实验七 石蜡切片法2

一、实验目的
掌握动植物材料石蜡切片的方法及要求； 学习和掌握番红-固绿及苏木精-伊红双重染
色方法。
二、实验材料及用品
实验材料：上周已切和贴好的植物叶片、小鼠 肝脏的切片
实验用具：盖玻片、染色缸、镊子、显微镜。 实验药品：梯度酒精、 ½二甲苯+ ½100%酒
精 、二甲苯、苏木精染色液、1%伊红水溶液、 1%番红水溶液、1%固绿95%酒精溶液、加拿 大树胶。
氨水中“蓝 3-4s 化” 水洗 5min，换几次
染色时注意的几个问题
应根据材料的结构、性质、观察目的来选择染色方法 ； 材料从溶液中取出放入染色液时，此两种溶液的浓度必
须相同 ； 作二重染色时，应先染碱性染 料，后染酸性染料； 染色宁可深一点，不要浅一点 ； 作分色用的酸、碱溶液必须彻底洗净； 制成的片子不要置于阳光下，以免褪色。
染色原理－－物理作用
渗透作用：染料渗透到多孔的组织中，与组织没有牢固的结合； 吸收作用：又称溶解学说，组织吸收染料中的色素粒子，与之牢
固结合，组织着色与染液的颜色相同，不一定与干燥染料的颜色 相同。如品红在干燥时为绿色，而其溶液呈红色，组织在染色后 也呈红色，即使组织干燥后，其红颜色不变； 吸附作用：染液中分散的色素粒子进入被染物质的粒子间隙内， 由于分子的引力作用，色素粒子被吸附而染色，也由于各种蛋白 质或胶体有不同的吸附面，因此可以吸附不同的粒子，也就是说 对粒子的吸附有选择性，即有的容易被某些物质吸附，有的则不 容易吸附。
苏木精-伊红（简称 H·E ）染色中：苏木精使细胞核显深紫色， 伊红使细胞质显粉红色；
番红-固绿染色中：番红可将木质化细胞壁红色，角质化细胞壁 粉红色，栓化细胞壁黄褐色，染色体、核仁、中心体染红色； 固绿将纤维素细胞壁染成绿色，细胞质染成淡绿色。
五、作业
实验完毕，每人交玻片两张，用铅笔在载玻 片上写上材料名称及自己的姓名和日期；
根据染料的用途可分为：细胞核染色剂（用于细胞核的染色剂有天然染 色剂的苏木精、洋红以及合成染色剂中的番红、结品紫、硫堇、甲苯胺 蓝、甲基绿、美蓝、孔雀绿和焦油紫等）、细胞质染色剂（用于细胞质 的染色剂有合成染色剂中的曙红、亮绿、橘黄G、酸性品红、苦味酸和 水溶性苯胺蓝等）和脂质染色剂（用于显示脂质的染色剂有合成染色剂 中的苏丹III、苏丹Iv、硫酸尼罗蓝及油红等）。
100% 5min
脱 水
95% 洗一下
Fra Baidu bibliotek
1%固绿95%酒精溶液 10-60s
对 染
95% 10min
80% 10min
脱
70% 10min
水
50% 10min
水洗
三、实验步骤（2） 苏木精-伊红（HE）
脱 二甲苯Ⅰ 10min
树胶封藏
封 藏
蜡 二甲苯Ⅱ 10min
二甲苯 5min
透
½二甲苯+ ½100%AL 5min ½二甲苯+ ½100%AL 5min
染色原理－－化学作用
化学作用的主要理论根据是染色剂的性质可分为酸性、碱性和中 性染色剂，而动、植物的细胞内—般也可区分为酸性(阴离子)和 碱性(阳离子)部分。当碱性染色剂溶液中的有色部分成为阳离子 时，就能与细胞的阴离子(酸件部分)较牢固地结合，当酸性染色 剂溶液中的有色部分成为阴离子时，就能与细胞内的阳离子(碱 性部分)较牢固地结合。
例如，细胞核，尤其是核内的染色质，主要由核酸组成，是酸性 的组成成分．故和碱性染色剂(苏木精)的亲和力很强，易于着色。 细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红、曙红)的亲和力很大， 易于着色。
常用染色剂分类
按染料的化学性质可分为 ：碱性染料 、酸性染料 、直接染料 、媒染染 料 、中性染料；
根据染料的来源可分为：天然染料（此类染色剂是从动、植物体中提取 的，为天然产物，产量少。目前常用的有苏木精、洋红、地衣红和靛蓝 等）和合成染料（全是由芳香环或具有芳香性的杂环化合物所构成。最 早是由煤焦油蒸馏产物合成而得的，所以又称为煤焦油染料）。
三、实验步骤（1） 番红-固绿
脱 二甲苯Ⅰ 10min
树胶封藏
封 藏
蜡 二甲苯Ⅱ 10min
二甲苯 5min
透
½二甲苯+ ½100%酒精 5min ½二甲苯+ ½100%酒精 5min
明
100%AL 5min
95%AL 5min
复 水
80%AL 5min
70%AL 5min
50%AL 5min
蒸馏水 5min 染 色 1%番红水溶液 1.5-2h
封片注意事项
切片透明后封藏前材料上要保持二甲苯不挥发，如已干， 则可再滴加少许二甲苯；
封片时万一树胶量过少，可在盖玻片有空隙的地方，再 滴注少量树胶使其慢慢布满盖玻片。
四、实验结果
一张符合要求的切片应该是：平整、透明、染色足够，颜色鲜艳 且分明、封片时没有气泡、树胶不外溢、镜检时细胞结构清晰。
明
100%AL 5min
95%AL 5min
复 水
80%AL 5min
70%AL 5min
50%AL 5min
蒸馏水 5min 染 色 苏木精染色液 20min
100%AL 5min
95%AL 5min
脱
水
80%AL 5min
70%AL 过一下
1%伊红水溶液 3min
对 染
蒸馏水漂洗 5min，换几次
实验八 石蜡切片法
—— 染色、封藏
实验原理
切片通过不同方法，使其干燥，然后进行染色。因为每 一张载片上粘贴的是蜡带，因此必须先用二甲苯去除石 蜡再用酒精去除二甲苯，再进入水中，才能染色，染色 的方法很多，要根据每张标本要求显示的目的选择不同 的染剂，染色后显示清晰的细胞形态和核的大小，位置， 然后使带水的载片经历脱水→透明等步骤最后用树胶封 片。
实验报告（姓名和日期）。