组织培养法制备食用菌母种

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食用菌母种的制作方法：培养基配制，灭菌、菌种分离、培养及管理

食用菌母种的制作方法：培养基配制，灭菌、菌种分离、培养及管理一、食用菌菌种瓶的选择用100毫升医用盐水瓶代替试管作盛装培养基的容器。

二、培养基的配制1．配方：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18～20克，水1000毫升。

2．制作：马铃薯挖去芽眼，去皮洗净，切成薄片后加水，在铝锅中煮沸25～30分钟，用4层纱布过滤，取滤液放入铝锅中，加入琼脂，小火加热并不断搅拌，待琼脂溶化后加入葡萄糖，加开水补足1000毫升，搅匀，趁热装入盐水瓶中，每瓶装8～10毫升，塞上棉塞棉塞要求干燥、松紧、长度合适，再用牛皮纸包住棉塞及瓶口部分，用胶圈扎紧瓶口。

三、灭菌采用高压灭菌，若没有专用高压锅，可用家用高压锅进行灭菌。

方法是：将装好培养基的菌种瓶放置在高压锅中，瓶间留有空隙，不可堆放过紧，以利蒸汽循环，灭菌彻底。

当压力表指针指到0．05时，打开放气阀，集中排出冷空气，使压力降到零时，关闭排气阀进行升压灭菌，自动放气后保持30分钟家用普通高压锅灭菌1．5小时，让其自然冷却，取出放置在接种箱中备用。

四、菌种分离主要采用组织分离法。

通常是从食用菌子实体内部分离纯菌种，操作时，从子实体内切取一小块组织，放在培养基中培养可长出纯菌种，且菌丝萌发快，遗传性状稳定，后代不易发生变异。

1．种菇消毒：种菇采下后，切去菌柄，放入洗净的盘内，在装有紫外灯的接种箱内照射20～30分钟。

2．接种块切取：在已消毒的接种箱内，撕开子实体，用经酒精灯火焰杀菌冷却的小刀，在菌柄与菌盖交接处内部切取黄豆大小组织块，放入菌种瓶内培养基上培养。

3．接种块选择部位：接种块选择部位因食用菌种类不同而异，菇体肥厚的种菇，在菌盖外缘菌盖皮和菌褶交接处切取组织块进行分离。

菌体小、盖薄、柄空的菌类如金针菇，应快速击掉菌盖，用接种针钩取菌柄顶端生长点组织进行分离。

菌肉极薄菌柄中空孢子不易萌发的伞菌类，可采用子实层分离法，选取半破膜的子实体，移入培养基上，菌丝萌发后即转入新的培养基上。

一般食用菌母种(一级种)制作

一般食用菌母种(一级种)制作母种制作的基本工艺流程为母种(由科研单位、大专院校、菌种保藏专门机构引进)一培养基制备一接种一培养检查一成品。

(一)常用培养基及配方培养基是食用菌菌种生长所需营养的基质。

培养基要具备四个条件，第一，要含有所培养的菌株生长所需要的各种营养物质，如糖类、有机氮、矿物质等。

第二，所含养分浓度和状态要利于食用菌的吸收和利用。

如食用菌母种培养基使用葡萄糖的浓度多在2％左右，过高和过低都不利于菌丝的生长；食用菌对氮素的吸收优先吸收有机氮，因此，原种和栽培种的培养基中应添加有机氮源，如麦麸、米糠等。

第三，要有适宜的酸碱度(pH)，食用菌多数喜偏酸性，pH5.0～6.5。

第四，经过严格灭菌，保持无菌状态。

这最后一点是要通过灭菌才能达到的，然而，灭菌的高温能破坏培养基中的许多化学成分，并能降低pH。

这一点必须在配制时就考虑到。

这就要求从使用的营养型药品试剂上，要尽量选用热稳定性好的种类，配制时，灭菌前的pH要略高于使用时所需的适宜酸碱度。

一般高压蒸汽灭菌0．1～0．12兆帕30分钟，培养基的pH下降0．1～0．3。

高压灭菌切勿压力过高，时间过长，以利培养基保持良好的营养和适宜的pH。

目前食用菌母种生产上使用的都是固体培养基，以琼脂(洋菜)为凝固剂，琼脂的用量从10～24克不等，这依琼脂的质量而定，使用时用量要参考产品使用说明书。

此外，当制作相同培养基时，高温季节要较常量多用些，以利凝固，低温季节可按常量使用；较酸的培养基也要较pH较高的培养基琼脂用量多些。

1．通用培养基通用培养基有多种配方，几乎通用于各类食用菌，常用的配方如下：(1)PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，琼脂10或20克，水1升。

(2)综合马铃薯培养基马铃薯(去皮)200克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。

(3)马铃薯麦麸综合培养基马铃薯200克，麦麸100克，葡萄糖20克，磷酸二氢钾2克，硫酸镁0．5克，琼脂10或20克，水1升。

食用菌栽培学实验---食用菌母种的制作实验

食用菌母种的制作实验一、目的要求了解无菌操作规程，熟练掌握PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)的制作、母种的转管与培养技术。

二、材料与用具(1) 材料:马铃薯、葡萄糖、琼脂、酒精棉球、高锰酸钾、37%甲醛溶液、紫外线灯、标签纸等。

(2)用具:锅、玻璃棒、18mm×180mm试管、棉塞、纱布、牛皮纸、1000mL量筒、手提式高压蒸汽灭菌锅、菜刀、砧板、天平、烧杯、接种箱、超净工作台、接种针、酒精灯、恒温培养箱等。

三、内容与方法(一)PDA母种培养基的制作1.PDA培养基配方去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18-20g，水1000mL,pH自然。

此配方培养基适用于香菇、黑木耳、金针菇、滑菇、灵芝、草菇、平菇等多种菌种，但不适用于双孢菇等有特殊营养要求的食用菌。

2.配制方法(1)确定使用量:根据人数确定使用量，一般每人制作10-20支培养基供接种用。

(2)制备营养液:马铃薯去皮、挖掉芽眼，切成黄豆大小的块。

称量后用略多于用量的水煮开，并维持10-20min，至马铃薯块酥而不烂，再用2层纱布过滤，取其滤液，定容至1000ml待用；琼脂称好后，用剪刀剪成小段，再用清水浸泡，以利于熔化;将琼脂条放人滤液申边煮边搅拌，至全部熔化。

再将溶液倒入量器中，加入葡萄糖，并不断搅拌使之完全溶解。

一般情况下，此营养液的pH不需要特意调节。

(3)营养液分装:趁热用注射器分装营养液。

营养液以装人试管容量(或高度)的1/5 左右为宜，一般18mmx180mm试管注人8-10ml营养液即可。

注意防止培养液粘到近管口的壁上装好后，塞好棉塞，每7支或10-12支捆成束，管口一端用防潮纸包扎好，待灭菌。

(4)灭菌:按照高压蒸汽灭菌锅的操作规程使用。

①加水:先向外锅加水，略超过支架。

②装锅:将灭菌物品装人锅内，不宜装得过满过紧，应留下1/5空间及空隙，以利蒸汽流通，并检查导管是否与排气网结合紧密，畅通。

③盖锅盖:对好内锅上插孔，盖好锅盖，对角将螺丝旋紧。

食用菌母种怎么提取-

食用菌母种怎么提取?
食用菌母种：子实体中分得的菌种称为母种.
可以找专门做食用菌的实验室帮你做.一般用PDA培养基或者水琼脂培养基就可以.
仪器设备有：75%和95%的酒精,次氯酸钠,超净工作台,平皿,试管,滤纸,解剖刀,镊子,干热或湿热灭菌设备.
方法：
1制备培养基：称马铃薯200g,琼脂20g,蔗糖或葡萄糖20g,琼脂20g,取马铃薯削皮洗净,切成拇指大的小块,加入1000ml水煮至马铃薯块一触即烂,用四层纱布过滤,将滤液继续加热放入琼脂并搅拌直至琼脂完全溶解,加入蔗糖,装置容器内（一般为三角瓶,如是试管可直接分装）灭菌.
2灭菌后,如是试管直接摆斜面,如是平皿在超净工作台内分装,待培养基凝固即可用.
3开始分离母种：将采集到的野生菌,与要用的所有仪器试剂一起放入超净工作台内,紫外杀菌30mim,采用子实体分离方法,用酒精盯烧过的镊子和刀取菌种中未接触到空气的部分,黄豆粒大小,放入平皿培养基内,封号口放入26度的培养箱内3-5天,如未染菌,则在菌肉周围会有菌丝长出,此为母种.在超净工作台内,用接种针将菌丝挑出,放入试管中,继续纯化培养,放入，分离成功!
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食用菌的制种(母种的分离和培养)

食用菌的制种（母种的分离和培养）()---食用菌菌种质量的优劣，直接影响到栽培的成败和产量的高低，只有优良的菌种，才能获得优质高产的食用菌。

因此食用菌的制种，是生产中一项极其重要的工艺。

食用菌的菌种按培养阶段和来源的不同，可分母种、原种和栽培种三种。

从食用菌的孢子分离培养或从组织分离培养、基内菌丝分离培养所得到的第一代菌丝体，称为母种。

从母种扩大培养的菌丝体，称为原种。

从原种扩大培养直接用于生产上播种的菌丝体；称为栽培种。

一、母种的分离和培养（一）母种培养基的配制1.母种培养基的种类母种是菌种生产的关键，要求纯度高，不能混生杂菌，同时母种的菌丝体较为纤细，分解培养料的能力较弱。

因此，母种菌丝体需要培养在营养丰富，易被吸收，表面光滑易于鉴别有无杂菌感染的琼脂培养基上。

适合母种菌丝生长的琼脂培养基种类很多，常用的有下列几种：（1）马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基马铃薯（去皮） 200克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（2）麦芽汁——葡萄糖——琼脂培养基干麦芽 250克琼脂 15～20克葡萄糖（或蔗糖） 10克水 1000毫升（3）胡萝卜——葡萄糖——琼脂培养基胡萝卜 100克琼脂 20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（4）蘑菇汁——葡萄糖一一琼脂培养基（适用于蘑菇）鲜蘑菇 250克琼脂20克葡萄糖（或蔗糖） 20克水 1000毫升（5）蛋白胨——葡萄糖——琼脂培养基蛋白胨 2克葡萄糖 20克磷酸氢二钾 2克维生素B1（硫胺素） 0.5毫克磷酸二氢钾 0.5克琼脂 18克硫酸镁 0.5克水l000毫升2.母种培养基的制法兹以最常用的马铃薯——葡萄糖——琼脂培养基的制法为例介绍如下：先将马铃薯去皮，洗涤，切成小块，加水1000毫升，煮沸15～20 分钟，取双层纱布过滤，取其滤液，加入琼脂和葡萄糖（或蔗糖），用文火加热使其溶化，最后补足水分，使其容量仍为1000毫升。

趁热分装于试管中，装量约为试管长度的1/5左右，装管时要注意不使培养基沾污试管壁和试管口。

菌种母种的分离培养

菌种母种的分离培养在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。

所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。

菌种分母种、原种、栽培种。

母种的分离培养食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。

1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。

这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。

（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。

蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。

单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。

（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。

具体操作方法，有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。

在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。

培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。

形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。

用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。

待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。

还可用孢子采集器收集孢子。

方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。

随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。

并在纱布上倒少许升汞或无菌水。

移入20℃左右恒温箱培养。

②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇，用接种针直接插入褶片之间，轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子，再在培养基上划线接种。

食用菌组织分离法实验报告

食用菌母种的制作——组织分离法实验报告实验目的：学习和掌握食用菌的组织分离法；一、实验原理：食用菌的母种一般是采用孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物。

利用食用菌子实体内部组织进行分离，是获得母种最简便的方法。

二、实验器材：1. 食用菌：香菇、平菇。

2. 培养基：PDA培养基斜面。

3. 仪器或其他用具：75%酒精棉球、接种针记号笔等。

三、实验方法：1. 选择种菇：选择肥壮菇体作种菇；2. 种菇消毒：取1张菇片，用70%的酒精轻擦表面进行消毒；3. 菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇柄与菌盖的交界处取一米粒大小的菇肉组织接于PDA试管斜面上；4. 培养：将试管斜面置于15～30℃下培养；五、注意事项1. 在整个操作过程中都要注意无菌操作，一切用具都要消毒。

2. 要等刀片冷却后再切取组织块。

六、实验结果与记录第一次实验：10月16日上午进行接种，两试管都以肥壮的双孢菇为种菇，10月13日观察培养基杂菌没有菌落产生结果分析：本次实验全班只有一人成功，大部分都被杂菌污染，最有可能的原因就是制作的PDA培养基本身受到污染，但是又有培养基根本没有菌落产生，那么一方面可以看做是空白对照，得到培养基本身没有问题而是我们操作都有问题，没有做到避免污染，规范的无菌操作，另一方面也有可能是在接种过程，接种针，试验刀酒精灯上灼烧后未冷却直接接触种菇，使待接种的菌块高温致死。

第二次实验：10月30日上午进行接种，记号笔标记的两支试管为双孢菇，标签纸标记的两只试管为香菇进行实验，10月9日观察实验基本成功，试管下端有少部分红棕色杂菌实验成功，无杂菌，斜面上均为雪白的菌丝无杂菌，也无目的菌落结果分析：培养基本身无污染，接种香菇菌块的过程中可能由于接种针和实验刀未完全冷却导致目的菌块高温致死，培养基上无菌落产生。

接种双孢菇菌块过程中基本做到了无菌操作，实验较为成功。

实验感想：本实验原理目的简单，操作过程方法在微生物学中也有接触，但是容易杂菌污染，第一次实验结果几乎全军覆没，几乎所有培养基都受到了污染，第二次实验在总结前一次的基础上，大部分做到了无菌操作，看到了培养基中雪白的菌落。

食用菌母种制作-实验一讲解

食用菌母种制作-实验一讲解实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。

4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。

二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。

三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。

马铃薯洗净，挖芽去皮。

称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。

量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。

四层纱布过滤于量杯中。

滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。

补足水量至1000毫升。

(2)分装试管。

将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。

培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。

分装完成后，盖紧硅胶塞。

（3）捆把。

7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。

贴上标签，准备灭菌。

（4）灭菌。

注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。

（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。

斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。

①菌种分离与培养（1）种菇选择。

选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。

子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。

（2）母种分离（组织分离法）。

在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。

将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。

食用菌母种制作技术

食用菌母种制作技术母种是从子实体中提纯，复壮获得母种，人工栽培蘑菇成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产，这是种植蘑菇高产的第一个要素。

母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。

母种培养基的分装：母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其它杂菌侵蚀。

要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。

母种培养基的灭菌：用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。

制作母种：母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。

组织分离法制备母种

1.菌丝未萌发
• ①组织块太小； • ②烫伤严重； • ③培养条件，如温度不适宜。
2.有杂菌污染
① 培养基灭菌不彻底； ② 培养基成分适宜杂菌生长； ③ 环境、用具消毒不严格； ④ 菇体耳体消毒不严格； ⑤ 接种操作控制不当，要无菌操作。
常见的杂菌观察
• 常见的杂菌主要有细菌、放线菌；

青霉、黑曲霉
杏鲍菇：Pleurotu seryngii
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
榆黄蘑：Pleurotus citrinipileatus
白灵菇：Pleurotus eryngii
白灵菇：Pleurotus eryngii
红菇：Russula lepida
子囊菌纲食用菌
羊肚菌
羊肚菌
Morchella esculenta
子囊菌纲食用菌
冬虫夏草
冬虫夏草
冬虫夏草的蛹、成虫、虫卵冬虫夏草的蛹
冬虫夏草的虫卵
三、PDA培养基制作及灭菌
PDA培养基配方：
马铃薯葡萄糖或蔗糖琼脂水 pH 30 g 3 g 2.7-3 g 150 ml 自然
每组150ml。每人分装1支试管。包扎。灭菌
灰树花
担子菌纲食用菌
长根菇
牛肝菌
担子菌纲食用菌
茶新菇
茶树菇
茶树菇 Agrocybe aegerita
茶树菇 Agrocybe aegerita
鸡腿菇
鸡腿菇
Coprinus comatus
担子菌纲食用菌
真姬菇
担子菌纲食用菌
虎掌菌：Sarcodon imbricatus
猪苓菌：Grifola umbellata

食用菌母种、原种、栽培种制作步骤

食用菌母种、原种、栽培种制作步骤食用菌菌种的质量对食用菌生产至关重要。

菌种的好坏，菌种的保存直接影响到食用菌的产品质量和产量、效益和成败，所以我们要制作优良的食用菌菌种，更要有优良的菌种保存方法，以保存菌种的生活力和优良性状，确保菌种纯种、无污染。

一、菌种制作食用菌菌种分三种即母种（一级种）、原种（二级种）、栽培种（三级种）1.制作母种（一级种）1.1菌种采集选择健壮无病虫害的食用菌子实体。

经表面消毒后，放在无菌的厚纸上，使子实体菌褶向下，在通风条件下经过12--24h，等子实体放出孢子后，将纸折叠起来风干，放入塑料袋中，里面放几粒干硅胶，封好口，放入2--4℃冰箱中，可保存起来长期备用。

1.2母种培养基制作配方：马铃薯200g、琼脂20g、葡萄糖20g、纯净水1000ml。

先把马铃薯切成大约1cm大的小方块，放入1000ml 纯净水中煮30min，过滤后加入琼脂、0.2-0.3%的磷酸二氢钾、再加入20g葡萄糖，溶解后分别装入试管，每个试管装量1/5-1/4，用棉塞封好试管口，外加塑料膜扎紧，放入压力灭菌锅1.3㎏/cm灭菌30min，待温度降至60℃将试管摆成30-35度倾斜面，冷却后观察几天，无受到杂菌污染即可接种，孢子液用灭菌的自来水将孢子稀释，在无菌操作环境下将孢子悬浮液移到试管琼脂斜面上，在25℃下培养，很容易萌发生长成菌丝，然后用石蜡封口置于4-5℃恒温箱中可保存6个月。

2.制作原种（二级种）将木屑78%、麦麸20%、糖1%、石膏1%加入水拌匀（100kg料加125kg水），培养基原料拌匀后拿试纸测ph 值，ph值在6-7为宜，然后装入大口的罐头瓶至瓶肩部，将培养料压平压紧，抹干净瓶的培养料，拿完好无破损的塑料薄膜扎紧瓶口，放入压力灭菌锅1.4-1.5㎏/cm灭菌1.5-2h，冷却至25℃即可进行无菌接种，用接种针从母种试管斜面上挑取少量菌丝体接入瓶中，接种后在25℃恒温箱中培养30d菌丝可长满，即可作为原种（二级种）。

食用菌母种的制作培养

食用菌母种的制作培养用试管制成斜面培养基，并接种原始试管种(保留种，并用于生产的母种即为生产母种，可用于扩接原种。

1．培养基配方配方一综合马铃薯培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸氢二钾2克硫酸镁0.5克维生素B110毫克琼脂20克水1000毫升 PH值自然配方二合成培养基马铃薯 200克葡萄糖20克磷酸二氢钾2克蛋白胨10克牛肉膏5克酵母膏5克硫酸镁0.8克水1000毫升 PH值自然2．培养基制作方法先将马铃薯洗净去皮切成簿片，称取200克，加水1000毫升，煮沸15—20分钟，用4层纱布过滤，取其滤液并补足水至1000毫升，加入琼脂20克，再加热，琼脂溶化后，再加入其它配方中的药品。

培养基的分装，应在培养凝固前进行（琼脂培养基40℃凝固）一般用漏斗，或分装瓶，下端连接一段软橡皮管，橡皮管下面再连接一水段玻璃管，在橡皮管上安装一个止水弹簧夹，分装时将玻璃管细口插入试管内，但不要碰到管壁，每支试管装入量为度管长度1/4。

装好后塞上棉塞，每10支试管扎一捆，棉塞上用塑料纸封扎好，用线绳捆扎起来。

3．灭菌将分装后的试管扎捆好，放入高压蒸气灭菌锅，在1公斤/厘米压力下(锅入温度达121℃)灭菌20分钟,使微生物包括芽子色全部杀死。

待压力降到0度时，慢慢放出锅内气体，趁培养基没有凝固时，将试管摆成斜面。

4．接种与培养通过无菌操作方法将菌种接入试管斜面上，置28℃、3天后将温度降至24℃继续培养，12—15天左右，菌丝长满整个试管斜面，即成(生产)母种。

原种的制作母种接种到原种培养基上，进行扩大繁殖育种即为原种，原种一般采用广口瓶或袋装。

1．培养基配方配方一木屑麸皮培养基阔树木 78% 麸皮 20% 糖 1% 石膏粉 1% 水 65% PH值自然配方二棉籽壳木屑混合培养基棉籽壳 90% 糖 1% 麸皮 5% 过磷酸钙 3% 石膏粉 1% PH值自然2．拌料与装袋选用新鲜无霉变原料，根据生产所需的数量，计算配料总量，将麸皮、石膏粉均匀的混合在培养料里，糖和过磷酸钙溶于水解后，按上述干料量加入水，比例为1：1、3拌匀，培养料含水量60%为宜，含水量以手紧握培养料指缝间有水欲滴为宜。

组织分离制食用菌母种PPT课件

75%酒精及酒精棉球等培养箱等。
复习上一节母种培养基的配制步骤
• 1.按配方称量：见下面的配方 • 2.煮制 • 3.分装 • 4.灭菌 • 5.排斜面
母种培养基配方：
1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml
2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g或黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mg）。此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。
2.记录你制作的母种的生长状态; 3.是否有杂菌污染,如有分析其原因.
再见!
写在最后
成功的基础在于好的学习习惯
The foundation of success lies in good habits
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谢谢聆听
·学习就是为了达到一定目的而努力去干, 是为一个目标去战胜各种困难的过程,这个过程会充满压力、痛苦和挫折
人操作；第二大组可在无菌室内操作；
第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分进行组织分离，作对比观察。
分组辅导
注意同学们的操作；及时纠正不规范动作。接种操作完毕，收集试管进行培养。
数显式恒温培养训第三大部分
结果观察
培养基的高压灭菌
使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？（提问同学） (1)锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到121.3℃，压
力在0.1－0.15 MPa之间维持30 min； (4)不耐高热高压之物品，不能用此法灭菌。
（四）组织分离操作的主要步骤：

食用菌母种简易制作方法

食用菌母种简易制作方法食用菌母种的制作，大多使用PDA或PSA及其改良培养基，但一些偏远地区或小批量生产时，配方中的原材料由于价格较高（一般是分析纯），且在农村不易购到，耽误生产。

现介绍几个简易制作方法。

1、明胶型培养基。

明胶，指食用明胶，一般食品化工商店有售，价格较低。

食品生产中用作凝固剂或固形剂的明胶，用于母种生产上代替琼脂（洋菜、琼胶）做凝固剂，笔者90年代初即进行试验并用于生产，证明效果不错，但需对所购商品进行凝固性试验，最后确定每1000毫米中的使用量后，需坚持用该种品牌，不可随意更换。

一般生产配方为：土豆200克，麦麸30克，白糖20克，明胶50克左右，水1000毫升。

2、原粮型培养基。

即谷粒培养基。

小麦、玉米、豆类等均可作为母种培养基，且生产效果很好。

方法是：玉米、大豆需破碴，使其大小与小麦粒相仿，浸泡至无白心，用开水煮熟后迅速使用冷水冲洗，捞出后随即拌入适量麦麸，然后装入试管。

建议用该培养基时改换大型试管一般可使用20×200或25×200规格的试管，既方便操作，又相应加大一次性生产数量，经济上、时间上均合算。

3、土豆型培养基：选择大个头光滑土豆，去皮后切成撅形条，土豆条长12－15厘米，两端分别厚13厘米和0．2厘米，宽度根据试管直径确定，一般为2厘米以下，并尽量使其成半圆形，以使圆边贴近试管壁。

装入试管，常规灭菌等操作即可。

4、南瓜条培养基：秋季南瓜成熟后，可直接和来作母种培养基参照土豆型培养基切制南瓜条，制作同上。

5、苹果泥培养基：将成熟的苹果去皮、去核，研碎成果泥，装入试管，常规灭菌。

只是需要接种时用一灭菌木条将果泥压为长条型，使之与普通培养基相彷，而后再常规接种。

6、胡萝卜条培养基：可参照土豆培养基进行。