微生物限度与无菌-内毒素区别

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微生物检验技术总结

微生物检验技术总结微生物检验技术总结微生物检验技术总结一．名词解释1.微生物：一群肉眼看不见的微小生物，如细菌、真菌、病毒。

必须借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍，千倍，甚至数万倍才能观察到的低等生物体。

2.细菌：是一类体积微小，结构简单，以二分裂的方式繁殖，对抗生素敏感的原核细胞型单细胞微生物。

3.细菌的生化反应：利用生化试验检测细菌对各类基质的代谢作用及其代谢产物的试验方法。

4.内毒素：是革兰阴性菌细胞壁的脂多糖，当菌体死亡崩解后，才可释放到菌体外。

5.外毒素：是由革兰阳性菌及部分革兰阴性在生活过程中合成并可释放到菌体外的毒性蛋白质，毒性强而且有高度的选择性。

6.抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的、能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质。

7.正常菌群：在正常情况下，人体的体表及其与外界相通的腔道，（上呼吸道、口腔、泌尿生殖）都有一定种类和数量的微生物寄生，这些微生物通常对人体是无害的，甚至有益，8.条件致病菌：在正常情况下不致病，但在特定条件下能引起疾病的菌群，称为条件致病或机会致病菌。

9.菌群失调：是指宿主某些部位正常菌群中各菌群之间的比例发生了大幅度的变化，由生理性组合转变为病理性组合的状态。

10.消毒;是指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法。

11.灭菌：是指杀灭物体上所有的微生物（包括病源微生物、非病源微生物、和细菌芽孢）的方法12.无菌：是指没有活的微生物存在。

13.无菌操作：防止微生物进入机体或其他操作对象的方法，二．填空题1.微生物的类型：非细胞性微生物（病毒），原核细胞型微生物（细菌、放线菌、衣原体、支原体），真核细胞性微生物（真菌）2.寄居于人类的微生物可分为：（1）正常微生物群或正常菌群（2）条件致病微生物（3）病源微生物3.革兰阳性菌细胞壁特有组分a)磷壁酸;由核糖醇和甘油残基经磷酸二酯键交联而成的多聚物。

b)磷壁酸功能：抗原性强，是阳性菌表面重要抗原（分型），并与细菌的黏附（致病）有关。

药品GMP检查中清洁验证常见问题

药品GMP检查中清洁验证常见问题1、清洁目标物的选择及限度的确定清洁目标物即清洁验证中需关注的残留物，对于非无菌生产过程，通常包括活性成分、微生物和清洁剂；对于无菌生产过程，还加入细菌内毒素。

在原料药内控标准中，对细菌内毒素有具体要求，清洁验证也应考察细菌内毒素残留。

根据风险分析结果，也可增加其他可能存在的残留。

在检查中发现，有的企业在选择清洁目标物时，缺少充分的评估。

如某厂原料药盐酸法舒地尔洁净区玻璃反应釜的清洁验证文件中，缺少细菌内毒素控制分析数据及评估，而内控标准中对内毒素有要求；又如某厂原料药次水杨酸锐在清洁验证报告中缺少产品溶解性、化学残留物、稳定性的内容，对清洁目标物的评估不充分。

对于专用生产设备，有的企业未经必要的风险评估确定合适的清洁目标物。

如某厂口服混悬剂虽为专线生产，但化合物本身易降解为氧化型产物，且处方中添加了蔗糖等矫味剂，在清洁验证时仅作了目检，未对可能的降解产物、微生物残留进行测定考察。

1.1活性成分清洁目标物中活性成分的确定需经过风险评估，充分考虑其溶解度、清洁难易程度、毒性和效价、稳定性等，以确定最差条件［3］。

如某厂共线生产20%甘露醇、0.2%乳酸左氧氟沙星、0.4%甲硝嗖等注射剂，以水为清洁剂；虽乳酸左氧氟沙星、甲硝嗖属于微溶于水的化合物，但因为甘露醇注射液浓度为20%,其易结晶难洗，故选择了甘露醇作为清洁目标化合物。

又如，某厂药膏涂布机清洁验证仅进行了不挥发物检测，未考虑活性成分含辣椒素、生物碱、薄荷脑、樟脑等易溶或可溶的化合物；经整改评估后，最终选择生物碱为目标化合物。

再如，某湿法混合制粒机，清洁目标化合物的选择比较困难，因共线品种有非洛地平缓释片、阿奇霉素分散片、复方曲尼司特片等；其中非洛地平、阿奇霉素溶解度较差，两者日治疗剂量分别为2.5mg、167mg,最终选择日治疗剂量小的非洛地平为目标化合物。

1.2微生物和细菌内毒素在检查中发现，有的企业对生产设备和器具未制定清洁后的保存时效，缺少微生物等方面的数据支持。

微生物限度3篇

微生物限度第一篇：微生物限度的概念和意义微生物限度是一种质量控制方法，用于确保制药、食品和化妆品等产品中微生物的数量不超过一定限度。

微生物限度的主要目的是确保产品的安全性和稳定性，防止因微生物污染导致的品质问题和健康问题的发生。

本文将探讨微生物限度的概念和意义。

概念微生物限度是指微生物在一定量的样品中的可接受数量范围。

它是用来评估和规定一种产品是否符合微生物质量要求的标准。

微生物限度的标准和方法在各个行业之间可能有所不同，但通常都基于该行业的相关规定和标准。

微生物限度测试可用于监测产品中可能存在的各种微生物，如细菌、真菌和酵母等。

在制药和医疗行业中，微生物限度测试通常用于检验药品、生物制品和医疗器械等产品的微生物质量。

在食品和饮料行业中，微生物限度测试通常用于检验各种食品和饮料的微生物数量。

在化妆品行业中，微生物限度测试通常用于检验各种化妆品的微生物数量，例如面霜、洗发水、护肤品等。

意义微生物限度测试对于各行业的产品质量和安全性有着重要的意义。

下面列举了微生物限度测试的几个方面的重要性：1.保证产品的安全性微生物污染对于医药、食品、化妆品等产品的安全性是一个很大的威胁。

微生物限度测试能够监测产品中可能存在的各种微生物，并评估其数量是否达到安全标准。

如果产品中微生物数量超出安全标准，就会导致产品不安全，可能会对人们的健康造成危害。

因此，微生物限度测试对于确保产品的安全性至关重要。

2.控制产品的质量微生物限度测试可用于监测产品的微生物质量，并确保产品符合质量规定。

如果产品中微生物数量达到或超出了可接受范围，就说明产品质量不佳。

这可能是由于制造或存储过程中的污染导致的，或者可能是产品本身存在质量问题。

微生物限度测试可帮助制造商识别这些问题并采取行动来改进产品。

3.确保产品的稳定性微生物限度测试可用于监测产品的微生物质量，并确保产品的稳定性。

如果产品中微生物数量达到或超出了可接受范围，就说明产品的稳定性可能受到影响。

药品生物检定技术简介

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门冬酰胺酶（抗肿瘤药） Ch.P（2005）二部本品系自埃希大肠杆菌（E.coli ASI.357）
或欧文菌（Er-winia casotovora）中提取制备的具有酰氨基水解作用的酶。
肝素钠（抗凝血药） Ch.P（2005）二部本品系自猪或牛的肠黏膜中提取的硫酸氨
基葡聚糖的钠盐，属黏多糖类物质。
小包装容器的数量。
例：2支（瓶）/2板×12粒
检查量：指一次试验所用供试品的总量
（g 或 ML）
例： 2×10=20ML
24×0.25=6g
2、对照试验：阳性对照
阴性对照
9
3、检查方法：
a、薄膜过滤法：应用广、准确性高，适用于任何药品、尤其是具有抑菌作用的
。
b、直接接种法：操作简便，适用于无抑菌作用的供试品。
中文名称
英文名或缩写
适应症
重组人干扰素a1b
rhuIFNaIb
上皮生长因子
(EGF)
粒细胞集落刺激因子
(GCSF)
粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (GM-CSF)
红细胞生成素
(EPO)
溶栓药物链激酶
(SK)
重组人胰岛素
Humulin
Novolin
Humalog
白细胞介素-2
rhuIL-2
治疗病毒性角膜炎烧伤或创伤治疗外用药物
细胞因子类（重组人干扰素）
生长因子类（重组人表皮生长因子）
激素类（重组人胰岛素）
酶类（重组链激酶）
疫苗（重组乙型肝炎疫苗）
单克隆抗体
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重组DNA技术
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国外重组DNA制品
中文名称
英文名或缩写
适应症
胰岛素

1168《药品生物检定技术》西南大学网教22秋作业参考答案

1168 20222判断题1、由于使用和要求不同，标准品可分为国际、国家、工作用三级标准。

( ). A.√. B.×2、实验动物的分组不管采用什么方法，重要的是不要受到主观愿烈的影响。

（）. A.√. B.×3、处于未完全密封状态下产品的操作和转运，如产品灌装（或灌封）、分装、压塞、轧盖等应在A级或B级背景下局部A级环境下完成。

（）. A.√. B.×4、在破伤风梭菌毒力实验中，小白鼠强直性痉挛，抽搐。

呈现弓背反张，腿部强直，尾巴竖立等症状，最后死亡，即为阳性反应。

（）. A.√. B.×5、每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

（）. A.√. B.×6、在药品的微生物检验中，若作静置培养，则100 ml培养基/250 ml的三角瓶，最多不能超过150 ml培养基/250 ml的三角瓶，否则灭菌时培养基沸腾容易污染棉塞，造成染菌。

（）. A.√. B.×7、微生物限度检查应在环境洁净度为不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行，检验全过程需严格遵守无菌操作,防止再污染。

（）. A.√. B.×8、在控制菌检查中，白色念珠菌和黑曲霉均接入玫瑰红钠琼脂培养基中，作适应性检查。

（）. A.√. B.×9、药物微生物总数检测时，胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30〜35 ℃培养3〜5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20〜25 ℃培养5〜7天。

（）. A.√. B.×10、霉菌、酵母菌计数平板倒置于23-28℃培养箱中培养24 h。

（）. A.√. B.×11、单向流系沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流，所以仅有垂直单向流。

（）. A.√. B.×12、空态系指洁净室（区）在净化空气调节系统已安装完毕且功能完备的情况下，但是没有生产设备、原材料或人员的状态。

（）. A.√. B.×13、IMVC试验是指靛基质试验(I)、甲基红试验(M)、乙酰甲基甲醇试验(V)、枸橼酸盐试验(C)，主要用于金黄色葡萄球菌检测。

几种灭菌法的优缺点及技术参数

几种常用灭菌法的优缺点及技术参数灭菌法系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平的方法。

本法适用于制剂、原料、辅料及医疗器械等物品的灭菌。

无菌物品是指物品中不含任何活的微生物。

对于任何一批灭菌产物品来说而言，绝对无菌既无法保证也无法用试验来证实。

一批物品的无菌特性只能相对地通过物品中活微生物的概率低至某个可接受的水平来表述，即无菌保证水平(Sterility assurance level，简称SAL)。

实际生产过程中，灭菌是指将物品中污染微生物的残存概率下降至一定水平，以无菌保证水平SAL（sterility assurance level）表示预期的无菌保证水平。

最终灭菌的产物品微生物存活概率，即无菌保证水平不得高于10-6。

已灭菌产物品达到的无菌保证水平可通过验证确定。

灭菌产物品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的无菌保证体系。

灭菌工艺的确定应综合考虑被灭菌物品的性质、灭菌方法的有效性和经济性、灭菌后物品的完整性和稳定性等因素。

灭菌程序的验证是无菌保证的必要条件。

灭菌程序经验证后，方可交付正式使用。

验证内容包括：(1)撰写验证方案及制定评估标准。

(2)确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确，并能处于正常运行（安装确认）。

(3)确认关键控制设备和仪表灭菌设备、关键控制和记录系统能在规定的参数范围内正常运行（运行确认）。

(4)采用被灭菌物品或模拟物品按预定灭菌程序进行重复试验，确认灭菌效果各关键工艺参数符合预定标准，确定经灭菌物品的无菌保证水平符合规定（性能确认）。

(5)汇总并完善各种文件和记录，撰写验证报告。

日常生产中，应对灭菌程序的运行情况进行监控，确认关键参数（如温度、压力、时间、湿度、灭菌气体浓度及吸收的辐照剂量等）均在验证确定的范围内。

灭菌程序应定期进行再验证。

无菌、微生物限度、细菌内毒素方法学验证

无菌检查验证用菌株：

金黄色葡萄萄球菌 (Staphylococcus aureus) [CMCC(B) 26 003] 铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10 104] **拟修订为大肠埃希菌枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) [CMCC(B) 63 501] 生孢梭菌 (Clostridium sporogenes) [CMCC(B) 64 941] 白色念珠菌 (Candida albicans) [CMCC(F) 98 001] 黑曲霉 (Asperglllus niger) [CMCC(F) 98 003]
直接接种法

取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于 100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管；取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100cfu的白色念珠茵、黑曲霉各2管。其中1管接人规定量的供试品，另1管作为对照，按规定的温度培养3～5天。

验证的目的是为了确认试验中供试品应选择药典中所收载的何种供试液制备方法、何种测定方法及确定的检测系统是否适用于该供试品的检验，即只有通过方法验证，才能确定供试品的检验条件和方法，保证“微生物限度检查”或 “无菌检查”方法的科学性和检验结果的准确性。
2．不同企业生产的相同品种，特别是中

问题：方法选择错误

薄膜过滤法和直接接种法如：一般供试品（无特殊说明）采用直接接种法某厂家胸腺五肽注射液为普通注射剂，完全可以采用薄膜过滤法，生产单位进行的无菌检查验证法为直接接种法。也有的厂家把两种方法的验证都写上，结论中也没有说明采用那种方法。 CP2005：无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法，只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。修订：改为薄膜过滤法重新进行验证。

无菌、微生物限度检查及方法验证

7
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法，仅能用于工作用菌种的短期保藏。
8
琼脂斜面低温保藏法保藏法（厂家常用）
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏，无菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内，轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间在层流台下，取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液（pH7.0）加入培养皿内用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔，注意不要划破培养基。用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液，收集于试管中。将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟，冷却。做好标记，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌室前，至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 生孢梭菌 [CMCC（B）64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC（B）50094] 白色念珠菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（B）9 003]

药品微生物检测项目

药品微生物检测项目
微生物检测分为染菌量检测和控制菌检测，其中药品微生物限度检测的内容有以下三个方面：
-细菌数检测：细菌数测定是衡量药品卫生质量的重要指标。

-真菌数检测：包括霉菌、酵母菌数检测。

细菌、真菌数测定是对染菌量检测，是检测单位质量、体积或面积（g、ml或10cm²）的药品中所污染活菌数量。

其测定结果可用于判断药品被污染的程度，用于评价药品卫生质量。

-控制菌检测：非规定灭菌制剂不但要控制微生物的数量，同时不允许含有致病菌。

此外，无菌检查、微生物无限度检查、细菌内毒素、热原质检查也是药品微生物检测的重要项目。

微生物限度与无菌-内毒素区别

微生物限度-无菌-内毒素区别与联系微生物检测基本就这3项了。

微生物限度：用营养琼脂、玫瑰红钠培养。

洁净度中等操作台内进行（B级)无菌：硫乙醇酸盐、改良马丁在无菌套筒里操作并培养。

洁净度要求较高(A级）内毒素：鲎试剂稀释不同浓度来判定。

洁净度要求不高，D级情况下即可。

我的理解微生物泛指细菌和霉菌酵母菌等等、应该是包罗万象，各种杂菌都有无菌则也是各种杂菌与微生物限度检测的微生物有什么区别？内毒素是一种热源，服用没什么关系，在注射后容易导致人体发热。

内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。

脂多糖对宿主是有毒性的。

内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。

耐高温比如说注射液产品用气接触产品，他应该用滤器过滤其他吧。

用膜直径改用0.45（过滤）的好还是0.22（除菌）的好？滤膜泡点肯定要做的，高风险产品应该要最少2层滤膜吧。

用了这滤膜可以不用检这3项还是要检其中项目？而且有的企业只是一年验证一下，不对气体日常可行吗？求大神详解3者的联系与区别，各什么时候需要检这3项及为什么。

答：微生物限度针对非无菌产品无菌和内毒素针对无菌产品。

微生物限度，无菌检验，内毒素检验均为供试品安全性检测。

主要区别是微生物限度，无菌检验是检验活的微生物方法，内毒素检验可以检验死去的微生物中内毒素含量。

什么时候选用不同的检验方法，主要参见药典要求，例如口服制剂选择微生物限度，注射剂和眼用制剂选择无菌检验，注射剂也需要做内毒素检验。

选择不同实验方法主要依据是供试品生物风险级别和供试品用途。

例如纯化水检验中不需做内毒素实验，注射用水检验中不需做无菌实验。

依据是纯化水主要用途为清洗，注射用水用途是配液，所以注射用水的微生物风险更高，需要做内毒素实验，控制风险。

微生物限度和无菌实验用具要求无菌，内毒素实验用具要求去除内毒素。

检验环境要求现行药典微生物限度和无菌实验均是C级下局部A级，微生物限度在超净工作台，无菌实验在生物安全柜内操作。

微生物基础知识

微生物学基础知识微生物广泛地存在于自然界，与我们共同生活在这个世界上，影响着我们生产和生活的方方面面，微生物对于大多数人来说既熟悉又陌生。

说熟悉，那是因为在我们的周围,如土壤、空气，直至我们身体无不存在着大量的微生物，我们所患的各种疾病如肝炎、痢疾、伤寒、肺炎、脑膜炎等无不与它们有关。

在制药行业，GMP对厂房的洁净度有着较为苛刻的要求：在100级洁净度下每立方米空气中的浮游菌不得多于5个，沉降菌不得多于1个；大容量注射剂必须做无菌检查，固体制剂必须做微生物限度检查。

不同的剂型不得检出相应的控制菌；在工艺用水中对细菌、霉菌、酵母菌也有要求。

这些控制指标所针对的对象都是微生物。

因此说，我们对它们是熟悉的。

说到不熟悉，那是因为我们大多数人对它们缺乏较深入的了解，如它们的外观形态、内部结构是什么样的？它们的生化特点有哪些？它们对整个生态系统有着怎么样的功与过？它们对我们制药行业会带来哪些有益或有害的影响，我们对它们应该怎样加以利用或防范？所有这些，对大多数人来说是不了解的。

因此说对它们是陌生的。

以下对微生物的一些基本知识作一简要介绍。

1、什么是微生物？微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。

它们都是一些个体微小，结构简单的低等生物，包括原核类的细菌（真细菌）、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次体；属于真核类的真菌（酵母菌、霉菌和蕈菌）、原生动物和微藻类以及属于非细胞类的病毒和亚病毒。

那什么是“原核类”和“真核类”呢？所谓原核，是指这类微生物的细胞中没有细胞核的结构，而且其它结构成份也比较简单；所谓真核，就是在它们细胞中有一明显的细胞核。

它们在繁殖的方式上也有所区别。

原核类微生物的繁殖靠细胞的一分为二、二分为四的分裂方式来实现，因此它们也被称为“裂殖菌；而真核微生物的繁殖方式比较复杂和多样，许多种类要通过不同细胞的交配，此外在细胞壁的结构上二者也有不同，有细胞壁的原核微生物其细胞壁的主要成份是一类含氨基酸的多糖，称肽聚糖；有细胞壁的真核生物其细胞壁中含有的主要成分是纤维素（例如高等植物细胞）或甲壳质（如霉菌）。

热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查

热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查的关系前面看到过关于无菌和内毒素区别的帖子。

那么请问各位，热源、无菌、细菌内毒素和微生物限度检查究竟有什么区别，又有什么联系呢？本人我在微生物方面比较白，只是觉得这四项都和细菌有关，都需要培养基，都要在无菌台里做…… 汗~~ 其他的实在不知了。

头都大了，希望各位指点迷津，谢谢。

[楼主] | Posted:08-09-09 10:22|珊瑚礁级别: ★会员发帖: 292威望: 6财富: 95注册时间:2008-03-06最后登陆:2010-11-25无菌，最终灭菌产品和百级生产非灭菌产品需要检测的项目，一般采用薄膜过滤法；如，粉针剂、大输液产品。

微生物限度，允许结果有菌落，但有限度，是一定范围，一般采用半封闭薄膜过滤法和平皿法。

指非灭菌产品，如口服制剂和食品、外用药。

热源，目前很多品种采用细菌内毒素检测方法代替，简单，成本低。

但必须按照国家标准。

内毒素和热源一般是大输液产品的检测项目。

想了解很多，应该多看看专业书籍啊[1 楼] | Posted:08-09-09 12:21|洲际捣蛋级别: 论坛版主发帖: 2500威望: 315财富: 42注册时间:2008-03-15最后登陆:2010-11-08热原---不需要培养基兔法看药典就知道是怎么回事了细菌内毒素----不需要培养基一般工作环境也可以做无菌----需要培养基薄膜过滤法直接接种法也可以参照药典微生物限度检查----需要培养基薄膜过滤法梯度稀释图布平板法区别：热原和细菌内毒素检验方法的不同但检验的东西在本质上其实是一样的另外细菌内毒素检查法要比热原检查法灵敏10倍，根据各种药物的特性，规定检查热原还是细菌内毒素。

注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-10-11zyb3421060级别: ★会员发帖: 65威望: 3财富: 1注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-11-12还不是很明白[5 楼] | Posted:08-12-25 08:26|shabb007级别: ★★会员发帖: 649威望: 20财富: 20注册时间:2007-12-14最后登陆:2010-12-03这么说吧。

药检试题09

比武试题九一、填空1．抗生素微生物检定包括两种方法，即管碟法和浊度法。

2．在抗生素微生物检定法中，二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径应在 18～22 ㎜。

3．在抗生素微生物检定法中，实测效价与估计效价：试验计算所得效价应在估计效价的±10% 以内。

4．抗生素微生物检定法常用检定菌为枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和藤黄微球菌。

5．抗生素微生物检定法系在适宜条件下，根据量反应平行线原理设计，通过检测抗生素微生物的抑制作用，计算抗生素活性（效价）的方法。

6．《中国药典》2010年版细菌内毒素检定法分凝胶法和光度测定法；后者包括浊度法和显色基质法。

7．凝胶法细菌内毒素检查用水系指内毒素含量小于 0.015 EU/ml的灭菌注射用水。

光度测定法用的细菌内毒素检查用水，其内毒素含量小于 0.005 EU/ml。

8．当细菌内毒检查测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法为准。

9．无菌检查应在环境洁净度 10000 级下的局部洁净度 100 级的单向流空气区域或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。

10．药品进行无菌检查时所用的冲洗液有0.1％蛋白胨水溶液和pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。

11．无菌检定法有薄膜过滤法和直接接种法两种方法；细菌培养温度为32.5℃±2.5℃，真菌培养温度为25.5℃±2.5℃。

12．培养基灵敏度检查所用菌株为金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉。

13.洁净室的温度和相对湿度应与药品生产工艺要求相适应。

无特殊要求时，温度应控制在18～26℃，相对湿度控制在45%～65%。

14．眼部给药制剂微生物限度检查除细菌数、霉菌数和酵母菌数外还包括金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和大肠埃希菌。

15．微生物限度检查中，细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。

中国药典2020版二部纯化水微生物检查

中国药典2020版二部纯化水微生物检查【原创实用版】目录1.概述2.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的标准3.微生物检查的方法4.微生物检查的注意事项5.结论正文1.概述纯化水是制药工业中常用的一种水质，其微生物质量对于药品的质量和安全性至关重要。

为了保证纯化水的微生物质量，我国制定了一系列的标准和方法。

本文将介绍中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的相关内容。

2.中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的标准中国药典 2020 版二部对于纯化水的微生物检查有严格的标准。

其中，纯化水的微生物限度要求如下：- 细菌总数：≤10cfu/ml- 霉菌和酵母菌：≤1cfu/ml- 细菌内毒素：≤0.25EU/ml3.微生物检查的方法微生物检查通常包括以下几个步骤：- 采样：在纯化水的生产过程中随机采样，保证样品具有代表性。

- 培养：将样品在适当的培养基中进行培养，以便微生物生长和繁殖。

- 计数：在适当的时间点对培养基中的微生物进行计数，以了解样品中微生物的数量。

- 鉴定：通过显微镜观察和生化试验等方法，对微生物进行鉴定，以确定其种类。

4.微生物检查的注意事项在进行纯化水微生物检查时，应注意以下几点：- 采样时应保证样品的无菌性，避免样品被污染。

- 选择适当的培养基和培养条件，以保证微生物的生长和繁殖。

- 在进行微生物计数时，要保证计数方法的准确性和精度。

- 定期对纯化水微生物检查的设备和方法进行验证，以确保检查结果的可靠性。

5.结论通过对中国药典 2020 版二部纯化水微生物检查的研究，我们可以了解到，我国对于纯化水的微生物质量有着严格的要求。

微生物检查的方法和注意事项也需要我们在实际操作中严格遵守，以保证药品的质量和安全性。

2008 无菌_微生物限度及细菌内毒素检查方法学验证中常见问题及分析_国明

中国药品标准 2008年第 9卷第 1 Nhomakorabea 47以减少膜的吸附, 对于抑菌性较强的注射用无菌粉末或固体原料, 一定要充分溶解、混合均匀。 114 加菌时机不一致
验证试验主要考虑滤器中残留抗菌物质对阳性菌生长的影响, 应与对照滤器比较而作出判断, 所以验证试验中加菌时机要与对照一致 [ 2] 。
115 薄膜过滤法滤膜材质选择不正确, 直接影响试验结果
20 05年版药典执行以来药品生产企业、科研单位等在药品质量标准建立及检验工作中困难和问题较多的项目。我们在药品注册品种的审核检验中, 发现有的申报单位对方法学验证的意义理解不够, 验证试验的科学性、完整性及可操作性均存在着很多问题。为尽快提高方法学验证水平, 更好地保证用药的安全性, 现将方法学验证工作中常遇到的问题进行分析、讨论。 1 无菌检查方法学验证问题及分析 111 验证菌株选择不正确 11111 敏感菌株与阳性对照菌不一致, 降低了阳性对照菌的意义。有些药品选择了敏感菌株进行方法学验证试验, 但是无菌检查时阳性对照菌不是验证试验选定的敏感菌株。实际工作中抑制枯草芽孢杆菌的样品很多, 可用此作为敏感菌株, 但药典规定无菌检查时以金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌, 使金黄色葡萄球菌失去了阳性对照菌的意义。应在此类无菌检查时也增加敏感菌株作为阳性对照菌。 11112 2005年版药典无菌检查中规定 / 抗革兰阴性菌为主的供试品以大肠埃希菌为对照菌 0, 但方法学验证规定用菌株没有大肠埃希菌, 缺少了验证此类药物抗菌作用的代表菌株。建议对抗菌作用中明确具有抗革兰阴性菌的药品进行无菌检查方法学验证时, 应增加大肠埃希菌作为验证菌株。 112 验证时取样量不符合要求 11211 无菌检验量与验证试验的取样量不同, 与中国药典 2005年版方法学验证要求不符。进行供试品检查时, 所采用的检验方法和检验条件应与验证的方法相同, 应按照规定的检验数量和检验量取样。 11212 有的生产单位无菌检查方法学验证仅按抽验产品检验数量进行验证, 药典规定应按照批出厂产品最少检验数量进行试验 [ 1] 。 113 方法选择错误或不恰当, 不符合 2005 年版中国药典要求 11311 有的申报单位无菌检查时无论什么药品都用直接接种法。 2005年版中国药典规定, 只要供试品性状允许, 应采用薄膜过滤法 [ 1] 。 11312 有些申报单位对非抑菌性供试品也用大量的冲洗液冲洗, 如每次 100 mL, 10次 /膜, 既增加了对膜的损伤和对微生物生物特性的破坏机会, 也增加了检验繁琐性和检验人员的工作量。所以薄膜过滤时尽可能减少冲洗量, 冲洗不一定为每次 100 mL, 可少量多次, 并注意充分振摇。对于抑菌性较强的供试品, 可以先用适宜的稀释液稀释后再过滤,

清洁验证中有关微生物限度检查的确定原则

清洁验证中有关微生物限度检查的确定原则一、2010版GMP有关清洁验证内容如下：（一）清洁操作规程通常应当进行验证。

清洁验证一般应当针对污染物、所用物料对原料药质量有最大风险的状况及工艺步骤。

（二）清洁操作规程的验证应当反映设备实际的使用情况。

如果多个原料药或中间产品共用同一设备生产，且采用同一操作规程进行清洁的，则可选择有代表性的中间产品或原料药作为清洁验证的参照物。

应当根据溶解度、难以清洁的程度以及残留物的限度来选择清洁参照物，而残留物的限度则需根据活性、毒性和稳定性确定。

（三）清洁验证方案应当详细描述需清洁的对象、清洁操作规程、选用的清洁剂、可接受限度、需监控的参数以及检验方法。

该方案还应当说明样品类型（化学或微生物）、取样位置、取样方法和样品标识。

专用生产设备且产品质量稳定的，可采用目检法确定可接受限度。

（四）取样方法包括擦拭法、淋冼法或其它方法（如直接萃取法），以对不溶性和可溶性残留物进行检验。

（五）应当采用经验证的灵敏度高的分析方法检测残留物或污染物。

每种分析方法的检测限必须足够灵敏，能检测残留物或污染物的限度标准。

应当确定分析方法可达到的回收率。

残留物的限度标准应当切实可行，并根据最有害的残留物来确定，可根据原料药的药理、毒理或生理活性来确定，也可根据原料药生产中最有害的组分来确定。

（六）对需控制热原或细菌内毒素污染水平的生产工艺，应当在设备清洁验证文件中有详细阐述。

（七）清洁操作规程经验证后应当按验证中设定的检验方法定期进行监测，保证日常生产中操作规程的有效性。

二、关于清洁验证中的微生物限度，大多数企业在做清洁验证时都不把此作为重点关注项目。

对于无菌产品，清洁验证中的微生物限度自然是必不可少的，甚至还会根据实际需要增加内毒素、热原等项目。

但是对于非无菌产品，清洁验证中的微生物限度如何来确定呢？在2010版GMP实施指南中清洁验证中是这样描述这个问题“企业制定清洁验证的微生物限度时可以考虑产品、剂型、清洁方法的特点以及环境级别等因素。

无菌检验室的设计和建造

无菌检测从广义上讲就是微生物检测，或称生物测定。

其包括了无菌检测、微生物限度检测、细胞内毒素检测、阳性对照及阴性对照。

1、医疗器械的无菌检测的目的是检查是否存有活菌或者说所存在的活菌量在百万分之一以下，而不是像无菌**检测有无菌体存在。

检品为所生产的无菌器械产品、无菌工作服或无菌器具及注射用水等。

检验室的设置条件为万级下百级层流，可回风，工作台为洁净工作台，可选用垂直流或水平流型。

其对照品为空白品。

2、微生物限度检测的目的是检查微生物的存在量是否符合允许存在的总量范围内。

如对产品或无菌服、器具等灭菌前的初始污染菌、洁净区环境空气污染菌、纯化水中的污染菌等的存在量限度。

设置条件为十万级下的百级层流。

可回风。

工作台为垂直流或水平流洁净工作台。

3、细胞内毒素检测从严格意义上讲应不属于无菌检测的范畴，其设置条件为一般性检测，不需要净化条件。

也不需要洁净工作台。

4、阳性对照其定义为采用阳性药物对照，对照品采用阳性药物（指与试验用药治疗作用一致的药物）。

适用范围是具有治疗效果或有抑菌、抗菌作用的药物或者是医疗器械，如纳米抗菌产品、银离子抗菌产品及含有抗体抗原或毒菌的体外诊断试剂。

原来在做无菌检测时需要用的金黄色葡萄球菌等致病菌是和无菌检测在同一室内完成，在2005版的药典中要求设置阳生对照的目的是为了强调阳性对照作为一种干预方式或验证其可靠性效果，要求分开独立设置。

这时的设置条件是万级下百级层流，只采用垂直流洁净工作台。

可回风而不需要全对于一般的无菌医疗器械产品而言，这种阳性对照室应是可设也可不设。

如果无菌检测是在垂直流净化台下做，可以不设阳性室。

但如果强调无菌检测的可靠程度时，可把做金黄色葡萄球菌等致病菌的对照置于另设的洁净工作台中去做。

这时的无菌室要适当宽敞一些。

真实意义上的阳性对照是指采用强致病菌、高感染菌、毒菌作为对照品，检验**的抗菌、抑菌效能。

设置条件是万级下百级层流，要采用生物安全柜，不可用任何形式的洁净工作台。

清洁验证中的微生物限度

清洁验证中的微⽣物限度关于清洁验证中的微⽣物限度，⼤多数企业在做清洁验证时都不把此作为重点关注项⽬，所以对于这个问题的相关资料⽐较少。

对于⽆菌产品，清洁验证中的微⽣物限度⾃然是必不可少的，甚⾄还会根据实际需要增加内毒素、热原等项⽬。

但是对于⾮⽆菌产品，清洁验证中的微⽣物限度如何来确定呢？在2010版GMP实施指南中清洁验证中是这样描述这个问题“企业制定清洁验证的微⽣物限度时可以考虑产品、剂型、清洁⽅法的特点以及环境级别等因素。

如果没有其他特殊考虑因素，建议根据⽣产区域的洁净级别选⽤新版中国GMP附录1中的表⾯微⽣物限度。

”即接触碟(55mm)：A级<1cfu/碟，B级<5,C级<25,D级<50。

以上提到的考虑产品的因素，主要是要考虑产品质量指标中是否有⽆菌的指标，微⽣物限度指标为多少？剂型因素，主要是要考虑是否为⽆菌制剂，是否为⽆菌⼯艺等。

清洁⽅法的特点因素主要是要考虑清洁⽅法中是否有灭菌消毒的过程，是否使⽤了抑菌剂等。

环境级别因素主要是考虑是所处的⽣产环境是否有微⽣物控制的要求。

综合以上⼏个因素，可以看出并⾮所有⽣产⽤的设备的清洁验证需要定微⽣物限度，⽐如原料药⽣产⽤的⾮洁净区设备，就⽆需制定微⽣物限度指标。

还有⽐如中药提取设备如果在⼀般区的也⽆需定微⽣物限度指标。

这类在⼀般区⽣产⽤的设备，⼀⽅⾯本⾝⽣产过程并⽆微⽣物限度的要求，如果有要求就需要在洁净区⽣产了。

另⼀⽅⾯即使制定了微⽣物限度要到达⼀定要求也⾮常困难，环境本⾝就⽆微⽣物限度控制，那么这个环境⾥的设备要严格控制微⽣物也⽐较困难。

这种情况下可以采取⼀些特殊的处理⽅法，⽐如使⽤前⽤蒸汽或注射⽤⽔冲洗、或者使⽤抑菌剂⽐如碱来抑制细菌的滋⽣。

总之，需要考虑企业⾃⾝产品的特点和实际情况来确定是否需要制定微⽣物限度指标，⽽不要⼈云亦云。

微生物限度和无菌检查方法验证中存在的问题

微生物限度和无菌检查方法验证中存在的问题
钟长鸣;陈希;吴燕红
【期刊名称】《中国药品标准》
【年(卷),期】2011(12)1
【摘要】@@ 有些药品由于其自身杀菌和抑菌作用,在微生物限度和无菌检查时就有可能出现假阴性结果,为使检查结果真实可靠则必须消除其自身杀菌和抑菌作用.消除药品自身杀菌和抑菌作用的方法有:培养基稀释、离心沉淀集菌、薄膜过滤、中和等方法.寻找一种恰当的能消除药品其自身杀菌和抑菌作用的方法是其方法验证的内容.我所在开展方法验证工作中发现存在一些问题.
【总页数】2页(P12-13)
【作者】钟长鸣;陈希;吴燕红
【作者单位】江西省食品药品检验所,南昌,330029;江西省食品药品检验所,南昌,330029;江西省食品药品检验所,南昌,330029
【正文语种】中文
【中图分类】R927
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