双波长紫外分光光度法参考课件
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现代光学分析：第2章 双(三)波长分光光度法
①.在双峰双波长位置有最大吸光度差值 公式
∆A= A2 –(-A1)= A2 + A1
②.双波长法可以提高分析校准曲线斜率
提高灵敏度原因:
以二甲苯胺蓝Ⅱ测定镁为例, ①.1线和3线斜率相同,仅参比溶液不 同,当1线减去固定试剂空白的吸光度 值得3线. ②.2线是以相应过剩显色剂作参比测 定结果,既1线减4可得2线. ③.2线与3线相比,2线的斜率大大高 于3线.
双组分的测定-（1）等吸收法
对于双组分体系中某一组分的测定,实质上在测定任一组分 时,要选择两个合适的波长,使另一组分在这两个波长处具有 相等的吸光度,以达到消除干扰的效果.
对于含有吸收光谱相互重叠的 A,B组分来说,选择波长必须考 虑两个条件:
①.B组分在 两个波长处 具有相同的 吸光度,即
ΔAB=0
如果选择合适的波长使As`A s``，通过吸收池的两道光束的 光信号差：
-log I2 = A2 -A1=A I1
A=( a2 -a1)bc
双波长测定方法-（1）等吸收点法
等吸收点:指在某一波长上的吸光度 不随浓度的变化而发生改变.
如果吸光物质在不同浓度的吸收曲线 有若干个等吸收点,可以选择其中一 个等吸收点处的波长作为参比波长 （1），与吸收物质的吸收峰波长 （2 ）组合。
三波长法中三个波长的选择——等吸收点法和计算法
等吸收点法
如果在干扰组分的吸收光谱上能找到三个 等吸收点,而且在此三波长处测得的待测组 分ΔA值较大.
如选择的三个波长相应于干扰物吸收曲线上三点处于 一条直线上,则测得干扰物的ΔA为0.
当干扰组分的吸收曲线 为一直线(如浑浊产生的 干扰, 右图),则在任选的 三个波长处测定,测得的 ΔA与干扰物浓度无关.
∆A= A2 –(-A1)= A2 + A1
②.双波长法可以提高分析校准曲线斜率
提高灵敏度原因:
以二甲苯胺蓝Ⅱ测定镁为例, ①.1线和3线斜率相同,仅参比溶液不 同,当1线减去固定试剂空白的吸光度 值得3线. ②.2线是以相应过剩显色剂作参比测 定结果,既1线减4可得2线. ③.2线与3线相比,2线的斜率大大高 于3线.
双组分的测定-（1）等吸收法
对于双组分体系中某一组分的测定,实质上在测定任一组分 时,要选择两个合适的波长,使另一组分在这两个波长处具有 相等的吸光度,以达到消除干扰的效果.
对于含有吸收光谱相互重叠的 A,B组分来说,选择波长必须考 虑两个条件:
①.B组分在 两个波长处 具有相同的 吸光度,即
ΔAB=0
如果选择合适的波长使As`A s``，通过吸收池的两道光束的 光信号差：
-log I2 = A2 -A1=A I1
A=( a2 -a1)bc
双波长测定方法-（1）等吸收点法
等吸收点:指在某一波长上的吸光度 不随浓度的变化而发生改变.
如果吸光物质在不同浓度的吸收曲线 有若干个等吸收点,可以选择其中一 个等吸收点处的波长作为参比波长 （1），与吸收物质的吸收峰波长 （2 ）组合。
三波长法中三个波长的选择——等吸收点法和计算法
等吸收点法
如果在干扰组分的吸收光谱上能找到三个 等吸收点,而且在此三波长处测得的待测组 分ΔA值较大.
如选择的三个波长相应于干扰物吸收曲线上三点处于 一条直线上,则测得干扰物的ΔA为0.
当干扰组分的吸收曲线 为一直线(如浑浊产生的 干扰, 右图),则在任选的 三个波长处测定,测得的 ΔA与干扰物浓度无关.
紫外-可见分光光度法 PPT课件
若化合物在某波长处有强的吸收峰，而所含杂质在该波长处 无吸收或吸收很弱，则化合物的吸光系数将降低，若杂质在
该波长有比此化合物更强的吸收，将会使化合物的吸光系数
增大，且会使化合物的吸收光谱变形。（举一个间接的例子
吧，前一段时间快检车抽到一批吗叮啉，红外快检认定是假
药，送到所里以后，我们用薄层法做了一下，发现样品也显
百分吸收系数 377
吸收度值 277nm 0.461
0.461×0.2609×100.00×200.00
含量=-----------------------------------×100%=96.97%
377×0.0658×5.00×0.2×100
二、多组分定量测定 解线性方程组法 等吸收双波长消去法 系数倍率法 导数光谱法
面神经麻痹的病理变化早期主要为面神经水肿髓鞘和轴突有不同程度的变性以在茎乳突孔和面神经管内的部分尤为显著w五测定时除另有规定外应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照测定吸光度实际上是透光率而在测定光强弱时不只是由于被测物质的吸收所致还有溶剂和容器的吸收光的色散和界面反射等因素都可使透射光减弱用空白对照可排除这些因素的干扰
由上图可以看出吸收光谱的特征： ⑴曲线上“A”处称最大吸收峰，它所对应的波长称 最大吸收波长，以λmax表示。 ⑵曲线上“B”处有一谷，称最小吸收，所对应的波 长，称最小吸收波长，以λmin 表示。 ⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”，形状像 肩的部位，称肩峰，以λsh表示。
⑷在吸收曲线的波长最短的一端，曲线上“D”处， 吸收相当强，但不成峰形，此处称为末端吸收。
利用物质的吸收光谱进行定量、定性及结构 分析的方法称为吸收光谱分析法。紫外－可 见吸收光谱是一种分子吸收光谱，它是由于 分子中原子的外层电子跃迁而产生的。
双波长紫外分光光度法
将样品在276nm和322nm波长处的得的吸收度计算得的ΔA，代入标 准曲线，求得样品中阿司匹林的浓度。
②样品测定：取阿司匹林肠溶片20片，精密称定，研细。精密称取约 相当于阿司匹林50mg置于50mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解 并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL置25mL容量瓶中，加乙 醇至刻度，摇匀。分别在276nm、322nm波长处测定吸收度，用回 归方程计算阿司匹林的含量。
含量计算
阿司匹林制剂在体外的含量测定
——双波长紫பைடு நூலகம்分光光度法
原料
阿司匹林肠溶片
原理
采用双波长紫外分光法（测定波长为276nm和322nm），测定了阿 司匹林肠溶片的含量，可消除附加产物水杨酸的干扰。
方法
①标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林对照品适量，加乙醇溶解使成 1000μg/mL的溶液。精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL，分置于 25mL容量瓶中，加乙醇至刻度，分别制成40，60，80，100和 120μg/mL的对照品溶液，以乙醇为空白，分别在276nm、322nm波； 长处测定吸收度，以浓度C和ΔA进行线性回归得出方程式。
②样品测定：取阿司匹林肠溶片20片，精密称定，研细。精密称取约 相当于阿司匹林50mg置于50mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使溶解 并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL置25mL容量瓶中，加乙 醇至刻度，摇匀。分别在276nm、322nm波长处测定吸收度，用回 归方程计算阿司匹林的含量。
含量计算
阿司匹林制剂在体外的含量测定
——双波长紫பைடு நூலகம்分光光度法
原料
阿司匹林肠溶片
原理
采用双波长紫外分光法（测定波长为276nm和322nm），测定了阿 司匹林肠溶片的含量，可消除附加产物水杨酸的干扰。
方法
①标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林对照品适量，加乙醇溶解使成 1000μg/mL的溶液。精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL，分置于 25mL容量瓶中，加乙醇至刻度，分别制成40，60，80，100和 120μg/mL的对照品溶液，以乙醇为空白，分别在276nm、322nm波； 长处测定吸收度，以浓度C和ΔA进行线性回归得出方程式。
紫外分光光度计的使用原理和方法 PPT
这些显色反应,必须满足以下条件:
1、反应得生成物必须在紫外-可见光区有较 强得吸光能力,即摩尔吸光系数较大;
2、反应有较高得选择性,即被测组分生成得 化合物吸收曲线应与共存物质得吸收光谱有 明显得差别;
3、 反应生成得产物有足够得稳定性,以保 证测量过程中溶液得吸光度不变;
4、反应生成物得组成恒定。
按所吸收光得波长区域不同,分为紫外分 光光度法与可见分光光度法,合称为紫外-可见 分光光度法。
紫外-可见分光光度法得特点:
1 与其它光谱分析方法相比,其仪器设备与操 作都比较简单,费用少,分析速度快;
2 灵敏度高; 3 选择性好; 4 精密度与准确度较高; 5 用途广泛。
§1、 紫外-可见吸收光谱
3、 狭缝宽度得选择
为了选择合适得狭缝宽度,应以减少狭 缝宽度时试样得吸光度不再增加为准。一 般来说,狭缝宽度大约就是试样吸收峰半 宽度得十分之一。
二、显色反应条件得选择
对多种物质进行测定,常利用显色反应 将被测组分转变为在一定波长范围有吸收 得物质。常见得显色反应有配位反应、氧 化还原反应等。
参比溶液得选择视分析体系而定,具体有:
1、溶剂参比 试样简单、共存其它成分 对测定波长吸收弱,只考虑消除溶剂与吸收 池等因素;
2、试样参比 如果试样基体溶液在测定 波长有吸收,而显色剂不与试样基体显色 时,可按与显色反应相同得条件处理试样, 只就是不加入显色剂。
3、试剂参比 如果显色剂或其它试剂在 测定波长有吸收,按显色反应相同得条件, 不加入试样,同样加入试剂与溶剂作为参 比溶液。
红移与紫移
在有机化合物中,常常因取代基得变更或 溶剂得改变,使其吸收带得最大吸收波长λmax 发生移动。向长波方向移动称为红移(表3-3), 向短波方向移动称为紫移。
双波长分光光度法的基本原理及应用
双波长分光光度法的基本原理及应用应用分光光度法对共存组分进行不分离定量测定时,通常采用的方法有双波长法，三波长法，导数光谱法、差谱分析法及多组分分析法等方法，其快速，简便的优点使这些方法在实用分析中得到越来越广泛的应用.其中以双波长法的应用为最多，该法的准确度和精密度要高于其它方法，是对共存组分不分离定量测定的有效方法之一。
实用中的双波长法主要采用等吸收波长法和系数倍增法两种分析方法,下面就其基本原理和应用作以介绍：一、等吸收波长法1、基本原理图1是同一组分三个不同浓度供试液的吸收光谱图，经典分光光度法的定量测定通常是在被测组分的最大吸收波长处进行测定，根据兰伯一比耳定律，其吸光度值与被测组分的浓度C成正比，即：依(3）式测定被测组分a，则可完全消除b组分的干扰，达到共存组分不分离进行定量测定的目的。
2、影响因素（1）测定波长和组合波长的选择应使被测组分的△A值尽可能大,以增加测定的灵敏度和精确度。
（2）测定波长和组合波长应尽可能选择在光谱曲线斜率变化较小的波长处，以减小波长变化对测定结果的影响。
（3）干扰组分等吸收波长（组合波长)的选择必须精确，只有其△A值等于零时才能完全消除干扰,否则会引入测定误差.为此，在实用分析中，都是先配制一个干扰组分b的供试液，在仪器上准确找出等吸收波长 ,然后再对样品进行测定。
3 应用实例等吸收波长法的一个典型应用实例为收载于《中华人民共和国药典》中的抗菌消炎药复方磺胺甲噁唑片的含量测定。
复方磺胺甲噁唑片中含有磺胺甲噁唑（SMZ）和甲氧苄（TMP）两个成分，其吸收光谱见图3。
当测定SMZ时，选择其最大吸收波长257nm为测定波长，可以在干扰组分TMP的光谱曲线上304nm附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰；当测定TMP时，选择239nm为测定波长，可以在干扰组分SMZ的光谱曲线上295nm附近找到等吸收波长为组合波长消除其干扰，分别对SMZ和TMP进行含量测定。
紫外可见分光光度PPT(完整版)课件
因此，可能的跃迁为σ → σ*、π→ π*、n→ σ* n→ π*等。
2023/10/14
10
Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
16
常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
2023/10/14
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Wavelength
2023/10/14
11
て
~104 10～100 100～300
k
~200 200～800
<200 ~150(<200)
Amax(nm)
<U<M<M<xD<U<*0<1<*1<0<*0<0
(red shift 或bathochromic
shift) 指取代基或溶剂效应引起吸收带 向长波方向的移动；
蓝移 ( blue shift 或 hypsochron sh ift) 或紫移： 吸收带向短
波方向移动
2023/10/14
16
常见助色团及其助色效应(红移)λ
-F<-Cl<-Br<-OH<-OCH₃<-N NHCH₃<-N(CH₃)₂<-NHC₆H₅<
6
分子中电子能级、振动能级和转动能级示意图
2023/10/14
不是任一波长的 光都可以被某一物质 所吸收，由于不同物 质的分子其组成结构 不同，它们所具有的 特征能级也不同，故 能级差不同，而各物 质只能吸收与它们内 部能级差相当的光辐 射，所以，不同物质 对不同波长的光吸收 具有选择性。
7
物质颜色与光吸收的关系
2023/10/14
29
四、 无机化合物的吸收光谱
金属离子 金属离子
配位体
d-d配位场跃迁
配位体
配位体π- π*
金属离子
配位体
电荷转移
2023/10/14
紫外可见分光光度法(共73张PPT)
）。
2022/11/21
分光光度计的类型
2022/11/21
3.紫外-可见吸收光谱及其特征
吸收光谱
用不同波长的紫外-可见光（200~ 760 nm）依次照一定浓度的被测样品溶液时，就 会发现部分波长的光被吸收。如果以波长λ为 横座标（单位nm），吸收度 （absorbance）A为纵座标作图，即得到紫 外-可见吸收光谱（ultraviolet-visible spectra，简称UV）。
对光波来说，产生感光作用与生理作用的是 电场强度 E 。
2022/11/21
光的波长越短（频率越高），其能量越 大。
紫外光区 可见光区
远紫外区 10-200 nm （真空紫外区）
近紫外区 200 - 400 nm （UV光谱的研究区域）
400 - 760 nm
2022/11/21
2022/11/21
能量最小，λ 200~400nm（近紫外区）
ε = 10~ 100，弱吸收
跃迁能量大小： σ→σ* > n→σ* > π→π* > n→π*
2022/11/21
∆E
n → σ*
σ→ σ*
π → π* n → π*
200
300
σ*反键轨道 π*反键轨道
n 非键轨道 π 成键轨道 σ 成键轨道
λ（nm）
第二节 紫外-可见分光度计
紫外-可见分 光光度计
2022/11/21
一、分光光度计的主要部件
Major Components of spectrometer
紫外-可见分光光度计的基本组成模块（ general process）
2022/11/21
1.光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连 续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、 较长的使用寿命。
2022/11/21
分光光度计的类型
2022/11/21
3.紫外-可见吸收光谱及其特征
吸收光谱
用不同波长的紫外-可见光（200~ 760 nm）依次照一定浓度的被测样品溶液时，就 会发现部分波长的光被吸收。如果以波长λ为 横座标（单位nm），吸收度 （absorbance）A为纵座标作图，即得到紫 外-可见吸收光谱（ultraviolet-visible spectra，简称UV）。
对光波来说，产生感光作用与生理作用的是 电场强度 E 。
2022/11/21
光的波长越短（频率越高），其能量越 大。
紫外光区 可见光区
远紫外区 10-200 nm （真空紫外区）
近紫外区 200 - 400 nm （UV光谱的研究区域）
400 - 760 nm
2022/11/21
2022/11/21
能量最小，λ 200~400nm（近紫外区）
ε = 10~ 100，弱吸收
跃迁能量大小： σ→σ* > n→σ* > π→π* > n→π*
2022/11/21
∆E
n → σ*
σ→ σ*
π → π* n → π*
200
300
σ*反键轨道 π*反键轨道
n 非键轨道 π 成键轨道 σ 成键轨道
λ（nm）
第二节 紫外-可见分光度计
紫外-可见分 光光度计
2022/11/21
一、分光光度计的主要部件
Major Components of spectrometer
紫外-可见分光光度计的基本组成模块（ general process）
2022/11/21
1.光源
在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连 续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、 较长的使用寿命。
紫外可见分光光度法(课堂PPT)
比调T=100﹪后，再测样品
22
仪器
可见分光光度计
23
双光束分光光度计
裂
单色器 光源
光束分器
比值
显示
吸收池
检测器
自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵
敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，
价格较高。
24
仪器
紫外-可见分光光度计
25
❖ 双波长分光光度计
单色器
光源
单色器
又例如： KMnO4溶液，吸收了白光中
的绿光，透过的为其互补光紫色，故其溶 液呈紫色。
再例如：NaCl、KNO3溶液，对其射入
的可见光全不吸收，光全透过，因此溶液 为无色。
34
2、吸收光谱曲线
某一溶液对何种波长的光吸收？吸收的程度 如何？
这可通过使不同波长的光通过某一固定浓度 的有色溶液，分别测量每一波长下对应的光的 吸收程度[吸光度 A]，作A-λ曲线，即吸收光谱 曲线。
2
1.概念：分光光度法是根据物质的吸收光 谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分 析的一种仪器分析方法。
2.方法分类： 根据测定时所选用的光源：
➢可见分光光度法(400800nm) ➢紫外分光光度法(200400 nm) ➢红外分光光度法(800nm50m)
3
3.紫外分光光度法的优缺点 优点：⑴灵敏度高,主要用于微量分析；
A = K·b ·c
44
A = K ·b ·c
c：物质的量浓度(mol ·L-1) b：为液层厚度(cm)
K:吸光系数。
❖应用的条件： ❖入射光必须是单色光； ❖吸收发生在稀的均匀的介质中； ❖吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。
22
仪器
可见分光光度计
23
双光束分光光度计
裂
单色器 光源
光束分器
比值
显示
吸收池
检测器
自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵
敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。仪器复杂，
价格较高。
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仪器
紫外-可见分光光度计
25
❖ 双波长分光光度计
单色器
光源
单色器
又例如： KMnO4溶液，吸收了白光中
的绿光，透过的为其互补光紫色，故其溶 液呈紫色。
再例如：NaCl、KNO3溶液，对其射入
的可见光全不吸收，光全透过，因此溶液 为无色。
34
2、吸收光谱曲线
某一溶液对何种波长的光吸收？吸收的程度 如何？
这可通过使不同波长的光通过某一固定浓度 的有色溶液，分别测量每一波长下对应的光的 吸收程度[吸光度 A]，作A-λ曲线，即吸收光谱 曲线。
2
1.概念：分光光度法是根据物质的吸收光 谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分 析的一种仪器分析方法。
2.方法分类： 根据测定时所选用的光源：
➢可见分光光度法(400800nm) ➢紫外分光光度法(200400 nm) ➢红外分光光度法(800nm50m)
3
3.紫外分光光度法的优缺点 优点：⑴灵敏度高,主要用于微量分析；
A = K·b ·c
44
A = K ·b ·c
c：物质的量浓度(mol ·L-1) b：为液层厚度(cm)
K:吸光系数。
❖应用的条件： ❖入射光必须是单色光； ❖吸收发生在稀的均匀的介质中； ❖吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。
双波长K系数-紫外分光光度法同时测定水中硝酸盐氮和亚硝酸盐氮
１ ．ｕ ／ 。 ０ ０ ｇ ｍＬ
（） ２
令 Ｋ＝Ａ ｍ ，１ Ａ ｍ ，２ Ｋ ＝ （ｌ ２ Ａｍ ， ｌ （２ ） ２ ） ２ Ａ ｍ ， ） （ ， 入／ ， ｋｘ
收稿 日 ：０ ｌ ｏ 一 ５ 期 ２ １— ６ ｌ 作者简介 ： ， 夏明 工程师 ， 从事环境监测分析工作 。 现
．
）Ａ ｍ ， ） 、 （ ： 分别绘制标准曲线。
２ ． 样 品测定 ．２ ２
／
直接取 洁净水样或经处理 的水样 于 ２２ ｍ和 ０ｎ ２０ ｍ处测定总吸光度值 ，求 出 Ａ （ 。 。 Ａ ｍ ， １ｎ ｍ， ） （ 入、
关键 词 ： 双波长 Ｋ系数一 紫外分光光度法 ； 硝酸盐氮 ； 亚硝酸盐氮
中图分类号 ： ８２ Ｘ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章 编号 ：Ｇ）１４ （０ １０ — ４ ０ （ ｌ０ ５２ １ ）３ ３ — ３
硝 酸 盐 氮 和 亚 硝 酸 盐 氮 是 评 价 水 质 受 有 机 物 污 染 的重 要 指 标 ， 长期 饮 用 含硝 酸 盐 氮 和亚 硝 酸 盐
２ 实验部分
２ １ 仪 器 与 试 剂 ．
（ ）仪 器 １
ＷＦ ８０ Ｄ Ｂ型 紫 外 分 光 光 度 计 Ｚ０一 ３
（ 京瑞 利 分析仪 器公 司 ）ｌｍ石英 比色皿 。 北 ，ｃ
（ ） 剂 亚 硝 酸 盐 氮 标 准 溶 液 ：称 取 ２试
Ａ总 ＝ （２ ２ Ｉ ２……（ ） （． Ａｍ ， ） ｍ ， ） 入 ＋Ａ １ 由式（ ） １可推导出 ：
Ａ息 ＝ （ ， Ｉ （２ ） Ａｍ２ｋ ｘ （２ ） （． ＡｍＩ ） ｍ ， ， （ ，￣ Ａｍ ， １ ） 入 ＋Ａ １ ２ Ａ 总 ＝ （ ， ） （ ， ） Ａｍｌ入）Ａ（ ， １ （． Ａｍ２ ＋Ａｍｌ ， ，１ ｍｌ ） ２ ２ × 入
（） ２
令 Ｋ＝Ａ ｍ ，１ Ａ ｍ ，２ Ｋ ＝ （ｌ ２ Ａｍ ， ｌ （２ ） ２ ） ２ Ａ ｍ ， ） （ ， 入／ ， ｋｘ
收稿 日 ：０ ｌ ｏ 一 ５ 期 ２ １— ６ ｌ 作者简介 ： ， 夏明 工程师 ， 从事环境监测分析工作 。 现
．
）Ａ ｍ ， ） 、 （ ： 分别绘制标准曲线。
２ ． 样 品测定 ．２ ２
／
直接取 洁净水样或经处理 的水样 于 ２２ ｍ和 ０ｎ ２０ ｍ处测定总吸光度值 ，求 出 Ａ （ 。 。 Ａ ｍ ， １ｎ ｍ， ） （ 入、
关键 词 ： 双波长 Ｋ系数一 紫外分光光度法 ； 硝酸盐氮 ； 亚硝酸盐氮
中图分类号 ： ８２ Ｘ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章 编号 ：Ｇ）１４ （０ １０ — ４ ０ （ ｌ０ ５２ １ ）３ ３ — ３
硝 酸 盐 氮 和 亚 硝 酸 盐 氮 是 评 价 水 质 受 有 机 物 污 染 的重 要 指 标 ， 长期 饮 用 含硝 酸 盐 氮 和亚 硝 酸 盐
２ 实验部分
２ １ 仪 器 与 试 剂 ．
（ ）仪 器 １
ＷＦ ８０ Ｄ Ｂ型 紫 外 分 光 光 度 计 Ｚ０一 ３
（ 京瑞 利 分析仪 器公 司 ）ｌｍ石英 比色皿 。 北 ，ｃ
（ ） 剂 亚 硝 酸 盐 氮 标 准 溶 液 ：称 取 ２试
Ａ总 ＝ （２ ２ Ｉ ２……（ ） （． Ａｍ ， ） ｍ ， ） 入 ＋Ａ １ 由式（ ） １可推导出 ：
Ａ息 ＝ （ ， Ｉ （２ ） Ａｍ２ｋ ｘ （２ ） （． ＡｍＩ ） ｍ ， ， （ ，￣ Ａｍ ， １ ） 入 ＋Ａ １ ２ Ａ 总 ＝ （ ， ） （ ， ） Ａｍｌ入）Ａ（ ， １ （． Ａｍ２ ＋Ａｍｌ ， ，１ ｍｌ ） ２ ２ × 入
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阿司匹林制剂在体外的含量测定
——双波长紫外分光光度法
原料
阿司匹林肠溶片
Page 2
原理
采用双波长紫外分光法（测定波长为276nm和322nm干扰。
Page 3
方法
①标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林对照品适量，加乙醇溶解使成 1000μg/mL的溶液。精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL，分置于 25mL容量瓶中，加乙醇至刻度，分别制成40，60，80，100和 120μg/mL的对照品溶液，以乙醇为空白，分别在276nm、322nm波； 长处测定吸收度，以浓度C和ΔA进行线性回归得出方程式。
②样品测定：取阿司匹林肠溶片20片，精密称定，研细。精密称取 约相当于阿司匹林50mg置于50mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使 溶解并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL置25mL容量瓶中， 加乙醇至刻度，摇匀。分别在276nm、322nm波长处测定吸收度， 用回归方程计算阿司匹林的含量。
Page 4
含量计算
将样品在276nm和322nm波长处的得的吸收度计算得的ΔA，代入标 准曲线，求得样品中阿司匹林的浓度。
Page 5
——双波长紫外分光光度法
原料
阿司匹林肠溶片
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原理
采用双波长紫外分光法（测定波长为276nm和322nm干扰。
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方法
①标准曲线的绘制：精密称取阿司匹林对照品适量，加乙醇溶解使成 1000μg/mL的溶液。精密吸取1.0、1.5、2.0、2.5和3.0mL，分置于 25mL容量瓶中，加乙醇至刻度，分别制成40，60，80，100和 120μg/mL的对照品溶液，以乙醇为空白，分别在276nm、322nm波； 长处测定吸收度，以浓度C和ΔA进行线性回归得出方程式。
②样品测定：取阿司匹林肠溶片20片，精密称定，研细。精密称取 约相当于阿司匹林50mg置于50mL容量瓶中，加乙醇适量，振摇使 溶解并定容，摇匀，滤过。精密量取续滤液2mL置25mL容量瓶中， 加乙醇至刻度，摇匀。分别在276nm、322nm波长处测定吸收度， 用回归方程计算阿司匹林的含量。
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含量计算
将样品在276nm和322nm波长处的得的吸收度计算得的ΔA，代入标 准曲线，求得样品中阿司匹林的浓度。
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