关于中药的论文1500字

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篇一：有关-中药的论文

中药麻黄汤HPLC指纹图谱研究

姓名：井源博

专业：药剂学

学号：104753121090

中药麻黄汤HPLC指纹图谱研究

[摘要] 目的:建立中药复方麻黄汤的指纹图谱。方法:采用RP-HPLP法,色谱柱为WatersXTerraRP18(3.9mm×150mm, 5μm),流动相为乙腈-10mmol/L碳酸氢铵溶液(用浓氨水调pH至9.5),梯度洗脱,检测波长为215nm;流速0.8ml/min。结果:以麻黄碱为参照峰,标示出麻黄汤10个共有峰,并说明了其药材归属。结论:该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,为麻黄汤制剂的质量控制提供了科学依据。

[关键词] 麻黄汤;高效液相色谱;指纹图谱

麻黄汤为医圣张仲景名方,出自《伤寒论》,全方以麻黄为君,配伍桂枝、杏仁、炙甘草所组成,具有发汗解表、宣肺平喘之功效[1],主治太阳伤寒表实证、恶寒发热、头痛身痛腰痛、无汗而喘[2]。现代药理及拆方实验研究表明,麻黄汤中麻黄碱和伪麻黄碱的生理活性及药动学不尽相同,且方中桂枝、杏仁、炙甘草对麻黄碱和伪麻黄碱的药动学影响较为显著[3-5]。因此,笔者试图运用RP-HPLC法,通过建立采用传统方法制备的麻黄汤指纹图谱,为较深入地研究该方有效成分的变化提供分析手段,同时,以期从多药物、多成分的系统化角度实现对麻黄汤及相关制剂的质量控制。

1 仪器与材料

Waters高效液相色谱仪(Waters 2690分离单元,Waters 996二极管阵列检测器);盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品由中国药品生物制品检定所提供;麻黄、桂枝、杏仁、炙甘草药材均购于安国药材市场,经解放军第302医院中医药研究所肖小河研究员鉴定为正品,即:麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephed-ra sinica Stapf.的干燥草质茎,桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl.的干燥嫩枝,杏仁为蔷薇科植物山杏Prunus armeniacaL. var. ansuMaxim.的干燥成熟种子,甘草为豆科植物甘草Glycyyrrhizauralensis Fischer的干燥根及根茎。乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 Waters XTerra RP18色谱柱(

3.9mm×150 mm,5μm);柱温为30℃;流速:0.8ml/min;检测波长215nm;乙腈210mmol/L碳酸氢铵溶液(用浓氨水调pH

至9.5)梯度洗脱:0min,5%乙腈;15min,15%乙腈;35min,30%乙腈;50

-60min,60%乙腈。

2.2 检测波长的选择本实验采用二极管阵列检测器,在分析时进行全波长紫外扫描,并在不同波长下获取数据,经比较分析表明215 nm色谱图峰形最好,各色谱峰相互之间分离度较好,故检测波长定为215nm。

2.3 对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品各

12.32mg、11.56mg,分别置于25 ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,以微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。

2.4 供试品溶液的制备按麻黄汤的传统配方,取全方各味药材(麻黄9 g、桂枝6g、杏仁6g、炙甘草3g),粉碎,混匀,加10倍量水,浸泡30min,加热回流2次,每次1 h,合并滤液,适当浓缩并冷冻干燥。精密称取干燥粉末适量置50 ml 量瓶中,加甲醇2水(1∶1)溶解并稀释至刻度,摇匀,以微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得;同法制得单味药材的供试品溶液。

2.5 指纹图谱测定的方法学考察

2.5.1 精密度试验:取同一供试品溶液,连续进样5次,测定HPLC色谱图,结果各共有峰相对峰面积的RSD小于1.5%,相对保留时间的RSD小于1.2%,表明仪器精密度良好。

2.5.2 稳定性试验:取同一供试品溶液在室温下保存,分别于0、2、4、8、16、24 h进样,HPLC检测,结果其各共有峰的相对保留时间RSD小于1.8%,相对峰面积RSD小于2.3%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.5.3 重复性试验:取同批药材配制成的全方,按供试品溶液制备方法平行制备5份麻黄汤供试品溶液,测定液相色谱图,结果各共有峰的相对保留时间的RSD 小于2.7%,相对峰面积的RSD小于2.8%,表明方法重复性良好。

2.6 麻黄汤指纹图谱的测定及技术参数

2.6.1 样品测定:取10批麻黄汤供试品溶液,分别按2.1项下条件进行HPLC 分析,比较各色谱图,有10个峰是10份供试液所共有的,因此确定这10个峰为共有指纹峰(图1)。同时取麻黄汤及单味药材样品,按相同条件进行HPLC分析确定各色谱峰来源。通过对照分析,确定共有峰1、9来源于桂枝;共有峰2、7来源于苦杏仁;共有峰3、4、5来源于麻黄;共有峰6, 8, 10来源于甘草。

2.6.2 参照物的选择:在HPLC图谱中选择峰面积较大,出峰时间适中且稳定的色谱峰作为参照峰,结果19.862 min的色谱峰符合此条件,经对照品对照认定为麻黄碱的吸收峰,故选择麻黄碱作为参照物。

2.6.3 共有峰的相对保留时间相对峰面积指纹图谱相似度计算:选取色谱图中10强峰,由色谱工作站辅助自动进行峰匹配,确定10个共有峰。以麻黄碱色谱峰的保留时间和峰面积积分值为1,各共有峰相对保留时间及相对峰面积的RSD 均在

3.0%以内;以10个共有峰峰面积的均值作模板,利用“相关系数法”[6]和“夹角余弦法”[7]计算指纹图谱的相似度,结果见表1和表2,两种方法计算的相似度结果均在0.99以上。

3 讨论

3.1 在流动相的选择中,以乙腈2水为本底分别考察了加入不同量的磷酸二氢钾、磷酸、十二烷基磺酸钠、碳酸氢铵的情况[8-10],结果以乙腈210 mmol/L 碳酸氢铵溶液(用浓氨水调pH至9.5)为流动相时,主要色谱峰可达到基线分离、保留时间适中、不对称因子符合要求;但普通填料C18柱一般耐受的pH范围为2~8,否则就会因柱床结构发生变化而影响柱效。本实验中选择融入了杂化颗粒技术而使pH耐受范围宽(1~12)的XTerraRP18色谱柱,达到了较好的分离效果。

3.2 研究结果表明,全方供试品溶液中麻黄碱、伪麻黄碱含量均较单味麻黄供试品溶液有所增加。生物碱含量的增加,可能是因复方配伍中其它药味含有有机酸如甘草酸、桂皮酸等酸性成分的缘故,与生物碱成分结合成盐,从而增加了麻黄中生物碱在水中的溶出度。

3.3 中药化学成分的多样性与复杂性是其发挥疗效的物质基础,也是质量评价的难点与重点。目前,大量中药在其有效成分不完全明确的前提下,只采用单一