显微镜的使用及维护资料
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载物台） • ④调节光亮度旋钮将光亮度调至最暗，关闭
电源。
3/1/2020
4、显微镜的性能参数
• （1）.数值孔径
又称镜口率，是物体与物镜间 媒质的折射率 n 与物镜孔径角 的一半（β）正弦值的乘积， 用NA表示。即：NA＝ n×sinβ
数值孔径与分辨率成正比，与放大率成正比， NA增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。
• 物镜一般刻有放大倍数×NA（数 值孔径）如： 4×0.1 （1组镜片） 10×0.25 （2组镜片） 40×0.65 （3组镜片） 100×1.25（4组镜片） 160/0.17 （机械镜筒长/盖玻 片的厚度）
3/1/2020
• （3）.工作距离
• 指显微镜正常观察物像时物镜表面到被观察标本间的距 离
3/1/2020
七、常见故障与处理
常见故障
原因
排除方法
视场内有 污迹或灰 尘
1．目镜、物镜、聚光 镜等其它光学部件上有 污迹和灰尘（旋动目镜 时污物转动说明目镜上 有污物，否则污物在物 镜或聚光镜上）
1．正确擦拭显微镜的 光学部件。擦拭目镜和 物镜时必须使用合格的 拭镜纸、蘸取无水乙醇 擦拭。要避免二次污染
• 显微镜使用过程中习惯所说的“调焦”指的就是调整物 镜的工作距离
• 它与物镜的数值孔径成反比，一般情况下，物镜的数值 孔径越大，其工作距离越小。
3/1/2020
• （4）.视野
• 视野又称视场，是指通过显微镜所能看到的标本范围。 视野成圆形
• 视野大小决定于物镜的倍数及目镜光阑的大小，小的放 大倍数和大光阑可获得较大的视野，反之则视野较小
2.目镜不要轻易拿下，否则灰尘会落入物镜中。 3.不用时，使载物台落下，呈放松状态。 4.光源灯不用时关到最小，保护灯泡。
3/1/2020
六、维护与保养
1.保证良好的使用环境 台面稳固、环境良好。 2.保持正确的使用方法 操作轻巧、舒缓，正确旋转各类
螺旋，合理使用照明光源和油镜 。 3.定期进行清洁维护 正确清洁，定期维护。 4. 擦镜： 1）擦镜液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20% 2）先用洗耳球吹去浮尘。 3）用长絮棉签沾檫镜液由中心向外擦。
3/1/2020
二、显微镜
• 1.光学显微镜的成像原理
要 获得清 晰的像， 被观察 标本 AB应 位于物 镜前焦 点外至 两倍焦 距之间。
标本AB经两级放大，在眼的明视范围内看到放大的A``B``像。
3/1/2020
2、普通光学显微镜的结构
• 普通显微镜在结构上分： 光学系统，机械系统。
• 光学系统包括物镜、目镜、 聚光镜、反光镜等。
• 机械系统包括底座、镜臂 粗调手轮、微调手轮、载 物台、转换器等。
3/1/2020
显微镜的光学系统
• 1.物镜
• 显微镜光学系 统最核心的部 件，其性能直 接关系到显微 镜的性能和成 像质量。
3/1/2020
显微镜的光学系统
• 2.目镜
• 也称接目镜， 实质上是放大 镜，其作用是 把物镜分辨和 放大的实像再 放大并映入观 察者眼中。
3/1/2020
七、常见故障与处理
常见故障
原因
排除方法
1．物镜转换器未能正确 1．旋转物镜转换器直 定位（物镜未与光路同轴）至选用物镜完全对中
视场模糊、
视场亮度 不均、不
2．聚光器位置太低
能看到完
整视场 3．视场光阑未对中
2．调整（升高）聚光 器位置得到良好物像
3．调整视场光阑使其 良好对中
4．视场光阑开得太小 4．适当开大光阑
3/1/2020
2．标本片上有污迹和 灰尘
2．正确擦拭标本片
七、常见故障与处理
常见故障
原因
排除方法
1．标本片正反面错放 1．翻转，使盖玻片向上
2．盖玻片太厚
2．使用标准厚度 （0.17mm厚）的盖玻片
观察效果 差、看不 清细节、 视场不均 匀（反差
过大）
3．油镜观察时未浸油 4．油镜浸油内有气泡
3．使用合格浸油，油镜 浸入
3/1/2020
• （2）.放大倍数
• 又称为放大率，指显微镜经多次成像后最终所观察到的 物像大小相对于原物体大小的比值，常记作M。即： M＝maq m是物镜的放大倍数 a为目镜的放大倍率 q是在双目显微镜中所增设的棱镜产生的放大倍数 （双目显微镜取值为1.6倍，单目显微镜q值为1）。
3/1/2020
• 因为视野的局限，一般均要通过机械装置移动、分区观 察标本。
3/1/2020
• （5）.景深
• 又称焦点深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像平 面不变，景物沿光轴前后移动的距离
• 显微镜观察时，不仅位于聚焦平面上的点是清楚的，而 且在景深范围内的各点也是清楚的
• 景深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比（垂直鉴别能 力）
实验一 普通光学显微镜的使用与维护
ALEX
前言
显微镜是一种高精密的仪器, 目前已广泛应 用于生命科学、材料科学、医学等学科领域。
第一代为光学显微镜，第二代为电子显微镜， 第三代为扫描隧道显微镜。
3/1/2020
光
电
学
子
显
显
微
微
镜
镜
3/1/2020
扫描隧道显微镜
一、实验目的
1.掌握显微镜的正确使用 2.熟悉显微镜的工作原理、基本结构、性能参数 3.了解显微镜的拆装技术和主要性能参数的设定
3/1/2020
显微镜的光学系统
• 3.光源 • 4.聚光镜
3/1/2020
光源(灯在底座内)
聚光镜
3/1/2020
聚光镜
孔径光阑
显微镜的机械系统
物镜转换器
3/1/2单020目镜镜筒
物镜转换器
载 物 台 调 节 手 轮
显微镜的机械系统
调焦螺旋锁
玻片夹
3/1/2020
调焦螺旋
聚光器升降螺旋
3、普通光学显微镜的正确使用
• （1）.显微镜取镜放置： • ①移取时右手握住镜臂，左手托住镜座，
保持显微镜平直 • ②显微镜放置在稳定的台面上，离台边
一定距离（6cm以上） • ③正确连接接地良好的电源。
3/1/2020
3、普通光学显微镜的正确使用
将主开关打 开，调节亮 度
将样品置于 载物台，移 入光路
以转换器使 低倍物镜入 光路
转动调焦旋 钮，对样本 聚焦
再次调节亮 度，开始观 察
将观察物镜 转入光路， 再聚焦
调节孔径光 阑和视场光 阑
调节目镜 瞳间距和 屈光度
（2）.普通光学显微镜的基本观察步骤
3/1/2020
3、普通光学显微镜的正确使用
• （3）.清洁收镜： • ①观察完毕，移去标本，扭转转换器，使两
低倍物镜镜头呈V字形于载物台上方 • ②用擦镜纸擦净油镜镜头，绸布擦拭镜身 • ③是有张力的部件处于松弛状态（聚光镜、
4．除去气泡（加浸油时 避免空气进入；有气泡可 用牙签等挑破而除去）
5．干型物镜上有浸油 或其他污物
5．用专用擦镜头液擦拭
6．光阑未能调整好 （过大或过小）
6．适当调整光阑
3/1/2020
2、普通光学显微镜的调试 3、显微镜光学性能参数的设定 4、正确使用光学显微镜观察不染色标本和染色标 本，并总结其不同之处（不染色标本制备：用微量吸管
吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理盐水中，混匀，用 一次性塑料吸管滴加3-5滴与洁净玻片上）
3/1/2020
五、注wk.baidu.com事项
1.转换物镜时须旋转转换器，勿转物镜，否则易损 坏光轴。
3/1/2020
三、实验器材
1.普通光学显微镜一台 2.红细胞悬液 3.骨髓片 4.微量吸管、一次性塑料吸管等
3/1/2020
四、操作步骤
1、显微镜光学系统的拆卸和组装（仅示教）
• 拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光镜、 物镜、目镜
• 组装：装的次序是由上而下，即先目镜、后物镜、聚光镜、 光源
电源。
3/1/2020
4、显微镜的性能参数
• （1）.数值孔径
又称镜口率，是物体与物镜间 媒质的折射率 n 与物镜孔径角 的一半（β）正弦值的乘积， 用NA表示。即：NA＝ n×sinβ
数值孔径与分辨率成正比，与放大率成正比， NA增大，视场宽度与工作距离都会相应地变小。
• 物镜一般刻有放大倍数×NA（数 值孔径）如： 4×0.1 （1组镜片） 10×0.25 （2组镜片） 40×0.65 （3组镜片） 100×1.25（4组镜片） 160/0.17 （机械镜筒长/盖玻 片的厚度）
3/1/2020
• （3）.工作距离
• 指显微镜正常观察物像时物镜表面到被观察标本间的距 离
3/1/2020
七、常见故障与处理
常见故障
原因
排除方法
视场内有 污迹或灰 尘
1．目镜、物镜、聚光 镜等其它光学部件上有 污迹和灰尘（旋动目镜 时污物转动说明目镜上 有污物，否则污物在物 镜或聚光镜上）
1．正确擦拭显微镜的 光学部件。擦拭目镜和 物镜时必须使用合格的 拭镜纸、蘸取无水乙醇 擦拭。要避免二次污染
• 显微镜使用过程中习惯所说的“调焦”指的就是调整物 镜的工作距离
• 它与物镜的数值孔径成反比，一般情况下，物镜的数值 孔径越大，其工作距离越小。
3/1/2020
• （4）.视野
• 视野又称视场，是指通过显微镜所能看到的标本范围。 视野成圆形
• 视野大小决定于物镜的倍数及目镜光阑的大小，小的放 大倍数和大光阑可获得较大的视野，反之则视野较小
2.目镜不要轻易拿下，否则灰尘会落入物镜中。 3.不用时，使载物台落下，呈放松状态。 4.光源灯不用时关到最小，保护灯泡。
3/1/2020
六、维护与保养
1.保证良好的使用环境 台面稳固、环境良好。 2.保持正确的使用方法 操作轻巧、舒缓，正确旋转各类
螺旋，合理使用照明光源和油镜 。 3.定期进行清洁维护 正确清洁，定期维护。 4. 擦镜： 1）擦镜液的配制：乙醇：乙醚=7：3或80%：20% 2）先用洗耳球吹去浮尘。 3）用长絮棉签沾檫镜液由中心向外擦。
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二、显微镜
• 1.光学显微镜的成像原理
要 获得清 晰的像， 被观察 标本 AB应 位于物 镜前焦 点外至 两倍焦 距之间。
标本AB经两级放大，在眼的明视范围内看到放大的A``B``像。
3/1/2020
2、普通光学显微镜的结构
• 普通显微镜在结构上分： 光学系统，机械系统。
• 光学系统包括物镜、目镜、 聚光镜、反光镜等。
• 机械系统包括底座、镜臂 粗调手轮、微调手轮、载 物台、转换器等。
3/1/2020
显微镜的光学系统
• 1.物镜
• 显微镜光学系 统最核心的部 件，其性能直 接关系到显微 镜的性能和成 像质量。
3/1/2020
显微镜的光学系统
• 2.目镜
• 也称接目镜， 实质上是放大 镜，其作用是 把物镜分辨和 放大的实像再 放大并映入观 察者眼中。
3/1/2020
七、常见故障与处理
常见故障
原因
排除方法
1．物镜转换器未能正确 1．旋转物镜转换器直 定位（物镜未与光路同轴）至选用物镜完全对中
视场模糊、
视场亮度 不均、不
2．聚光器位置太低
能看到完
整视场 3．视场光阑未对中
2．调整（升高）聚光 器位置得到良好物像
3．调整视场光阑使其 良好对中
4．视场光阑开得太小 4．适当开大光阑
3/1/2020
2．标本片上有污迹和 灰尘
2．正确擦拭标本片
七、常见故障与处理
常见故障
原因
排除方法
1．标本片正反面错放 1．翻转，使盖玻片向上
2．盖玻片太厚
2．使用标准厚度 （0.17mm厚）的盖玻片
观察效果 差、看不 清细节、 视场不均 匀（反差
过大）
3．油镜观察时未浸油 4．油镜浸油内有气泡
3．使用合格浸油，油镜 浸入
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• （2）.放大倍数
• 又称为放大率，指显微镜经多次成像后最终所观察到的 物像大小相对于原物体大小的比值，常记作M。即： M＝maq m是物镜的放大倍数 a为目镜的放大倍率 q是在双目显微镜中所增设的棱镜产生的放大倍数 （双目显微镜取值为1.6倍，单目显微镜q值为1）。
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• 因为视野的局限，一般均要通过机械装置移动、分区观 察标本。
3/1/2020
• （5）.景深
• 又称焦点深度，是指在成一幅清晰物像的前提下，像平 面不变，景物沿光轴前后移动的距离
• 显微镜观察时，不仅位于聚焦平面上的点是清楚的，而 且在景深范围内的各点也是清楚的
• 景深与总放大倍数及物镜的分辨率成反比（垂直鉴别能 力）
实验一 普通光学显微镜的使用与维护
ALEX
前言
显微镜是一种高精密的仪器, 目前已广泛应 用于生命科学、材料科学、医学等学科领域。
第一代为光学显微镜，第二代为电子显微镜， 第三代为扫描隧道显微镜。
3/1/2020
光
电
学
子
显
显
微
微
镜
镜
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扫描隧道显微镜
一、实验目的
1.掌握显微镜的正确使用 2.熟悉显微镜的工作原理、基本结构、性能参数 3.了解显微镜的拆装技术和主要性能参数的设定
3/1/2020
显微镜的光学系统
• 3.光源 • 4.聚光镜
3/1/2020
光源(灯在底座内)
聚光镜
3/1/2020
聚光镜
孔径光阑
显微镜的机械系统
物镜转换器
3/1/2单020目镜镜筒
物镜转换器
载 物 台 调 节 手 轮
显微镜的机械系统
调焦螺旋锁
玻片夹
3/1/2020
调焦螺旋
聚光器升降螺旋
3、普通光学显微镜的正确使用
• （1）.显微镜取镜放置： • ①移取时右手握住镜臂，左手托住镜座，
保持显微镜平直 • ②显微镜放置在稳定的台面上，离台边
一定距离（6cm以上） • ③正确连接接地良好的电源。
3/1/2020
3、普通光学显微镜的正确使用
将主开关打 开，调节亮 度
将样品置于 载物台，移 入光路
以转换器使 低倍物镜入 光路
转动调焦旋 钮，对样本 聚焦
再次调节亮 度，开始观 察
将观察物镜 转入光路， 再聚焦
调节孔径光 阑和视场光 阑
调节目镜 瞳间距和 屈光度
（2）.普通光学显微镜的基本观察步骤
3/1/2020
3、普通光学显微镜的正确使用
• （3）.清洁收镜： • ①观察完毕，移去标本，扭转转换器，使两
低倍物镜镜头呈V字形于载物台上方 • ②用擦镜纸擦净油镜镜头，绸布擦拭镜身 • ③是有张力的部件处于松弛状态（聚光镜、
4．除去气泡（加浸油时 避免空气进入；有气泡可 用牙签等挑破而除去）
5．干型物镜上有浸油 或其他污物
5．用专用擦镜头液擦拭
6．光阑未能调整好 （过大或过小）
6．适当调整光阑
3/1/2020
2、普通光学显微镜的调试 3、显微镜光学性能参数的设定 4、正确使用光学显微镜观察不染色标本和染色标 本，并总结其不同之处（不染色标本制备：用微量吸管
吸取EDTA抗凝血20ul，加入到5ml生理盐水中，混匀，用 一次性塑料吸管滴加3-5滴与洁净玻片上）
3/1/2020
五、注wk.baidu.com事项
1.转换物镜时须旋转转换器，勿转物镜，否则易损 坏光轴。
3/1/2020
三、实验器材
1.普通光学显微镜一台 2.红细胞悬液 3.骨髓片 4.微量吸管、一次性塑料吸管等
3/1/2020
四、操作步骤
1、显微镜光学系统的拆卸和组装（仅示教）
• 拆卸：拆的次序是由下而上，即先拆光源、后拆聚光镜、 物镜、目镜
• 组装：装的次序是由上而下，即先目镜、后物镜、聚光镜、 光源