072 药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定

药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定[适用对象] 药学、药剂学专业

[实验学时] 3学时

一、实验目的

学习激动剂量效曲线的测定方法，计算竞争性拮抗剂的pA2值

二、实验原理

在一定范围内药物随剂量或浓度的增加，效应也相应增加。以效应为纵坐标，剂量的对数值为横坐标，可绘制出对称的“S”型曲线。本实验选择对M、N受体有兴奋作用的乙酰胆碱（ACh），应用蟾蜍腹直肌为标本（含N2受体）进行实验，按累积浓度进行实验，观察AC h剂量的增加，肌肉收缩效应的变化，从而绘制量效关系曲线。

三、仪器设备

动物：蟾蜍1只

器材：氧气瓶、器官浴槽、铁支架、双凹夹、肌张力换能器、蛙板、探针、100μl微量注射器、10ml注射器、手术剪、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、丝线、计算机

试剂：10-4～10-1mol·L-1乙酰胆碱，10-3mol·L-1筒箭毒碱，任氏液

四、相关知识点

本课程知识点：受体激动药与受体拮抗药、竞争性拮抗、传出神经药物作用机制、量效曲线、pA2

多课程知识点：受体学说、计算机操作、数学计算

五、方法与步骤

1.实验装置的连接：①通过进水口对恒温槽内供水至红线处，接通电源。按下加温开关，使恒温在37℃。②排液口用橡皮管连接到水杯，将任氏液装入浴管内，调节气泡至每秒3～4个。③将张力换能器固定，使其对准浴管的上口。

2.标本制备与固定：取蟾蜍一只，断头处死，用探针破坏脑和脊髓，背位固定于蛙板上。剪开腹部皮肤，暴露腹直肌。在耻骨端及胸骨端，各以细线结扎，并自腹白线将两片腹直肌分离。将剪下的腹直肌标本，其一端固定于标本板固定钩上，迅速移至含有10ml任氏液的器官浴槽中，通入混合气体；另一端与张力传感器相连，调节微调器，使标本负荷1g，平衡0.5h，平衡期间每间隔15min更换一次营养液。

3．给药方法及曲线描记

按半对数摩尔浓度累积给药法，依次加入激动剂ACh，其方法见表：

按上述方法给药，当达到最小有效浓度后，每加一次药，将出现一次收缩，待收缩反应达最大时，立即加入下一剂量，直至加药后收缩反应不再增加，即达最大效应，即描记出ACh的量效曲线（第一条量效曲线）。连续用10ml营养液冲洗标本两次，再每间隔15分钟更换一次营养液，直至收缩张力恢复到正常（收缩张力曲线回至基线）。然后，加入拮抗剂筒箭毒碱10-3mol·L-1 30μl，即浴槽终浓度为3

×10-6mol·L-1。10min后按上述方法重复制作ACh第二条量效曲线。

4.实验结果分析

1）从剂量反应曲线上求出未加入拮抗剂前激动剂引起50%反应所需要的浓度（mol·L-1），以[A0]表示。加入不同浓度筒箭毒碱后，ACh的剂量反应曲线右移。从曲线上求出筒箭毒碱存在时，ACh 产生50%反应所需的浓度（mol·L-1），以[A B]表示。

2）pA2值的计算

以log（A B/A0-1）为纵坐标，相应的筒箭毒碱浓度的负对数（-l og[B]）为横坐标，作图得一直线，此直线的方程式为：pAx=-log[B]+log（[A B]/[A0]-1）

令[A B]/[A0]=X，则pAx=-log[B]+log(X-1)，其中[B]为拮抗药的浓度（mol·L-1）。

pAx反映拮抗药的拮抗效能，表示在[B]浓度的拮抗药存在时，激动剂需加在X倍浓度才能达到未加拮抗药时的效应。

pA2表示当某浓度拮抗药存在时，需将激动药的浓度加大1倍才能达到未加拮抗药时的效应，即当[A B]=2[A0]时，log2[A0]/([A0]-1) =0，pA2=-log[B]。

上式表示当log(X-1)=0时，-log[B]轴的截距即为pA2值。

5．注意事项

1）标本勿用手拿，应以镊子取，亦不能在空气中暴露久，以免

失去敏感性。

2）标本不要触及浴管壁

3）浴管中的任氏液量应始终保持一致，否则将影响药效。

4）加药时不要滴在管壁上，应直接滴在液面上。

5）每只注射器只能用来抽取一种浓度的药液。

六、实验报告要求

实验报告内容应包括：【实验目的】、【实验原理】、【器材】、【药品与试剂】、【动物】、【实验方法】、【结果】及【讨论】等部分。

【结果】要对所得实验数据进行统计分析；【讨论】要对实验中遇到的问题进行描述并分析原因。

七、思考题

从量效曲线分析效应强度与药物剂量的关系，并指出其重要意义。

合用具有协同或拮抗作用的药物，对量效曲线有何影响？

八、实验成绩评定

原理描述 : 20分

调试过程 : 10分

数据记录 : 10分

解决问题的能力 : 20分

资料搜集 : 10分

实验结果 : 10分

实验效果 : 10分