病毒与亚病毒(2020版)

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4.病毒的培养-二元培养法
1) 噬菌体的培养
噬菌斑（plaque）：
将少量噬菌体与大量宿主 细胞混合后，在合适条件 下培养一定时间后，在平 板表面布满宿主细胞的菌 苔上，出现一个个肉眼可 见的透明小圆斑。 （ “负菌落” ）
2）动物病毒的培养
感染
动物病毒
实验动物 鸡胚
多种细胞培养
在尿囊膜上 形成一些白 色的庖痘 （感染造成 局部组织病 损）
基本构造：核衣壳 核心（core）：DNA或RNA (nucleocapsid) 衣壳（capsid）：蛋白质
包膜(envelope)：脂蛋白或类脂、糖蛋白 非基本构造
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特性
1）个体微小，在电子显微镜下才能看见； 2）不具有细胞结构，其主要成分为核酸和蛋白质，故称为“分子生物”； 3）一种病毒只含有DNA或RNA一种类型的核酸； 4）绝对的细胞内寄生，在细胞外不能增殖：既无产能酶系，也无蛋白质 和核酸合成酶系，只能利用宿主活细胞内现成的代谢系统合成自身的核酸 和蛋白质； 5）没有个体生长，不能进行细胞分裂，以核酸复制和蛋白质合成、然后 装配的过程实现其大量繁殖； 6）在离体条件下，以无生命的生物大分子状态存在，并保持其侵染性； 7）对大多数抗生素不敏感，对干扰素敏感。
F.W. Twort（1915年）、F. d’Herelle（1917年），分别发现
细菌（Shigella dysenteriae）病毒-噬菌体
1935年，W. M. Stanley首次提纯并结晶了烟草花叶病毒； Bawden等证明烟草花叶病毒的本质为核蛋白；
1940年，Kausche首先用电镜观察到烟草花叶病毒颗粒.
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2.毒粒的形态
基本形态： 球形或拟球形（大多数动物病毒）； 杆状（植物病毒和昆虫病毒）； 蝌蚪状（大肠杆菌T偶数噬菌体）
其他形态： 弹状（狂犬病毒）、砖块状（痘病毒）、 丝状（大肠杆菌f1、fd、M13噬菌体）等 多形性（流感病毒，新分离的毒株呈丝状， 在细胞内稳定传代后转变为拟球状）。
3.毒粒的结构
若标本经过适当稀释进行接种并辅以染色处理，病毒可在培养的细 胞单层上形成肉眼可见的局部病损区域，即蚀斑（plaque）或称空 斑。
包涵体（inclusion body）：
在某些感染病毒的宿主细胞质或细胞核内，出现光 学显微镜下可见的大小、形状和数量不等的小体。
多数位于细胞质内，如：痘病毒、狂犬病毒 少数位于细胞核内，如：疱疹病毒和腮腺炎病毒 有的既可在细胞质内，又可在细胞核内，如：麻疹病毒 包含体可以是病毒粒子的聚集体，如昆虫核型多角体病毒和质型多角 体病毒的包含体；也可以是病毒结构蛋白与感染有关蛋白质等病毒组 分的聚集体。
能通过细菌滤器； 可被乙醇沉淀而不失去其感染性， 能在琼脂凝胶中扩散； 用培养细菌的方法不能被培养出来，
推测只能在植物活细胞中生活
比细菌小的具有传染性的活的流质 （contagium vivum fluidum）
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1900年前后，包括口蹄疫（foot and mouth disease）在内的多种动植 物疾病病原体的滤过性特性被证明。
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3.病毒的分类
人们习惯根据其宿主种类将病毒分类： 噬菌体（phage） 真菌病毒（fungi viruses） 植物病毒（plant viruses） 动物病毒（animal viruses）
分类依据
核酸的特征、壳体的对称形式、有无包膜、宿主的种类、引起的疾病种 类、复制和释放方式等。
命名规则
1996年国际病毒分类委员会提出38条新的病毒命名规则，病毒分类系统 依次用目、科、属、种分类等级。
1952年，Hershey和Chase利用同位素证实噬菌体的遗传物质是DNA，将 人类带入病毒的分子生物学阶段。
2.病毒的定义与特点
病毒：是一种结构简单，能够自我复制并具有 侵染性的独特非细胞生物体。
真病毒 至少含核酸和蛋白质二种组分
非细胞生物
类病毒 只含具侵染性的RNA组分
亚病毒 拟病毒 只含有不具侵染性的RNA组分
3）植物病毒的培养
植物病毒
敏感植物叶片
被感染部位的细胞快速死亡而 形成局部坏死斑，或称枯斑
即便没出现坏死斑，被感染的 植物仍会表现一定的病症，如 色素形成和叶子形状改变等。
二、毒粒的性质
毒粒是病毒的细胞外颗粒形式，也是病毒的感染性形式。
Dulbacco等（1985）指出：病毒颗粒或毒粒是一 团能够自主复制的遗传物质，它们被蛋白质外壳 所包围，有的还具有包膜，以保护遗传物质免遭 环境破坏，并作为将遗传物质从一个宿主细胞传 递给另一个宿主细胞的载体。
7.1
病毒与亚病毒（2020版）
一 概述
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1、病毒的发现
1884年，Chamberland发明细菌滤器 1886年，A. Mayer 发现具有传染性的烟草花叶病； 1892年，D. Ivanovsky烟草花叶病病原体能通过细菌滤器：
一种能通过细菌滤器的“细菌毒素”或“极小细菌” 1898年，M. W. Beijerinck对烟草花叶病病原体的研究结果：
朊病毒 只含蛋白质组分
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毒粒：完整的病毒粒子（virion）， 由蛋白外壳包裹一个或多个DNA或 RNA分子构成
病毒分两个阶段（以两种形式）存在： 胞外阶பைடு நூலகம்：“毒粒”形式存在，可抵抗几乎所有酶的侵袭，
但不能独立于活细胞增殖； 胞内阶段：主要以正在复制的核酸形式存在，
诱导宿主细胞合成病毒组分；
病毒是一类既具有化学大分子属性，又具有生物体基本特征；既具有细 胞外的感染性颗粒形式，又具有细胞内的繁殖性基因形式的独特生物类 群。
(一)病毒的形态结构
1.毒粒的大小
个体小（测量单位nm），必需在电镜下观察；不同 病毒的毒粒大小差别很大（10~400nm）
痘病毒： 300~450nm × 170~260nm 双粒病毒：直径 18~20nm
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Tobacco Mosaic Virus A tobacco mosaic virus preparation viewed in the transmission electron microscope. Latex beads 264nm in diameter (white spheres) have been added.