制品相关检查方法1853100 含量测定法186 3101 固体总量测定法187 3102 唾液酸测定法（间苯二酚显色法）188 3103 磷测定法189 3104 硫酸铵测定法190 3105 亚硫酸氢钠测定法191 3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法192 3107 氯化钠测定法193 3108 枸橼酸离子测定法194 3109 钾离子测定法195 3110 钠离子测定法196 3111 辛酸钠测定法197 3112 乙酰色氨酸测定法198 3113 苯酚测定法199 3114 间甲酚测定法200 3115 硫柳汞测定法201 3116 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法202 3117 O-乙酰基测定法203 3118 己二酰肼含量测定法204 3119 高分子结合物含量测定法205 3120 人血液制品中糖及糖醇测定法206 3121 人血白蛋白多聚体测定法207 3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法208 3123 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法209 3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法210 3125 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法211 3126 IgG含量测定法212 3127 单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS）2133200 化学残留物测定法214 3201 乙醇残留量测定法215 3202 聚乙二醇残留量测定法216 3203 聚山梨酯80残留量测定法217 3204 戊二醛残留量测定法218 3205 磷酸三丁酯残留量测定法219 3206 碳二亚胺残留量测定法220 3207游离甲醛测定法221 3208 人血白蛋白铝残留量测定法222 3209 羟胺残留量测定法2233300 微生物检查法224 3301 支原体检查法225 3302 外源病毒因子检查法226 3303 鼠源性病毒检查法227 3304 SV40核酸序列检查法228 3305 猴体神经毒力试验229 3306 血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求2303400 生物测定法231 3401 免疫印迹法232 3402 免疫斑点法233 3403 免疫双扩散法234 3404 免疫电泳法235 3405 肽图检查法236 3406 质粒丢失率检查法237 3407 外源性DNA残留量测定法238 3408 抗生素残留量检查法（培养法）239 3409 激肽释放酶原激活剂测定法240 3410 抗补体活性测定法241 3411 牛血清白蛋白残留量测定法242 3412 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法243 3413 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法244 3414 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法245 3415 类A血型物质测定法246 3416 鼠IgG残留量测定法247 3417 无细胞百日咳疫苗鉴别试验（酶联免疫法）248 3418 抗毒素、抗血清制品鉴别试验（酶联免疫法）249 3419 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法250 3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法251 3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法252 3422 人凝血酶活性检查法253 3423 活化的凝血因子活性检查法254 3424 肝素含量测定法255 3425 抗A、抗B血凝素测定法256 3426 人红细胞抗体测定法257 3427 人血小板抗体测定法258 3500 生物活性/效价测定法259 3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法260 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法261 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法262 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法263 3505 吸附白喉疫苗效价测定法264 3506 类毒素絮状单位测定法265 3507 白喉抗毒素效价测定法266 3508 破伤风抗毒素效价测定法267 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法268 3510 肉毒抗毒素效价测定法269 3511 抗蛇毒血清效价测定法270 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法271 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法272 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法273 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）274 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）275 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法276 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法277 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法278 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法279 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法280 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法281 3523 干扰素生物学活性测定法282 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法283 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法284 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法285 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法286 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法287 3529 重组链激酶生物学活性测定法288 3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法289 3531 尼妥珠单抗注射液生物学活性测定法290 3532 重组人白介素-11生物学活性测定法291 3533 注射用A型肉毒毒素成品效价测定法（平行线法）2923600 特定生物原材料/动物293 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求294 3602 实验动物微生物学检测要求295 3603 实验动物寄生虫学检测要求296 3604 新生牛血清检测要求297 3605 细菌生化反应培养基2983700299 3701 生物制品国家标准物质目录3008000 试剂与标准物质301 8001 试药302 8002 试液303 8003 试纸304 8004 缓冲液305 8005 指示剂与指示液306 8006 滴定液307 8061 对照品对照药材对照提取物308 8062 对照品标准品3099000 指导原则310 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则311 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则312 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则313 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则314 9014 微粒制剂指导原则315 9015 药品晶型研究及晶型质量控制指导原则316 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则317 9102 药品杂质分析指导原则318 9103 药物引湿性试验指导原则319 9104 近红外分光光度法指导原则320 9105 中药生物活性测定指导原则321 9106 基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则322 9107 中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则323 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则324 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则325 9203药品微生物实验室质量管理指导原则326 9204 微生物鉴定指导原则327 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则328 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则329 9301注射剂安全性检查法应用指导原则330 9302 中药有害残留物限量制定指导原则331 9303 色素测定法指导原则332 9304 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则333 9305 中药中真菌毒素测定指导原则334 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则335 9502 锝［99mTc］放射性药品质量控制指导原则336 9601 药用辅料功能性指标研究指导原则337 9621 药包材通用要求指导原则338 9622 药用玻璃材料和容器指导原则339 9901 国家药品标准物质制备指导原则。
硫酸鱼精蛋白的液相分析方法在预混胰岛素及胰岛素类似物中的应用及思考
临床医药文献杂志Journal of Clinical Medical2018 年第 5 卷第 54 期2018 Vol.5 No.5441・实验研究・硫酸鱼精蛋白的液相分析方法在预混胰岛素及胰岛素类似物中的应用及思考秦丽静，田雪华（通化东宝药业股份有限公司，吉林 通化 134123）【摘要】通过对胰岛素及胰岛素类似物的预混制剂中的鱼精蛋白的测定，确认硫酸鱼精蛋白的液相分析方法可用于预混型胰岛素制剂生产过程的控制，以及鱼精蛋白原料药的质量控制，但不能很好的用于预混型胰岛素制剂产品的稳定性研究等质量控制。
【关键词】预混双时相胰岛素制剂；硫酸鱼精蛋白；工艺过程控制；稳定性质量研究【中图分类号】R587.1 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-8242.2018.54.41.02随着国民生活水平的提高，中国的糖尿病患病率逐年增加，目前中国已成为糖尿病的患病率大国。
国内各大制药企业也均将研发精力转移到了糖尿病治疗领域，虽然目前已研发出了许多治疗糖尿病的药物，但到目前为止，最安全有效，积累治疗经验最丰富的药物仍是胰岛素类产品。
胰岛素也由最初的从猪、牛或羊的胰腺中提取的粗产品，到利用重组发酵技术生产的重组人胰岛素，直到目前利用基因工程技术对氨基酸序列及结构进行局部修饰，合成的人胰岛素类似物。
由于地域及生活习惯等特点，中国糖尿病患者人群以2型糖尿病为主，且具有患病初期胰岛β细胞功能受损严重、第一时相胰岛素分泌缺乏明显、空腹和餐后血糖同时不达标的患者比例高等特点[1]。
为了进一步改善胰岛素的起始治疗现状，使治疗更符合生理需求，各种胰岛素制剂也应运而生，其中预混胰岛素制剂因为可兼顾空腹及餐后血糖控制，使用更安全、灵活方便成为较理想的选择。
据不完全统计，约占70%的中国的糖尿病患者均使用的是预混型胰岛素。
目前治疗糖尿病的预混型胰岛素类产品主要为两类，一类是目前新研制出来并应用于临床的，以不同胰岛素类似物混合配制的双胰岛素制剂，如目前的德谷门冬双胰岛素，就是由德谷胰岛素联合门冬胰岛素组成的新一代基础餐时双胰岛素制剂[2]。
硫酸鱼精蛋白含量标准品
硫酸鱼精蛋白含量标准品硫酸鱼精蛋白含量标准品是一种常用的实验室试剂，用于测定药品、食品、化妆品等中鱼精蛋白含量的定量分析。
在进行定量分析实验时，需要标准品来建立校准曲线，从而准确测定样品中鱼精蛋白的含量。
以下将详细介绍硫酸鱼精蛋白含量标准品的制备方法、特点及应用。
1.制备方法1)选取高纯度的鱼精蛋白作为原料。
2)按照一定比例将鱼精蛋白与硫酸溶液混合，形成含有一定浓度鱼精蛋白的溶液。
3)对溶液进行混合、搅拌、搅匀等处理，确保鱼精蛋白能够均匀分散在溶液中。
4)进行多次反复的稀释、混合、搅拌等操作，使得溶液中的鱼精蛋白浓度具有一定的均匀性。
5)按照一定的标准浓度进行配比，制备出一系列含有不同浓度鱼精蛋白的标准品。
2.特点1)高纯度：原料鱼精蛋白需要经过一系列的洗涤、分离、纯化等处理，确保其纯度较高，以提高标准品的准确性和可靠性。
2)稳定性：标准品制备时需严格控制操作条件，保证每个批次制备的标准品具有一致的含量，并降低批次间的差异性。
3)可溶性：标准品中的鱼精蛋白需具有良好的溶解性，以确保样品在分析时能够均匀分散在溶液中，避免测定误差的产生。
4)易储存：硫酸鱼精蛋白含量标准品一般采用密封包装，防潮、防光、防氧等，以保证其存储期限和使用寿命，减小质量的波动。
3.应用1)药物研发：用于评价药物对鱼精蛋白的影响，评估其对鱼精蛋白的亲和性、结合能力等。
2)食品质量检测：用于测定食品中鱼精蛋白的含量，评估食品的营养成分和品质。
3)化妆品生产：用于测定化妆品中鱼精蛋白的含量，判断产品的安全性和有效性。
4)环境检测：用于分析水体、土壤等环境中鱼精蛋白的含量，评估环境的污染程度。
综上所述，硫酸鱼精蛋白含量标准品是一种常用的实验室试剂，具有高纯度、稳定性、可溶性和易储存等特点。
其应用广泛，可以用于药物研发、食品质量检测、化妆品生产和环境检测等领域。
标准品的制备方法和特点对于保证测定的准确性和可靠性至关重要，因此在实验操作中需注意操作规范，确保标准品的质量和可靠性。
123硫酸鱼精蛋白生物测定法-中国药品检验标准操作规范2010年版
硫酸鱼精蛋白生物测定法一、兔全血法1 实验材料及用具1.1 天平精度0.01mg或0.1mg 肝素标准品或供试品称量用精度1mg 试剂称量用精度10g 家兔称重用1.2 恒温水浴37℃±0.5℃。
1.3 压板测凝器或测凝棒。
1.4 实验用具兔固定板、注射器及取血用针头、吸管、移液管、烧杯、带塞玻璃小瓶、小试管（0.8cm×3.8cm或1.0cm×7.5cm，有1ml刻度）、试管架、不锈钢或细玻璃搅棒、记时器、安瓿、脱脂棉、纱布、线、绳。
1.5 手术用器械剪毛剪、手术刀、直镊、止血镊、眼科直镊、眼科弯镊、动脉夹。
1.6 试剂局部麻醉剂（如普鲁卡因）、氯化钠。
2 溶液配制2.1 生理盐水称取氯化钠适量，加水配成0.9%溶液。
2.2 1%普鲁卡因溶液称取普鲁卡因粉末适量，用生理盐水配成1%溶液。
2.3 肝素标准品溶液2.3.1 取肝素标准品，放置至室温。
2.3.2 割开标准品小管（注意勿使玻屑掉入），精密称量，置小烧杯中。
2.3.3 将称得的毫克数，乘以标示单位数，得总单位数。
2.3.4 精密加生理盐水，配成200U/ml溶液，密塞，置4~8℃保存备用，可在一周内使用。
2.4 肝素标准品稀释液2.4.1 实验当日，取肝素标准品溶液，放置至室温。
2.4.2 精密量取标准品溶液一定量，用生理盐水配成85、90、95、100、105、110、115、120、125U/ml的标准品稀释液。
2.5 供试品溶液2.5.1 粉末实验当日，精密称取供试品适量，按干燥品计算，用生理盐水溶解配成1mg/ml的溶液，充分混匀。
2.5.2 注射液2.5.2.1 取供试品，放置至室温，割开安瓿。
2.5.2.2 精密量取安瓿内溶液一定量，按标示含量计算，加生理盐水稀释成1mg/ml的溶液。
3 实验动物健康无伤，体重2.5kg以上的家兔，雌雄均可，雌者无孕。
4 检定法4.1 实验当日，将实验动物仰卧固定在手术台上，剪去颈部的毛，或用生理盐水湿润的棉花或纱布，将毛向两侧分开，皮下注入1%普鲁卡因溶液20ml，10~20min后，用手术刀沿颈部正中线切开皮肤，用止血钳、镊小心分离开肌肉和血管，暴露并剥离一侧颈动脉一段约3cm长，两端分别用动脉夹夹住，或结扎远心端，用另一较粗的棉线在此段血管下穿过，打一活结，于棉线结扎处刺一小孔，做好取血前的准备。
中国药典2000版二部：硫酸鱼精蛋白
药品名称硫酸鱼精蛋⽩
拼⾳名 Liusuan Yujingdanbai
英⽂名 PROTAMINE SULFATE
来源(分⼦式)与标准本品系⾃适宜的鱼类新鲜成熟精⼦中提取的⼀种碱性蛋⽩质的硫酸盐。
按⼲燥品计算，每1mg 所中和的肝素（肠）抗⾎凝作⽤不得少于100 单位。
性状 本品为⽩⾊或类⽩⾊的粉末；⽔溶液对⽯蕊试纸显酸性反应。
本品在⽔中略溶，在⼄醇或⼄醚中不溶。
检查 氮取本品适量，照氮测定法（附录Ⅶ D第⼆法）测定，按⼲燥品计算，含氮量应为21.0～25.0％。
⼲燥失重
取本品，在105 ℃⼲燥⾄恒重，减失重量不得过7.0 ％（附录Ⅷ L）。
热原
精密称取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml 中含1.5mg 的溶液，依法检查（附录Ⅺ D），剂量按家兔体重每1kg 注射1ml ，应符合规定。
【效价测定】 照硫酸鱼精蛋⽩⽣物检定法（附录Ⅻ J）测定，应符合规定，测得的结果应为标⽰量的90～110 ％。
鉴别 (1) 取本品约5mg ，加⽔1ml ，微温溶解后，加10％氢氧化钠溶液1 滴及硫酸铜试液2 滴，上清液显紫红⾊。
(2) 取本品约1mg ，加⽔2ml 溶解后，加0.1 ％α－萘酚的70％⼄醇溶液与次氯酸钠试液各5 滴，再加氢氧化钠试液使溶液成碱性，即显粉红⾊。
(3) 本品的⽔溶液显硫酸盐的鉴别反应（附录Ⅲ）。
类别抗肝素药。
贮藏密封，在凉暗处保存。
制剂硫酸鱼精蛋⽩注射液。
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1பைடு நூலகம்
第一次征求意见稿
同样重复 5 次，5 次试验测得终点管的肝素浓度，相差不得大于 10 个单位。 5 次结果的平均值，即为硫酸鱼精蛋白供试品（干燥品）1mg 中和肝素的效价（单 位）。
第二法 肝素结合力滴定法 本法系采用滴定的方法，观察硫酸鱼精蛋白供试品（T）溶液中滴加肝素钠 标准品（S）后的吸光度变化，以吸光度明显增加为终点，根据终点的滴加肝素 量来测定硫酸鱼精蛋白拮抗肝素活性效价的方法。 肝素标准品溶液的配制 精密称取肝素标准品适量，按标示效价加灭菌 注射用水溶解使成 80~120IU/ml 的溶液。 供试品溶液的配制 原料供试品，精密称取适量，按干燥品计算，加灭 菌注射用水溶解配制成浓度为 0.15mg/ml 的待测溶液；分别取适量 0.15mg/ml 的待测溶液，用灭菌注射用水稀释配制成 0.10mg/ml 和 0.05mg/ml 的待测溶液。 平行配制 3 份样品。待测溶液应尽快进行测定，放置时间不得超过 4h。 制剂供试品，按标示量加灭菌注射用水配制成 0.15mg/ml 的待测溶液。平 行配制 3 份样品。 测定法 精密量取适量待测溶液，滴加肝素钠标准品溶液后震荡均匀， 在 500nm 波长处测定吸光度，连续滴加肝素标准品直至吸光度值陡然升高，准 确记录滴加肝素标准品溶液的体积。每个待测溶液平行滴定 2 次，原料 3 份样 品共得到 18 个滴定结果，制剂 3 份样品得到 6 个滴定结果。每个滴定结果计算 效价如下： 测得效价（IU/mg）=（VT×CT）/（VS×CS）
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第一次征求意见稿
差（RSD%）应小于 5%，平均值即为每 1mg 中和肝素的效价（单位）。
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1213 硫酸鱼精蛋白生物效价测定法
硫酸鱼精蛋白效价测定法是用于测定硫酸鱼精蛋白的效价，包括凝结时间 测定法和肝素结合力滴定法。当检验结果有争议时，以凝结时间测定法试验结 果为准。
第一法 凝结时间测定法 本法系测定硫酸鱼精蛋白供试品（T）中和肝素标准品（S）所致延长新鲜兔 血、或猪、兔血浆凝结时间的程度，以测定供试品效价的方法。 肝素标准品溶液的制备 精密称取肝素标准品适量，按标示效价加 0.9% 氯化钠溶液溶解使成几种不同浓度的溶液，相邻两种浓度每 1ml 中所含肝素效价 （单位）相差应相等，且不超过 5 个单位，一般可配成每 1ml 中含 85 单位、90 单位、95 单位、100 单位、105 单位、110 单位、115 单位、120 单位、125 单位 等的溶液。 供试品溶液的制备 供试品如为粉末，精密称取适量，按干燥品计算，加 0.9%氯化钠溶液溶解使成每 1ml 中含 1mg 的溶液。供试品如为注射液，则按标示 量加 0.9%氯化钠溶液稀释至同样浓度。 血浆的制备 同肝素生物测定法中血浆制备法制备（通则 1208）。 测定法 取管径均匀（0.8cmX3.8cm）、清洁干燥的小试管 8 支，第 1 管和 第 8 管为空白对照管，加入 0.9%氯化钠溶液 0.2ml，第 2~7 管为供试品管，每管 均加入供试品溶液 0.1ml，再每管分别加入上述一种浓度的肝素标准品稀释液 0.1ml，立即混匀。刚抽出的兔血适量，分别加入上述 8 支试管内，每管 0.8ml， 立即混匀，避免产生气泡，并开始计算时间，将小试管置 37℃±0.5℃恒温水浴 中，从采动物血时起至小试管放入恒温水浴的时间不得超过 2 分钟；如用血浆， 则分别于上述各管中加入 0.7ml 的血浆，置 37℃±0.5℃恒温水浴中预热 5~10 分钟，每管分别加入 1%氯化钙溶液 0.1ml，立即混匀，避免产生气泡，并开始计 算时间。观察并记录各管凝结时间。 结果判断 两支对照管的凝结时间相差不得超过 1.35 倍。在供试品管的 凝结时间不超过两支对照管平均凝结时间 150%的各管中，以肝素浓度最高的一 管作为终点管。