琼脂糖凝胶电泳操作标准流程
琼脂糖凝胶电泳流程
琼脂糖凝胶电泳流程
琼脂糖凝胶电泳是一种用于分离和分析DNA、RNA 或蛋白质等生物大分子的技术。
以下是一般的琼脂糖凝胶电泳流程：
1. 准备电泳缓冲液：根据需要选择适当的电泳缓冲液，如TAE （Tris-乙酸-EDTA）或TBE（Tris-硼酸-EDTA）缓冲液。
缓冲液用于维持电泳过程中的酸碱平衡和离子浓度。
2. 制备琼脂糖凝胶：将琼脂糖粉末加入电泳缓冲液中，按照一定的比例加热溶解，制备琼脂糖凝胶。
通常根据需要选择不同浓度的琼脂糖凝胶，如0.8%、1%或1.2%等。
3. 制备样本：将待分析的DNA、RNA 或蛋白质样本与适量的电泳缓冲液混合，使其溶解或悬浮。
4. 加载样本：将样本小心地加载到琼脂糖凝胶的孔中，可以使用移液器或微量注射器。
加载时要避免产生气泡。
5. 电泳：将加载好样本的琼脂糖凝胶放入电泳槽中，连接电源，进行电泳。
根据样本的性质和目的，选择适当的电泳条件，如电压、电流和电泳时间。
6. 观察和记录：电泳过程中，DNA、RNA 或蛋白质样本会根据其大小和电荷性质在凝胶中移动。
可以通过染色或荧光染料来观察和记录样本的迁移情况。
7. 分析结果：根据样本在凝胶中的迁移距离和位置，可以判断样本的大小、纯度和数量等信息。
还可以通过凝胶成像系统对电泳结果进行拍照或分析。
具体的琼脂糖凝胶电泳流程可能会根据实验目的和样本类型有所不同。
在进行实验前，建议仔细阅读相关的实验手册和操作指南，并根据实际情况进行适当的调整和优化。
琼脂糖凝胶电泳制胶
琼脂糖凝胶电泳制胶方法
1，制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml)：称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中，加入70 ml(50ml)1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2，胶板制备：取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净，晾干，放入制胶玻璃板。
取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好，形成模子。
将内槽置于水平位置，并在固定位置放好梳子，将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上，使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
3，室温下静置直至凝胶完全凝固，垂直轻拔梳子，取下胶带，将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。
琼脂糖凝胶电泳详细过程与步骤分析
琼脂糖凝胶电泳详细过程与步骤分析琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）是一种常见的分离和鉴定DNA和RNA分子的实验技术。
它基于DNA和RNA分子在电场中对琼脂糖凝胶的移动速率的差异来进行分离。
以下是琼脂糖凝胶电泳的详细过程与步骤分析：1.准备琼脂糖凝胶：-准备琼脂糖溶液：按照规定比例在缓冲液中加入适量的琼脂糖并混匀。
-加热琼脂糖溶液：将琼脂糖溶液加热至完全溶解，通常在微波炉或水浴中进行。
-倒入模具：在凝胶电泳槽中设置模具，倒入热琼脂糖溶液并待其凝固。
2.准备样品：-提取DNA或RNA：采用适当的提取方法从待测样品中提取所需的DNA 或RNA。
-混合DNA或RNA与加载缓冲液：将提取的DNA或RNA与适量的加载缓冲液混合，以增加样品密度并提供电泳所需的离子浓度。
3.加载样品：-打开模具和样品孔：在琼脂糖凝胶上方打开模具，使用注射器或微量吸管在样品孔中加入适量的样品。
-加载DNA或RNA标记物：如果需要对DNA或RNA进行标记，则需要在样品中加入适量的荧光标记物，并在加载完样品后用紫外灯进行可视化检测。
4.进行电泳：-连接电极：将电泳槽连接到电源，将阳极和阴极电极分别插入缓冲液中的两端。
-调节电流：将所需电流值设置在电源上，并进行预运行电流以使电流通过样品和凝胶。
-进行电泳：打开电源，开始电泳过程，直到样品达到适当的分离位置。
5.可视化与分析结果：-停止电泳：当DNA或RNA样品达到预期位置时，关闭电源并断开电极。
-可视化：用染料（如乙溴橙）染色凝胶电泳的凝胶，或使用紫外灯照射凝胶以可视化DNA或RNA标记物的荧光。
-分析结果：使用图像捕捉设备（如凝胶图像系统）记录凝胶的图像，并根据DNA或RNA标记物的迁移距离和大小进行结果分析。
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
准备工具：用蒸馏水将制胶工具洗干净，准备好制胶平板，用琼脂将模具边缘封闭，架好梳子。
配制琼脂糖凝胶：根据要分离的样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。
将一定量的琼脂糖干粉加入到合适体积的锥形瓶中，加入一定量的电泳缓冲液（30ml左右TAE）。
融化琼脂糖：将琼脂糖放入到微波炉内加热融化，冷却片刻（不烫手即可）。
浇灌凝胶：融化后的琼脂溶液摇晃混匀，倒入电泳槽中，等其凝固。
凝固凝胶：室温下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝胶放入电泳槽内，准备上样。
加入电泳缓冲液：在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）；没过胶面1mm左右，去除胶孔内的气泡。
上样：将DNA样品和对应体积的上样缓冲液（loading buffer）和染料混合，用抢混匀后加入到凝胶孔内。
电泳：上样结束，接通电源，红色正极，黑色负极，DNA样品有负极往正极运动，加样孔侧为负，，40-50v电压，电压30敏左右即可（<40min）。
观察结果：电压结束，关闭电源，凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker 判断大小。
琼脂糖凝胶电泳步骤
琼脂糖凝胶电泳步骤实验前准备及注意事项：将所要用到的制胶锥形瓶、胶槽、梳齿等物品清理干净，如有残胶，需将残胶尽量去除。
注意：所有用来跑核酸胶的物品，只要接触过核酸染料，一定要专门放置，专物专用，不要再将污染过的物品随意放置，以免污染其他物品。
接触过核酸染料的手套不要再碰非污染区的物品。
制胶和拿取核酸胶时佩戴一次性PE手套，再操作其他地方时将一次性手套丢弃。
实验步骤：1.按每100ml 1×TAE/TBE缓冲液中加入1g琼脂糖（1%的胶，根据核酸大小选择制胶的浓度，一般情况用1%-2%的胶）的比例，称取琼脂糖，加入专门制琼脂糖凝胶的250ml-500ml的锥形瓶中。
2.按比例量取适量的1×TAE/TBE缓冲液，加入到锥形瓶中的琼脂糖一起，适当摇晃锥形瓶初步混匀。
3.将混合液放入微波炉中，用中高火加热，加热总时间可根据制胶总量调整，一般40ml左右的胶量加热90s左右。
如果制胶量大，记得每加热1min左右将瓶从微波炉中取出，轻轻晃匀后，再继续加热，以免局部过热导致胶溢出。
注意：取出加热后的瓶时，记得垫上纸，防止烫手！4.待胶加热好，完全溶解后，稍晾凉至45-55℃左右（以基本不太烫手为宜）按照1:10000的比例加入核酸染料（如100ml胶加10ul染料），迅速摇匀。
5.将胶槽和梳齿准备好，梳齿可以预先插好，将上一步摇匀的胶倒入胶槽中，一般厚度以60mm左右为宜，具体要根据梳齿的厚度以及样品量来定。
6.待胶变白，基本表示胶已凝好，此时可以将梳齿拔出，一定要竖着往上拔梳齿，不要摇晃，以免样品孔被破坏。
7.在电泳槽中倒入1×TAE/TBE缓冲液，将制好的胶放入缓冲液，以缓冲液没过样品孔为宜。
8.点样：根据样品孔的大小决定上样量，每一排样品孔至少有一个孔用来点DNA Marker。
（上样前确定每个样品和Marker里都已经加了Loading buffer，Loading buffer 的终浓度为1×）9.确定样品孔的方向，核酸带负电，样品孔要在负极，通电后在胶孔中向正极移动。
琼脂糖凝胶电泳步骤
琼脂糖凝胶电泳一、步骤：1、制胶(1%)：将加入30ml 1×TAE缓冲液和0.6g琼脂糖的三角瓶在微波炉加热至沸腾，摇匀至无颗粒。
2、倒胶：先插梳子，再倒胶。
胶冷却至60℃左右(不烫手)加染料后（胶-GelRed:1ml-1ul或30ml胶+3ulGelRed）缓缓倒入电泳槽(先胶布封口，放好梳子)，待胶凝固后取出梳子。
3、加样：1µl RNA + 2µl loading buffer混匀。
（点样孔置负极端即黑对黑，红对红）。
4、电泳：稳压条件下120V电泳，待溴酚蓝移动至接近胶前沿(约1cm)时停止电泳(约25min)。
5、观察结果：紫外分析仪上254nm观察，DNA存在处显亮绿色荧光条带，观察酶切后与未酶切质粒的DNA带位置，拍照。
二、注意事项：1、凝胶制备过程中，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。
2、巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。
高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。
3、电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲性能下降，可能使DNA电泳产生条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
4、如果电泳时电压和温度过高，可能导致出现条带模糊和不规则的DNA带迁移的现象。
特别是电压太大可能导致小片段跑出胶而出现缺带现象。
5、变性的DNA样品可能导致条带模糊和缺失，也可能出现不规则的DNA条带迁移。
在上样前不要对DNA样品加热，用20mM NaCl缓冲液稀释可以防止DNA变性。
6、太多的DNA上样量可能导致DNA带型模糊，而太小的DNA上样量则导致带信号弱甚至缺失。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质和核酸分析方法。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的具体操作步骤，帮助读者更好地理解和掌握这一实验技术。
材料准备1.琼脂糖凝胶：根据需要选择合适的琼脂糖凝胶，通常有0.8%、1%和1.5%等不同浓度的琼脂糖凝胶可供选择。
2.海藻酸缓冲液：配制1×TAE缓冲液，将适量的氨基乙酸和琼脂糖溶解在去离子水中，并调整pH值至7.5。
样品制备1.样品处理：将待分析的蛋白质或核酸样品按照实验要求进行处理，例如进行裂解、消化等。
2.加载缓冲液：将样品与适量的样品加载缓冲液混合均匀，通常加载缓冲液中含有甘氨酸、溴酚蓝等成分，有利于负载样品。
凝胶制备1.琼脂糖溶液的制备：将适量的琼脂糖粉末加入到海藻酸缓冲液中，用力搅拌使其充分溶解。
2.加入染色剂：在溶解的琼脂糖溶液中加入适量的染色剂，如溴酚蓝，以便观察凝胶的迁移情况和样品带。
3.准备载玻片：在凝胶电泳槽的两侧放置两块玻璃板，用胶条固定，形成一个长方形的凝胶槽。
4.倒制凝胶：将制备好的琼脂糖溶液倒入凝胶槽中，并用打孔器在凝胶上打孔，用来加载样品。
电泳过程1.样品加载：将经过处理的样品加载到凝胶孔洞中，注意不要溢出或漏掉。
2.正常电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，使凝胶完全浸泡在TAE缓冲液中，注意缓冲液的量要覆盖凝胶槽。
3.开启电源：将凝胶槽连接到电源上，并设定合适的电流和电压，开始电泳过程。
4.电泳时间：根据实验需要设定合适的电泳时间，通常为30分钟到数小时不等。
5.关闭电源：在电泳结束后，关闭电源，取出凝胶槽。
凝胶染色和成像1.染色凝胶：将电泳结束的凝胶浸泡在适量的染色液中，常用的染色剂有共染剂、Coomassie蓝等。
2.染色时间：根据染色剂的要求和实验需要，将凝胶浸泡在染色液中一定时间，以达到理想的染色效果。
3.洗涤凝胶：将染色液倒掉，用去离子水洗涤凝胶，去除多余的染色剂。
4.成像和分析：将凝胶放入凝胶成像系统中进行成像，根据需要可进行图像分析和数据提取。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下:1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65?左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止 .3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.(5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存实验原理闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。
实验材料和试剂(一)实验样品质粒pUC118(二)试剂1(l DNA/HindIII分子量标准2(溴酚蓝指示剂点样缓冲液0.2% 溴酚蓝50% 蔗糖3(1mg/ml溴化乙锭溶液4(电泳缓冲液(TAE)40 mmol/L Tris-乙酸1 mol/L EDTA(配制方法:24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml)5(0.7% 琼脂糖凝胶(配制方法:称取琼脂糖0.35克，加入50ml TAE电泳缓冲液)(三)仪器微量移液器电泳仪水平电泳槽透射紫外观察仪实验步骤1(选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。
简述琼脂糖凝胶电泳的基本过程
简述琼脂糖凝胶电泳的基本过程
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物分子分离和分析技术。
其基本过程如下：
1. 制备琼脂糖凝胶：将琼脂糖粉溶解在缓冲液中，加热并搅拌使其溶解，然后待其冷却凝胶化。
凝胶化的时间和温度可以根据需要来调节，一般凝胶化时间为30-60分钟。
2. 电泳槽的装置：凝胶凝胶化后，将其放入电泳槽中，槽中注入足够的缓冲液，使凝胶完全浸泡其中，确保电泳过程中缓冲液的循环。
3. 样品制备：将要分析的待分离生物分子样品进行处理，通常会进行核酸或蛋白质的提取、纯化和浓缩等步骤，得到待分析的样品。
4. 样品加载：在经过处理的样品中加入适量的载体，使样品具有一定的密度，然后将样品加载到凝胶孔中。
通常在一个凝胶中加载多个样品以实现多项分离。
5. 电泳：将电泳槽连接到电源上，通常使用直流电。
电场的作用下，待分离的生物分子带上电荷，沿着电场方向迁移，根据它们的大小和形状的不同，迁移速率也会有所不同。
较小的分子会迁移得更快，而较大的分子则迁移速度较慢。
6. 分析结果：电泳进行一段时间后，关闭电源，取出凝胶进行染色或其他相关检测分析。
染色后，在紫外线照射下可以观察
到凝胶上待分离生物分子的条带，根据条带的位置和大小可以进行分析和定量。
琼脂糖凝胶电泳具有操作简单、分辨效果好等优点，广泛应用于核酸和蛋白质的分离、纯化和分析等领域。
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
琼脂糖凝胶电泳的基本过程
琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质分离与检测方法，其基本过程如下：
1. 准备琼脂糖凝胶：将适量的琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解后冷却至适合凝胶形成的温度，通常为室温或4℃。
2. 注射样品：将待检测的样品（通常是蛋白质混合物）与一定量的加载缓冲液混合，并用微量注射器将样品缓慢地注射到琼脂糖凝胶的加载孔中。
3. 开始电泳：将装有琼脂糖凝胶的电泳槽中注入足够的电泳缓冲液，确保琼脂糖凝胶完全被液体覆盖。
然后将电泳槽连接到电源上，设定适当的电压和时间，开始电泳。
4. 蛋白质分离：在电场的作用下，由于蛋白质的不同特性（如分子大小、电荷等），蛋白质会在琼脂糖凝胶中以不同的速度移动。
较小的蛋白质会更快地移动，较大的蛋白质会移动得更慢。
5. 染色和可视化：电泳结束后，可以通过染色等方法对琼脂糖凝胶中的蛋白质进行标记，常见的染色方法有银染色、草酸染色、共蛋白染色等。
然后使用适当的设备（如紫外线透射仪）对染色后的凝胶进行图像记录和分析。
6. 分析结果：根据不同蛋白质在凝胶中的迁移距离和密度，可以对样品中的蛋
白质进行定性和定量分析，从而了解样品中蛋白质的组成和相对含量。
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目得:琼脂糖凝胶电泳就是常用得检测核酸得方法,具有操作方便、经济快速等优点。
DNA琼脂糖凝胶电泳得使用技术仅代表具备操作琼脂糖电泳得能力。
二、实验原理:琼脂糖凝胶电泳就是常用得用于分离、鉴定DNＡ、ＲＮA分子混合物得方法,这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物,利用DNA分子在泳动时得电荷效应与分子筛效应,达到分离混合物得目得。
DＮＡ分子在高于其等电点得溶液中带负电,在电场中向阳极移动。
在一定得电场强度下,DNA分子得迁移速度取决于分子筛效应,即分子本身得大小与构型就是主要得影响因素。
DＮA分子得迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型得ＤＮＡ分子得迁移速度不同。
如环形ＤNA 分子样品,其中有三种构型得分子:共价闭合环状得超螺旋分子(cccDNA)、开环分子(ocDＮA)、与线形DＮA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时得迁移速度大小顺序为:cccDNA〉ＩDN Ａ>ocＤNA、影响核酸分子泳动率得因素主要还就是:1、DＮＡ分子大小;2、琼脂糖浓度;３、DＮＡ构想;4、所用得电压;５、琼脂糖种类;6、电泳缓冲液。
核酸电泳中常用得染色剂就是溴化乙锭(ethidｉum bromiｄe EB)。
溴化乙锭就是一种扁平分子,可以嵌入核酸双链得配对碱基之间、在紫外线照射ＢＥ-DNA复合物时,出现不同得效应、2５4ｎm得紫外线照射时,灵敏度最高,但对ＤNA损伤严重;360ｎm紫外线照射时,虽然灵敏度较低,但对ＤNＡ损伤小,所以适合对ＤＮA样品得观察与回收等操作。
3００nm紫外线照射得灵敏度较高,且对ＤNA损伤不就是很大,所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料:不同大小得基因组片段2、试剂:Hｉnd III diｇｅｓｔDNA Marker(分子量标准)(TaKaRa);D2000(TianGeｎ);琼脂糖;加样缓冲液(6x):溴酚蓝;电泳缓冲液(1×TAE);溴化乙锭(EB);3、仪器及器具:(1)移液器、吸头、锥形瓶(2)电泳系统:电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
琼脂糖凝胶电泳实验操作流程
琼脂糖凝胶电泳实验操作流程如下：
1.按所分离的DNA分子的大小范围，称取适量的琼脂糖粉末，
放到一锥形瓶中，加入适量的0.5×TBE电泳缓冲液。
稍摇匀，得胶液。
2.取有机玻璃制胶板槽，有透明胶带沿胶槽四周封严，并滴加少
量的胶液封好胶带与胶槽之间的缝隙。
3.水平放置胶槽，在一端插好梳子，在槽内缓慢倒入已冷至60℃
左右的胶液，使之形成均匀水平的胶面。
4.待胶凝固后，小心拔起梳子，撕下透明胶带，使加样孔端置阴
极段放进电泳槽内。
5.在槽内加入0.5×TBE电泳缓冲液，至液面覆盖过胶面。
6.把待检测的样品，按量在洁净载玻片上小心混匀，用移液枪加
至凝胶的加样孔中。
7.接通电泳仪和电泳槽，并接通电源，调节稳压输出，电压最高
不超过5V/cm，开始电泳。
琼脂糖凝胶电泳SOP
琼脂糖电泳操作PROTOCOL一、材料、试剂和器材1、DNA样品。
2、琼脂糖。
3、5×TBE缓冲液：使用时十倍稀释。
4、溴化乙锭（EB）储备液：10mg/ml水溶液。
5、上样缓冲液。
6、DNA分子量标准。
7、电泳槽、电泳仪、紫外检测仪、微量加样枪。
二、操作步骤1、琼脂糖凝胶液配制称取1克琼脂糖，置于干净的三角瓶中，加入100ml 0.5×TBE缓冲液，在微波炉中加热1min，使之彻底融化。
之后，加入3 µlEB储备液混合（终浓度0.5pmg/ml），即制成1％的琼脂糖溶液。
此为示例，琼脂糖浓度应根据实际要求配置。
2、凝胶板的制备将电泳装置所配备的塑料胶托盘放置在胶槽中，注意托盘的放置位置。
水平地放在桌面上。
在胶模的标有黑色条带的一端放上样品梳。
将上述琼脂糖溶液放在室温下，待温度下降至60℃时，倒在凝胶板模具上，室温放置0.5小时左右。
待琼脂糖彻底凝固后，轻轻拔出样品梳。
3、加样将凝胶连同塑料托盘一起放置到电泳槽中，加入0.5×TBE缓冲液，使缓冲液淹过凝胶表面约1mm。
用微量加样品吸取0.5-1 µg DNA样品，按一定（上样缓液：DNA样品＝1：10）的比例（体积/体积）加入上样缓冲液。
混合后吸取10－20ul小心地加到凝胶板上的加样孔中。
按同样的方法在附近的加样孔中加入已知分子量的标准DNA，作为参照。
4、电泳与观察加样的一端接负极，另一端接正极。
以适当电压电泳0.5－1小时。
当指示剂泳动到距凝胶前沿约1厘米的位置时，停止电泳。
带上手套将凝胶板出，置于紫外分析仪下观察和照相。
安全注意：试验中使用的溴化乙锭（EB）为强致癌剂！试验中所有的物品，包括烧杯、胶、手套都不要带到他处！。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤试剂准备：5xTBE缓冲液：450mmol/L三硼酸，10mmol/LEDTA，pH8.0。
使用时，将上述存储溶液稀释至0.5倍TBE缓冲溶液10倍，可同时用作电泳和凝胶制备的缓冲溶液。
制胶：①根据凝胶量和凝胶浓度，向琼脂糖瓶中加入一定量的电泳缓冲液（琼脂糖粉的总液体量不得超过锥形瓶容量的50％）。
②用保鲜膜或牛皮纸盖住锥形瓶的嘴，在膜或纸上打一些小孔，然后在微波中加热并溶解琼脂糖。
加热时，当溶液沸腾时，戴上耐热手套并小心地摇动锥形瓶，以充分均匀地溶解琼脂糖。
重复该操作几次，直到琼脂糖完全溶解。
③让溶液冷却至约50°C-60°C。
如有必要，添加溴化乙锭溶液（终浓度为0.5μg/ml）或以1μL/30mL的比例添加DNAgreen染料，并充分混合。
④将琼脂糖溶液倒入橡胶模具中，然后将梳子插入适当的位置。
凝胶的厚度通常在3至5mm之间。
上胶模具如下图所示。
对于小胶水，倒入约25-30mL的琼脂糖溶液，对于大胶水，倒入约60-70mL。
如果需要切割和回收凝胶，可以适当地增稠凝胶。
⑤让胶水在室温下凝固约30分钟至1小时。
上样：①将适量的样品与6x上样缓冲液混合（例如：1μl样品和5μl6x— 1 —上样缓冲液），然后用微量移液器小心地将其添加到样品孔中。
②可根据样品浓度调节样品量。
如果DNA含量低，则可以按照上述比例增加样品量，但总体积不得超过样品罐的容量（小孔通常为40μl，大孔通常为200μl上限取决于粘合膜的规格。
③添加每个样品后，请更换移液器吸头，以防止相互污染。
装入样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品罐底部的凝胶。
电泳：①添加样品后，关闭电泳槽盖并立即打开电源。
控制电压保持在110V，电流大于40mA。
②当条带移离凝胶前端约2cm（约40分钟）时，停止电泳。
③拍照并在紫外线下观察。
— 2 —。
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想；4、所用的电压；5、琼脂糖种类；6、电泳缓冲液核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA 复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA 损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料不同大小的基因组片段；2、试剂Hind III digest DNA Marker（分子量标准）(TaKaRa)；D2000(TianGen)；BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）；加样缓冲液（6x）：溴酚黄；电泳缓冲液（1×TAE）；溴化乙锭（EB）；3、仪器及器具（1）移液器、吸头、锥形瓶（2）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
琼脂糖凝胶电泳详细过程和步骤
琼脂糖凝胶电泳详细过程和步骤
以下是琼脂糖凝胶电泳的详细过程和步骤：
1.准备琼脂糖凝胶：将适当的琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解并冷却至适宜的温度，然后倒入凝胶平台或者凝胶胶层中，让其凝胶。
2. 准备电泳缓冲液：根据实验需要选择相应的电泳缓冲液配制好，常用的电泳缓冲液是Tris-缓冲液和磷酸缓冲液。
3.电泳槽和电极的准备：将凝胶放入电泳槽中，将一端连接正电极，另一端连接负电极。
4.样品处理：将样品进行必要的预处理，如加标记、提取纯化等。
5.加载样品：在凝胶上开孔，将处理好的样品加入孔中。
可以使用特殊样品孔或者组合孔的方法进行多重样品的分析。
6.电泳运行：打开电源，设定合适的电压和电流，开始电泳运行。
运行时间根据分离需求，一般为几十分钟到数小时不等。
7. 染色和观察：电泳结束后，将凝胶从电泳槽中取出，进行染色。
常用的染色剂有EtBr（溴化乙锭）、SYBR Green等。
染色后，用紫外线透射或者数字成像系统观察和记录分离结果。
8.分析结果和解释：根据分离结果，分析样品中目标分子的迁移率和相对浓度，进而得到生物分子的分子量、电荷性质等信息。
需要注意的是，琼脂糖凝胶电泳的具体步骤可能会根据分析对象和具体实验要求的不同而有所变化。
总之，琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物分析技术，通过电场作用和凝胶基质的筛分作用，实现生物分子的分离和测定。
通过合理设计实验步骤，可以获得准确的分析结果，并为后续的研究提供基础数据。
琼脂糖凝胶电泳SOP
DNA琼脂糖凝胶电泳SOP
1.2.5%琼脂糖凝胶的配置（40ml）
(1)称取1g 琼脂糖置于干净的三角瓶中，加入1×TAE 电泳缓冲液 40 ml，轻轻晃匀后放到微波炉中加热（边加热变拿出摇晃以便于加快琼脂糖溶化），至琼脂糖颗粒全部溶解后取出冷却。
(2) 待琼脂糖溶液冷却到60℃左右，加入溴化乙锭（EB）溶液，使终浓度为0.5µg/ml, 并充分混匀。
(3) 在制胶膜的适当位置插上梳子（根据实验需要选择不同规格的梳子），将琼脂糖溶液倒入制胶模中，胶厚度一般在3-5mm之间。
（注意：不要产生气泡，溶液温度太高，会使得水分过分蒸发，也会使胶板变型，影响电泳效果）。
(4) 在室温下使胶凝固（大约30分钟），小心垂直向上拔出梳子，然后把胶放置于电泳槽中，样品孔靠近阴极端。
加入1×TAE 电泳缓冲液至液面恰好覆盖凝胶。
2. 上样电泳
(1) 用移液器吸取9ul样品和1ul的上样缓冲液（10×），混匀后，小心加入点样孔（加样量根据孔的大小而定）中，每加一个样均需更换枪头。
(2) 加完样后，合上电泳槽盖，打开电源开关，调节电压至110V，可见溴酚蓝条带由负极向正极移动，当溴酚蓝条带移动到距离凝胶前沿约2cm，停止电泳。
3. 紫外观察
将凝胶置于凝胶成像系统中，在紫外灯上观察电泳结果，DNA存在处显出橘红色荧光条带。
（注意：波长302nm的紫外适合核酸的观察和分析，
波长为365nm的紫外适合制备观察及切割条带，以减少对DNA的破坏）附：
不同浓度琼脂糖凝胶的分离范围
【下载本文档，可以自由复制内容或自由编辑修改内容，更多精彩文章，期待你的好评和关注，我将一如既往为您服务】。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程
一、实验目的
琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。
二、实验原理
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA
影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想；
4、所用的电压；
5、琼脂糖种类；
6、电泳缓冲液
核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料
不同大小的基因组片段
2、试剂Hind III digest DNA Marker（分子量标准）(TaKaRa)；D2000(TianGen)；BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）；加样缓冲液（6x）：溴酚黄；电泳缓冲液（1×TAE）；溴化乙锭（EB）；
3、仪器及器具（1）移液器、吸头、锥形瓶（2）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
（3）紫外透射仪、微波炉、电子天平四、操作步骤 1.器具清洗：首先将配胶、电泳、染胶所需要的器具清洗干净，包括托盘、胶托、梳子、电泳槽、染胶盘（EB污染，需独立清洗）。
清洗流程为：先用自来水冲洗三次，然后用纯水冲洗三次，最后用纸巾或医用纱布擦干。
若需对电泳产物进行胶回收，则还需用75%酒精对器具进行消毒。
2.配胶：根据基因组片段大小，配置相应浓度的琼脂糖凝胶。
首先将锥形瓶洗干净并加入少量纯水煮沸，然后量取一定量的电泳缓冲液（1×TAE）至锥形瓶中，再称取相应量的BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）倒入锥形瓶中，摇匀并用锡纸封口，最后放入微波炉煮，煮胶的过程中需注意安全，应适当摇匀，防止爆沸。
煮好的凝胶需无气泡、色泽均匀。
将煮好的凝胶放入65℃的水浴锅中，待凝胶冷却至65℃时，及时将凝胶倒入装好的干净模具中。
待凝胶完全凝固后，将凝胶小心转移至4℃冰箱，冷冻30min，然后拔梳子。
此时，凝胶需平整、不漏孔，可以用于电泳检测。
3.电泳准备：先将干净的电泳槽排放整齐并做好标记，然后把凝胶连同胶托一起放入电泳槽正中央，胶孔的方向朝向负极（注意：①放凝胶前，需将胶托底部的凝胶抹干净，防止胶托在电泳槽中滑动；②此时，可顺便观察凝胶是否漏孔），再往电泳槽中倒入一定量的电泳缓冲液（1×TAE）至刚好将凝胶淹没。
（注意保持桌面卫生，防止缓冲液洒到桌面） 4.验孔：用2ul 6×溴酚黄加入到每一个胶孔中，检测凝胶胶孔是否漏孔。
若不漏孔，则可在凝胶孔底部看到一条黄色条带；若漏孔，则看不到条带。
（注意：验孔完毕之后，需将凝胶固定在电泳槽中央） 5.
上样：将样品、6×溴酚黄按3：1的比例混匀，轻甩后按照规定的顺序上样，上样顺序应与电泳槽上的标记一致，最后点上一定量的Ladder。
（注意：①上样时必须确保上样顺序正确无误，样品间不混淆，点样后的空管子先放在电泳槽旁边，用于核查；②点样时不戳孔、不外漏、不溢出；③点样时需小心枪头不要碰到凝胶，以免凝胶挪动，若凝胶已经挪动，需等样品完全沉到底部后，再固定凝胶） 6.电泳：确认已经正确上样后，双手盖上电泳槽盖，接通电泳仪和电泳槽（注意：确认电极正确连接），设置电泳参数：电压：120V，电流：400mA，时间：30min；注意确认电极、电泳参数完全正确之后，最后按star 键开始电泳。
7.染胶：电泳结束之后，带上PE手套，小心滑出凝胶，把凝胶转移到干净的PE手套上（注意：PE手套上应做好标记，确保样品、电泳槽、PE手套的标记是一致），小心地将凝胶放入相应标记的EB染胶盘中，盖上盖子染30min。
其中，染胶盘放在EB暗房中，EB染液的配方为：100ml 1×TAE + 5ul EB燃料。
（注意：①配制EB染液和染胶时需戴上乳胶手套、PE 手套，必要时可戴上口罩，染胶时动作要轻，防止溅起EB染液；②注意区分EB污染区与非污染区，防止EB污染区向非污染区扩散）8.凝胶成像：带上PE手套，将凝胶从染胶盘中捞出，放在染胶时的那个PE手套上（注意：捞胶时需小心防止凝胶断裂、滑落，尽量把多余的EB染液甩干），将凝胶放入凝胶成像系统中，按照“Tanon凝胶成像系统操作规程”进行操作拍照。
（注意：拍照时需严格区分EB污染区与非污染区，防止EB污染区污染电脑、键盘及鼠标），最后保存胶图信息至规定的文件夹内，命名规则为：日期+姓名+工号+部门+电泳铜人阵考核。
五、注意事项1、电泳中使用的溴化乙锭（EB）为中度毒性、强致癌性物质，务必小心，勿沾染于衣物、皮肤、眼睛、口鼻等。
所有操作均只能在专门的EB暗房中操作，操作时戴上乳胶手套，必要时戴上PE手套和口罩。