临床药理学实验 PPT课件

0.667h、1.0h、1.5h、2.0h、3.0h、4.0h、 6.0h、8.0h、12.0 h静脉取血3mL，放入肝 素化试管 ▪ 离心(3000转/分×10 min)，分离血浆 ▪ 注意：实验前晚禁食（禁食不禁水）12 h， 次日7:00排空膀胱后服药，给药2 h后方可 饮水，4 h后进统一餐
17
3.样品处理 ▪ 10mL具塞试管：血浆0.5mL，加人2mol/L
HCL100μL，40μL内标液（吉非罗齐or卡 马西平）。
▪ 振荡30秒，加乙醚5.0mL，混旋2min，静 置10min
▪ 将有机相4mL转移至10mL刻度离心试管中 ▪ 37°C水浴挥干，加流动相100μL复溶，进
样20μL ▪ 用内标法峰面积定量分析。
5
2.血浆样品的采集 ▪ 健康志愿者 ▪ 口服200mg盐酸左氧氟沙星胶囊 ▪ 分别在不同时间点抽取静脉血3mL，放入
肝素化试管 0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、2.0h、 2.5h、4.0h、6.0h、9.0h、12.0 h、24.0h ▪ 离心(3 000转/分×10 min)，取血浆待测
6
3.血浆样品的处理（√） ▪ 1.5mL EP 2支，编号 ▪ 血浆样品0.5mL ▪ 70%高氯酸30μL ▪ 旋涡振荡20秒 ▪ 15000rpm离心10min ▪ 取上清液20μL进样检测
7
4.色谱条件
▪ 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18 （4.6×150mm，5μm，Agilent，USA）
13
微生物检测法和高效液相检测法
14
实验二反相高效液相色谱法检测人血 浆中双氯芬酸钠的浓度
▪ 【实验目的】 ▪ 掌握高效液相色谱内标法检测血浆药物浓
度的原理 ▪ 了解高效液相色谱仪的原理及应用。
15
【实验步骤】 ▪ 1.标准曲线的制备 ▪ 1.5mL EP管7支，编号 ▪ 空白血浆0.5mL ▪ 分别加入不同量的双氯酚酸标准工作溶液，
▪ 【结果】 ▪ 内标法定量 ▪ 汇总不同时间的血药浓度 ▪ DAS软件处理
20
▪ 【讨论】 ▪ 双氯酚酸 ▪ 萃取法 ▪ 内标法 ▪ 药动学特征
21
DAS系统
▪ Drug And Statistics
22
23
24
25
病例讨论1

▪ 患者男,75岁。有帕金森病史3年，服用美多巴超过半年。美多巴剂 量早250mg、中、晚各125mg。入院前连续4个月无明显诱因出现反复 头昏,心前区和胸骨后烧灼感,恶心,腹部饱胀不适,大便干结,焦虑不 安,失眠，每次发作几小时至1d不等,可逐渐自行缓解。
临床药理学实验
1
临床药理学实验基本要求
▪ 预习实验指导 ▪ 分组 ▪ 领用器械 ▪ 实验室卫生 ▪ 实验报告 ✓ HPLC外标法检测血浆左氧沙星的浓度 ✓ 反相-高效液相色谱法测定人血浆双氯芬酸钠浓度 ✓ 病例讨论
2
实验报告格式
▪ 实验名称 ▪ 目的 ▪ 方法 ▪ 结果 ▪ 讨论
3
实验一 HPLC外标法 检测血浆左氧氟沙星的浓度
配成浓度相当于0.025、0.05、0.100、 0.250、0.500、1.000、2.500、5.000mg/L 血浆标准溶液 ▪ 经预处理后，进样检测 ▪ 测定峰面积值（A），以A与浓度C作线性 回归，求出标准曲线方程。
16
▪ 2. 给药及血样采集 ▪ 每人口服单剂量双氯芬酸钠栓剂100mg ▪ 于给药前，给药后0.167h、0.333h、
苯，旋涡混合后转移有机溶剂层并挥干， 用流动相复溶后检测。 ▪ 蛋白沉淀法：乙腈、甲醇、高氯酸、三氯 醋酸（蛋白沉淀剂） ，旋涡混合后高速离 心一定时间，上清液可直接检测。
12
▪ 高效液相定量方法 ▪ 内标法：内标法就是用在样品中定量加入要分析
的物质，通过测得的实际样品量和加入样品量的 比值来定量所要分析的样品含量。 ▪ 外标法: 用待测组分的纯品作对照物质，以对照 物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定 量的方法称为外标法。 外标一点法和标准曲线法。 ▪ 内标法＋标准曲线法
▪ 保护柱：XDB-C18保护柱（4.6×12.5mm， 5μm，Agilent，USA）
▪ 流动相：乙腈-水-2%冰醋酸（18：12：70， V/V/V）
▪ 流速：1.0mL/min，柱温：20℃，检测波长： 294nm，参比波长：380nm，检测灵敏度： 0.1mAU。
8
【结果】 根据测得的A值和标准曲线，求出浓度。 全实验室汇总，以时间t为横坐标，浓度C和
单剂量口服0.2g后，血药峰浓度（Cmax）约为 1.6mg/L，达峰时间（Tmax）约为1小时。血消除 半衰期（t1/2β）约为6小时。蛋白结合率约为 30%～40%。组织和体液中的浓度与血药浓度之 比约在1.1～2.1之间。主要以原形自肾排泄，在体 内代谢甚少。
11
▪ 生物样品的预处理： ▪ 溶剂萃取法：乙醚、乙酸乙酯、正己烷、
18
4.色谱条件： ▪ 色谱柱:HypersilC18柱(4.6mm×250mm，
5um，Agilent，USA); ▪ 保护柱:ezs柱(大连依利特科学仪器有限公司) ▪ 流动相：甲醇：1.5%冰乙酸(72.5:27.5，v/v) ▪ 流速：0.9mL/min；检测波长276nm；柱温：
室温。
19
【实验目的】 ▪ 掌握血浆样品的预处理方法。 ▪ 掌握高效液相色谱外标法检测血浆药物浓
度的原理。 ▪ 了解高效液相色谱仪的原理及应用。
4
【实验步骤】 ▪ 1.标准曲线的制备 ▪ 1.5mL EP管7支，编号 ▪ 空白血浆0.5mL ▪ 分别加入不同量的左氧氟沙星标准工作溶
液，配成浓度相当于0.05、0.10、0.25、 0.50、1.00、2.50、5.00μg/mL的血浆样品 ▪ 经预处理后，进样检测 ▪ 测定峰面积值（A），以A与浓度C作线性 回归，求出标准曲线方程。
lgC为纵坐标作图。 时间：0.25h、0.5h、0.75h、1.0h、1.5h、
2.0h、2.5h、4.0h、6.0h、9.0h、12.0 h、 24.0h
9
▪ 【讨论】 ▪ 左氧沙星 ▪ 样品预处理方法和检测方法 ▪ 药时曲线
10
左氧沙星
广谱抗菌作用：多数肠杆菌科细 菌，金黄色葡萄球菌等革兰阳性 菌和肺炎支原体，肺炎衣原体。