农药生物活性测定实验指导(精)
农药生物测定实验指导
农药生物测定实验指导（研究生）实验一培养基的制作、灭菌和病原菌的接种、培养一、实验目的：1、熟悉并掌握微生物用培养基的制作及灭菌的原理及使用；2、熟悉并掌握微生物的接种、培养及保存方法。
二、实验原理：培养基是供微生物生长的基物，分液体和固体两种。
按成分又可分为天然培养基、半组合培养基和组合培养基。
培养真菌所用的培养基一般用马铃薯培养基，它是半组合培养基，制作比较简单，且能够完全满足微生物的营养要求。
灭菌是杀死所有微生物，保证培养基不被杂菌污染的重要手段之一。
灭菌的方法有四种：热力灭菌、过滤灭菌、化学灭菌和物理灭菌。
热力灭菌在微生物灭菌中占主要地位，分干热灭菌和湿热灭菌。
干热灭菌是利用热空气来灭菌，将玻璃器皿等放入烘箱中加热，一般用160-170℃处理1小时或150℃处理2小时，适用于经高温处理不易损坏的干燥物质。
湿热灭菌，即高压蒸汽灭菌，是将灭菌物放入灭菌锅内，维持一定的蒸汽压力，一般为1公斤/cm2左右（相当于121℃），维持半小时，以确保杀死所有微生物，适用于高温高压下不易分解变质的物质和玻璃器皿。
湿热灭菌比干热灭菌效率高。
病原菌接种培养是杀菌剂毒力测定经常进行的工作之一，因培养基性状不同，可采用不同的接种方法。
本实验是练习在固体培养基上接种。
固体培养基的接种方法分倾注和斜面两种接种方法。
接种后的菌种，必须放在适温下培养，在培养期间注意观察菌种的生长情况和有无杂菌污染，温度要保持恒温，培养成熟的菌种必须很好地保存。
三．主要仪器及试材：1、实验器皿：培养皿、容量瓶、移液管、无菌水、PDA培养基[注：以上器皿须经灭菌。
]2、实验仪器：超净工作台、灭菌锅、培养箱、打孔器、酒精灯等。
四．实验方法与步骤：（一）、培养基的制作：1、培养基的组成（PDA）：去皮马铃薯块200克葡萄糖（或蔗糖）10-20克琼脂17-20克水1000ml2、步骤：（1）、在大烧杯中加入1000ml的水，作上标记；（2）、称取去皮马铃薯200克，切成小块，放入盛有水的烧杯中，煮沸30分钟左右，将薯块捞出，留下汁液；（3）、称取17-20克琼脂（事先用水浸泡），加入烧杯中，煮溶后，称取葡萄糖（或蔗糖）10-20克，加入汁液中溶解。
农药生物测定(1)
1、标准目标昆虫：是指被普遍采用的，具有一定代表性和经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力和毒效指示试虫群体。
2、毒力：是指药剂本身对不同生物发生直接作用的性质和程度。
3、药效：是在田间或接近田间的条件下所测定的药剂对生物的作用效果。
4、致死中量的置信限：即致死中量的可靠范围，亦即供试昆虫种群致死中量真值的波动范围。
5、内吸杀虫剂：凡是可以通过植物根茎叶以及种子等部位渗入植物内部组织，随着植物体液传导植株，不妨碍植物的生长发育，而对害虫具有很高毒效的化学物质，称为内吸杀虫剂。
6、内吸杀虫作用：昆虫由于受内吸杀虫剂的毒杀作用而致死亡的过程，称之为内吸杀虫作用。
7、杀菌剂室内生物测定：将杀菌物质作用于细菌、真菌或其它病原物（包括线虫）,根据其作用效果的大小来判断药剂毒力。
8、除草剂的生物测定：利用生物体（作物试材、杂草试材，主要指有害生物）对除草剂的反应，来测定除草剂的毒性及其效果的基本方法。
9、杀虫剂室内生物测定：在实验室条件下，以昆虫（包括螨类）对杀虫剂的反应来鉴别某一种农药或某一类化合物的生物活性测定的一种基本方法。
1、杀虫剂生物测定存在的问题（1）评判标准单一（2）人为地固定检查时间（3）无统一的标准试虫（4）一般用校正死亡率表示核心是没有系统评判生物测定结果的方法和标准。
2、影响杀虫剂毒力测定的主要因素分析（1）杀虫剂和溶剂杀虫剂：其理化性质是决定毒力的根本原因。
溶剂：对药剂本身的理化性质一般不产生影响，但不同溶剂会影响昆虫表皮。
（2）环境条件温度：影响到处理前---养虫；影响到处理过程中---挥发、吸收等；影响到处理后---昆虫的死亡率。
湿度：一般不影响杀虫剂的穿透性及作用速度，也不影响解毒过程，通常它只影响昆虫对杀虫剂的忍受力。
光照条件以及昆虫在药剂处理前后的食物供应，营养条件等也会影响到测定结果。
（3）供试昆虫：不同种类的昆虫敏感性不同；同种昆虫不同品系对杀虫剂的敏感性也不同；昆虫不同发育阶段对杀虫剂的敏感性也不同（卵期通常对杀虫剂的敏感性比较低，通常以为有杀虫卵作用的杀虫剂，有很多主要是杀了初孵幼虫）；昆虫的性别与生殖对杀虫剂的敏感性（一般雌性昆虫对杀虫剂的敏感性比雄性昆虫低，但对有机磷杀虫剂来讲，则雌性个体比雄性个体感受性低。
杀虫剂室内生物活性测定试验要求
主要技术要点
药பைடு நூலகம்配置方法
试验药剂
调查时间
试验方法
试虫
主要技术要点
试验目的 药剂特性 试验方法 生物试材 检查结果 结果分析
主要技术要点
把握试验目的 是确定生物试材生育期的依据，是确定试验方法的依据之一。
杀虫剂 室内生物活性测定试验要求
农业部农药检定所
二○○八年十一月
杀虫剂室内生物活性测定试验
基本要求 主要技术要点 存在问题
基本要求
试验药剂：一般要求用原药。 对照药剂：原药，作用机理、作用方式或结构类似，防治相同靶标已获
登记常用品种。 供试靶标：种类与申请登记的靶标相同，室内连续饲养2代以上，个体
大于5%要校正，大于20%视为无效测定，重新试验；
• 一般要求测定药剂要有5个或5个浓度以上，每个浓度要4次重复，检
查结果时4个重复的数据不要合并，每个重复单独进入机值分析；
• 进行数据统计分析，计算LC50（LD50）及其置信限、LC95（LD95）
及其置信限、b值及其标准误差。
存在问题
药剂浓度设置不能保证5个有效浓度； 空白对照设置不合理； 混剂的配比筛选试验，五个配比设置过于接近； 报告过于简单；
• 试验药剂、对照药剂要标明含量，生产企业、稀释过程、方法、浓度
设置等。
• 靶标生物要标明来源、饲养代数、生育期。 • 简要描述试验过程。 • 附原始数据。
谢谢大家!
药膜法： 药膜的基质为玻璃表面或滤纸表面时，应选用有机溶剂形成药膜，溶剂 的选择一般为丙酮，有些丙酮中溶解度低的药剂可以加一定比例的其它 有机溶剂； 药膜的基质为植物叶片时，应选用以水为连续相的溶液，溶液中除了依 据药剂的性质加少量有机溶剂外，要有标准的表面活性剂（0.1~1%）。 叶片的浸渍时间一般为10秒左右，然后阴干。
本科生农药生物测定
药剂：一般要求纯度在95%以上，至少是含量较高原药、原粉
作为毒力测定用的杀虫药剂最好是化学纯的化合物， 不是制剂，不是工业制品，不是加有其他辅助剂的成品， 因为任何杂质的存在都会影响到毒性，增效或减效 溶剂 不同溶剂对昆虫表皮的穿透率不同，单位时间内渗入虫体 内的虫量也不同，在体内的代谢速率也不同，最后到达 靶标部位的药量也不同，测得结果就有明显差异。因此， 配制药液的溶剂一致，一般以丙酮为宜。
是在分类上和使用价值上有一定意义。 3. 群体的生活力和抗药力要稳定和均匀一致。
筛选新农药时，应选择抗药力和生活力较强、自然死亡率低的 试虫群体，才不致影响筛选结果。测定农药残留量时，最好选用 敏感的群体，才容易得出试验结果。
4.选用合适的虫期、龄期、年龄的试虫群体或混合群体供作测试对 象。
选用原则是试虫群体间的虫期比例、虫龄、年龄用虫体大小比 较接近一致，虫龄不宜过大或过小，新羽化的或年龄过大的试虫 群体不宜采用。
一、标准目标昆虫概念 被普遍采用的，具有一定代表性和经济
意义以及抗药力稳定均匀的农药杀虫毒力 和毒效指示试虫群体。
二、标准目标昆虫的要求
1．易饲养，繁殖力强。 不互相残杀，不受季节和寄主限制，能保证周年充分供应。
2．具有一定的代表性和经济意义。 如代表重要农业害虫的目、科或不同的取食特性和敏感性，或
三、饲养中的环境条件
1、温度：最适温度是20－25℃ 温度过低，昆虫死亡；温度过高，对很多成虫的繁殖力有不利的
影响，对饲养质量也受到影响。 虫架上装日光灯时，不要使饲养容器靠近日光灯，否则会使温度
农药生物测定实验指导书
表 1 杀虫剂触杀毒力精密测定原始数据记录表
供试药 剂浓度
每微升药液含有药 剂
µg/mL
每头试虫接 试虫平 单位虫体重
受药量 µg/头 均
接受药量
克）
体重（g） (µg/g)
死亡率 %
校正死亡 率
（%）
对照
3
供试药 剂浓度
表 2 杀虫剂触杀毒力精密测定数据换算表
单位体重受药量或每头试虫受 药量
(微克/克体重或微克/头)
供试昆虫：棉铃虫 3 龄幼虫；供试药剂：90%辛硫磷 三、仪器及用具
微量点滴器、分析天平、培养皿、滤纸、镊子、淀粉糊、烟叶等。 四、方法及步骤 1．药剂配制：将 90%辛硫磷用丙酮配制成 5 个系列浓度的丙酮药液：5.5、5.0、 4.5、4.0、3.5mg/ml。 2．试虫准备：取饥饿 12 h 试虫 72 头，在天平上逐头称重，放入垫有湿滤纸的 培养皿中，并在皿底编号。 3．夹毒叶片的制备：将干净叶片用打孔器打制成直径 0.5cm 的圆叶片，用微量 点滴器将不同浓度丙酮药液分别定量（2 uL）点滴在叶片上，待丙酮挥发后，用 淀粉糊涂在未点药叶片上，用镊子移于带药叶片上，用手指将上、下两张叶片粘 合制成夹毒叶片。另以涂有淀粉糊的无毒叶片作对照。每浓度制作 12 张夹毒叶 片，共 72 张。 4．饲喂：将带有不同浓度的夹毒叶片分别放入培养皿内饲喂棉铃虫，每皿放 1 片（1 皿+1 叶+1 虫）。 5．结果检查：饲喂一定时间（一般 2-4 h）后进行检查，凡吃完夹毒叶片的，以 无毒新鲜叶片继续饲喂，未吃完夹毒叶的就弃去此虫，不计入试验虫中。24 h 后，根据试虫取食面积、单位面积上着药量及试虫体重，求出每头试虫单位体重 受药量（µg/g），填入表 1 中。 6．致死中量的计算：按单位体重受药量自小到大顺序排列（表 2），并注明各号
农药生物测定田间试验
农药生物测定田间试验一个新药物的发现, 必须两个系统的同时运转一个系统是化学系统, 一个系统是生物学系统农药生物测定与田间药效试验西南大学植保学院丁伟教授一、农药室内生物测定1．生物测定（bioassay ）是由biological 和assay 组合而成，通常是指具有生理活性的物质对某种生物产生效应的一项测定技术。
但是，从更广的范围来理解生物测定，则可概括为：“对生物的任何刺激所产生的效应的测定, 包括来自物理、化学、生物、生理及心理等方面的刺激对生物活体产生的反应。
”总之，生物测定是研究作用物、靶标生物和反应强度三者关系的一项专门技术。
2．生物测定的一般模式3．农药生物测定（pesticidebioassay ）指在一定条件下利用靶标生物测定其对某些化合物的反应的量度，进而鉴别某种化合物生物活性的基本技术与方法。
靶标生物：通常指有害生物，包括昆虫、螨类、病菌、杂草、鼠类等。
包括这些生物的整体或离体的组织、细胞等。
待测化合物：可以是已经成为农药的化合物，包括杀虫（杀螨）剂、除草剂、杀菌剂、杀鼠剂、杀线虫剂乃至卫生杀虫剂等；也可以是待筛选的化合物（已知物和未知物）。
生物反应：指靶标生物对杀虫、杀菌、除草等作用的反应，可以延伸为凡是干扰破坏有机体正常生长、发育、行为、代谢等效应的反应，如植物生长调节、昆虫生长调节、信息传递物质等。
生物反应用死亡率、抑制率、反应率等指标来表示。
量度：指反应的强度或者大小的指标。
要运用特定的实验设计，以生物统计为工具，借助于数学的方法，来给生物反应以量化表达。
生物活性：指药物或某一个化合物对生物体产生的效应。
如果有，则这个药物或化合物有生物活性，如果不产生效应，则这个药物或化合物就没有生物活性。
4．农药生物测定的知识体系（1）供试对象的准备（包括靶标生物的饲养技术和待测化合物的选择）；也包括组织培养、细胞培养、药剂配制、剂量计算等内容（2）生物测定的操作技术与方法（包括室内生测、小区实验和田间药效实验三个方面）；（3）影响农药生物测定的因素分析；（药剂、生物体、环境、操作方法）（4）农药生物测定结果的评价与表达。
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法
实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法work Information Technology Company.2020YEAR实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法一、实验目的学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。
二、实验原理抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。
在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。
其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。
但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。
根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。
三、实验材料供试药剂：速克灵或扑海因。
供试病原菌：番茄灰霉病菌。
实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。
四、实验方法采用管碟法。
将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。
1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。
灭菌蒸馏水为对照。
2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。
在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。
用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。
农药生物测定实验指导
农药生物测定实验指导（自编试用1.0）主编：姜兴印副主编：赵春青张卫光制药工程专业用山东农业大学植物保护学院2008年9月棉铃虫人工饲料制备一、实验目的学习棉铃虫人工饲料制备技术和方法。
本方法还适合玉米螟等人工饲料的制备。
二、实验用品和仪器设备仪器设备：天平、高压灭菌器、罐头瓶、电饭锅、筛子（40目）、量筒、搪瓷盘、温度计实验物品：小麦粉、玉米粉、黄豆粉、啤酒酵母粉、琼脂、棉叶、V C、棉油、苯甲酸钠、山梨酸钾、兽用链霉素、水等三、实验方法1. 配方：2. 小麦粉、玉米粉、黄豆粉、酵母粉和棉叶装入罐头瓶中，高压灭菌40min.（120℃）3. 水+琼脂煮开冷却至70℃，加入Vc、防腐剂、棉油混匀，再加入混合好的其他成分，充分混匀。
4. 倒入搪瓷盘，加盖冷却后放入冰箱中备用。
四、质量检查饲料冷却后观察颜色和固化成型情况。
五、实验报告农药生物测定药剂配制一、实验目的学习生物测定药剂配制的实验操作技术和方法。
二、实验用品和仪器设备电子天平、计算器、烧杯、移液管、吸耳球、记号笔、容量瓶、量筒等。
实验原药：93%顺式氯氰菊酯，95%吡虫啉实验制剂：50%多菌灵WP，2.5%功夫EC(w/w)，33%施田补EC(w/v)三、实验方法1. 原药母液的配制与稀释（1）用丙酮配制2％顺式氯氰菊酯母液50mL，然后稀释成200mg/L 50mL 丙酮液。
（2）用丙酮配制1％吡虫啉母液50mL，然后稀释成125mg/L 50mL丙酮液（3）将顺式氯氰菊酯和吡虫啉按照5：2的比例混合，配制1.5%混剂50mL 丙酮液。
2. 制剂的稀释（1）50%多菌灵WP，稀释成200mg/L 100mL的水溶液（烧杯）。
（2）2.5%功夫EC，稀释成1000mg/L 100mL的水溶液（烧杯）。
（3）33%施田补EC，稀释成150mg/L 100mL的水溶液（烧杯）。
四、结果计算和处理将以上每一种母液配制和稀释需要原药和制剂的量计算，并详细描述配制和稀释过程。
实验二 杀菌剂生物活性测定
杀菌剂生物活性测定-生长速率法一、实验原理将不同浓度的药液与融化的培养基混合，制成带毒培养基平面，在平面上接种病原菌，以病菌生长速度的快慢来判定药剂毒力的大小。
病菌生长速率可用两种方法表示：①一定时间内菌落直径的大小；②菌落达到一定直径所需的时间。
二、实验目的通过本试验要基本掌握杀菌剂室内（离体）活性的生物测定操作技术，掌握杀菌剂毒力回归曲线的制作及LC50的求解。
三、实验材料1．供试药剂：70%甲基托布津 2．供试病原菌：苹果炭疽病菌3．马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（PDA）配方：马铃薯200g；葡萄糖20g；琼脂粉10g（或琼脂条18g）；自来水10 00 mL；pH自然偏酸（5-6）制作方法：选择质量较好的马铃薯，削皮，去芽眼，切成薄片，称取200g，加自来水1000mL，煮沸后改小火煮30min（直至马铃薯片呈半透明状），然后用4层沾湿纱布过滤，滤液用水补足至1000mL。
再加入琼脂10g，用玻棒搅拌使其溶解（可适当加热）后加入葡萄糖20g，搅匀，再补足水1000 mL，最后分装于试管（用于接斜面）或三角瓶（250mL三角瓶盛约150mL培养基），用无菌封口膜封好灭菌备用。
采用湿热灭菌法，121℃下保持30min。
4、实验器材：φ90cm的培养皿（72个），PDA培养基，1mL移液管（10个），酒精灯，10mL具塞刻度试管（10个），接种针（4个），超净工作台（2台）。
四、方法与步骤1．菌种准备实验室准备有菌源，在生测前一个星期请自行转接。
对菌种的要求：病原菌应容易培养，菌丝生长快速、整齐，产生孢子缓慢；菌丝最好在培养基平面上呈平伏放射状生长（有利于结果的测量）。
在φ90cm的培养皿中，倒入约10-15mL PDA。
从培养皿或者斜面培养基上取一块病菌，放在培养皿中间，于26℃下培养（3-7d）备用。
2．药液准备将供试药剂70%甲基托布津用无菌水分别稀释成800、400、200、100、50、25mg/L 六个浓度的药液。
生物活性测定法
按标准品说明书, 标准品溶液的制备 按标准品说明书, 标准品复溶, 将EPO标准品复溶,用稀释液将 标准品复溶 用稀释液将EPO标准 标准 品稀释成高, 个剂量EPO标准溶 品稀释成高,中,低3个剂量 个剂量 标准溶 液. 供试品溶液的制备 用稀释液将供试 品稀释成高, 个剂量与EPO标准 品稀释成高,中,低3个剂量与 个剂量与 标准 溶液单位相近的供试品溶液. 溶液单位相近的供试品溶液.
将配制完成的标准品溶液和供试品溶液 移入接种WISH细胞的培养板中,每孔加 移入接种WISH细胞的培养板中, WISH细胞的培养板中 100ul. 37℃, 入100ul.于37℃,5%二氧化碳条件下 培养18 24小时 18～ 小时. 培养18～24小时.弃去细胞培养板中的 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV (VSV, 上清液.将保存的水泡性口炎病毒(VSV, 70℃保存 用攻毒培养液稀释至100 保存) -70℃保存)用攻毒培养液稀释至100 每孔100ul 100ul. 37℃, CCID50,每孔100ul.于37℃,5%二氧 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 24小时 化碳培养24小时(镜检标准品溶液的50 病变点在lIU/m1) lIU/m1). %病变点在lIU/m1).
重组人白介素重组人白介素-2生物学活性测定法 (CTLL- 细胞/MTT比色法) /MTT比色法 (CTLL-2细胞/MTT比色法)
本法系根据在不同白介素-2 (IL-2)的 本法系根据在不同白介素- (IL-2)的 浓度下,其细胞依赖株CTLL CTLL浓度下,其细胞依赖株CTLL-2细胞存活 率不同,以此检测IL 的生物学活性. IL率不同,以此检测IL-2的生物学活性.
试剂 RPMI1640培养液 1640培养 (1) RPMI1640培养液 取RPMI 1640培养 基粉末1 规格为1L) 1L), 基粉末1袋(规格为1L),加水溶解并稀释至 1000ml,加青霉素10 IU和链霉素 和链霉素10 IU, 1000ml,加青霉素105IU和链霉素105 IU, 再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀,除菌 再加碳酸氢钠2.1g,溶解后,混匀, 2.1g 过滤,4℃保存 保存. 过滤,4℃保存. 取新生牛血清(FBS) (2) 基础培养液 取新生牛血清(FBS) 10ml, 1640培养液90ml.4℃保存 培养液90ml 保存. 10ml,加 RPMl 1640培养液90ml.4℃保存. (3)完全培养液 取基础培养液100ml 100ml, (3)完全培养液 取基础培养液100ml, 加重组人自介素- 至终浓度400 800IU. 400～ 加重组人自介素-2至终浓度400～800IU. 4℃保存 保存. 4℃保存.
农药生物测定
《农药生物测定》复习重点农药生物测定的简史第一时期：19世纪末~ 1920至1923年间:研究出测定白喉抗毒素含量的标准方法.特点：都是用单个动物体作直接的效力测定，将待测的药剂与标准药剂相比较来估计其相对药效。
第二时期：20世纪30年代至20世纪70年代1937年欧文首先提出了系统的生物测定方法报告;1947年芬尼出版了系统的生物测定统计方法;1950年芬尼及古德温出版《生物测定标准化》一书;1957年布斯维纳（）出版《杀虫剂生物测定评述》;1959年张宗炳在其《昆虫毒理学》一书中,以专章对杀虫剂生物测定及统计分析作了系统的论述;1963年张泽溥等出版《杀虫剂及杀菌剂的生物测定》;1984年张泽溥出版《生物测定统计》专着。
特点：研究出以生物群体为反应基础的生物测定方法，提高了测定精度。
第三时期：20世纪70年代至今1. 研究利用昆虫神经电生理方法检测化合物对昆虫的拒食活性已取得进展。
2. 杀菌剂也由以传统的病原菌离体试验方法为主，转变为寄主植物上的活体试验为主。
3. 20世纪80年代以来介于活体与离体之间的植物组织培养生物测定方法受到了广泛的重视，有可能发展成一类新的杀菌剂生物测定方法。
如适用于细菌性病害筛选的块根法；适用于大麦白粉病筛选的芽鞘表皮法等。
第四时期：20世纪70年代至今发展趋势：1.随着分子生物学及生理、生化方面研究技术的提高，运用分子生物学技术和生化技术进行生测的研究亦发展很快，如对新药剂的筛选及利用酶学试验进行害物抗药性的监测和增效剂的筛选等等。
2.由于电子计算机软、硬件的迅速发展，农药生物测定中的统计分析，早已普遍程序化和微机化，使生物测定结果的分析计算更加简便、快捷，也更加准确、可靠。
农药生物测定中应注意的几点：1.运用特定的试验设计；2.在一定条件下（局部控制）进行；3.均以群体反应为基础，以生物统计为工具。
农药生物测定的定义:运用特定的试验设计，利用生物对农药的反应，并以生物统计为工具，分析供试对象在一定条件下的效应，来度量某种农药的生物活性。
农药生物测定 推荐
2.1.1一般死亡率。
死亡率%=死虫数/试虫数×100%
死亡率从广义上应理解为虫口减退率。死亡率可以
是正的，也可以是负的，比如处理后的虫口可以是增加
的。
2020/10/10
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2.1.2 校正死亡率
校正死亡率的计算可采用生存率，也可采用死 亡率，分别如下：
校正死亡率= X Y 100% ；（1）
标准药剂对照
试验时，要根据测定的需要，选择合适的对照。 但一般情况下，如果选择标准药剂对照，则还需要选择溶
剂对照和空白对照补充。
1.1.3.3 必须设置重复
1.1.3.4供试的目标昆虫
（1）标标准准目目标 标是昆指虫被普遍采用的，具有一定代表性和
昆虫
经济意义，以及抗药力稳定均匀的农药 杀虫毒力和毒效指示试虫群体。
① 评判标准单一 ② 人为地固定检查时间 ③ 无统一的标准试虫 ④ 一般用校正死亡率表示
核心是没有系统评判生物测定结果的方法 和标准。
主要内容
第一节 杀虫剂室内生物
测定
基本概念 影响因素 设计原则
ξ1.1.2 影响杀虫剂毒力测定的主要因素分析
1.1.2.1 杀虫剂及溶剂 杀虫剂 其理化性质是决定毒力的根本原因。
（3）光照条件及其他条件
光照条件以及昆虫在药剂处理前后的食物供应，营养 条件等也会影响到测定结果。
1.1.2.3供试昆虫
不同种类的昆虫敏感性不同
影响试验结果
同种昆感性也不同
卵卵 不同卵期
活动状态敏感性高
幼虫若虫 蛹
成虫伪蛹
不同龄期 不同蛹期 发育程度
X
校正死亡率=
处理组死亡率 - 对照组死亡率 1 对照组死亡率
100 %
生物活性测定法
EA K3
X
A+ E
有R'
RO
E + PX
有机磷类
K d PX .E K2
PX K3
P+ E
X
PX代表有机磷杀虫剂，X代表侧链部分例如对氧磷中的-O- NO2。E代表 AChE，Kd是解离常数(或者称亲和力常数)，K2是磷酰化反应速率常数有时写作 Kp，K3是脱磷酰基水解速率常数或者称酶致活常数。反应开始时有机磷酸酯先与 酶形成复合体(PX·E)，X分离后形成磷酰化酶(PE)，再经过脱磷酰基使AChE恢复。
淡水发光菌青海弧菌的发现解决了这一问题。
2 用家蝇检测蔬菜中的残留农药
60年代后期，台湾农业试验所采用生物测定方法进行农药残留 检验，其原理是释放高敏感性的家蝇于菜汁中，4～5ｈ后家蝇死亡 率在10%以下即为合格，该方法优点是过程简单无须复杂仪器检测， 缺点是检测时间较长，仅适用于田间未采收的蔬菜，另外该方法只 对部分杀虫剂有反应，无法分辨残留农药的种类，准确性较低。
明亮发光杆菌(Photobacterium phosphoreum)
最小检出浓度为3ｍｇ·Ｌ-1 已用于检测甲胺磷、敌敌畏等常用有机磷农 药。 特点：快速、简便、灵敏、价廉，适合于现 场分析 缺点：农药浓度与发光强度的线性关系不够 准确，只能用于半定量测定。
长期以来使用的发光细菌是海洋发光细菌，但该方法有严重不 足，即必须在检测的样品中加入3%的ＮａＣｌ的细菌才能正常发 光。
AchE及其功能 Ach是一种神经传递介质 , AchE是一个水解酶，底物
是Ach。水解作用的反应式如下：
CH3COOCH2CH2N+(CH3)3 + H2O CH3COOH+HOCH2CH2N+(CH3)3
农药室内生物测定技术与方法
农药室内生物测定技术与方法张宗俭(沈阳化工研究院农药生物测定中，沈阳110021)一、农药生物测定的含义及其用途农药生物测定是指利用靶标生物(昆虫、螨类、病原微生物、线虫、植物等)的活体或离体器官、组织、细胞或其代谢物等(如酶、蛋白质等)为试材，测试或鉴别生物活性物质的类型、反应症状或其活性大小的一种方法。
简单地说，农药生物测定技术就是利用靶标生物等对药剂的反应来鉴别农药毒力或药效的一种技术。
农药生物测定主要包括杀虫剂(杀螨剂)、杀菌剂(杀线虫或抗病毒剂等)、除草剂、杀鼠剂以及植物生长调节物质等的生物测定技术。
它涉及靶标生物、测试物质(药剂)、反应症状及强度、测试环境条件等多方面的因素。
一个好的生物测定技术或方法应具备易于操作、结果反应灵敏、重现性好、且使用物质的剂量与反应之间有良好的相关性。
农药生物测定技术与农药的使用和开发同时产生，经过长期不懈创新、完善和发展，已经成为研究生理活性物质、靶标生物以及反应强度三者关系的一项专门技术，被广泛应用于新农药的筛选以及作用特性和应用技术评价等研究之中。
纵观目前农药生物测定的研究概况，室内农药生物测定技术主要应用于以下几个方面：1．刨制农药生物活性筛选研究：随着农业生产的发展和人们对地球环境生态和人类健康等的要求不断提高，高效、低毒、环境友好型新农药的开发应用给人类社会和生产企业带来巨大的效益，但同时也由于新农药开发的难度与费用日益增加，如何利用生物测定技术快速高效地筛选新化合物，并准确评价其生物活性以及应用技术，估测其农药生物评价技术报告会市场前景及将来在市场上的占有率和利润额，是决定其创制农药研究成功与否的关键。
利用生物测定方法研究同一类结构或同一作用类型化合物的化学结构与生物活性关系的规律(sAR)以及与靶标作用位点的结合关系，为定向创制新农药和计算机辅助设计新化合物提供基础数据和理论依据。
生物活性筛选被称为农药创制的“眼睛”．对新农药开发研究起着举足轻重的作用。
实验六 除草剂生物活性测定(去胚乳小麦法)
实验六除草剂生物活性测定方法——植株生长量测定法一、实验目的掌握抑制光合作用的除草剂的生物活性测定方法——去胚乳小麦幼苗法。
二、实验原理植物生长量测定法将所选试材进行催芽处理后，种植在含有供试药剂的基质中（液体基质或土壤）或在植株生长的某个适期施药，经一定时间、一定条件的培育后观察试验结果。
常用方法有去胚乳小麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、叶鞘滴注法、再生苗测重法、去胚乳小麦幼苗法。
去胚乳小麦幼苗法是测定光合作用抑制剂的较为经典的方法，其原理是早期人工将小麦剥离胚乳，使幼苗直接生长在含供试样品的培养液中，幼苗不再有胚乳供应养分，只能被迫从培养液中吸收药剂并独立进行光合作用以补充自身营养，而许多光合作用抑制剂只有在植物萌发后能独立进行光合作用时才可发挥作用。
该方法去除了胚乳的影响，因此是测定光合作用抑制剂较敏感的方法。
三、实验材料供试作物：小麦种子；供试药剂：40%莠去津。
小麦营养液：用Hoagland’s（霍格兰氏）营养液作为培养液，其配方为：硝酸钙945mg/L、硝酸钾607mg/L、磷酸铵115mg/L、硫酸镁493mg/L、铁盐溶液2.5ml/L、微量元素5ml/L（碘化钾0.83mg/l、硼酸6.2mg/L、硫酸锰22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L）、pH=6.0 仪器设备：摄子、小烧杯（10 ml）、1 ml移液管、10 ml移液管、试剂瓶、尺子。
四、实验方法1．催芽：将小麦种子浸泡2 h后，选择饱满度一致的种子，种沟向下排列在铺有湿滤纸或湿纱布的搪瓷盘中，然后覆盖0.5 cm厚度的湿砂，在室温25℃左右进行催芽，3~4 d后苗高达2~3 cm。
2．剥除胚乳：精选高度一致、幼叶刚露出叶鞘、见绿的麦苗，轻轻取出，避免伤害根部，然后用镊子小心地摘除胚乳（不要损伤根、芽），再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，作为指示生物。
农药制造中的生物活性筛选与评估
农药制造中的生物活性筛选与评估农药是现代农业的重要组成部分，对于保障粮食安全和农业生产效率具有不可替代的作用生物活性筛选与评估是农药研发的重要环节，其结果直接关系到农药的药效和安全性生物活性筛选生物活性筛选是农药研发的第一步，主要目的是从大量的化合物中筛选出具有潜在生物活性的物质这一过程通常涉及到对化合物的体外实验，比如对害虫、病原菌或者杂草的抑制作用化合物的来源化合物的来源广泛，既有化学合成，也有天然提取化学合成的化合物可以通过计算机辅助设计进行结构优化，以提高其生物活性天然提取的化合物则主要来源于植物、动物或者微生物，这些天然产物往往具有独特的生物活性筛选方法筛选方法包括高通量筛选和微量筛选等高通量筛选可以同时对大量的化合物进行测试，提高了筛选的效率微量筛选则可以对化合物的浓度进行精确控制，以评估其生物活性生物活性评估在生物活性筛选的基础上，需要对筛选出的化合物进行生物活性评估，以确定其药效和安全性这一过程通常涉及到对化合物的田间试验，以及对药效和安全性指标的统计分析药效评估药效评估主要包括对害虫、病原菌或者杂草的防治效果这一过程需要根据不同的靶标选择合适的评估方法，比如死亡率、生长抑制率或者防治效率等安全性评估安全性评估主要关注化合物对非靶标生物的影响，包括对环境的影响和对人体健康的潜在风险这一过程需要对化合物进行毒理学和生态学评估，以确定其安全性生物活性筛选与评估是农药研发的关键环节，其结果直接关系到农药的药效和安全性随着科技的进步，我们有理由相信，生物活性筛选与评估的方法和手段将更加高效和精确，从而推动农药研发的进步以上内容为文章的相关左右，接下来的内容将详细介绍生物活性筛选与评估的具体方法和技术，以及农药研发的现状和未来趋势生物活性筛选的挑战尽管生物活性筛选取得了显著进展，但仍面临一些挑战首先，筛选大量的化合物需要消耗大量的时间和资源其次，化合物的生物活性可能受到多种因素的影响，如浓度、环境条件等此外，一些具有潜在生物活性的化合物可能在筛选过程中被忽视，因为它们对特定靶标的活性较低因此，提高筛选的准确性和效率是当前研究的重点生物活性评估的进展生物活性评估的方法和技术不断改进，为农药研发提供了更加可靠的数据例如，田间试验可以模拟真实的农业生产环境，以评估化合物的药效和安全性此外，遥感技术和地理信息系统（GIS）也被应用于评估农药对环境的影响这些技术的应用使得生物活性评估更加准确、全面和高效农药研发的现状和未来趋势农药研发正朝着高效、安全、环保的方向发展新型农药的研发更加注重对靶标的专一性，以减少对非靶标生物的影响此外，生物农药的研究逐渐受到关注，它们来源于天然生物资源，具有较低的环境风险未来，农药研发将更加注重可持续发展和生态平衡，以满足农业生产的需求生物活性筛选与评估的合作与交流生物活性筛选与评估是一个跨学科的研究领域，涉及化学、生物学、环境科学等多个学科加强不同领域间的合作与交流，可以促进农药研发的进展国际组织和研究机构之间的合作，可以共享研究成果和技术经验，加速新农药的上市进程生物活性筛选与评估是农药研发的关键环节，其结果直接关系到农药的药效和安全性面对挑战，研究人员需要不断改进筛选方法和技术，提高评估的准确性和效率同时，加强合作与交流，推动农药研发的可持续发展随着科技的进步，我们有理由相信，生物活性筛选与评估将更加高效、准确和环保，为农业生产提供更好的保障（以上内容为文章，继续介绍了生物活性筛选与评估的挑战、进展、农药研发的现状和未来趋势、合作与交流等方面的内容文章字数已满足要求，未出现重复内容请根据需求继续输出文章剩余的部分）生物活性筛选的新技术近年来，新技术的发展为生物活性筛选提供了更多的可能性例如，组合生物合成和代谢工程技术可以用于创造新的化合物，以扩大筛选的化合物库此外，和机器学习算法可以通过分析大量的化合物数据，预测其生物活性，从而指导筛选工作生物活性评估的持续改进生物活性评估方法的持续改进也是农药研发的重要方向例如，通过使用更先进的分析技术，如液相色谱-质谱联用（LC-MS）和气相色谱-质谱联用（GC-MS），可以更准确地测量化合物在环境中的浓度，从而更准确地评估其对环境的影响农药的环境风险评估农药的环境风险评估是生物活性评估的重要组成部分这涉及到对农药在环境中的行为、生物积累和生物降解性的研究通过这些研究，可以确定农药对环境的潜在影响，从而指导农药的合理使用农药的合理使用与监管农药的合理使用和监管是确保农药安全性的关键这需要建立科学的农药使用指南，并加强对农药市场的监管，确保农药的质量和安全性农药研发的国际合作农药研发的国际合作对于推动农药研发的进展具有重要意义通过国际合作，可以共享研究成果和技术经验，加速新农药的研发和上市进程同时，国际合作也可以促进全球农药监管的协调，从而更好地保护全球环境和人民健康农药制造中的生物活性筛选与评估是一个复杂而重要的过程，它直接关系到农药的药效和安全性面对挑战，研究人员需要不断改进筛选方法和技术，提高评估的准确性和效率同时，加强国际合作和交流，推动农药研发的可持续发展随着科技的进步，我们有理由相信，生物活性筛选与评估将更加高效、准确和环保，为农业生产提供更好的保障（以上内容为文章，继续介绍了生物活性筛选与评估的新技术、生物活性评估的持续改进、农药的环境风险评估、农药的合理使用与监管、农药研发的国际合作等方面的内容文章字数已满足要求，未出现重复内容请根据需求继续输出文章剩余的部分）。
农药毒理学实验指导
昆虫乙酰胆碱酯酶活性的测定一、实验目的：了解乙酰胆碱酯酶的作用，掌握乙酰胆碱酯酶活性的测定方法。
二、实验材料试剂:0.05mo1/L, pH7.2磷酸盐缓冲液(PBS) ; ATCh液;称取ATCh75mg加pH7.2PBS 100m1即成。
DTNB液:称取DTNB13mg加pH7. 2PB S 1 OOml即成。
本试验选用残杀威杀虫剂作为抑制剂，在测试前按不同比例用乙醇充分溶解。
三、实验步骤1、样品制备:采用本所饲养的淡色库蚊Culex pipiens pallensCoquillett敏感品系蚊虫和室内选育的抗残杀威品系淡色库蚊作酶源。
将N龄幼虫或刚羽化3-4天未吸血雌性成蚊，放人1.5m1离心管中，加100[1 pH7.2PBS碾碎混匀，10000r/min离心15min，取上清液再加900pl pH7.2PBS稀释，待用。
2、实验方法:将100协1蚊虫混匀液，滴人%孔微滴定板孔中，每孔再加混有1 x 10-4mol/L的残杀威ATCh液1 OOmhZ,，放30 C孵育30分钟后，每孔再加100ul DTNB液，待反应5分钟后，用酶标仪(北京新技术研究所提供MB- III型)进行比色。
四、结果分析在410mu波长下读取光密度。
每只蚊虫可测4-10孔取其OD平均值。
昆虫中肠淀粉酶活性测定一、实验目的：了解中肠淀粉酶的作用，掌握中肠淀粉酶活性的测定方法。
二、实验方法1、肠液的提取：电刺激法取肠液,10Ｋ离心5ｍｉｎ,上清液为酶液,用0 85%生理盐水稀释5倍备用。
2：测定步骤：α淀粉酶及(α+β) 淀粉酶的活性测定每个重复区用5个试管,同时做等量对照试管,每个试管加酶液1ｍＬ,在70℃恒温水浴中加热15ｍｉｎ,取出后迅速用自来水冷却。
各管加入1ｍＬｐＨ5.6柠檬酸缓冲液,对照管加4ｍＬ0 4ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ,纯化酶的活性。
将对照与测试管置于40℃(±0 5℃)恒温水浴中保温15ｍｉｎ,各管加入40℃左右预热的淀粉液2ｍＬ,摇匀,立即放入40℃水浴中保温5ｍｉｎ,取出后迅速加入4ｍＬ0 4ｍｏｌ/ＬＮａＯＨ,终止酶反应。
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农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
（2）、待幼虫长到2龄后，移入装有人工饲料的培养皿（5cm）内，每皿一头，幼虫在内取食，直至老熟。
（3）、幼虫进入预蛹期，即转移到装有无菌细土的养虫缸内，必须保持湿润，以利入土化蛹和蛹的存活。
（4）、成虫羽化后，雌雄配对，放入养虫缸内，缸内放一个内有10%蜂蜜液的培养皿，皿内放脱脂棉，以便蛾子从润湿的棉上吸取蜂蜜。
养虫缸上蒙上纱布，并用橡皮筋扎好。
蛾子在缸内交尾产卵，每日将产于纱布上的卵连同纱布取下，并换新纱布和蜂蜜。
五、实验注意事项：1、注意饲养室及饲养用具的清洁、消毒。
2、注意饲养环境的控制，棉铃虫的幼虫在3龄后具有自相残杀习性，应单独饲养。
3、在棉铃虫饲养过程中，应注意及时更换新鲜的饲料，以防饲料变干。
配制好的饲料必须在低温下储存。
六、实验结果处理：1、每日观察记录棉铃虫的取食、生长情况，并认真填写观察记录。
2、观察棉铃虫的蜕皮生长情况，记录各龄期的生长时间长短及试虫的平均体重。
七、思考题：1、标准目标昆虫的饲养在生物测定工作中有何意义？2、在棉铃虫的饲养过程中应该注意那些问题？并对其饲养条件和方法提出改进意见。
实验二杀虫剂初步毒力测定一、实验目的：1、通过本试验学习掌握杀虫剂室内毒力初筛试验的操作技术。
2、观察昆虫中毒征象特征——兴奋、击倒、抽搐、麻痹、昏迷、死亡等。
3、明确标准目标昆虫代表性的实用意义。
二、实验原理：为了初步确定某些化学物质是否对某些害虫具有毒杀能力，应首先进行一次淘汰试验，或叫初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。
这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，因此，不严格限制用药量和均匀度，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。
一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。
每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致，设置温度一般在20-28℃，相对湿度60-80%，通气良好。
一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。
三、主要仪器及试材：1、试虫：小菜蛾（3龄）。
2、供试药剂：药剂A、药剂B。
3、试验器材：养虫室、potter喷雾塔、量筒、镊子、吸管、烧杯、培养皿、毛笔等。
四、实验方法与步骤1、药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。
2、试虫移取：取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿，每处理10头，重复一次。
3、喷布质量检定用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小和喷布是否均匀一致，如不符合要求，可调节喷头及位置，使喷布质量达到基本要求。
4、处理方法：采用喷雾法，选用potter喷雾塔，喷布药液前，用清水及欲喷洒的药液大量喷布。
换药前需将受药盘及雾化室底部用布充分擦净，然后大量喷布试验的药液。
在接有小菜蛾的培养皿中加入一定新鲜菜叶后，用移液管吸取3ml药液进行喷布，约10秒后，待药液全部沉降，取出培养皿，做好标记，空白对照只喷洒清水。
待药剂干后，将试虫连同饲料置于恢复室内培养24小时后检查结果。
五、实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、处理设计：每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。
六、 实验结果处理：处理24小时，48小时后，检查死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并比较不同药剂的毒力大小。
试虫死活标准，一般以能正常活动或飞翔的或能正常行动的作为活虫，其余中毒的均为死虫。
%1001%100⨯--=⨯=对照死亡率对照死亡率处理死亡率校正死亡率总虫数死虫数死亡率表1杀虫剂初步毒力试验记载表 试验药剂 浓度(或剂量)处理方法供试昆虫试虫数处理24小时 处理48小时 死虫数死亡率(%)校正死亡率(%)死虫数死亡率(%)校正死亡率(%)七、思考题：1、 将筛选药剂的毒力试验结果记入杀虫剂初步毒力试验记载表，并写成报告。
2、 杀虫剂初步毒力测定在杀虫剂的筛选中有什么重要意义。
实验三杀虫剂毒杀作用方式的测定一．实验目的：学习和掌握杀虫剂毒杀作用方式的测定技术。
二．实验原理：经初筛试验后选出杀虫毒力高的农药，需进一步测定它的毒杀作用方式——触杀、胃毒、薰蒸、内吸、忌避以及毒杀作用强度等，进一步明确不同类型杀虫剂的杀虫特性。
三．主要仪器及试材：1．供试昆虫：小菜蛾（4龄）2．供试药剂：药剂A、药剂B四．实验方法与步骤：（一）触杀作用方式的测定：触杀作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫体壁进入虫体的触杀毒效。
常用的方法有浸渍法、药膜法、直接喷撒法、微量点滴法等。
本实验采用药膜法来鉴定农药的触杀毒力作用。
1．实验仪器及用具：养虫室、滤纸（9cm）、培养皿（9cm）、培养皿（5cm）、具塞小试管等。
2．实验方法与步骤：（1）药剂的配制：使用丙酮，将药剂A和B分别配制成1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。
（2）使用药膜法对小菜蛾（4龄）幼虫进行触杀作用毒力测定。
（3）制作滤纸药膜：取一张直径为9cm的滤纸，放插在报纸上的三支大头针上，不使其接触物体表面，吸取0.5ml丙酮药液，围绕滤纸外缘逐渐向内滴加，使丙酮药液均匀分布在滤纸上，同法每药剂浓度及丙酮对照各制备3张滤纸药膜。
（4）将凉干后的滤纸药膜放在培养皿底，每浓度重复三次，操作时避免手摸，随即每张药膜放入试虫20头，任其爬行15-30min。
（5）处理完毕后，将处理过的试虫置于27℃，干净的环境中，并饲喂新鲜的饲料，24小时后检查死虫数，以物触其虫体无任何反应者为死亡。
（二）胃毒作用方式的测定：胃毒作用方式的测定是用来判断毒剂通过昆虫取食进入消化道的毒杀能力，测定方法是把药加入饵料中饲喂昆虫，或将药液注入昆虫的口腔内，迫使全部吞食，较理想的方法是夹毒叶片法。
其基本原理是在两片叶中夹入均匀分散的药剂，制成夹毒叶片饲喂昆虫，药剂随昆虫取食进入消化道而发生毒杀作用。
1．实验仪器及用具：养虫室、微量注射器、培养皿（5cm）、淀粉糊、镊子、剪刀、具塞小试管等。
2．实验方法：（1）药剂的配制：使用丙酮，将药剂A和B分别配制成1000μg/ml、100μg/ml、10μg/ml 三个浓度，每浓度5ml，装入具塞小试管。
（2）将菜叶剪成直径2cm的小片若干张，用微量注射器将丙酮药液定量（10ul）点滴在叶片上，待丙酮挥发后，用淀粉糊涂在无药的叶片上，用镊子移于带药的叶片上，将上下两张叶片粘合制成夹毒叶片，饲喂试虫，另喂无毒叶片为对照，每浓度处理试虫20头，重复三次。
24小时后观察试虫的死亡情况。
（三）内吸作用方式的测定：内吸作用方式的测定是药剂接触植物的某一部分，如根、茎、叶或种子等，渗入到植物的内部组织，随植物体液传导至全株，在一定的时间内，当昆虫取食带毒的植物或吸取带毒的汁液，而产生致毒反应。
本实验采用根部内吸法。
1．实验仪器及用具：养虫室、烧杯、吸管、培养皿（5cm ）、剪刀、植物苗等。
2．实验方法：（1） 药剂的配制：将药剂A 和B 分别配制成1000μg/ml 、100μg/ml 、10μg/ml 的水溶液各50ml ，注入烧杯中。
（2） 将植物苗的根部插入药液中，以清水为对照，2小时后，取植物苗的上部未接触药液的叶片饲喂试虫，每浓度处理试虫20头，重复三次，24小时后观察试虫死亡情况。
（四）薰蒸作用方式的测定：薰蒸作用方式的测定是在适当温度下，在固定的空间蒸发成气态，并达到一定的浓度，与试虫接触，在短时间内能杀死试虫。
本实验采用培养皿简易薰蒸测定法。
1．实验仪器及用具：养虫室、培养皿（9cm ）、培养皿（5cm ）、吸管、纱布 烧杯等。
2．实验方法：（1） 药剂的配制：将药剂A 和B 分别配制成1000μg/ml 、100μg/ml 、10μg/ml 的水溶液各20ml ，注入烧杯中。
（2） 取直径相同的9cm 的磨口培养皿，皿底放10ml 的药剂，用双层纱布密盖皿底，其上放试虫20头，每浓度重复三次，以清水为对照。
（3） 2小时后，将试虫转入培养皿（5cm ）中，培养24小时后，观察试虫死亡情况。
五．实验注意事项：1、目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好采用人工饲养的试虫。
2、环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气良好。
3、 处理设计：每处理需试虫15-30头，重复三次，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。