植物生理学实验讲义

植物生理学实验

（第一版）

目录

实验一质壁分离法测定植物组织的渗透势 (2)

实验二植物体内硝态氮含量的测定 (4)

实验三叶绿素a，b含量的测定 (5)

实验四赤霉素对水稻α--淀粉酶的诱导形成 (6)

实验五植物呼吸强度的测定 (7)

实验六种子活力的快速测定—氯化三苯基四氮唑(TTC)法及红墨水法 (8)

实验七丙二醛含量的测定 (11)

实验一质壁分离法测定植物组织的渗透势

[实验目的]

观看植物组织在不同浓度溶液中细胞质壁分离的产生进程及其用于测定植物组织渗透势的测定

[实验原理]

原生质层（细胞膜、原生质、液泡膜）具有选择透过性，近似于半透膜，一个成熟的植物细胞确实是一个完整的渗透装置：当外界溶液浓度大于细胞液浓度时(高渗溶液），细胞失水，发生质壁分离；当外界溶液浓度小于细胞液浓度时（低渗溶液），细胞吸水；当植物组织细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平稳状态，当外界溶液浓度等于细胞液浓度时（等渗溶液），植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。细胞水势等于细胞液的渗透势等于外界溶液渗透势。

将植物组织置于对其无迫害的一系列不同浓度的溶液里处置一按时刻，然后镜检发生质壁分离的情形，细胞的等渗浓度将界于方才引发初始质壁分离的浓度和不能引发质壁分离的浓度之间。代入公式即可计算渗透势。

[材料、器材与试剂]

1 实验材料洋葱表皮

2 实验仪器显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，刀片，培育皿，记号笔，滴管。

3 实验试剂别离配制、、、、、、、、L的蔗糖溶液，贮9个试剂瓶中。称34.23g蔗糖用蒸馏水配成100ml，其浓度为1mol/L(母液)。再配制成以下各类浓度：

L：吸母液25ml+水25ml

L：吸母液+水

L：吸母液+水

L：吸母液+水

L：吸母液+水

L：吸母液+水

L：吸母液+水

L：吸母液+水

L：吸母液+水

[方式与步骤]

1. 取6套干净清洁的小培育皿，用记号笔编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序倒入各个培育皿中使成一薄层，盖好皿盖。

3.选用有色素的洋葱鳞片的外表皮迅速别离投入各类浓度的蔗糖溶液中，每一个培育皿中放材料3个左右，使其完全浸没，浸泡20分钟左右。

4. 到时后，掏出表皮，放在载玻片上，滴一滴相同浓度的蔗糖，盖上盖玻片，在显微镜下观看质壁分离的细胞数若是所有的细胞都产生质壁分离现象，那么取低浓度溶液中的制片做一样的观看，并记录质壁分离的相对程度。

5. 在实验中确信一个引发半数以上细胞原生质方才从细胞壁角隅上分离的最低浓度，和不引发质壁分离的最高浓度。

6. 在找到上述浓度极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几回，直到有把握为止。在此条件下，细胞的渗透势与两个极限溶液浓度之平均值的渗透势相等。

求得C1按下式计算渗透势

ψπ =-iRTC1

ψπ为细胞渗透势(bar)；R为气体常数*105L.Pa/mol·K)；T为绝对温度(273+t℃)；i解离系数，蔗糖为1；C1等渗溶液的质量摩尔浓度，单位是mol/kg；

实验二植物体内硝态氮含量的测定

[实验目的]

硝态氮是植物最要紧的氮源。植物体内硝态氮含量往往能反映土壤中硝态氮供给情形，因此可作为土壤肥氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情形，而且对鉴定蔬菜和植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。

[实验原理]

在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反映，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在碱性条件下（PH>12）呈黄色，在必然范围内，其颜色深浅与含量成正比，可直接比色测定。

[材料、器材与试剂]

1 实验材料白菜叶片。

2 实验仪器722型分光光度计、电子天平。

3 实验试剂（1） 500ppmNO3-标准溶液精准称取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于无离水中，定容至200ml。（2） 5%水杨酸一硫酸溶液称取5克水杨酸溶于100ml，浓硫酸中（密度为1. 84），搅拌溶解后，贮于棕色瓶中。置冰箱保留一周有效。（3）8%氢氧化纳溶液称取10克氢氧化纳溶于1升无离子水中即可。

[实验步骤]

1. 标准曲线的制作

（1）吸取500ppmNO3-标准溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml别离放入501ml容量瓶中，用无离子定至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120ppm的系列标准溶液。

（2）吸收上述系列标准溶液，别离放入刻度试管中，以无离子水代替标准溶液作空白，再别离加入水杨酸一硫酸溶液，摇匀，在室温下放置20分钟后再加入8%NaOH溶液9. 51ml摇匀冷却至室温，显色液整体积为101ml。

（3）以空白作参比，在410nm波长下测定吸光度。以NO3-N浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品中硝酸盐的测定

（1）样品液的制备，取一定量的植物材料剪碎混匀后，精确称取2-3克别离放入三支刻度试管中，加入10ml无离子水，用玻璃塞封口，置入滚水浴中提取30分钟，到时刻后掏出，用自来水冷却，将是取液过滤到25ml容量瓶中，并反复冲洗残渣，最的定容至刻度。

（2）样口液的测定吸取样品ml分别于三支刻度试管中，然后加入5%水杨酸一硫酸溶液ml，混匀后置室温下20分钟，再慢慢加入9. 5 ml 8%NaOH溶液，待冷却至室温后，以空白作参比，在410nm波长下测期吸光度。在标准曲线上查得或用回归方程计算出

NO3-—N浓度，再用下公式计算其含量。