胃蛋白酶活力测定
胃蛋白酶效价测定实验方案
胃蛋白酶检验用试剂：盐酸、酪氨酸、胃蛋白酶、三氯醋酸、牛血红蛋白酪氨酸烘干至恒重（105C）、试管（16支/组，至少12支/组，最少8支试管）试液的配制：1mol/L盐酸溶液：90ml盐酸，加水稀释并定容至1000ml。
（配500ml）盐酸溶液：取1mol/L盐酸溶液65ml，加水至1000ml。
（每组各配1000ml）5%三氯醋酸溶液：配600ml血红蛋白试液：配600ml （每组至少20ml）血红蛋白试验取牛血红蛋白1g,加盐酸溶液（取1mol/L盐酸溶液65ml,加水至1000ml）使溶解成100ml，即得。
本液置冰箱中保存，2日内使用。
本品系自猪、羊或牛的胃黏膜中提取的胃蛋白酶。
每1g中含蛋白酶活力不得少于3800单位。
【效价测定】对照品溶液的制备精密称取经105 C干燥至恒重的酪氨酸适量，加盐酸溶液〔取1mol/L盐酸溶液65ml，加水至1000ml〕制成每1ml中含0.5mg的溶液。
供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每1ml中约含0.2〜0.4单位的溶液。
测定法取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液1ml ,另3支各精密加入供试品溶液1ml，置37C10.5C水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37C ±）.5C的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37C ±）5C水浴中反应10分钟。
立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml ,摇匀，滤过，取续滤液备用。
另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml , 置37C ±）.5C水浴中保湿10分钟，再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml ,其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法（附录W A）在275nm的波长处测定吸收度，算出平均值A S 和A,按下式计算。
A XWs Xn每1g含蛋白酶活力（单位）=A s W X10 X81.19 式中AS为对照品的平均吸收度；A为供试品的平均吸收度；Ws为对照品溶液每1ml中含酪氨酸的量，ygW为供试品取样量，g;n为供试品稀释倍数。
胃蛋白酶质量标准
目的：建立胃蛋白酶的质量标准，确保产品质量。
适用范围：胃蛋白酶的质量检验。
责任者：QC按本标准进行检验。
内容胃蛋白酶WeidanbaimeiPepsin本品系自猪、羊或牛的胃黏膜中提取制得的胃蛋白酶，按干燥品计算，每1g中含胃蛋白酶活力不得少于3800单位。
[性状]本品为白色至淡黄色的粉末；无霉败臭；有引湿性；水溶液显酸性反应。
[鉴别]取本品的水溶液，加5%鞣酸或25%氯化钡溶液，即生成沉淀。
[检查]干燥失重取本品，在100℃干燥4小时，减失重量不得过5.0%（附录VIII L）。
微生物限度取本品，依法检查（附录XI J）。
每1g供试品中细菌数不得过5000个，霉菌和酵母菌数不得过100个，并不得检出大肠埃希菌；每10g供试品中不得检出沙门菌。
[效价测定]对照品溶液制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液（取1 mol/L盐酸溶液65ml，加水至1000ml）溶解并定量稀释制成每1ml中含0.5mg的溶液。
供试品溶液制备取本品适量，精密称定，加上述盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.2～0.4单位的溶液。
测定法取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液1ml，另3支各精密加入供试品溶液1ml，置37℃±0.5℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，取续滤液备用。
另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见分光光度法（附录IV A），算出平均值Ās和Ā，按下式计算。
Ā×W S×n每1g蛋白酶活力(单位)= ——————————ĀS×W×10×181.19式中ĀS为对照品的平均吸收度；Ā为供试品的平均吸收度；W S为每1ml对照品溶液中含酪氨酸的量，ug；W为供试品取样量，g；n为供试品的稀释倍数；在上述条件下，每分钟能催化水解血红蛋白生成1umol酪氨酸的酶量，为一个蛋白酶活力单位。
胃蛋白酶
一：苏玉永,徐楚鸿,吕永宁.多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定[J].2004.24(4):214-1252.1.1对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液(取1 moL·L-1盐酸溶液65 mL,加水至1000 mL,摇匀,即得)制成每1 mL中含0.5 mg的溶液,摇匀,备用。
2.1.2供试品溶液的制备取本品5粒,将内容物中的5片粉红色的胃蛋白酶糖衣片置研钵中,研细。
加上述盐酸溶液少许,研磨均匀,移至100 mL量瓶中。
加上述盐酸溶液至刻度,摇匀。
精密量取适量,用上述盐酸溶液制成每1 mL中约含0.2～0.4单位的溶液。
2.1.3测定法取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1 mL,另3支各精密加入供试品溶液 1 mL,置(37±0.5)℃水浴中,保温 5 min。
精密加入预热至(37±0.5)℃的血红蛋白试液5 mL,摇匀,并准确计时,在(37±0.5)℃水浴中反应10 min。
立即精密加入5%三氯醋酸溶液5 mL,摇匀,滤过。
取续滤液备用。
另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5 mL。
置(37±0.5)℃水浴中保温10 min,再精密加入5%三氯醋酸溶液5 mL。
其中1支加供试品溶液1 mL,另1支加盐酸溶液1 mL,摇匀,滤过。
取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法,在275 nm波长处测定吸收度,见图1,图2。
算出平均值A s和A,按下式计算:式中,As为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws为对照品溶液每1 mL中含酪氨酸对照品的量μg;n为供试品稀释倍数。
在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmoL酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。
2.2干扰试验按照处方配制无胃蛋白酶的空白样品,取适量,按2.1项下方法操作,结果在275 nm波长处几乎无吸收,说明处方中其他组分对胃蛋白酶活力的测定无干扰。
胃蛋白酶测定
胃蛋白酶测定文章目录*一、胃蛋白酶测定的基本信息1. 定义2. 专科分类3. 检查分类4. 适用性别5. 是否空腹*二、胃蛋白酶测定的正常值和临床意义1. 正常值2. 临床意义*三、胃蛋白酶测定的检查过程及注意事项1. 检查过程2. 注意事项*四、胃蛋白酶测定的相关疾病和症状1. 相关疾病2. 相关症状*五、胃蛋白酶测定的不适宜人群和不良反应1. 不适宜人群2. 不良反应胃蛋白酶测定的基本信息1、定义胃蛋白酶的前身是胃蛋白酶原,由胃底腺主细胞分泌,在胃酸中转化为胃蛋白酶。
后者将蛋白质在胃内进行初步消化。
胃蛋白酶测定胃液化学检查项目之一。
人类及哺乳动物胃液中的蛋白酶与凝乳酶为同一种酶,因此可利用胃蛋白酶使乳液发生凝固的速度,间接推算出胃蛋白酶的含量,此法简便、易操作。
2、专科分类消化3、检查分类生化检查4、适用性别男女均适用5、是否空腹空腹胃蛋白酶测定的正常值和临床意义1、正常值40～60U/ml。
2、临床意义异常结果:胃溃疡时PP多为正常;十二指肠溃疡时明显升高;慢性十二指肠炎、胃扩张、慢性胃炎时活性减弱;恶性贫血时极低或无活性。
PGⅠ、PGⅡ含量升高提示消化性溃疡发病的危险性增加,PGⅠ含量增高对判断溃疡活动有意义。
PGⅠ/PGⅡ比值在胃癌和萎缩性胃炎时均明显降低,提示此项检查可作为萎缩性胃炎的一种追查指标和早期发现胃癌的筛选方法。
胃蛋白酶测定的检查过程及注意事项1、检查过程取0.5mol/L醋酸缓冲液95ml,加入0.2mol/L氯化钙溶液5ml,再加入脱脂乳20g液体,即为基质液。
取基质液5ml,用0.05mol/L枸橼酸盐缓冲液稀释至6倍,加入胃液0.2ml混合。
立即置于35.5℃水浴中,立即用力摇动使其混合,并同时开动秒表,然后将试管反复倾斜、直立,同时注意铅管壁流下的乳液,当出现小片状干酪样物时,停止秒表,观察凝乳开始附着于管壁的时间,记录时间。
胃蛋白酶单位的计算:在上速条件下,使5毫升牛乳一醋酸混合液于60秒钟发生凝固的蛋白酶为一个单位。
蛋白酶活性的测定
实验四蛋白酶活力的测定一、实验目的1、了解蛋白酶活力测定的原理；2、掌握蛋白酶活力测定的方法。
二、实验原理蛋白酶在一定条件下不仅能够水解蛋白质中的肽键，也能够水解酰胺键和酯键，因此可用蛋白质或人工合成的酰胺及酯类化合物作为底物来测定蛋白酶的活力。
本实验选用酪蛋白为底物，测定微生物蛋白酶水解肽键的活力。
酪蛋白经蛋白酶作用后，降解成相对分子质量较小的肽和氨基酸，在反应混合物中加入三氯醋酸溶液，相对分子质量较大的蛋白质和肽就沉淀下来，相对分子质量较小的肽和氨基酸仍留在溶液中，溶解于三氯醋酸溶液中的肽的数量正比于酶的数量和反应时间。
在280nm波长下测定溶液吸光度的增加，就可计算酶的活力。
三、实验试剂①微生物蛋白酶萃取液（0.01g/ml）：称取1.0g酶制剂，加100ml蒸馏水搅拌30min，在4℃下离心分离后，将上层清夜置于冰箱中保存，使用前稀释一定倍数；② 0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）；③ 1%酪蛋白溶液：取1.0g酪蛋白，加100ml 0.2mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.5），加热并搅拌使它完全分散，然后置于冰箱中保存；④ 5%三氯醋酸（TCA）溶液。
四、实验步骤1、将5%TCA溶液和1%酪蛋白溶液在37℃下保温。
2、取四支15ml具塞试管，分别标上记号A1、A0、B1和B0。
在A1和A0试管中各吸入0.20ml酶液，在B1和B0试管中各吸入0.40ml酶液，分别用0.2mol/L 磷酸盐缓冲液定容至2.00ml。
在A0和B0试管中各吸入6.00ml5%三氯醋酸溶液，上述四支试管都置于37℃水浴中保温。
3、在各试管中吸入2.00ml 1%酪蛋白溶液，在37℃下保温10min（准确计时）后，再向A1和B1试管中吸入6.00ml5%三氯醋酸溶液。
4、将试管从水浴中取出，在室温下放置1h，用少量上清液润湿滤纸后过滤，保留滤出液。
5、在280nm波长下，分别以A0和B0滤液为空白，测定A1和B1滤液的吸光度。
国标—蛋白酶活力测定法
中华人民共和国专业标准蛋白酶活力测定法 SB/T 10317-1999Measurement of proteinase activity━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油时在制品菌种、成曲的蛋白酶活力测定。
1 福林法1.1 试剂及溶液: 以下试剂都为分析纯1.1.1 福林试剂(Folin试剂):于2000mL磨口回流装置内,加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O) 100g,钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)25g,蒸馏水700mL,85%磷酸50mL,浓盐酸100mL,文火回流10h。
取去冷凝器,加入硫酸锂(Li2SO4)50g,蒸馏水50mL,混匀,加入几滴液体溴,再煮沸15min,以驱逐残溴及除去颜色,溶液应呈黄色而非绿色。
若溶液仍有绿色,需要再加几滴溴液,再煮沸除去之。
冷却后,定容至1000mL,用细菌漏斗(No4～5)过滤,置于棕色瓶中保存。
此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释。
即成已稀释的福林试剂。
1.1.2 0.4mol碳酸钠溶液: 称取无水碳酸钠(Na2CO3)42.4g,定容至1000mL。
1.1.3 0.4mol三氯乙酸(T C A)溶液: 称取三氯乙酸(CCL3COOH)65.4g,定容至1000mL。
1.1.4 pH7.2磷酸盐缓冲液:称取磷酸二氢钠(NaH2PO4·2H2O)31.2g,定容至1000mL,即成0.2mol溶液(A液)。
称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)71.63g,定容至1000mL,即成0.2mol溶液(B液)。
取A 液28mL 和B 液72mL,再用蒸馏水稀释1倍,即成0.1mol pH7.2的磷酸盐缓冲液。
1.1.5 2%酪蛋白溶液:准确称取干酪素2g,称准至0.002g,加入0.1N氢氧化钠10mL,在水浴中加热使溶解(必要时用小火加热煮沸),然后用pH7.2磷酸盐缓冲液定容至100mL即成。
蛋白酶活性的测定方法
蛋白酶活性的测定方法(GB/T23527-2009)1 原理蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷物蛋白等都有很好的水解作用。
磷钨酸和磷钼酸混合试剂，即福林-酚试剂，碱性条件下极不稳定，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应（钨兰和钨兰混合物）。
由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸（酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸），因此，蛋白质及其水解产物也呈此反应。
利用蛋白酶分解酪素（底物）生成含酚基氨基酸的呈色反应，来间接测定蛋白酶的活力。
2 仪器和设备2.1 分析天平：精度0.0001g2.2 恒温水浴：精度±0.2℃2.3 计时表2.4 分光光度计2.5 沸水浴器2.6 振荡混合器2.7 pH计: 精度0.01pH单位3 试剂和溶液3.1 乳酸缓冲液（pH=3.0）适用于酸性蛋白酶甲液：称取乳酸（80%-90%）10.6g,加水溶解并定容至1000ml。
乙液：称取乳酸钠（70%）16g,加水溶解并定容至1000ml.使用溶液：取甲液8ml,加乙液1ml,摇匀，稀释一倍，即成0.05mol/L乳酸缓冲溶液。
3.2 磷酸缓冲液的制备（pH=7.5）适用于中性蛋白酶准确称取磷酸氢二钠（Na2HPO3.12H2O）6.02和磷酸二氢钠（NaH2PO3.2H2O）0.5g,加水定容至1000ml3.3 硼酸缓冲液(pH=10.5) 适用于碱性蛋白酶甲液：称取硼酸钠19.08g,加水溶解并定容至1000ml。
乙液：称取氢氧化钠4.0g,加水溶解并定容至1000ml.使用溶液：取甲液500ml,加乙液400ml,摇匀，用水稀释至1L。
3.4 0.4mol/L碳酸钠溶液：准确称取无水碳酸钠42.4g,以蒸馏水溶解定溶至1000ml.3.5 0.4mol/L的三氯醋酸液：准确称取65.4三氯醋酸,以蒸馏水溶解定溶至1000ml3.6 0.5mol/L的NaOH：准确称取2g NaOH溶解并定至100ml3.7 10.00mg/ml酪素溶液称取酪素1.000g,准确至0.001g,用少量的0.5mol/L的氢氧化钠溶液(若为酸性蛋白酶则用浓乳酸2-3滴)润湿,,加入适量的各适宜的缓冲液约80ml,在沸水浴中边加热边搅拌,直至完全溶解,冷却后,转入100ml容量瓶中,用适宜的缓冲液稀释至刻度,此溶液在冰箱内贮存,有效期为三天.3.8 100μg/ml酪氨酸标准溶液3.8.1 准确称取预先于105℃干燥至恒重的L-酪氨酸0.1000g ,用1mol/L 的盐酸60ml 溶解后定容至100ml,即为1.00mg/ml的酪氨酸溶液.3.8.2 吸取1.00mg/ml酪氨酸标准溶液10.00ml,用0.1mol/L盐酸定容至100ml,即得100.0μg/ml L-酪氨酸标准溶液.3.9 酶样的制备准确称取1.000g固体酶或移取1ml液体酶样，用少量的适宜缓冲液溶解并用玻璃棒捣研,然后将上清液倒入100ml容量瓶,沉渣中再添入少量缓冲液捣研多次,最后全部移入容量瓶,稀释到刻度,用四层纱布过滤。
蛋白酶活力测定1
一、概述
1．什么是酶？
2．影响酶催化反应的 因素
3．什么是酶的活力? 4．测定意义
5. 测定方法
生物催化剂
特殊催化功能的蛋白质
酶的特性:
（2）催化速度快 （3）反应条件温和
一种酶只作用一种底 物： 淀粉酶：只能催 化淀粉水解 → 糊精、 低聚糖； 蛋白酶：只能催 化蛋白质水解 → 氨 基酸、肽；
C（μ g/ml）
（2）计算K
Kn = Cn ODn
K1+K2+K3+K4+K5
K=
5
（3）直接查取
（4）计算机处理，回归曲线：C=KOD
（二）测定蛋白酶活力——实测
1．缓冲溶液的配制 2．底物配制 3．待测酶液配制 4．测定
1．缓冲溶液的配制
酸性蛋白酶。如：537 pH最适=3.0 柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液 pH=3.0
0 0
2 无 无
0 0
2 无 无
操作
操作
40℃水浴锅内保温 10 分钟
0 白色↓ 3 白色↓ 3 白色↓
40℃水浴锅内保温 10 分钟
10﹪三氯乙酸（ml）
现象
10﹪三氯乙酸（ml）03 Nhomakorabea3
现象取出摇振后室温下静置数分钟过滤 白色↓ 白色↓ 取出摇振后室温下静置数分钟过滤
白色↓
操作手续
接滤液 干试管 移取滤液（ml） 0.55mol/LNa2CO3（ml） 福林试剂（ml） 0` 0`` 1 5 1
柠檬酸—柠檬酸钠溶液的pH计算
弱酸—弱酸盐缓冲体系 pH = pka1+lg（C酸/C盐） = 3.13+ lg（C酸/C盐） 柠檬酸: pKa1 = 3.13 pKa2 = 4.76 pKa3 = 6.40
胃蛋白酶活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
胃蛋白酶活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC2320规格：50T/24S产品内容：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入25mL试剂二充分溶解。
试剂二：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入25mL蒸馏水充分溶解。
产品说明：胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质成小肽段。
一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解，水解产物酪氨酸在275nm下有特征吸收峰。
通过测定吸光值的变化来计算酶活。
自备仪器和用品：紫外-可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、粗酶液提取：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆或者0.1mL胃液加入0.9mL提取液。
10000rpm4℃离心10分钟，取上清，即粗酶液，置冰上待测。
二、测定步骤：1.分光光度计预热30min以上，调节波长到275nm，蒸馏水调零。
2.按下表操作：第1页共2页测定管对照管样本（μL）100-试剂一（μL）500500混匀，37℃保温10min。
试剂三（μL）500500摇匀1min。
样本（μL）-100混匀后10000rpm4℃离心10min，取上清用1mL石英比色皿，测定A，记为A测定和A对275nm照，计算∆A=A测定-A对照。
（注意对照管后加粗酶液，而测定管先加粗酶液）三、胃蛋白酶活性计算：（1）按样本蛋白浓度计算：活性单位定义：37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶（U/mg prot）=（∆A÷Ɛ÷d×V反总）÷（Cpr×V样本）÷T=0.786×∆A÷Cpr（2）按样本鲜重计算：活性单位定义：37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成1μmol酪氨酸为一个酶活单位。
蛋白酶活力测定
Δ
H2O 50ml
混匀 + 溴水 15`
Δ
冷却 →黄色 → 过滤
金黄色溶液
(1)柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液 pH=3.0
A液：0.1mol/L柠檬酸 21.01g C6H8O7·H2O → 1000ml
CH2—COOH HO—C —COOH
CH2—COOH
B液：0.1mol/L柠檬酸纳 29.4g Na3C6H5O7·2H2O → 1000ml
胶原蛋白（80%-85%）
弹性蛋白 非胶原蛋白 网硬蛋白
间质蛋白
酶的活力会下降 酶的催化能力强
测定方法
乙醇滴定法、甲醛滴定法等
Folin-酚法，紫外分光光度法，残 氮量测定法等等。
Gross法、明胶粘度下降法、凝乳 作用法
酸性蛋白酶活性，还可以根据胰蛋 白酶原激活作用的大小来表示。
二、测定原理
福林试剂，在碱性情况下极 不稳定。可被酚类化合物还原， 而呈蓝色反应。由于蛋白质或 水解产物中含有酚基的氨基酸 (酪氨酸、色氨酸等)也呈这个 反应，因此可以利用这个原理 来测定蛋白酶活性的强弱。
蛋白酶的活力定义：
在一定温度、pH条件下，1g酶粉或1ml酶
液，每分钟催化水解酪蛋白（或血红蛋白） 所产生的酪氨酸的微克数，称为酶的活力。
表示为：单位/g或单位/ml。通常人
们爱讲多少个单位。如一般出厂酶活力为
5万单位，即：50000μg/g =0.05g酪氨酸 /1g酶粉。
生皮蛋白 质
测定意义
➢ 缓冲溶液
➢ 福林试剂
显色剂
一种杂多酸
磷钼酸 H3[P（Mo3O10）4] 磷钨酸 H3[P（W3O10）4]
福林试剂的配制
Na2WO4·2H2O Na2MoO4·2H2o
胃蛋白酶原检测标准
胃蛋白酶原检测标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：胃蛋白酶原（PG）是一种由胃部分泌的酶原前体，在胃内经盐酸激活成为胃蛋白酶。
胃蛋白酶在胃酸的环境下能够分解蛋白质，是胃液中的主要蛋白酶。
胃蛋白酶原检测是一种可以用来评估胃部功能状况的检测方法，对于诊断和治疗胃相关疾病具有重要的临床意义。
胃蛋白酶原检测的标准主要包括以下方面：一、检验方法：目前常用的胃蛋白酶原检测方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫测定法等。
在进行检测时，需要遵循严格的操作规程，确保得到准确可靠的检测结果。
二、参考范围：一般情况下，正常人的胃蛋白酶原水平在一定范围内波动。
通过比对实验结果与正常参考值的范围，可以帮助医生评估患者的胃功能状况，发现是否存在异常。
三、临床意义：胃蛋白酶原检测可以帮助医生对胃功能状况进行评估，诊断和鉴别消化性溃疡、胃疼痛、胃部不适等症状。
也有助于指导临床治疗方案的制定和调整。
四、质控措施：在进行胃蛋白酶原检测时，需要严格控制试剂品质，确保实验环境的洁净和条件的稳定，做到标本采集、运输、保存等环节的规范，以确保检测结果的准确性和可靠性。
胃蛋白酶原检测标准对于评估胃部功能状况，诊断和治疗胃相关疾病具有重要的临床意义。
只有做好相关工作和措施，才能确保胃蛋白酶原检测在临床实践中的准确性和可靠性，为患者的健康服务。
希望在未来的临床实践中，能进一步完善和规范胃蛋白酶原检测标准，为医生和患者提供更好的监测和治疗手段。
【字数不足，需要再加一些内容】第二篇示例：胃蛋白酶原检测标准是指用于检测胃的胃蛋白酶原水平的一套标准化的方法和指导原则。
胃蛋白酶原是一种蛋白酶前体，它在胃内受到激活成为活性胃蛋白酶，参与胃内蛋白质的消化。
胃蛋白酶原水平与一些胃部疾病的发生和发展密切相关，因此对其进行检测具有重要的临床意义。
胃蛋白酶原检测标准主要包括以下几个方面：一、检测方法的选择：目前，常用的检测方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫荧光法和放射免疫法等。
胃蛋白酶活力测定
胃蛋白酶拼音名：Weidanbaimei英文名：Pepsin书页号：2005年版二部－389本品系自猪、羊或牛的胃黏膜中提取制得的胃蛋白酶。
每1g中含蛋白酶活力不得少于3800 单位。
【性状】本品为白色至淡黄色的粉末；无霉败臭；有引湿性；水溶液显酸性反应。
【鉴别】取本品的水溶液，加鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液，即生成沉淀。
【检查】干燥失重取本品，在100 ℃干燥4 小时，减失重量不得过5.0 ％（附录ⅧL）。
【效价测定】对照品溶液的制备精密称取酪氨酸对照品适量，加盐酸溶液〔取1mol/L 盐酸溶液65ml，加水至1000ml 〕制成每1ml 中含0.5mg 的溶液。
供试品溶液的制备取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每1ml 中约含0.2 ～0.4单位的溶液。
测定法取试管6 支，其中3 支各精密加入对照品溶液1ml ，另3 支各精密加入供试品溶液1ml ，置37℃±0.5℃水浴中，保温5 分钟，精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml ，摇匀，并准确计时，在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟。
立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml ，摇匀，滤过，取续滤液备用。
另取试管2 支，各精密加入血红蛋白试液5ml ，置37℃±0.5℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml ，其中1支加供试品溶液1ml ，另1 支加上述盐酸溶液1ml ，摇匀，滤过，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照紫外-可见分光光度法（附录ⅣA），在275nm 的波长处测定吸光度，算出平均值ＡS和Ａ，按下式计算。
在上述条件下，每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol 酪氨酸的酶量，为一个蛋白酶活力单位。
【类别】助消化药。
【贮藏】密封，在干燥处保存。
【制剂】(1)胃蛋白酶片(2)胃蛋白酶颗粒(3)含糖胃蛋白酶。
蛋白酶酶活力的测定
五、心得体会
一、在本实验中的对照组是为了证明在酸性条件下，胰蛋白酶无法催化酪蛋白水解；空白对照是要排除蒸馏水能与Folin试剂产生蓝色这种可能的存在。
二、稀释的酶溶液不能长期使用。因为酶的活性并不能长期保持，放置时间过长会导致酶活性丧失而引起较大实验误差，甚至无法完成实验。
六、参考文献
实验报告
课程名称：食品化学与分析实验指导老师：_冯凤琴_____成绩：__________________
实验名称：蛋白酶酶活力的测定实验类型：定量实验
一、实验目的二、实验原理三、材料、仪器与试剂
四、实验步骤五、结果及分析六、讨论七、参考文献
一、实验目的
1、了解蛋白酶的作用机理和作用条件。
2、掌握测定酶活力的方法及其原理。
三、材料、仪器与试剂
（一）材料：木瓜蛋白酶、酪蛋白、酪氨酸
（二）仪器：可见-紫外分光光度计、水浴锅、天平、具塞刻度试管(10、15ml)、试管架，容量瓶(100、500ml、1000mL)、移液管(1、10ml)、烧杯(25ml)、玻璃棒。
（三）试剂：
1、0.5mol/LNaOH溶液：取4gNaOH固体，溶解后，定容在100mL蒸馏水中
四、实验步骤
（一）酪氨酸标准曲线制作
1、取6只干燥、洁净的试管，编号为1~6。
2、按照下表所示配方，分别用移液管向各试管中加入相应物质，震荡混匀。
3、在40℃水浴中显色20分钟，于680nm波长处进行比色，以1号试管为空白组，测各组溶液的吸光值并进行记录。
试管编号
1
2
3
4
5
6
200μg /mL标准酪氨酸溶液(mL)
1、《食品化学》作者冯凤琴，陆柏益等出版社：浙江大学出版社
胃蛋白酶
一：苏玉永,徐楚鸿,吕永宁.多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定[J].2004.24(4):214-1252.1.1对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量,加盐酸溶液(取1 moL·L-1盐酸溶液65 mL,加水至1000 mL,摇匀,即得)制成每1 mL中含0.5 mg的溶液,摇匀,备用。
2.1.2供试品溶液的制备取本品5粒,将内容物中的5片粉红色的胃蛋白酶糖衣片置研钵中,研细。
加上述盐酸溶液少许,研磨均匀,移至100 mL量瓶中。
加上述盐酸溶液至刻度,摇匀。
精密量取适量,用上述盐酸溶液制成每1 mL中约含0.2～0.4单位的溶液。
2.1.3测定法取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1 mL,另3支各精密加入供试品溶液 1 mL,置(37±0.5)℃水浴中,保温 5 min。
精密加入预热至(37±0.5)℃的血红蛋白试液5 mL,摇匀,并准确计时,在(37±0.5)℃水浴中反应10 min。
立即精密加入5%三氯醋酸溶液5 mL,摇匀,滤过。
取续滤液备用。
另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5 mL。
置(37±0.5)℃水浴中保温10 min,再精密加入5%三氯醋酸溶液5 mL。
其中1支加供试品溶液1 mL,另1支加盐酸溶液1 mL,摇匀,滤过。
取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法,在275 nm波长处测定吸收度,见图1,图2。
算出平均值A s和A,按下式计算:式中,As为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws为对照品溶液每1 mL中含酪氨酸对照品的量μg;n为供试品稀释倍数。
在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmoL酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。
2.2干扰试验按照处方配制无胃蛋白酶的空白样品,取适量,按2.1项下方法操作,结果在275 nm波长处几乎无吸收,说明处方中其他组分对胃蛋白酶活力的测定无干扰。
蛋白酶活力测定
3
在实际应用中，蛋白酶活力测定具有广泛的应用 价值，如食品工业中蛋白质水解、洗涤剂生产中 的酶催化反应等。
研究展望
随着生物技术的不断发展，蛋白酶活力测定技术也在不断改进和完善。未来，可以通过开发 新型的蛋白酶活力测定方法，提高测定灵敏度和特异性，进一步拓展其应用范围。
在研究蛋白酶的底物特异性、抑制剂作用机制等方面，可以结合计算机模拟技术、光谱学技 术等手段，深入探究酶的催化机制和作用机理。
随着蛋白质组学和代谢组学研究的深入，蛋白酶活力测定在生物标志物发现、疾病诊断和治 疗等方面的应用将更加广泛。同时，随着人类对生物大分子结构和功能的认识不断深入，蛋 白酶活力测定在药物设计和发现等领域也将发挥更加重要的作用。
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数据记录与处理
06 详细记录实验数据，并进行必
要的计算和处理，以得出实验 结论。
实验操作技巧
温度控制
确保酶反应在恒温条件下进行，以减 少温度对酶活力的影响。
02
pH调节
使用适当的缓冲液调节反应液的pH值， 以保证酶活力的稳定。
01
03
避免污染
在整个实验过程中，要严格控制实验 环境，避免样品和试剂受到污染。
对照实验
进行对照实验时，要确保对照组与实 验组条件一致，以消除误差对实验结 果的影响。
05
04
精确测量
在实验过程中，要使用精确的测量工 具和方法，确保实验数据的准确性。
05
结果分析与解读
结果分析
酶活力单位
通过实验数据，计算出蛋白酶的酶活力单位， 以评估酶的催化活性。
酶促反应速率
分析酶促反应速率，了解酶促反应的进程和 快慢。
底物浓度与酶活力的关系
蛋白酶活力测定方法
蛋白酶活力测定方法酸性蛋白酶产品概述:蛋白质由氨基酸组成，是自然界中发现的最复杂的有机化合物之一。
由盐酸和蛋白酶分解成易被高等动物的肠道和微生物有机体的细胞膜吸收的氨基酸。
包括人类在内的每种动物，必须要有足够的蛋白质来维持自身生长，来生成每个细胞所必需的氨基酸，一些特种蛋白质还是某些特殊细胞、腺体分泌物、酶和激素的功能性组成元素。
蛋白酶是指一些有催化功能的酶，能够水解（断裂）蛋白质，因此也被称为蛋白水解酶。
蛋白水解酶在许多的生理和病理过程中发挥着重要作用，在食品和乳品加工业也有着广泛应用。
工作机理蛋白水解酶制剂本产品能在酸性条件下水解蛋白质食品中的缩氨酸键，释放氨基酸或者多肽。
在酒精、葡萄酒、果汁、啤酒、黄油和酱油生产中，添加酸性蛋白酶可澄清发酵液中的雾气。
酵母在发酵阶段的生长可以通过悬浮蛋白质转化的氨基酸来加以促进，从而加速发酵并提高产量。
本产品是一种酸性蛋白酶制剂，在酸性条件下具有较高活性，由酸性蛋白酶高产菌株——曲霉菌深层发酵而成。
它广泛应用于饲料、纺织、废水处理和果汁提纯方面。
酸性蛋白酶（Acid protease ）是指蛋白酶具有较低的最适pH，而不是指酸性基团存在于酶的活性部位，酸性蛋白酶的最适PH从2左右（胃蛋白酶）到4左右。
从酶的活力-PH曲线分析，在酶的活性部位中含有一个或更多的羟基。
这一类蛋白酶中研究最彻底的是胃蛋白酶。
（酸性蛋白酶537容易失活）简介：酸性蛋白酶是由隆科特黑曲霉优良菌种经发酵精制提炼而成，它能在低PH条件下，有效水解蛋白质，广泛应用于酒精、白酒、啤酒、酿造、食品加工、饲料添加、皮革加工等行业。
1、产品规格：，规格有5万u/g～10万u/g液体型为黑褐色液体，规格有50000u/ml～10000u/ml.2、酶活力定义：一个酶活力单位是1g酶粉或1ml酶液在40℃，PH3.0条件下，1分钟水解酪素产生1ug酪氨酸为一个酶活力单位（u/g或u/ml）特性1、温度范围为：最适温度范围为40℃-50℃2、PH为：最适PH范围为2.5～3.5使用方法1、白酒工业：本品用以淀粉为原料的生产酒精及白酒行业，提高出酒率0.25%个酒分，提高发酵速度。
胃蛋白酶三项检测解读
胃蛋白酶三项检测解读
胃蛋白酶三项检测是一种通过检测胃液中的蛋白酶活性来评估胃功能的方法。
该检测主要包括胃酸、胃蛋白酶和胰蛋白酶的测定。
1. 胃酸测定：胃酸是胃液中最主要的消化液之一，能够促进食物的消化和杀灭进入胃内的细菌。
胃酸测定可以评估胃酸分泌功能。
正常情况下，胃酸浓度应在一定范围内，过高或过低均可能引起胃肠道疾病。
2. 胃蛋白酶测定：胃蛋白酶是一种由胃壁细胞分泌的蛋白酶，主要参与蛋白质的消化。
胃蛋白酶测定可以评估胃蛋白酶分泌功能，当胃蛋白酶活性异常时，可能出现胃肠道消化不良等问题。
3. 胰蛋白酶测定：胰蛋白酶是由胰腺分泌的蛋白酶，也是参与蛋白质的消化。
胰蛋白酶测定可以评估胰腺功能。
当胰蛋白酶活性异常时，可能出现胰腺炎、胆道阻塞等问题。
通过胃蛋白酶三项检测的结果，医生可以评估胃蛋白酶和胰蛋白酶的分泌功能、胃酸的分泌状态，进而判断胃肠道消化功能是否正常，对胃肠道疾病的诊断和治疗有一定参考价值。
然而，需要注意的是，胃蛋白酶三项检测的结果仅为一种辅助诊断工具，临床诊断还需综合考虑其他临床症状、体征以及其他相关检查结果。
最终的诊断和治疗方案应由医生根据具体情况来确定。
多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定
表3 供试品(1→10)干扰实验结果T ab 3 Results of inhibition enhancement test for product (1→10)内毒素浓度/EU ・mL -1内毒素水溶液内毒素供试品溶液(1→10)0202024020103401033040.25++++++++++++++++0.125++++++++++++++++0.06----++++++++++++0.03----------------水溶液阴性对照(NC )--供试品阴性对照(NPC )------终点(end 2point )/EU ・mL -1λs =0.125λt =0.06λt =0.06λt=0.06表4 样品稀释溶液(1→10)的细菌内毒素检测结果Tab 4 Results of bacterial endotoxin test for product (1→10)鲎试剂批号(TAL )样品批号供试品(1→10)溶液阴性对照(NC )供试品阳性(PPC )阳性对照(PC )0008260202024---++0201043---++0103304---++0112110202024---++0201043---++0103304---++原检查(家兔法)中的家兔给药剂量没有一个统一的值,而丹参注射液临床用量较大,考虑到临床安全等因素,本文将M 值初定为2.0mL ・kg -1・h -1。
由干扰初筛试验和干扰试验可知丹参注射液的原液对鲎试剂有抑制作用,而10倍以上的稀释液对鲎试剂抑制作用消失。
因此,选择丹参注射液的10倍稀释液进行细菌内毒素检查。
不同鲎试剂对样品的反应有差异,本试验采用两种不同批号的鲎试剂同时进行试验,得到了较为一致的结果,说明鲎试剂用于丹参注射液的内毒素检查是可行的。
参考文献:[1] 章国钧,邱在峰,边有珍,主编.上海市医院制剂手册[M ].第3版.上海:上海科学技术出版社,1995.481.[2] 南京市卫生局主编.医院制剂规范[M ].第1版.南京:南京大学出版社,1989.37.[3] 中国药典.二部[S].2000.附录86.[4] 中国药典.二部[S].2000.附录204.[收稿日期]2003207212[作者简介] 苏玉永,男,硕士,主管药师,电话:027*********,E 2mail :dlpj @多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定苏玉永,徐楚鸿,吕永宁 (华中科技大学同济医学院附属协和医院,湖北武汉430022)[摘要] 目的:建立多酶微片胶囊中胃蛋白酶活力测定的方法。
蛋白酶活力的测定
实验三蛋白酶活力的测定一、目的掌握用分光光度计法测定蛋白酶活力的原理与操作技术。
二、原理蛋白酶水解酪蛋白，其产物酪氨酸能在碱性条件下使福林——酚试剂还原，生成鉬蓝与钨蓝，以比色法测定。
三、试剂及仪器1．福林—酚试剂称取50g钨酸钠(Na2WO4•2H2O)，12.5g钼酸钠(Na2MoO4•2H2O)，置入1000mL原底烧瓶中，加350mL水，25mL85%磷酸，50mL浓盐酸，文火微沸回流10h，取下回流冷凝器，加50g硫酸锂(Li2SO4)和25mL水，混匀后，加溴水脱色，直至溶液呈金黄色，再微沸15min，驱除残余的溴，冷却，用4号耐酸玻璃过滤器抽滤，滤液用水稀释至500mL。
使用时用2倍体积的水稀释。
2．0.4mol/L碳酸钠溶液：称取42.4g碳酸钠，用水溶解并定容至1000mL。
3．0.4mol/L三氯乙酸溶液：称取65.5g三氯乙酸，用水溶解并定容至1000mL。
4．2%酪蛋白溶液称取2.00g酪蛋白(又名干酪素)，加约40mL水和2~3滴浓氨水，于沸水浴中加热溶解，冷却后，用pH7.2磷酸缓冲溶液稀释定容至100mL，贮存于冰箱中。
5．pH7.2磷酸缓冲液0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液：称取31.2g磷酸二氢钠(NaH2PO4•2H2O)，用水溶解稀释至1000mL；0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液：称取71.6g磷酸氢二钠(Na2HPO4•12H2O)，用水溶解稀释至1000mL；pH7.2磷酸缓冲溶液：取28mL 0.2mol/L磷酸二氢钠溶液和72mL 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液，用水稀释至1000mL。
6．标准酪氨酸溶液：准确称取0.1g DL-酪氨酸，加少量0.2mol/L盐酸溶液(取1.7mL浓盐酸，用水稀释至100mL)，加热溶解，用水定容至1000mL，每毫升含DL-酪氨酸100微克。
7．仪器：分光光度计、试管四、操作步骤1．标准曲线绘制标准酪氨酸溶液(mL)[100 g/mL]稀释酪氨酸溶液浓度(g/mL)在上述各管中各取1mL，分别加入5mL 0.4mol/L碳酸钠溶液，1mL福林—酚试剂，于400C水浴显色20min，在680nm波长下测吸光度，绘制标准曲线，在标准曲线上求得吸光度为1时相当的酪氨酸g 数，即为K 值。
胃蛋白酶试剂 指标
胃蛋白酶试剂指标
（最新版）
目录
1.胃蛋白酶试剂的定义和作用
2.胃蛋白酶试剂的指标及其意义
3.胃蛋白酶试剂的应用场景
4.胃蛋白酶试剂的注意事项
正文
胃蛋白酶试剂是一种用于检测胃液中胃蛋白酶活性的生化试剂。
胃蛋白酶是胃液中的一种重要酶类，对蛋白质具有消化作用。
通过测量胃液中胃蛋白酶的活性，可以评估胃液的分泌功能和胃部疾病的病情。
胃蛋白酶试剂的指标主要是胃蛋白酶活性单位（U/ml），这个指标反映了胃液中胃蛋白酶的浓度。
正常情况下，胃液中胃蛋白酶活性应该在20-100 U/ml之间。
如果胃液中胃蛋白酶活性过低，可能是因为胃酸分泌不足，如萎缩性胃炎、胃窦炎等疾病；如果胃液中胃蛋白酶活性过高，可能是因为胃酸分泌过多，如胃溃疡、十二指肠溃疡等疾病。
胃蛋白酶试剂广泛应用于临床检验和科研工作中。
在临床检验中，胃蛋白酶试剂主要用于检测胃液中胃蛋白酶活性，辅助诊断胃部疾病；在科研工作中，胃蛋白酶试剂主要用于研究胃液的消化功能和胃部疾病的发病机制。
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供试品溶液的制备 取本品适量，精密称定，用上述盐酸溶液制成每1ml 中约含 0.2 ～0.4 的溶液。
测定法 取试管6 支，其中3 支各精密加入对照品溶液1ml ，另3 支各精密加入供 试品溶液1ml ，置37±0.5 ℃水浴中，保温5 分钟，精密加入预热至37±0.5 ℃的血红 蛋白试液5ml ，摇匀，并准确计时，在37±0.5 ℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5% 三氯醋酸溶液5ml ，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用。另取试管2 支，各精密 加入血红蛋白试液5ml ，置37±0.5 ℃水浴中保湿10分钟，再精密加入 5％三氯醋酸溶 液5ml ，其中1 支加供试品溶液1ml ，另1 支加上述盐酸溶液1ml ，摇匀，滤过，弃去 初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法（附录Ⅳ A） 在275nm 的波长处测定吸收度，算出平均值ＡS 和Ａ，按下式计算。
Ａ×Ｗｓ×ｎ
每g含蛋白酶活力单位数＝───────────
Ａs×Ｗ×10×181.19
式中
ＡS 为对照品的平均吸收度；Ａ为供试品的平均吸收度；Ｗs ＝1ml 对照品溶液中含酪氨酸的量，μg ；Ｗ＝供试品取样量解血红蛋白生成1 μmol 酪氨酸的酶量，为一个蛋 白酶活力单位。