可溶性糖含量的测定

可溶性糖含量的测定

实验九植物组织中可溶性糖含量的测定

2005级生物科学(1)班赵银锁(40508010) 一(实验目的

学习可溶性糖测定的蒽酮比色法

二(实验原理

植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。三(实验用品

721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精(80%)

葡萄糖标准溶液:称取已在80?烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每

mL含糖为200μg的标准溶液。

蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL

浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。

四(实验步骤

1.可溶性糖的提取

称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80?水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上

清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80?水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色

吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算)，然后再行计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线

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取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、

10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625,糖浓度曲线，或

进行直线回归求得直线方程。

试剂(ml) 管号

1 2 3 4 5 6

葡萄糖标准液 0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4

80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6

蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5

葡萄糖浓度(ul/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量,

设V为植物样品稀释后的体积(m L);C为提取液的含糖量(μg/ m L);W为植物组织鲜重

(g)。

则得计算式如:可溶性糖含量,,( C×V)/(W×106) ×100%

五(注意事项

1.蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心;

2.离心时要平衡;

3.在蒽酮反应前稀释样品10-20倍。

六(实验结果既及分析

表一测得不同浓度的糖溶液的吸光度值

浓度吸光值

0 0

10 0.21

20 0.387

40 0.91

60 1.369

80 1.72

测得吸光值为0.663，由葡萄糖溶液标准曲线可得方Y=0.0221X-0.0086，则该样品中葡萄糖

含量为30.39ug/ml，植物组织中的含糖量=(100×30.39)/(0.5×1000000)

×100%=0.608%。本次实验中测定了青菜中的标准葡萄糖含量，由测定结果可以看出，青菜中糖含量还是比较

低的。本次实验的标准曲线十分近似与一条直线，因此实验结果还是真实可靠的，能够反映

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出青菜中的含糖量。

图一 A625,糖溶液浓度的标注准曲线

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