感染性疾病免疫学检测优秀课件

11.11.2020
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(一)、HBsAg
常见HBsAg检测情况：
ELISA
• 检测模式：一步法。原材料：McAb；
• 检测结果：定性。
• 缺点：钩状效应，灵敏度较差，HAMA干扰、RF干扰，不 能定量。
化学发光（某些公司）
• 检测模式：一步法。原材料：McAb；
• 检测结果：定量。
• 灵敏度好于ELISA，无RF干扰。
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(一)、HBsAg
4、PcAb检测HBsAg（adr）的灵敏度高于McAb
HBsAg McAb （“a”）
标记McAb （抗“d”）
标记McAb （抗“d”）
固 相
HBsAg
载
体
标记PcAb （抗“d”）
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HBsAg McAb （“a”）
标记PcAb
（抗“r”）
分离游离抗原，再加标记抗体的两步法检测： 第一步：包被抗体捕获抗原成为固相，然后分离游 离抗原；第二步：固相抗原与标记抗体结合，分离 液相标记抗体后记录检测信号。
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(一)、HBsAg
两步法检测能消除钩状效应：
Ab
标记Ab
固 相 载 体
Ag
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(一)、HBsAg
感染性疾病免疫学检测优秀课 件
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什么是感染性疾病?
是由各种病原体，如病毒、细菌、支原体、衣原 体、螺旋体、寄生虫等引起的疾病。
一部分疾病可以通过各种方式，如接触、消化道、呼吸道、 昆虫叮咬等在正常人体间传播，具有较强的传染性，对社 会危害极大，这一类疾病被归于传染病范畴。
传染病
(Delte) (Epsilon)
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Ig 种类 IgA, IgG, IgM,
免疫球蛋白的水解片段
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免疫学检测技术基本原理
基于抗体－抗原的结合具有特异性和专一性的特点
+
Ag
Ab
Ag-Ab
利用已知 Ag 检测 未知 Ab
利用已知 Ab 检测 未知 Ag
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(一)、HBsAg
5、标本自身及前处理引起的干扰因素
• 类风湿因子 • 嗜异性抗体 • 自身抗体 • 补体 • 纤维蛋白 • 溶血或黄疸 • 交叉反应性物质 • 外源性物质(污染、抗生素
和生物制剂等）
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(一)、HBsAg
6、操作不当或人为等外在因素
• 标本编号、加样或加试剂差错 • 孵育 • 洗板 • 结果判读和报告失误等
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免疫学检测技术的类型
经典血清学技术
• 凝集反应 • 沉淀反应 • 补体结合反应 • 中和反应
免疫标记技术
• 荧光标记技术 • 放射免疫标记技术 • 酶免疫技术 • 胶体金免疫技术 • 化学发光免疫分析 • 电化学发光免疫分析
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要保证检验结果的正确性和可靠性，必须对 实验的检测原理及整个过程中各个环节的干扰因 素，有比较清楚的掌握和了解。
2、型特异决定簇：
（1） d/y（ aa122，赖氨酸/精氨酸）； （2） w/r（ aa160，赖氨酸/精氨酸）；
四种亚型：adr、adw、ayr、ayw。
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(一)、HBsAg
检测中常见的问题
1、一步法测定中的钩状效应（Hook effect）：
一步法检测时，受检抗原的含量很高时， 过量抗原分别和固相抗体及标记抗体结合，而 不能形成 “固相抗体—抗原—标记抗体”夹心复 合物，所得结果将低于实际的含量，这种现象 称为钩状效应。钩状效应严重时，可出现假 阴性结果。
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(一)、HBsAg
HAMA效应的假阳性模式：标本中的人抗鼠抗体分别与固 相HBsAb和标记HBsAb McAb结合，形成固相HBsAb－ HAMA－HBsAb复合物。
固相McAb
标记McAb
固 相 载 体
人抗鼠抗体
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(一)、HBsAg
3、S基因突变引起的HBsAg漏检：
了解这些干扰因素，对于我们在临床工作中 如何注意和解决这些干扰，以及实验结果的解释 具有重要意义。
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常用检测项目
• 乙肝两对半检测 • 梅毒螺旋体抗体检测 • HCV抗体检测 • HIV抗体检测
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10来自百度文库
一、乙肝两对半检测
• 项目
HBsAg HBsAb HBeA g HBeA b HBcAb
2、人抗鼠抗体效应 (Human anti-mouse effect, HAMA效应) 对检测的干扰
产生HAMA的原因： • 经常接触老鼠； • 肿瘤病人进行鼠单克隆抗体的治疗。
用鼠源McAb检测HBsAg时，如样品中有HAMA， 就会产生假阳性或假阴性。 非鼠源的PcAb可消除HAMA效应。
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(一)、HBsAg
双抗体夹心一步法的钩状效应
固 相 载 体
标记Ab
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固相Ab
Ag
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(一)、HBsAg
• 钩状效应是HBsAg一步法检测时不可避免的现象； • 由于钩状效应的存在，一步法检测HBsAg所得到的
检测信号无法确定其真实性； • 解决钩状效应的根本方法为固相抗体与抗原反应后
基因突变引起“a”决定簇内部一个或多个氨基酸置 换、缺失或插入，HBsAg 蛋白质氨基酸组成发生改 变，导致其抗原性产生变化。
变异率高 ，自然变异和免疫逃避，变异无地域性。
HBsAg抗原性发生改变，不能被野生型HBsAb所 识别。
不一定HBsAg抗原性发生改变后就一定漏检。很多时候野 生型与突变型是混合存在的，这种情况虽然有突变，同样可 以检出 。
• 检测技术
ELISA 化学发光 时间分辨荧光 免疫层析
• 检测方法
夹心法 竞争法
• 检测结果
定性 定量
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(一)、HBsAg
双抗体夹心法：两步法，一步法
双抗体夹心法模式：
Ab
Ag
固 相 载 体
标记Ab
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(一)、HBsAg
HBsAg抗原表位 1、共同决定簇： a（aa124-147）；
感染性疾病
非传染病
感染性疾病不一定会传染，而传染病一定是感染性疾病
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感染免疫
感染
致病 ？
病原体对机体的感染 机体的抗感染免疫作用
非特异性免疫 特异性免疫
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感染免疫
特异性免疫
抗 体
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人体内的5种抗体
H链：
,
,
,
,
.
(Alpha) (Gamma) (Mu)