吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体检测SOP(欧蒙)

吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体检测

（欧蒙印记法）

1.目的：规范实验室吸入性及食物性过敏原特异性IgE抗体的检测操作。

2.范围：XXX医院xxx科

3.测定原理:

采用免疫印迹法原理。经缓冲液预处理的检测膜条与患者样本进行温育。如果样本阳性，IgE 类特异性抗体与相应的过敏原结合。在洗涤之后，加入酶标单克隆的抗人IgE 抗体（酶结合物）进行第二步温育，以形成复合物。在孵育之后，冲洗掉未结合的酶-抗-IgE，

然后加入底物液，发生颜色反应。终止反应之后，风干判读结果。

4.标本:

4.1病人准备：要求患者在安静状态下；晨起的精神、体力、情绪等因素的影响较小，是标

本采集的最佳时间；抽取肘部静脉血或毛细血管血。

4.2标本种类：人血清或者EDTA、肝素或柠檬酸抗凝血浆。

4.3标本稳定性：待测样本于2-8°C 条件下通常可保存14 天。稀释后的样本应在同一个

工作日内检测。

4.4标本稀释：

4.4.1患者样本不需稀释，直接检测（方案a）。

4.4.2如果样本量过少，可用已稀释的通用缓冲液1:11稀释血清或者血浆样本，然后过夜

温育（方案b）。例如：100ul血清用1.0ml已稀释的通用缓冲液稀释，并用旋涡混匀器充分混匀，不适合用加样枪混匀。

4.4.3 如果使用特定的温育盘（ZD9897-0130）用于减少血清用量打的实验，使用这种温育

盘未稀释血清用量可以减少至400ul（方案c）。

4.5标本容器：一般用真空采血管中的血清促凝管（红色头盖）或抗凝管（紫色或绿色头盖）。

4.6标本最小用量：血清最小用量 1ml。

4.7标本运送：标本采集于真空采血管后应尽快送实验室分析，物流系统可加快标本传递速

度。若标本不能及时转运到实验室，应将真空采血管内的标本置冰瓶或冷藏箱内，运送过程中应避免剧烈震荡。当天无法运送的标本应分离血清后冷藏。

5.试剂:

5.1来源：欧蒙公司.

5.2 规格： 16*1人份/盒

5.3试剂盒组成和代号：

主要组分：16 人份的试剂盒

5.4储存和稳定性：2-8°C 保存，不要冰冻。未开封前，试剂盒可稳定至所标示的有效期。

已稀释的缓冲液必须在一个工作日内用完。

5.5试剂的准备和稳定性：

5.5.1试剂在使用前均应在室温（18-25℃）平衡30分钟左右。

5.5.2包被过敏原的检测膜条：直接使用。为防止膜条发生冷凝，只有当膜条平衡到室温后

才可打开包装。取出膜条后应立即密封好原包装并将其保存于2-8°C。

5.5.3酶结合物：直接使用。使用前充分混匀。

通用缓冲液：10 倍浓缩。在稀释前应充分混匀。用干净的吸管从瓶中吸取需要量用蒸馏水或去离子水1:10 稀释。由于欧蒙印迹法中使用了特殊的膜条，因而需要用已稀释的通用缓冲液稀释患者样本和清洗检测膜条。如需温育一条检测膜条，可取5ml 浓缩缓冲液用45ml 蒸馏水或去离子水稀释。稀释后的缓冲液应在同一个工作日用完。

5.5.4底物液：直接使用，因对光敏感，使用后应立即盖紧瓶盖。

6.临床标本测定:

操作流程

预处理：将检测所需的膜条朝上放置于温育槽中，分别加入1.0ml通用缓冲液，于室温

温育5分钟后吸去温育槽中的液体。

血清温育手动：

第一次： a（省时）：在温育槽中分别加入1.0ml未稀释的患者样本，在摇摆摇床上室温（18-25℃）温育60分钟。

b(省血清量)：将至少1.0ml已稀释的样本在摇床上室温温育过夜（12-24小时），温育时需加盖以防挥发。

c(兼具省时和省血清量)：在每条特殊温育槽（ZD9897-0130）中加入400ul 未稀释的患者样本，在摇床上室温温育60分钟。

自动：方案b中，1:11稀释样本过夜温育，反应液体量为1.65ml（1.5ml

通用缓冲液加150ul的样本）。

清洗：手动：吸去每个温育槽内的液体，在摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3

次，每次5分钟。

自动：1:11稀释样本过夜温育的方案b中，第一步清洗时的缓冲液的量为

1750ul。

酶结合物温育在每个温育槽中加入1.0ml酶结合物（碱性磷酸酶标记的抗人IgE,单克隆），于摇床上室温温育60分钟。

第二次：

清洗：吸去每个温育槽内液体，在摇床上用1.0ml通用缓冲液清洗膜条3次，每次5分钟。

色原/底物温育在每个温育槽中分别加入1.0ml色原/底物温育，于摇床上室温温育10分钟。第三次：

终止反应：吸去槽内液体，用蒸馏水或去离子水清洗膜条3次，每次1分钟。

结果判断：将检测膜条放置在结果判断模板中，风干后判定段结果。

7.性能指标:

7.1检测范围：欧蒙印记法是一种半定量检测方法。

7.2精密度：通过比较同一样本在相同时间内多次检测结果的差异来研究批内差异；批间差

异为用不同批号产品在不同时间对同一样本进行检测所得的差异。每一次实验，抗原带着色的深浅都在额定范围内。该欧蒙印迹法试剂具有很好的批内和批间重复性。7.3灵敏度：采用Pharmacia CAP 系统为参考方法，本检测系统的灵敏度对于牧草(g6)为

90%、白桦(t3)为90%、屋尘螨(d1)为83%、粉尘螨（d2）为84%、猫(e1)为98%、马(e3)为82%。。

7.4方法学比较：与Pharmacia CAP 系统相比较，该试剂具有很好的特异性和灵敏度。

7.5特异性：采用Pharmacia CAP 系统为参考方法，本检测系统的特异性为牧草(g6)为100%、

白桦(t3)为92%、屋尘螨(d1)为100%、粉尘螨(d2)为86%、猫(e1)为91%、马(e3)为100%。

7.6交叉反应：由于过敏原之间具有相似的结构，如化学组成相似或植物学上的相关性，在

过敏原之间可出现交叉反应，患者体内的特异性IgE抗体也可与同源性蛋白过敏原上的

相同表位结合。

8.方法的局限性:

8.1干扰因素：血红蛋白浓度小于5 mg/ml 的溶血、甘油三脂浓度小于20 mg/ml 的脂血和

胆红素浓度小于0.4mg/ml 的黄疸对检测结果没有影响。

8.2利用该检测结果进行诊断时，最好结合病人的病史、临床体征和其他检查结果。