外周血淋巴细胞培养和染色体标本制备实验教学方法

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第 30 卷第 1 期2012 年 2 月广东医学院学报

JOURNAL OF GUANGDONG MEDICAL COLLEGE V ol. 30 No. 1Feb. 2012

实验教学是高校教学的重要组成部分，在培养了使学生更好地了解和掌握消毒灭菌知识和技能，学生分析和解决问题能力、培养严密的思维方法和通过在PPT 上讲解后，再由带教老师用实物进行操踏实肯干的工作作风等方面具有不可替代的作用。作演示。这个过程加强了学生的无菌操作意识，树要使实验室成为推行素质教育、培养学生创新精神立学生的无菌概念。

和实验能力的主要阵地，必须突破传统的教学观念 1.2　通过实际操作，培养学生动手实践的兴趣，确和教学模式，探讨不同层次、具有特色的、多样化立严格的无菌操作观念

的实验教学方法。《医学遗传学》是高等医学院校在经过适当改装后的实验室里，带教老师向学的一门必修课，外周血淋巴细胞培养和染色体制备生讲解细胞培养基的配制方法及要求后，由学生自是这门课程的重要实验教学项目之一，是综合性实己操作。配制培养基是实验的重要环节之一，要求验项目。该实验包括灭菌技术、培养基配制、采血在无菌条件下操作。以往因为实验室条件所限，必接种、细胞培养、收集细胞制备标本、Ｇ显带处理

须用预先在无菌实验室里配制好的培养基给学生做[1-2]

和镜下观察分析等内容，实验过程繁琐，耗时实验，如果使用市售的培养基则成本费用高，并且长。根据目前学生人数多以及本实验的特点，我们学生都没有动手的机会。由于配制培养基是一项细进行了以下教学方法的探索和改进：微且繁琐的实验过程，一旦失败则后面的实验无法进行，要求带教老师把每一个细小的环节都仔细向1　多种实验手段结合，使繁琐的实验简单化学生交代清楚，包括一些操作的动作要领和容易出现的问题。有些学生会忘记按无菌操作要求用酒精1.1　运用现代教学手段，了解实验中使用器械、物灯高温消毒试管口和玻璃器皿，或者忘记消毒玻璃品的清洗消毒灭菌程序

安培，教师要预先强调并密切观察学生的操作，及由于学生初次接触本实验使用的仪器设备和试时纠正其错误，避免培养基被污染。学生们通过自剂，例如CO 培养箱、抽滤器、培养基(所需的药品2己动手配制培养基，了解了细胞培养的实验过程，及试剂)和秋水仙素、离心机、显微镜及玻璃器皿认识了每个操作环节的重要性，培养了高度的责任等，感到非常的陌生，因此我们应用多媒体教学手心和严谨的科学态度。

段介绍它们的作用、原理和正确的使用方法，让学 1.3　开放实验室，使每个学生参与整个实验过程，生容易理解和掌握。

激发其学习兴趣

外周血淋巴细胞培养是在体外条件下的细胞培在完成了以上实验课后，根据实验要求分2次安养技术，整个过程必须在严格无菌条件下进行，对排学生回实验室完成以下2个实验步骤。(1) 采血接实验所需的器皿(如烧杯、量筒、培养瓶、抽滤器、种及培养：在老师的指导下，由学生自己互相采静胶塞等)的消毒灭菌是进行细胞培养最重要及最基本脉血，注入配制好的培养液内进行培养。让学生互的条件，这个过程包括洗、煮、烤、高压灭菌。为

相采血进行实验，学生会更加关心实验的结果，更认真地进行后面阶段的实验，激发他们对这个实验的兴趣。(2) 在收获细胞前4 h ，尚要进行一个很关

摘　要：由于外周血淋巴细胞培养和染色体制备这一实验教学课程耗时长，步骤繁琐，要求学生完成全部实验过程并达到较好的教学效果操作起来不容易。经过多年的摸索，我们将普通实验室加以改造，采用集中采血、分批分阶段进行实验的方法开展实验教学，结果绝大多数学生均能顺利完成该实验，达到预期的教学效果。

关键词：细胞培养；染色体；实验教学

中图分类号：G 624.4 文献标识码：B 文章编号：1005-4057(2012)01-0107-02DOI: 10.3969/j.issn.1005-4057.2012.01.044

外周血淋巴细胞培养和染色体标本制备实验教学方法的探索

廖　霞，陈小萍，周汝滨

（广东医学院生物学教研室，广东湛江 524023）

收稿日期：2011-11-12；修订日期：2012-01-30作者简介：廖　霞(1959－)，女，大专，实验师。

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键的步骤：用无菌注射器加秋水仙素。秋水仙素的的实验仪器设备的准备和实验方法应用多媒体教学作用是破坏细胞的纺锤体，使正在分裂的细胞不能方法讲解，而主要和关键的实验步骤则由学生在老再正常地进入分裂的后期与末期，从而可以积累大师指导下亲自操作。同时我们根据学生人数多，课

[2]

量的中期分裂相供分析研究。加秋水仙素必须掌时少且安排分散的特点，采用集中采血，分批分阶握好时间和量，加的量过多或过少都会影响细胞中段实验的方法开展教学。并且将普通实验室(可容纳期分裂相的收获结果，所以带教老师必须对学生进30多个学生进行实验)加以改进，代替只能容纳2人行示范、训练操作。我们让学生用注射器和水在其操作的无菌室来完成实验，既节省了课时，又使每他的瓶子里练习加样，熟练后再向自己培养的标本个学生都能动手进行实验。原来的教学方法是由老瓶内加秋水仙素，确保实验成功。师在实验课前为学生准备好所有灭菌器皿、配制好

[3-1.4　独立制作标本，掌握实验操作技巧，确保标本培养基、采用大容量集体分组抽血进行细胞培养

4]

质量和收获细胞制片，甚至是只给学生提供已经制备好收获细胞：按常规收获处理(低渗－预固定－的染色体玻片让学生进行镜下读片分析。这样学生固定2次－滴片)。在低渗处理过程中对温度、时并不能了解整个实验技术和实验过程，学生的知识间、使用滴管吹打的力度轻重次数都有较严格的要点和动手能力都有不足。改进后，96%的学生都能求，如果操作不当，就不能获得最佳的细胞分裂在老师指导下自己动手完成从培养液配制、细胞培相；在固定处理过程中，带教老师必须认真讲解和养、收获和制片，然后进行镜下分析的实验操作过示教，要求学生掌握好离心的时间、速度和吸管操程。这样既激发了学生对该课程的学习兴趣，进一作手势技巧；滴片是用气干法滴片，用吸管吸取细步丰富了学生的相关理论知识，使学生树立起严谨胞悬液，滴于事先用冰水浸泡的洁净载玻片上，用的科学态度，又培养了学生的动手能力，达到理想口吹气，使细胞悬液铺展，并在酒精灯的火焰上慢的教学效果。

慢烤干，制作出常规染色体片。将制好的染色体片

参考文献：

放置室温进行1周老化，最后进行染色体G显带制作

及分析。实验的成败在于标本的质量，不管在哪个

[1] 丁显平. 现代临床分子与细胞遗传学技术[M]. 成都：四川

大学出版社, 2002:45-46.

环节出错，都会影响到染色体标本的分析，甚至造

[2] 周焕庚, 夏家辉, 张思仲. 人类染色体[M]. 北京:科技出版成实验失败。

社, 1987:64-778.

2　讨论[3] 倪岚, 余从年, 周光云. 人类染色体标本制备的改进[J]. 生

物学通报, 2000, 35(2):33.

开设这一实验课的主要目的是使学生了解和掌

[4] 穆灵敏, 邢智峰, 张楠, 等. 大体积培养人外周血淋巴细胞制握外周血淋巴细胞培养和染色体制备及分析这一实

备染色体标本[J]. 新乡医学院学报, 2005, 3(22):228-230.验技术和实验过程，理论联系实际，树立无菌概

念。由于该实验过程繁琐，耗时长，我们先将一般