丹参药材提取液中丹酚酸B稳定性影响因素的考察

·研究报告·

丹参药材提取液中丹酚酸B 稳定性影响因素的考察

张　军＊,王凤云,詹丽玲,赖小平

(广州中医药大学,广东广州510405)

[收稿日期]　2004-05-08

[基金项目]　广州市科技攻关计划项目(200323-E5161)[通讯作者]　＊张军,Tel :(020)36585812,Fax :(020)36586508,E -mail :zhjxsh @yahoo .com .cn

丹参水溶性酚酸类包括丹酚酸A 、丹酚酸B 、丹酚酸C 、迷迭香酸、丹参素、原儿茶醛等。药理研究

表明丹参酚酸类具有抗凝、抗氧化的活性[1-3],其中丹酚酸B 是含量最高的活性成分,有文献提示丹酚酸B 的稳定性较差,其制剂工艺过程中稳定性影响因素有待探讨[4]

。本实验对丹参提取液施以不同影响因素,用HPLC 测定丹酚酸B 的含量,考察各种因素对其稳定性的影响。

1　仪器,试剂与样品

DIONEX SUMM IT 高效液相色谱仪;丹酚酸B 对照品(中国药品生物制品检定所,批号200201);丹参药材购于陕西商洛地区;乙腈为色谱纯;其余试剂均为分析纯。2　方法与结果

2.1　丹酚酸B 含量测定色谱条件与方法学考察2.1.1　色谱条件　Kromasil C 18柱(4.6mm ×250mm ,5μm ),流动相乙腈-0.5%冰醋酸水溶液(20∶80),检测波长254nm ,柱温30℃,流速1.0m L ·min

-1

,理论塔板数按丹酚酸B 计算不低于3000。

2.1.2　方法学考察　丹酚酸B 含量测定的线性回归方程为Y =709.91X -10.547,r =0.999,线性范围0.288～2.88μg ;精密度试验RSD 0.5%,(n =6);重复性试验RSD 1.0%,(n =6);加样回收试验得平均回收率为97.3%,RSD 1.8%(n =9)。2.2　不同温度对丹参提取液中丹酚酸B 含量影响

将丹参水提液分别置于50,60,100℃水浴中受热,每隔一定时间分别取出1份,测定其中丹酚酸B 的含量。结果见表1。

结果表明,丹参药材提取液在100℃受热1h

表1　温度、受热时间对丹参水提液中丹酚酸B 含量影响受热时间/h 含量/mg ·m L -1

50℃60℃100℃00.21130.25520.25520.5--0.177310.21220.21520.145320.20160.19590.116230.17870.17180.06925-0.14570.037960.15560.12830.02709

0.1241

0.1018

0.0152

时,丹酚酸B 含量降低约30%,受热9h 时,其含量降低约95%。丹参药材提取液60℃受热1h 时,丹酚酸B 含量降低约15%,受热9h 时,其含量降低约60%。

丹参药材提取液50℃受热1h 时,其含量几乎不降低,受热8h 时,丹酚酸B 含量降低约40%。

以上结果表明丹参水提液中丹酚酸B 对受热温度和受热时间敏感。提示为提高丹酚酸B 在制剂工艺过程中的保留率,丹参水提液不宜长时间高温浓缩。

2.3　不同溶媒体系对提取液中丹酚酸B 的含量影响

将丹参水提取液过大孔吸附树脂,水洗至糖的反应为阴性后(HPLC 图谱显示过柱液及水洗液不含丹酚酸B ),以乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液(HPLC 图谱显示乙醇洗脱液含丹酚酸B )。上述乙醇洗脱液置于50℃水浴中,分别测定在不同受热时间丹酚酸B 的含量。结果见表2。

表2　50℃丹参酚酸乙醇溶液中丹酚酸B 不同时间含量

受热时间/h

含量/mg ·m L -1

0.131910.144820.130130.14025

0.1468

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结果表明,丹参酚酸乙醇溶液中丹酚酸B 在50℃水浴中受热5h ,其含量几乎不变化,比丹参水提液中丹酚酸B 更为稳定,提示丹参酚酸乙醇溶媒体

系更有利于丹酚酸B 的稳定。

2.4　不同pH 对丹参提取液中丹酚酸B 稳定性的影响

2.4.1　酸性体系对丹酚酸B 稳定性的影响　将丹参水提液以盐酸调pH 2,置于50℃水浴中,测定丹酚酸B 在不同受热时间的含量。结果见表3。

表3　pH 2提取液中丹酚酸B 在50℃受热不同时间含量

受热时间/h

药液含量/mg ·mL -1

00.256510.231520.248830.257750.23368

0.2524

结果表明,在酸性体系下,丹参提取液中丹酚酸

B 几乎不变化;提示酸性体系有利于丹酚酸B 水溶液在受热条件下的稳定。

2.4.2　碱性体系对丹酚酸B 稳定性的影响　将丹

参水提液以氨水调pH 12,测定其中丹酚酸B 的含量。H PLC 图谱显示提取液中无丹酚酸B 特征峰,提示该碱性条件将使提取液中丹酚酸B 迅速减失或转化。试验相关样品HPLC 图谱见图1。3　讨论

3.1　丹参水提液在长时间受热中,丹酚酸B 的含量大大降低,这一点中试研究中已经得到重复验证。3.2　乙醇体系有利于丹酚酸B 的稳定。考虑在工艺中将丹参水提液过大孔吸附树脂,以乙醇洗脱富集丹参酚酸,使其存在体系由水相改变为乙醇相,既可降低浓缩温度,又利用丹参酚酸在乙醇体系中较为稳定的性质,保证工艺过程中丹参酚酸有更高的保留率。这一点已在丹参酚酸有效部位的中试研究中得到证实

。

图1　试验相关样品HPLC 图

A .丹参提取液原液;

B .乙醇液受热5h (50℃);

C .水提液受热8h (100℃);

D .水提液受热8h (50℃);

E .pH 2受热8h (50℃);

F .pH 12;1.丹酚酸B

3.3　丹参水提液长时间受热后,丹酚酸B 的含量降低,同时其他成分含量有所增加;丹参水提取液加

氨水碱化后,丹酚酸B 的含量降低,同时其他成分含量有所增加。其对药效学的影响有待进一步研究。

[参考文献]

[1]　黄诒森,张均田.丹参中三种水溶性成分的体外抗氧化作用.

药学学报,1992,27(2):96.[2]　刘　平,森泽成司,

口靖

.丹酚酸B -镁盐抗大鼠D -半乳

糖胺肝损伤的作用.中国中西医结合杂志,1993,13(6):352.[3]　刘　平,刘乃明,徐列明,等.丹酚酸乙对四氯化碳体外损伤

原代培养大鼠肝细胞的直接保护作用.中国中药杂志,1997,22(5):303.

[4]　倪力军,史晓浩,高秀蛟,等.提取时间、溶剂对丹参提取物

质量的影响研究.中成药,2003,25(10):780.

[责任编辑　刘　]

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