紫外线对枯草芽孢杆菌诱变剖析

[3]周德明，冯友仁，梁帅.木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶高产 菌株的诱变育种[J].中国林业科技大学学报，2009,10（5）. 利用低能N 注入，对产木质素过氧化物酶(Mnp)和锰过氧化物酶(Lip) 活力均较高的菌株N1023进行诱变，研究了不同能量和不同剂量N+离 子诱变后菌株的存活率与突变率、突变菌株的产酶活力及遗传稳定 性．结果表明：不同能量和不同N 离子剂量注入对菌株有显著影响， 诱变菌株Nlo23j产Mnp~11Lip双酶活力分别提高了27．29％和 22．58％，同时诱变菌株N1o23j有很好的遗传稳定性 。 [4]孟庆云，张鹏.环境参数变化对γ 射线诱变微生物的影响[J].微 生物学通报，2000,27（3）. 报告了在非自然环境中培养选育青霉菌苗株的一些结论。实验表明 随着辐射剂量的增加菌株的致死率也相应增加；当辐照剂量相同时， 与自然环境相比其致死率有所提高，且随着非自然环境参数值的增 加而增加。当电场强度为300kV／m、磁场强度为600G~时，正变率有 一极大值。
实验结论： 实验失败
失败原因分析：细节决定成败
1：制作牛肉膏蛋白胨培养基时，没有调到合适的 PH。 2：培养基灭菌处理没有处理好，导致杂菌没有 灭干净。 3：接种过程中由于在酒精灯上灼烧时间长且 没有完全冷却就进行接种导致菌种被烫死。 培养基培养时没有长出实验中所需菌落。
失败原因
4：紫外线诱变过程及诱变后的稀释操作没有在无菌下进行 在黑暗中培养时间过短。 5：涂平板时离酒精灯远进，导致杂菌进入，最后 菌落没有长出，且其他杂菌生长旺盛。 6：由于以上所有操作都应无菌操作进行，但实际操作没有 做到无菌操作，最后导致平板上菌落较杂，分不清枯草芽 孢杆菌菌落无法计数。
教训
1：实验操作提前准备 材料及器材。 2：无菌操作时严格 按照无菌操作 技术操作。 3：紫外线诱变处 理时注意黑暗 培养。 4：遇到不会的要 及时询问，不能 自己随便做。
参考文献：
[1]李豪，车振明.微波诱变微生物育种的研究[J]. 山西食品工业，2005,6（2）. 简要概括了国内外微波诱变育种领域的研究新进 展，对微波的生物学效应及诱变微生物的机 理进行了总结和讨论，在此基础上探讨了微波诱 变微生物育种的应用性研究。最后，对本领域的 发展进行了展望。 [2]孙金旭.乳酒酵母紫外诱变原生质体制备研究[J]. 酿酒科技，2008（6）. 在乳酒酵母原生质体形成率和再生率影响单因素 研究的基础上，对菌龄、酵解温度、酵解时间、 酶浓度、稳渗剂采用L16（4）5正交试验，评价 各因素的影响程度，得出适宜该菌原生质体制备 的条件。
实验目的：
学习微生物诱变育种的基本操作方法
实验内容：
1：对枯草芽孢杆菌出发菌株进行处理 制备菌悬液。 2：对紫外线进行诱变处理。
实验材料和用具 1 菌种:枯草芽孢杆菌 2 培养基:淀粉培养基。 3 主要药品:牛肉膏、蛋白胨、 Nacl、可溶性淀粉、碘液，生理盐 水。 4主要器皿:试管、移液管、锥形瓶、 量筒、烧杯、紫外灯、离心机、培 养皿等。
存活率 将培养48 h 后的平板 取出进行细胞计数。 根据平板上菌落数， 计算出对照样品1 mL 菌液中的活菌数。
同样计算用紫外线处 理1、2、3min 后的存 活细胞数及致死率。
注
1：紫外线照射时注意保 护眼睛和皮肤。 2：诱变过程及诱变后 的稀释操作在无菌下进行并黑暗中培养。
意 事 项
实验结果分析
3诱变处理
用物理方法或化学方法，所用诱变剂种类及剂量的选 择可视具体情况决定，有时还可采用复合处理，可获 得更好的结果。本实验用紫外线照射的诱变方法。 (1)．紫外线处理 打开紫外灯预热20min。取5mL 菌悬 液放在无菌的培养皿中，同时制作5 份。逐一操作， 将培养皿平放在离紫外灯30cm(垂直距离)处，照射l min 后打开培养皿盖，开始照射，与照射处理开始进 行搅拌，即时计算时间，照射时间分别为15 s、30 s、 l min、2 min、5 min。照射后，诱变菌液在黑暗中保 存1～2h 然后稀释涂菌进行初筛。 (2)．稀释菌悬液 按10 倍稀释至10-6，从10-5 和106 中各取出0.lmL 加入到酪素培养基平板中(每个稀释 度均做3 个重复)，然后涂菌并静置，待菌液渗入培养 基后倒置，于30℃恒温培养2～3d。
[5]娄权，陈广平.浸矿微生物紫外诱变选育及浸矿机理研究[J].现代 矿业，2004（2）. 通过微生物的铜离子耐受性培养，选取可以浸出铜离子的酸性浸矿 微生物，并利用紫外线照射对微生物进行诱变培养，培育出一种可 以高效浸出铜离子的酸性浸矿微生物。同时探讨了微生物对铜离子 的耐受性培育和紫外线诱变在高效浸矿微生物选育中的应用，以及 浸矿微生物在矿山中的应用前景。 [6]丁学知，夏立秋.苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育[J].中 国生物防治，2001,17（4）63-166. 不同生态区域的早作地、果园和稻田采集的858份土样中，分离筛 选出苏云垒杆菌30株 选取一株具典型苏云垒杆菌菌落特征和较高杀 虫毒力的菌株70为出发菌株，经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合 诱变，显微涂片染色镜检，发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数 量及芽孢与伴孢晶体的比倒与杀虫效力密切相关 以这些特征为参考 进行一佚速韧筛和毒力生测复筛，筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4．0718。该突变袜杀虫毒力与原始菌株相比提高了7．5倍，在6、 12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20％ 、97％ 和 100· 此菌株的高效速效杀虫毒力经连续l0代培养能稳定遗传。
百度文库 技术路线：
材料器具准备
紫外线诱变处理
菌悬液制备
平板制作 稀释涂平板
计算存活率 及致死率
稀释菌悬液
操作步骤
1.菌悬液制备 将枯草芽孢杆菌接种在牛肉膏蛋白胨培养基上， 37℃培养20h，使其活化，取已培养20 h 的活 化枯草芽孢杆菌斜面一支，用10 mL 生理盐水 将菌苔洗下，倒入离心管中，离心(3000 r/min)15min，弃上清液，将菌体用无菌生理盐 水洗涤2 次，最后制成菌悬液，用血球计数板 在显微镜下直接计数。调整细胞浓度为108/mL。 2. 平板制作 将培养基熔化后，冷至45℃左右倒平板。
4稀释涂平板
取未照射的菌悬液(作为对照)和照射 过的菌悬液各0.5 mL 进行不同程度的稀释。 取最后3 个稀释度的稀释液涂于淀粉培养 基平板上，每个平板加稀释液0.1 mL，用 无菌玻璃刮棒涂匀，培养48 h(用报纸包好 平板)。注意在每个平板背后要标明处理时 间、稀释度。 注：枯草芽孢杆菌诱变前：稀释至10-8， 10-7,10-6，生理盐水 枯草芽孢杆菌照射1min稀释至10-8,107,10-6，生理盐水 枯草芽孢杆菌照射2min稀释至10-8,10-7， 10-6，生理盐水 枯草芽孢杆菌照射3min稀释至10-8，10