细胞培养的过程注意事项
细胞培养的注意事项
细胞培养的注意事项细胞培养技术是现代生物技术的重要组成部分，它广泛应用于生物医学研究、药物筛选、病原体繁殖和疫苗生产等方面。
然而，在进行细胞培养时，需要注意一些细节问题，以确保细胞的生长繁殖和培养结果的稳定性。
下面，就对细胞培养中需要注意的事项进行介绍。
一、无菌操作细胞鲜活度非常敏感，细胞培养最重要的是保持无菌状态，避免细胞感染，而这需要在实验室中采取无菌操作。
在一些细胞培养实验操作中，需要消毒实验器材，瓶口、瓶盖和培养皿盖等操作工具。
要确保使用的培养基和培养液都是无菌的。
在培养细胞时候，尤其要注意勿触碰到其它无菌品或样品。
二、选择适当的细胞种类生物体内细胞种类繁多，每一种细胞都有其特定的培养条件。
因此，选择最适合自己研究的细胞类型，比如从同一物种的组织细胞、肿瘤细胞、细菌、病毒中选取。
在选择种类时，要注意是否具有比较稳定的特性，易于培养、扩增、观察，同时可用于大量研究和应用，如肝脏细胞、淋巴细胞、上皮细胞等。
三、培养条件和培养基培养细胞需要准备培养基和培养条件。
培养基中必须含有所需的营养成分，而不同类型细胞所需营养物也各不相同，所以要选择适宜的培养基，如黄草酸-蛋白酶消化培养基、麦芽糖琼脂-方解石培养基等。
同时，还应注意控制培养条件，如细胞的生长条件、生长周期、接种密度、污染、氧气浓度调节、CO2浓度，以及培养时温度、湿度、光线和气体供应控制。
四、防止细胞污染细胞培养容易受到细菌、真菌、病毒、和其他污染物的污染，这不仅对培养的细胞产生破坏，也会对实验研究造成很大的干扰。
在进行细胞培养实验之前，要先将操作工具、培养皿、试管等器具进行消毒，然后再通风室中进行操作。
同时，也应注意实验室的环境要保持干净，衣着要规范。
五、监测细胞状态细胞状态监测是细胞培养实验的重要环节，实验者需要不间歇地检查细胞的状态，如生长状况、细胞形态、生长周期、污染情况等，如果出现细胞损伤、变异、感染等，应及时将污染的细胞删除，更换培养基和器具，努力保证培养状态的良好.细胞培养是较为复杂的实验，它需要实验者细心谨慎，把握好每一个环节。
细胞培养中的注意事项
细胞培养中的注意事项
1.消毒操作
在进行细胞培养之前必须对工作台、培养器、培养物品、培养液等进行消毒处理，以避免细菌交叉污染。
必须使用丙酮或酒精将培养器表面彻底清洗干净。
2.注意温度
应选用温度恒定的培养箱或恒温槽进行培养，保持恒定的温度和湿度，避免细胞过冷或过热。
此外，还要注意避免温度突变，可能会影响细胞的生长和健康。
3.培养物的质量
该细胞的培养必须选用优质培养物，以保证细胞的品质和生长状态。
如果培养物质量不好，细胞的健康和增殖速率都会受到影响。
4.培养物的数量
在培养细胞时，必须确保培养物的数量和容积适当，以保证细胞的充分增长和合理分裂，以及抵御微生物和腐败的攻击。
5.注意操作技巧
在进行细胞培养之前一定要注意自己的操作技巧，保持双手、工具和培养器的干净，避免污染，同时避免因不当操作而对细胞造成损害。
6.培养时间的控制
在进行细胞培养时，必须严格控制培养时间，避免过度培养，以影响细胞的生长和健康。
同时也要注意密切观察生长状态，及时调整培养时间。
7.注意细胞的来源
在使用细胞进行培养的时候，必须注意细胞的来源，切勿使用受过辐射或有感染性的细胞。
同时避免使用已经失去生长能力的细胞进行培养。
8.垃圾清理
在进行细胞培养完成之后，必须将培养器和培养物进行垃圾清理处理，保持实验室的清洁卫生。
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制
细胞培养过程中的注意事项及试剂配制一.常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。
配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。
培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（-80℃）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。
必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、CO孵箱（孵育培养物）、2水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱（放置serum和培养用液）。
二.无菌操作无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％过氧乙酸擦拭。
2.CO孵箱（培养箱）灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者20.5％过氧乙酸，再用紫外灯照射3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4.实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。
实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。
2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75％酒精棉球擦净双手。
无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面2.靠近酒精灯火焰操作。
3.器皿使用前必须过火灭菌4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。
5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。
如吸管不能碰到废液缸。
6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。
三.器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：(1)新的玻璃器皿的洗消：1.自来水刷洗，除去灰尘。
2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、砷等物。
3.刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
细胞培养的注意事项
相关疾病:每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢？早走早脱身，从此专注黑生物1. 严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干。
2。
不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套。
3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4。
水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换（灭菌水加进去）.5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外，超净台是用完就开。
6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
非科班出身经验分享1. 别怕浪费。
枪头什么的只要有可能污染就换,如果用酒精灯就什么都稍微烤一下,别直接放到火上，离一段距离。
2。
动作要既轻柔又有力。
动作太重会有一堆一堆的气泡，动作太轻就吹不下来。
. 刚开始的时候吹细胞太痛苦了,稍微一下就起泡.后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来,留一点,枪的最头部尽量深的在液面以下。
3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍，包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手.4。
实验结束后对实验台的消毒.紫外什么的，用前用后都照个30 分钟。
5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。
比如实验台，又比如培养箱内部。
6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定.培养基的话最多最多不要超过2 天就要换一次.细胞可以不传代，但是培养基是一定要换的。
大概就是，不该碰的地方不碰，有影响的地方少碰；该使劲的时候绝对不含糊,不该使劲的地方一定忍住。
如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯，所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。
如果是高级台子就多用酒精喷喷。
感觉生物的实验，心疼钱就还是不要做了。
最后一点点绝对非科班的经验。
癌细胞真是坚挺。
有一次实在是不想传了，放了 5 天吧，感觉都长了几层出来，培养基都黄了.抱着试一试的心情传了一次，又坚强的活过来了。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是在体外培养和维持生物细胞生长和繁殖的一种技术，它是生物学、医学研究和药物研发等领域的重要实验手段。
细胞培养的过程需要遵循一定的步骤和注意事项，以确保细胞的正常生长和繁殖。
细胞培养的详细过程如下：2.细胞分离：将组织或细胞样品分离，去除多余的组织或细胞，获得单个细胞的悬浮液。
分离的方法包括酶消化、机械或化学分离等。
3.细胞培养基准备：准备培养基，培养基的配制根据细胞的要求而定，可以是无血清培养基、低血清培养基或含血清的培养基。
培养基提供了细胞所需要的营养物质和生长因子。
4.细胞接种：将细胞悬浮液接种到含有培养基的培养皿或培养瓶中，密度通常在1×105至1×106个细胞/mL之间。
接种后，培养皿或培养瓶需放入培养箱中，设定适当的温度、湿度和气体环境。
5.细胞培养条件控制：细胞的生长和繁殖需要适宜的培养条件。
常规的培养条件包括37℃、5%CO2和95%湿度。
通过调节培养基的pH值、温度和培养箱内的CO2和湿度等参数，来维持良好的培养环境。
6.细胞观察和培养基更换：培养过程中，需要定期观察细胞的生长状态和形态，通过显微镜观察细胞的形态变化和细胞层的覆盖率等指标。
根据需要，定期更换培养基，以确保提供足够的营养物质和维持适宜的细胞密度。
7.细胞传代：当细胞达到充分生长的状态时，需要进行传代，即将细胞从当前培养皿或培养瓶中移至新的培养皿或培养瓶中，以保证细胞的健康和生长。
用一句话总结上述细胞培养的过程就是从细胞分离到细胞培养，并按照一定条件进行观察和传代。
在进行细胞培养时，需要注意以下事项：1.无菌操作：细胞培养需要在无菌条件下进行，避免细胞被异物或外源性微生物污染。
操作前，材料和设备需要进行消毒。
2.培养基筛选：根据细胞的特性和需求选择合适的培养基，确保细胞能够获得必要的营养物质和生长因子。
3.冻存细胞库：定期将细胞进行冻存，以备后续使用，以避免病毒污染或细胞失活。
请简述细胞原代培养(组织块培养法)的实验步骤及注意事项
请简述细胞原代培养(组织块培养法)的实验步骤及注意事
项
细胞原代培养也被称为组织块培养法，是一种从组织中分离和培养原代细胞的方法。
以下是细胞原代培养的实验步骤和注意事项：
1.组织分离：首先需要从生物体中收集组织样本，如肝、肺、心脏等。
样本需要通过消化或机械分离等方法分离出单个细胞或小组织块。
消化方法可以使用胰酶或胰蛋白酶等酶类来消化样本，机械分离则需要使用切割器或剪刀等工具。
2.细胞培养：分离出的组织块需要在含有营养物质和生长因子的培养基中培养。
在培养过程中需要注意不要过度培养，否则会导致细胞老化或死亡。
3.传代：当细胞达到一定密度时，需要将其分离并移至新的培养皿中进行传代，以维持细胞的生长和繁殖。
注意事项：
1.细胞的培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞污染。
2.选择适当的培养基和生长因子，以保证细胞的生长和分化。
3.细胞培养过程中需要定期观察细胞的形态和生长情况，以及细胞浓度，以便及时进行传代。
4.细胞应该在体外保持与体内相似的环境和温度，以提高细胞的存活和生长率。
5.尽量使用新鲜的组织样本，避免长时间冷藏或保存，以保证细胞质量和数量的优良。
细胞培养注意事项
细胞培养注意事项细胞培养是一项非常复杂和关键的实验技术，需要仔细选材、操作，使用特殊的设备和培养物质来维护和生长细胞。
以下是细胞培养方面的一些注意事项。
2.清洁卫生：细胞培养需要在无菌环境下进行，所以在实验同时需要注意整个实验室的清洁和卫生。
摆放培养皿前要用70%酒精消毒，实验前需要穿着实验服、手套以及戴着口罩和帽子，以避免细菌、病毒和其他污染物的污染。
3.玻璃器皿消毒：细胞培养中使用的各种玻璃器皿比如培养皿、移液管和试管等都需要高温干烤，以达到无菌状态，避免细菌的污染。
4.培养基的制备：培养基是细胞培养的重要环节，制备时应该按照说明书和协议的要求来配制各种含量的物质，这个过程中要避免任何可能的污染，同时要保持连续性的搅拌，以达到适当的均匀度。
5.细胞的处理：处理细胞的时候也需要注意无菌操作，用消毒工具取出细胞，避免使用手指抓取细胞，同时需要正确的切割和品种选择，否则会影响细胞分化和生长的快速性。
6.维护培养环境：在细胞培养过程中，需要保持适当的pH、温度、湿度和氧气含量，不同类型的细胞需要不同的培养条件，只有维持好了培养环境，细胞才能健康有效的生长。
7.对细胞进行质检：在细胞培养的过程中，每天需要对细胞进行质检，观察细胞的数量和形态、细胞的状态与否，在有必要时需要决定是否要加入新的元素来维护生长。
8.记录培养记录：每项实验操作完成后，都要详细记录实验的步骤、培养基的成分、培养条件和细胞的生长状况，以便可以及时分析可能出现的问题并作出相应的调整。
总之，细胞培养是一个耗时、复杂、困难的过程，它需要小心谨慎的选择，不断调整并做好记录。
坚持遵守这些注意事项和要求，才能保证细胞培养实验最好的效果和结果。
细胞培养详细过程及注意事项
细胞培养详细过程及注意事项细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。
细胞培养目的与用途1、科学研究：药物研究开发与基础研究药物研究与开发(1) 新药筛选：如化学合成药物药效研究、中药有效成分筛选与鉴定等。
(2) 疫苗研究与开发：如病毒性疫苗的研究与开发（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(3) 基因工程药物研究与开发：如干扰素研究与开发，细胞生长因子研究与开发等。
(4) 细胞工程药物研究与开发：生物活性多肽研究与开发，人参皂甙、紫杉醇等生物活性成分研究与开发。
(5) 单克隆抗体制备：包括诊断用单克隆抗体，治疗用单克隆抗体。
基础研究(1) 药物作用机理(2) 基因功能(3) 疾病发生机理2、生物制药(1) 疫苗生产：如病毒性疫苗（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、肿瘤疫苗(多肽疫苗)等。
(2) 基因工程药物生产：如在临床医学中具有治疗价值的一些细胞生长因子如干扰素、粒细胞生长因子、胸腺肽等(3) 诊断用和药用单克隆抗体生产(4) 细胞工程药物生产：生物细胞内的一些生物活性多肽，生物活性物质等细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养是一种重要的实验技术，它有助于我们了解细胞生物学、生理学以及疾病的发生和发展机制。
以下是细胞培养的步骤以及注意事项：
步骤：
1. 细胞的收集：从组织样本中得到细胞，比如从动物、植物或
人类的器官中取得。
2. 细胞的处理：将细胞进行脱离、切割、分离等处理，从而得
到单个的细胞。
3. 细胞的培养基准备：选择适合细胞类型的培养基，加入营养
物质和生长因子以维持细胞的生长和分裂。
4. 细胞的接种：将处理好的单个细胞加入到培养基中，并放置
于培养箱中，控制其温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境因素。
5. 细胞的观察和维护：观察细胞的形态、生长速度、分裂情况等，同时需要定期更换培养基、检测细胞的纯度和健康状态。
注意事项：
1. 保持无菌环境：细胞培养需要在无菌环境下进行，防止培养
基和细胞被细菌、真菌等污染。
2. 确保细胞的纯度：细胞培养需要保证细胞的纯度，避免异质
性细胞或细胞株的混淆。
3. 控制培养环境：细胞培养需要控制培养环境，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳等，以确保细胞的正常生长和分裂。
4. 定期更换培养基：培养基中的营养物质和生长因子会随着时间的推移而减少，因此需要定期更换培养基，以维持细胞的生长和分裂。
5. 避免过度培养：过度培养会影响细胞的健康和生长速度，因此需要在适当的时候停止培养，或将细胞进行冻存以备后续使用。
细胞培养的过程及注意事项
36细胞培养旳过程及注意事项细胞旳培养过程及注意事项；根据培养过程中与否需要分割培养物进行再培养而将细；一、原代培养；（一）过程；原代培养旳基本过程包括取材、培养材料旳制备、接种；1.组织块培养法；(1)基本操作过程；1）、用培养液湿润所取组织材料, 并用锋利旳眼科剪；2）、用湿润旳吸管吸取切碎旳组织块, 清清吹到培养；3）、将培养瓶翻转, 使瓶底朝上, 在种植了组织块一；4）、将种植了组织块细胞旳培养过程及注意事项根据培养过程中与否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。
一、原代培养（一）过程原代培养旳基本过程包括取材、培养材料旳制备、接种及培养等环节。
原代培养旳措施诸多, 基本和最常用旳是组织块培养法和分离细胞法。
1.组织块培养法(1)基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料, 并用锋利旳眼科剪将附在其上旳脂肪和结缔组织清除洁净。
再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利旳眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS或Hanks液漂洗多次, 直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。
2）、用湿润旳吸管吸取切碎旳组织块, 清清吹到培养瓶皿中, 并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上, 量不要过多, 要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转, 使瓶底朝上, 在种植了组织块一侧旳对侧面加足培养液, 勿使组织块与培养液接触, 塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块旳一侧朝上, 静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1 h到3h后翻瓶, 使贴壁旳组织块浸没与培养液中, 静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液, 或者根据培养瓶种颜色旳变化确定换液时间。
2.注意事项1）、组织块接种后旳前3天, 从组织块向外迁徙旳细胞数很少, 组织块旳黏附不牢固, 在观测和移动旳过程中, 注意不要引起液体旳振荡。
要防止常常翻动和振动, 否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。
2）、加入旳培养液不适宜过多, 防止浸泡旳组织块受轻微旳波动而脱落下来。
培养细胞的注意事项是什么
培养细胞的注意事项是什么培养细胞是一项非常重要的技术，在生物学、医学研究以及生物制药等领域起着至关重要的作用。
合理、有效地培养细胞不仅可以促进细胞生长和增殖，还可以帮助我们更好地了解细胞的性质和功能。
在进行细胞培养时，有一些注意事项需要我们遵循，以确保实验结果的准确性和可靠性。
以下是一些培养细胞的注意事项：1. 无菌操作：细胞培养必须在无菌条件下进行，以避免外源菌的污染对培养过程和结果的干扰。
在实验室中，使用无菌环境下的工作台、培养皿和培养液，戴手套，进行灭菌操作等步骤是非常重要的。
2. 细胞的起始材料：细胞培养的起始材料可以是原代细胞或细胞株。
在选择细胞时，要确保其来源可靠，并且具有所需的性质和特征。
细胞株的鉴定也是非常重要的，可以通过遗传学和生物学方法来确认细胞的特异性。
3. 培养基的选择：培养基的选择应根据细胞类型和要求的特定性质而定。
培养基中应包含必需营养物质和生长因子，以支持细胞的正常生长和增殖。
一般来说，培养基应含有适量的能量源如葡萄糖，并且要经过平衡和调整，在pH、渗透压和离子浓度等方面符合细胞生长的要求。
4. 细胞的传代：细胞培养过程中，细胞的传代是必不可少的。
细胞传代过程中，要注意细胞密度的控制，以避免细胞过度密集导致的营养物质和氧气不足，或者产生细胞毒性的代谢产物。
同时，要保证细胞传代后的纯度和稳定性。
5. 操作技术：进行细胞培养时，需要掌握一系列的操作技术。
包括细胞的各类传代方法、细胞分离和冻存技术、细胞培养皿的接种和交换、培养液的更换和添加等。
操作技术的正确与否，直接影响到细胞的生存和繁殖。
6. 培养条件的控制：细胞的培养过程中，温度、湿度、CO2浓度等环境因素对细胞的生存和生长有着重要的影响。
通常情况下，细胞培养室内的温度应该保持在37左右，湿度应维持在90%以上，CO2浓度视培养细胞类型而变化，一般在5%到10%之间。
7. 污染的预防和处理：细胞培养中的污染对实验结果有很大的影响。
细胞传代铺板冻存复苏等细胞培养相关操作步骤和注意事项
细胞传代铺板冻存复苏等细胞培养相关操作步骤和注意事项细胞传代：细胞传代是指将已经培养得到的细胞进行继代，以维持细胞的健康生长和增殖。
具体步骤如下：1.预备培养基和消化液：准备需要的培养基和细胞消化液，将培养基预暖在37摄氏度保温箱中。
2.消化细胞：将已经生长到80-90%的细胞培养皿放到细胞消化液中消化，消化时间根据细胞的种类和生长状态而定。
消化完成后，在显微镜下观察，确保细胞基本脱落。
3.细胞计数与离心：将细胞消化液转移到离心管，进行细胞计数。
根据所需细胞数量计算所需消化液的体积，并用预暖的培养基配置所需的细胞悬液。
离心细胞消化液以去除细胞消化的消化液。
4.铺板：将计算好的细胞悬液转移到铺板中，轻轻摇晃铺板使细胞均匀分布。
放置在培养箱中，培养条件根据细胞类型而定。
注意事项：-消化时间不宜过长，否则细胞会受到过度损伤。
-细胞计数时要使用显微镜和相关计数仪器，确保准确性。
-铺板时要轻轻摇晃铺板以均匀分布细胞，避免气泡产生。
冻存：冻存是将细胞保存在低温条件下，以备日后使用。
具体步骤如下：1.细胞准备：选择处于对称生长期的细胞进行冻存。
对细胞进行消化并离心，将细胞沉淀取出至干燥的离心管。
2.冻存液准备：根据细胞的特性和保存要求选择合适的冻存液，如含有二甲基亚砜（DMSO）和甘油的培养基。
将冻存液预暖。
3.冻存管装填：将已洗净的冻存管放入液氮中预冷，稍微干燥后将细胞沉淀均匀加入冻存管中。
用塑料冻存盖或冷却后的金属冻存夹紧。
4.冷冻：将装有细胞的冻存管放入-80摄氏度的深冷冰箱中，预冻24小时到48小时。
等冷冻固化后将管子迁移到液氮冷冻罐中。
注意事项：-使用合适的冻存液，避免对细胞造成过度伤害。
-在严格消毒和无菌条件下进行冻存操作。
-细胞冷冻时，必须迅速并且均匀降温，以避免冷冻诱导的细胞损伤。
复苏：复苏是指冻存的细胞被解冻、恢复生长和增殖的过程。
具体步骤如下：1.细胞解冻：将冻存的细胞管迅速取出，直接放入37摄氏度的水浴中，轻轻摇动直至融化。
细胞培养的方法及注意事项
细胞培养的方法与注意事项细胞培养是将动物某一器官、组织如肝脏、肺、肾脏等取出，将其分散成单个细胞，在人工条件下，使之存活、生长和增殖的技术。
细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养：第一次培养，将培养物放置在体外生长环境中持续培养，中途不分割培养物，不更换培养物的生长器皿的培养过程。
传代培养：在培养过程中培养物分裂生长，长满培养空间，细胞之间相互接触而发生接触抑制，生长速度减慢甚至停止。
在这种情况下，需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿中，再进行培养一、原代培养的方法：1、取材对于水产动物，取材的方法为：无脊椎动物取材用消毒海水或淡水暂养24小时；用酒精棉消毒体表；解剖需培养的组织和器官，放到消毒液中处理一段时间；取出，用灭菌BSS清洗3次鱼的取材用酒精棉消毒体表；打开腹腔（注意不能碰破肠道）；体表组织，处理方法同无脊椎动物。
原代培养过程技术路线图：①准备工作：实验台面用紫外灯照、70%酒精棉球擦；所用各种器械、培养液无菌；操作者用新洁尔灭和酒精擦手，穿衣、戴帽、口罩；实验动物体表用酒精消毒或放入无菌海水中。
②取材：在无菌条件下取出需要培养的器官或组织；如果是有菌的器官或组织需进行灭菌处理；取材要准确③培养材料的制备：欲培养的器官或组织洗去血污，剔掉多余成分。
剪成1mm3大小，用于外置块培养。
用胰蛋白酶消化，终止消化后，机械法吹打组织块，筛网过滤，过滤液离心1000rpm,10min，用培养液悬浮细胞，计数细胞密度，用于细胞培养。
④接种：外植块：用吸管将小的组织块均等地在培养瓶底排列好；反过培养瓶加入培养基，或5-6h后再加培养基；放入CO2培养箱培养；2-3d更换培养液或颜色变黄时更换；记录、每2-3d观察。
结果：1-3d，细胞从外植块中迁移出来分离细胞：将已分散的细胞悬液加到培养瓶或培养板中，并加少量培养液,细胞浓度为105-106个/ml。
不能少于5000个。
24h后加足培养液（防漂浮）。
细胞培养中的注意事项
细胞培养中的注意事项细胞培养是现代生命科学研究中非常重要的实验技术之一，它被广泛应用于细胞生物学、生物医学研究、药物筛选等领域。
在进行细胞培养实验时，研究者需要严格遵守一些注意事项，以确保实验的可靠性和结果的准确性。
本文将针对细胞培养中的注意事项进行详细的介绍。
首先，实验者需要使用无菌技术进行细胞培养。
细胞在体外培养时非常容易被外界的微生物污染，因此在进行细胞培养实验前，需要准备好无菌培养物料和无菌操作器具。
实验者应严格遵守无菌技术操作规范，包括实验装置、培养器皿、培养液和培养工具等必须经过高温高压灭菌处理，同时实验操作者必须佩戴无菌手套、口罩和无菌操作衣物，以防止外界微生物的污染。
其次，实验者需要定期检测和维护细胞的纯度。
细胞培养中，细胞的纯度是一个非常重要的因素。
实验者需要定期检测细胞的纯度，并确保细胞质量的稳定。
此外，实验者还需要定期检查细胞的形态和生长状态，以了解细胞是否受到了外界或内部因素的干扰。
对于有异质细胞的培养物，实验者需要定期进行亚克隆化处理，以确保研究结果的准确性。
另外，在细胞培养中，控制细胞的传代次数也是十分关键的。
细胞的传代次数过多会导致细胞分化甚至突变，影响研究结果的可靠性。
因此，实验者需要根据细胞类型的特性和生长速度，合理控制细胞的传代次数。
通常情况下，当细胞培养达到80% - 90% 的密度时，进行传代操作，以保证细胞的健康状态和繁殖能力。
此外，细胞培养液中的温度、湿度和气体条件也是需要注意的。
细胞的生长需要适宜的温度、湿度和气体成分。
通常情况下，细胞培养箱中的温度维持在37°C左右，湿度维持在95%，并通过调整培养箱中的CO2气体浓度来维持适宜的酸碱平衡。
实验者需要定期检测和调整这些条件，以保证细胞的正常生长和稳定性。
对于细胞培养中常见的问题，研究者需要及时解决。
细胞培养过程中，会遇到各种问题，比如细胞的不正常增殖、细胞的凋亡和细胞的染色体异常等。
当发现这些问题时，实验者需要尽快排除干扰因素，并及时采取措施来解决问题。
细胞培养注意事项(入门级)
细胞培养注意事项（入门级）总的原则：无菌操作、保证细胞培养环境的稳定性按时间顺序整理1、细胞房和生物安全柜（或超净工作台）先开紫外照射30min。
作用：对环境灭菌（空气）。
（备注：如果着急，至少也要开15分钟）在做实验之前考虑好需要哪些物品。
开始照射之前，将所需要用到的物品都放到生物安全柜（或超净工作台）里面。
常用移液枪或电动移液器等，需要在工作台上放置一套专用设备。
细胞培养箱一般都已经调整好。
定期留意一下二氧化碳是否足够。
不够及时更换。
2、显微镜需要定期消毒酒精擦拭。
注意：显微镜一般都放在细胞房。
3、进入实验之前，首先给自己带上拖鞋、头套，口罩，实验服，手套（手套带双层）。
注意：手套要将袖口套进去。
实验服、拖鞋最好是细胞房专用。
4、开始操作之前先观察细胞。
首先观察细胞培养液的颜色。
现在的细胞培养液通常都放有酸碱指示剂（绝大部分是酚红）。
细胞在培养生长过程中，不断在培养液上清中累积酸性物质，时间长了，培养液变为黄色（同时培养液中营养物质耗尽）。
其次镜下观察细胞的生长状态是否良好，是否需要传代。
如果生长状态不好，需要对培养液进行调整（一般是加大血清浓度）。
过于密集出现大片融合或太密集而导致细胞脱落，则进行传代。
如果长势良好，且细胞培养液颜色未发生变化，可以酌情进行1/2、1/3、1/4换液，也可以全换液。
总之，视细胞生长情况而定。
5、细胞培养预准备：首先是准备各种溶液。
第一是配制溶液过程中要用到的水。
水用纯水，高压灭菌之后，再去内毒素。
去内毒素方法很多，最简单可以放在烘箱180度3小时。
或者过去内毒素的柱子后，高压灭菌。
第二，各种溶液灭菌：抗生素用去内毒素水配制后，直接过滤除菌（过0.22u滤头）。
可以用一次性无菌注射器过一次性0.22u滤头。
现在用的培养液，如果是商业化液体培养基，不用处理。
如果是粉末，需要用去内毒素水在生物安全柜（或超净工作台）进行配制，再过滤除菌。
可以先配浓缩液（如10×），过滤除菌后。
细胞培养实验的技巧与注意事项
细胞培养实验的技巧与注意事项细胞培养实验是生物学和医学研究中常用的一种实验方法，用于研究细胞的生长、分化和功能等。
良好的细胞培养实验技巧和适当的注意事项对于实验结果的准确性和可重复性至关重要。
本文将介绍一些常用的细胞培养实验技巧和注意事项。
1. 无菌操作在进行细胞培养实验前，必须确保操作环境和实验材料的无菌。
操作前需使用酒精和紫外灯对操作台面、培养器皿和工具进行消毒。
在实验室中穿戴无菌手套，注意不要触碰任何非无菌物品，以防止细菌、真菌等的污染。
操作时要注意使用一次性材料和无菌技术，尽量减少细菌和真菌的感染。
2. 细胞培养基和培养条件的选择选择适合细胞类型的培养基非常重要。
常见的培养基包括DMEM、RPMI 1640等。
培养基中常添加血清、生长因子和抗生素等物质来提供细胞所需的营养物质和生长环境。
同时，温度、湿度和二氧化碳浓度等也是细胞培养条件的重要因素。
通常情况下，细胞培养温度为37摄氏度，湿度保持在95%以上，CO2浓度维持在5-10%左右。
3. 细胞传代的技巧细胞在培养中会不断增殖，超过一定密度后就需要传代。
细胞传代的技巧非常重要，可以避免细胞的老化和突变。
传代前需用无菌PBS缓冲液冲洗细胞，用胰酶或胰酶-EDTA溶液将细胞从培养器皿中脱落。
注意在传代过程中避免剪伤细胞群，以防止细胞群内的DNA、RNA和蛋白质的损失。
传代后，新的细胞培养基和培养条件应与原来一致，以保持细胞的正常生长和功能。
4. 细胞冻存与解冻技巧细胞冻存是为了长期保存和共享细胞系，同时也是培养细胞的一种常用方法。
在细胞冻存前，需要选择适合的冻存液，一般为含10%-20%细胞培养基和10%-20% DMSO的液体。
将细胞和冻存液混合后，采用慢速冷冻的方法冷冻细胞。
解冻时，需要快速将细胞转移到预先加热的培养基中，尽量避免细胞因冻存和解冻过程中的应激而死亡。
5. 细胞实验中的质控与记录在进行细胞培养实验过程中，质量控制和详细的记录非常重要。
培养细胞的注意事项
一、无菌操作细胞培养最看重的就是无菌操作，无菌操作是细胞培养是否成功的关键点。
1、使用前用75%的乙醇擦拭细胞间的桌面、超净台、孵箱和离心机等；紫外照射细胞间和超净台30分钟以上才可以进入使用。
2、进入细胞间必须穿上隔离服或者细胞间专用的白大衣，戴上手套和口罩，换上拖鞋，严格意义上来说，帽子也是要带的。
除了隔离服，其他穿着物品最好一次性使用。
3、凡是放入超净台中的不是一次性使用的物品事先都需要经过高压灭菌；不能进行高压处理的物品也需要经过75%的乙醇消毒。
包括酒精灯、吸管、移液器、试管架、培养皿、废液缸等。
4、操作过程中尽量接近酒精灯；用镊子拿取枪头、离心管、吸管等物品时，避免碰到使用端；不要在开口器皿的上端进行操作。
5、细胞间的设计都是一层层的隔间，每一层隔间的拉门都必须关好；当有人在超净台工作时，其他人员不允许进入操作区域。
（外流式及垂直式超净台结构和原理示意图）二、培养基1、培养基的选择依细胞种类而定。
如果是从别的实验室借来的细胞，最初阶段一定要保持细胞原有的培养条件；特殊种类的细胞，比如内皮细胞，可以借鉴网上培养成功的条件，添加一些特定成分。
2、液体培养基的保存条件应是冰箱4度冷藏。
小六儿见过有的大实验室细胞量多，一次性购买的培养基瓶数也多，有些人可能觉得-20冰箱保存时间会更久一些。
但是经过冷冻后的培养基再溶化时，你会发现培养基的颜色发生变化，颜色变深，这就是培养基的PH值升高了。
3、培养基中都含有大量的谷氨酰胺，用来合成细胞生长所需要的核酸和蛋白质。
但是谷氨酰胺在溶液中不稳定，保存4周后的培养基需要重新加入谷氨酰胺。
所以尽量不要大批量购买培养，也不要一次配太多的培养基。
4、细胞适合的培养基PH值是7.2-7.4，偏高或偏低都不好，但相对于碱性条件而言，细胞更耐酸。
原代细胞对PH值的变化很敏感，而永生性细胞相对来说忍受力更强一些。
5、造成皿或瓶内培养基PH值变化的原因有很多：细胞增殖速度的快慢、孵箱内二氧化碳的浓度不准确、培养瓶的盖子拧紧或者发生了污染。
细胞培养的一般过程
细胞培养的一般过程一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。
准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。
二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中，这一过程称为取材。
如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。
机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。
理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。
取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。
取组织时应严格保持无菌，同时也要避免接触其他的有害物质。
取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。
由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。
三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。
如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。
如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。
细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由酚红指示剂指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。
一般原代培养进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。
过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。
细胞长满瓶底后要进行传代培养，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。
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细胞的培养过程及注意事项根据培养过程中是否需要分割培养物进行再培养而将细胞培养分为原代培养和传代培养。
一、原代培养（一）过程原代培养的基本过程包括取材、培养材料的制备、接种及培养等步骤。
原代培养的方法很多，基本和最常用的是组织块培养法和分离细胞法。
1、组织块培养法(1)基本操作过程1）、用培养液湿润所取组织材料，并用锋利的眼科剪将附在其上的脂肪和结缔组织去除干净。
再用平衡液（PBS）或Hanks液漂洗；用锋利的眼科弯剪将组织块剪成小块；再用PBS 或Hanks液漂洗多次，直至液体不浑浊、无油滴、清亮为止。
2）、用湿润的吸管吸取切碎的组织块，清清吹到培养瓶皿中，并将其按一定间距均匀放在培养瓶底壁上，量不要过多，要将组织块切面贴在培养瓶底壁上；3）、将培养瓶翻转，使瓶底朝上，在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液，勿使组织块与培养液接触，塞紧瓶塞；4）、将种植了组织块的一侧朝上，静置于37℃培养箱中；待组织块贴壁1h到3h后翻瓶，使贴壁的组织块浸没与培养液中，静置；5）、每隔2到3天更换一次培养液，或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。
2、注意事项1）、组织块接种后的前3天，从组织块向外迁徙的细胞数很少，组织块的黏附不牢固，在观察和移动的过程中，注意不要引起液体的振荡。
要避免经常翻动和振动，否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。
2）、加入的培养液不宜过多，避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。
3）、用组织块培养时，要及时观察，当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞，因为已漂浮的组织块和那些细胞碎片已经死亡，它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长，要及时清除。
4）、为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上，可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。
细胞培养过程中，胶原中的促细胞贴附因子先吸附于培养瓶底壁上，悬浮的圆形细胞再与已吸附有促贴物质的底壁附着。
2、分离细胞培养法—贴壁型细胞培养（1）基本操作过程1）、首先用细胞分散法收获细胞，随时吸取少量消化液在镜下观察，并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞，采取终止消化措施。
用筛网滤掉未消化的组织块。
2）、低速离心细胞悬液，弃掉上清液，加入含血清的培养液，轻轻吹打制成细胞悬液，计数并用培养液调整细胞密度。
3）、根据培养的细胞类型和实验要求，用吸管吸取一定量的细胞悬液，加到培养瓶中。
对于需要特殊底物的细胞，要先将底物涂一层于培养瓶皿底壁，然后接种细胞。
4)、将培养瓶放入37℃恒温箱中培养。
5）、每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。
（2）注意事项1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，虽然被分散成单个细胞，但它们之间的互相影响还是存在的，而且这种影响对细胞能否存活是非常重要的。
在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。
如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，虽然营养物质很充足，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。
如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。
2）原代培养时初始培养在组织分散和分离细胞时细胞可能会受到严重的损伤。
适当增大原代培养接种的细胞密度，给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用，会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。
待细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。
3）由于细胞之间的相互的内在联系被打破，分离细胞在体外培养时经历的生存环境改变很大，在体外存活和生长的难度相应增加。
对于贴壁依赖性细胞来说，尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。
可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养3h到5h，由于细胞悬液中带有少量培养液，细胞即可以维持存活，又可以很快接触到培养瓶底壁，是细胞迅速黏附于底物，待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。
3、分离细胞培养法—悬浮型细胞培养（1）操作过程1）制备细胞悬浊液，计数并用培养液调整细胞密度。
2）在培养皿中加入足够的培养液。
3）将欲接种的细胞接种到培养器皿中。
4）在培养皿内放入一个有聚四氟乙烯包被的磁棒。
将培养皿封口，送入恒温箱内。
在磁力搅拌器上边搅拌边培养。
若接种培养瓶或试管中，封口后可将培养器皿固定在恒温摇床上，边摇动边培养，无需放置磁棒。
有些细胞也可以不用磁棒或磁力搅拌器，也不必使用恒温摇床，接种于预先用硅脂包被的培养器皿内直接在培养箱中静置培养即可。
5）培养液略呈黄色换液。
吸出部分旧培养液，加入新鲜培养液即可。
（2）注意事项1）进行悬浮细胞培养时必须保持细胞的悬浮状态。
可以通过增加培养液的黏度来帮助细胞呈悬浮状态，如给培养液中加入低浓度的透明质酸复合物。
在有搅拌装置的培养器皿内加入培养液是，以5ml为最低限度，否则搅拌时会产生气泡对细胞造成伤害。
使用这种方式需注意勿使搅拌速度过快，否则即可使培养液溢出又容易造成污染。
如果培养液的量在5ml以下，可以采用旋转瓶培养。
给悬浮培养的细胞换液时要注意不要吸出细胞。
2）能够进行悬浮培养的细胞，其生命力一般都比较旺盛，体外分裂增殖的速度较快，营养成分消耗大，换液时间隔一般较短。
（二）原代培养的注意事项1、在原代培养的1天到2天内，要特别注意观察是否有细菌、真菌的污染，一旦发现，要及时清除，防止造成其它细胞的交叉感染；2、随着培养的进程，培养液中的营养物质被逐渐的消耗，营养成分越来越少，细胞代谢产物越来越多，有细胞呼吸过程中释放出来的CO2及其它产物如乳酸、丙酮酸等也逐渐增加。
随着酸性物质的增加，培养液中的pH值越来越低，培养液的颜色也越来越黄。
因此，在细胞培养的过程中，要注意培养液颜色的变化，并根据培养液的颜色来决定换液时间。
正常情况下，培养液呈桃红色；当培养液呈橙黄色时，细胞一般生长情况良好；呈淡黄色时，可能培养时间较长，营养不足，死亡细胞较多；呈紫红色时，可能是细胞生长状态不好或已经死亡。
所以，应在培养液略黄时吸出部分旧培养液，然后补加同等数量的新鲜培养液。
换液过程中，不要吸出细胞，不要使培养液溢出培养瓶，避免各种微生物的污染。
换液时，应将培养液事先预温至37℃。
一般培养一天，组织细胞即可在培养瓶皿底壁黏附并贴壁生长。
2天到3天后，细胞恢复增殖活动。
随着培养时间的延长，细胞数量逐渐增多，消耗的营养物越来越多，需要换液的时间越来越短，当细胞逐渐长满培养瓶壁并形成一单层细胞时，细胞之间相互发生接触和联系，逐渐产生接触抑制作用，培养物生长速度减慢。
当培养物最后形成一层完整的细胞单层时，生长几乎停止。
在细胞高达80%融合时就需要进行传代了。
二、传代培养(一)传代培养的过程1、组织块培养物的传代过程基本操作过程：（1）将原代培养物连同底物盖玻片一同取出，置于无菌的培养皿上。
（2）用刀将培养物分割，刮去多余的部分，剩余继续培养的部分。
一般是分割刮去组织块外围的部分组织，留下中央的部分组织继续培养。
或部分分割并挑去组织块，留下迁移出来的细胞于底物盖玻片上继续培养。
也可以将组织块挑出，再种植于新的底物盖玻片上继续培养。
（3）给剩余的培养物加上培养液，放入培养箱中继续培养。
2、分离细胞培养物—贴壁型细胞的传代过程：有两项核心工作：一是分割培养物，二是再接种。
基本操作过程：（1）取出培养瓶，打开瓶盖，用吸管吸出旧的培养液。
（2）用无Ca2+、Mg2+的平衡盐溶液轻轻漂洗培养物1次到2次，洗去残余血清后弃去平衡盐溶液。
（3）在培养皿内加入胰蛋白酶溶液，室温下消化5min到15min显微镜下观察细胞突起缩回近似圆形、细胞之间的间隙增大时停止消化。
（4）吸管吸去消化液后立即加入含血清培养液或蛋白酶抑制剂，抑制胰蛋白酶的活性，使消化终止。
（5）用弯头吸管吸取培养皿内的培养液反复吹打瓶皿底壁，使已经消化的细胞脱离瓶皿底壁。
（6）低速离心，弃去上清液。
（7）用新鲜培养液将细胞沉淀重新悬浮，计数并调整细胞密度。
（8）根据传代目的将细胞悬浮液接种到一个或多个新的培养器皿中。
3、分离细胞培养物—悬浮型细胞的传代过程基本操作过程：（1）将培养物移入离心管低速离心。
根据传代目的将细胞悬液接种在一个或多个新的培养皿中。
（2）用吸管吸去上清液，加入新鲜培养液使细胞沉淀重新悬浮（3）根据传代目的将细胞悬液接种在一个或多个新的培养皿中。
（4）加足培养液，加盖封口，加入恒温箱中继续培养。
（二）传代培养的注意事项1、离体培养的细胞生命力比较脆弱，因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的80%以前，不要急于传代。
2、首次传代，由于原代培养中各种类型的细胞常混杂生长，传代时不同细胞又不同的消化时间，因而要根据需要注意及时处理。
3、对贴壁细胞消化后的吹打过程要有序进行，要从一边开始到另一边结束，尤其是器皿的四角处，确保瓶皿底壁各处的细胞都被吹打脱离。
吹打时动作不宜过猛，吹出液体的力度要适中，否则会直接损伤细胞并产生能伤害细胞的气泡。
4、对于贴壁能力较弱，容易脱壁的细胞，可以不经蛋白酶原消化处理和终止消化这两步，直接对原代培养物或经漂洗后用吸管进行吹打使细胞脱离瓶皿底壁。
这种直接吹大的方法对生命力旺盛的细胞如某些肿瘤细胞较为合适。
高强度机械吹打易对细胞造成伤害较大，细胞也常有较大数量的丢失，因而绝大部分贴壁生长的细胞需消化后才能吹打，一般不单独采用高强度机械吹打。
5、首次传代时适当增大接种的细胞密度，使培养的细胞间尽快发生相互作用，有利于传代细胞的存活。
6、传代数是指对培养物传代的次数，它不等于细胞分裂的次数或细胞的代数，而仅代表传代操作的次数。
7、传代对细胞的影响或伤害程度仅次于将活细胞从生物体内取出并进行原代培养的程度。
只是因为传代后的细胞生长并不像刚开始原代培养时那样缓慢罢了。
8、每经过一次传代，细胞的生长环境就相应发生一次较大变化。
体外生长的细胞若处于动荡的生活环境中，细胞的遗传特性往往容易发生改变。
经过多次传代培养的细胞，往往容易转化为恶性细胞。
因此，传代对细胞生长和性状会产生不利影响，一般情况下要尽可能减少传代次数。