18种抗炎症中草药的抑菌作用研究

18种抗炎症中草药的抑菌作用研究

姓名:彭斯文学号:0312403012 专业:生物工程

前言

人类自从古代就记载了许多具有杀虫或控制害虫、抗菌或杀菌作用的植物,如中国、印度等东南亚以及一些非洲国家的劳动人民积累了许多利用植物杀虫防病的经验。自从1928年Alexander Fleming 发现青霉素以来，抗生素迅速发展，直到1960年代末期，人类可用来对抗细菌的武器已不下十数种，让人类顺利地脱离1940年代前饱受传染病威胁的窘境[1]，而传统的中草药遭到冷落。但是抗生素长期使用或滥用造成了人体或动物体抗药性的急剧上升，对人类生存已造成威胁。

由于中草药有着无副作用、无抗药性的特点，部分中草药有良好的抑菌效果，有可能替代抗生素的潜能，因而再次引起了人类的重视，中草药的抑菌研究成为目前研究的热点，并取得了不少成就。几个世纪前,我国人民就已知道植物中含有抗菌物质,在许多实例中,这些化合物能以天然的抗性或防御体系来抵抗微生物或其他病害。较早用于植物病害防治的有大蒜汁、洋葱汁、棉籽饼、辣蓼、五风草等[2]。至今人们已经调查和研究了一些具有杀菌、抗菌作用的植物,大部分资源集中在菊科、唇形科、木兰科、马兜铃科蓼科、木犀科、百合科、葫芦科、莎草科、豆科、十字花科等植物中,除此之外还有樟科的肉桂、香叶树、暴马丁香、白桂等[3,4]。而其具有抑菌作用的化学成分，其结构类型涉及萜类、生物碱类、黄酮类、苷类、皂甙、醌类、香豆

素、木脂素、芪类、胺类、酯类、酚类、醛类、醇类、甾类、有机酸及精油类等化合物[5]。虽然众多的植物提取物对病菌都有抑制作用,但是同一种活性物质对不同病原菌的抑制程度不同,同一病原菌对不同的提取物敏感性亦有差异。余世望等测定60种食药两用中药的抗菌作用,其中丁香(F.caryophylli)、花椒(P.zanthoxyli)、高良姜(R.alpiniaeofficinarum)、甘草(R.glycyrrhizae)、乌梅(F.mune)在0.2%浓度时显示明显的抗菌作用,丁香、花椒、高良姜对黄曲霉、黑曲霉等表现出强的抗真菌作用,乌梅对荧光假单孢菌属细菌均有强烈抑制作用,其他大部分提取物抗菌效果很弱[6]。鱼腥草水提取物[7]、马蹄皮酸醇提取物[8]、苦参提取物[9]、苦瓜汁液[10]、柚皮提取物[11]对各种细菌、真菌具有良好的抑菌作用。

随着科学的发展，中草药有效成分的提取、分离技术也不断进步。有关中草药有效成分的提取方法很多,常用的溶剂提取法包括浸渍法、渗透法、水蒸汽蒸馏法、煎煮法、回流法、连续回流法等[12]。近年来又出现了破碎提取法、超声波提取法、微波提取法、超临界萃取法[13～19]等新方法。提取溶剂也不断的改进，传统方法常用的是水提取，近年来有用乙醇、乙酸乙酯、丙酮、石油醚、乙醚等不同极性的溶剂[11]。分离方法越来越多，比较普通的方法有离心、过滤、萃取、柱层析、薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)、电泳、分子筛等本文我们通过对湖南新化民间中草药医生的拜访，面对面的交流，阅读他们的有关资料，并随他们上山采药[20,21,22]。其中香薷，味腥性微寒、发毒解暑、散湿利水、温胃调中。民间主治伤暑头痛、

发热恶寒、腹痛吐泻、水肿脚气等[20]，国内对香薷的研究主要体现在它能吸收土壤中的Cu元素来保护环境以及挥发油的提取，该种中草药的抑菌作用国、内外未见报道。千里光，味苦性寒、清热解暑、凉血明目等功能，主治疮疤肿痛、目赤痛肿疥癣、皮肤瘙痒，民间常用水煎液治病[21]。目前国内对千里光的研究主要在该植物的鉴定与部分体外抑菌实验，但体外抑菌实验不够透彻。本文对香薷、千里光等18种中草药的水提取物进行了抑菌研究。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1 实验设备CJ型水平层流工作台、ZHWY211B卧式恒温震荡摇床、LG10-

2.4A 、SIGMA型离心机、YXQ-LS-50S1立式压力蒸汽灭菌器、756PC紫外可见分光光度计、DHP-2000电热恒温培养箱、CS101-1EB电热鼓风干燥箱、QYQ-1000-UL／QYQ-200-UL移液枪、HH-S恒温水浴锅。

1.1.2 实验菌种大肠杆菌（E.coli O1）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus91053）、普通变形杆菌（Proteus vulgaris）、粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、鸡沙门氏杆菌（Salmonella pullorum）。由怀化学院微生物实验室提供。

1.1.3 培养基LB液体培养基：胰蛋白胨10 g、酵母粉5 g、食盐（NaCl）10 g、pH值7.0、水1000 ml。LB固体培养基在液体培养基中加入琼脂15～20 g。

1.1.4 实验药材号筒梗、槐米、千里光、蓖麻子、香薷、贯众、野

苦楝根、淡竹叶、栀子、冬瓜仁、七叶一枝花、杠板龟、牵牛子、田基黄、火麻仁、金樱子、土大黄、金钱草均采自湖南新化。

1.2 实验方法

1.2.1 制备中草药提取物将中草药切碎放入干燥箱，在70 ℃以下干燥至恒重。称取30克药材，加入20～30倍体积的水，加热煮沸后，小火熬煎30 min以上。除去药渣、浓缩至1000 mg/ml，然后在8000转/min高速离心10 min，取上清液灭菌备用。

1.2.2 实验菌的培养与计数配制200 ml LB固体培养基，灭菌后倒入20个直径为75 mm的无菌平板中，另配制LB液体培养基250 ml。用接种环分别挑取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、普通变形杆菌、鸡沙门氏杆菌斜面培养物一环，移接到LB平板上，使菌种活化。再分别挑取单菌落移接到装有50 ml液体LB培养基、容量为250 ml的三角瓶中，臵35 ℃、220 rpm下摇瓶培养10 h，用10倍稀释法将细菌稀释至10-7，取10-5、10-6、10-7涂平板，37 ℃培养24 h记数。

1.2.3 药敏纸片法筛选中草药将新星牌102号定性滤纸打成直径

为6 mm的圆形滤纸片，灭菌烘干后，放人上述中草药提取物中浸泡1～2 min，取出并在温度低于70 ℃的条件下烘干，即制成药敏纸片。取0.1 ml浓度为103～104 个/ml的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、普通变形杆菌、鸡沙门氏杆菌菌悬液涂平板各5个。用无菌镊子将药敏纸片均匀的贴在含菌的平板上，每个平板贴4种药敏纸片。放入恒温37 ℃培养24～36 h，测量抑菌圈的大小。每种药物重复做三次[23]。