铜绿假单胞菌的分类鉴定 ppt课件
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➢典型型 ➢粘液型 ➢侏儒型 ➢粗糙型 ➢大肠菌样型
生物学特性
典型型（麦康凯平板）
菌落呈灰绿色，大小 不一,扁平湿润，边缘 不规则呈伞状伸展， 表面常可见金属光泽。
生物学特性
典型型（普通平板）
产绿脓素 琼脂染成黄绿色
生物学特性
菌落光滑凸起 成粘液状
粘液型（麦康凯平板） 粘液型（血平板）
生物学特性
最终鉴定
明胶液化试验：选取可疑菌落的纯培养物，穿刺 接种于明胶培养基内，37℃培养24h，取出后放入 冰箱10-30min，如若溶解，即试验呈阳性；如凝固 不溶，试验呈阴性。 硝酸盐还原试验：选取可疑菌落的纯培养物，接 种于硝酸盐培养基，置于37℃培养24h，如若培养 基中的小倒管内有气体，试验呈阳性。
初步鉴定
选出可疑菌落
金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味等
初步鉴定
➢染色镜检：取可疑菌落，进行革兰氏染色、镜检。 ➢氧化酶试验：挑取可疑菌落于滤纸片上，滴加一 滴新配制的5%二甲基对苯二胺试剂，15-30min内， 出现红色至紫红色，为阳性；若不变色，为阴性。
初步鉴定
➢绿脓菌素试验：选取可疑菌落2-3个，置于绿脓菌 素测定用培养基，于37℃培养24h，加入氯仿、色素 后，再加入盐酸 ，上层稀盐酸液内出现红色为阳性， 表示菌落中含有绿脓菌素。
铜绿假单胞菌的分离及鉴定
组员：张冲
铜绿假单胞菌
实验目的
了解铜绿假单胞菌的微生物学特性 掌握微生物实验技术基本原理及操作 熟悉铜绿假单胞菌的分离鉴定程序及
方法
概述
铜绿假单胞菌惯称绿脓杆菌，为革兰 氏阴性杆菌，属假单胞菌属。它在自然界 分布甚广，空气、水、土壤中均有存在， 在潮湿处可长期生存，对外环境的抵抗力 比其他菌强，抗干燥的能力也强。
生物学特性
形态：革兰氏阴性杆菌， 菌体长短不一 ；单端单鞭 毛；动力阳性；无芽胞。 特性：专性需氧；生长 温度范围是25℃~42℃， 最适生长温度35℃，4℃不 生长。
生物学特性
抗原性: O抗原
H抗原 粘液抗原 R抗原 菌毛抗原
产生荧光素和水溶性的绿脓素，培养物呈蓝 绿色。
生物学特性
在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属 光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落，有生姜 味； 在普通平板、血平板、麦康凯平板上可形 成5种不同形态的菌落
最终鉴定
吲哚试验：选取可疑菌落的纯培养物接种于蛋白胨 水，培养8h-24h后，加Kovacs（靛基质）试剂约3mm 高，如若在液层界面发生红色，即为阳性反应。 42℃生长试验：选取纯被检物，接种于普通琼脂斜 面培养基上，于42℃培养4h，铜绿假单胞菌能生长为 阳性反应。
血清学鉴定
血清群鉴定：取洁净玻片，滴加多价O血清于玻片， 再接种此菌的纯培养物少许混匀，2min观察凝集现象， 鉴定。 血清学分型：按血清分型试剂盒操作说明进行操作： 将待检测菌在LB琼脂培养基中过夜培养，取少许与 30μL阳性血清混合，一分钟观察结果。 判定标准：有凝集块出现，且生理盐水空白对照组 不凝集者为阳性。
粗糙型（麦康凯平板）
菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙
生物学特性
大肠型（麦康凯平板）
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落
细小，无光泽 半透明菌落
侏儒型（麦康凯平板）
生化特性
氧化酶：+ 葡萄糖的氧化（O/F）：O 枸橼酸盐利用：+ 精氨酸双水解：+ 明胶液化：+ 硝酸盐还原：+ 乙酰胺酶：+ 吲哚试验：-
药敏试验
扩散法（K-B法）
➢选用抗菌药物，对分离的细菌进行敏感性试验： ➢药敏片：庆大霉素、环丙沙星、头孢噻肟、链霉素、 恩诺沙星、诺氟沙星、头孢哌酮、青霉素； ➢根据抑菌圈的大小判断病原菌对药物的敏感程度。
微生物学检验
检验程序
脓液 痰 尿液等
分离培养
直接涂片、革兰染色、镜检
（血平板、麦康凯）
35℃ 18-24h
可疑菌落（金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味）
初步鉴定
革兰阴性 杆菌，氧 化酶阳性
菌落特征 气味 绿脓素
最终鉴定
色素 来自百度文库定
生化 反应
42℃ 生长
分型 （血清学
噬菌体）
药敏试验
报告
试验材料
病料：痰液标本 试剂：氧化酶纸片，明胶、革兰染色液、药敏 纸片、无菌生理盐水及生化管配套试剂等 培养基：普通平板、血平板、麦康凯平板、半
固体培养基、非发酵菌微量生化管等 其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、
接种针、接种环、酒精灯、火柴、平皿等
分离培养
标本采集：脓液、浓痰（无菌拭子） 痰液标本的前处理 加入等量的PH 7.6 的1% 胰酶溶液，放置35℃、 90 min使痰液均质化。 直接涂片，革兰氏染色，镜检 分别接种普通平板、血平板和麦康凯平板，培 养18—24h ，进一步进行鉴定。
生物学特性
典型型（麦康凯平板）
菌落呈灰绿色，大小 不一,扁平湿润，边缘 不规则呈伞状伸展， 表面常可见金属光泽。
生物学特性
典型型（普通平板）
产绿脓素 琼脂染成黄绿色
生物学特性
菌落光滑凸起 成粘液状
粘液型（麦康凯平板） 粘液型（血平板）
生物学特性
最终鉴定
明胶液化试验：选取可疑菌落的纯培养物，穿刺 接种于明胶培养基内，37℃培养24h，取出后放入 冰箱10-30min，如若溶解，即试验呈阳性；如凝固 不溶，试验呈阴性。 硝酸盐还原试验：选取可疑菌落的纯培养物，接 种于硝酸盐培养基，置于37℃培养24h，如若培养 基中的小倒管内有气体，试验呈阳性。
初步鉴定
选出可疑菌落
金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味等
初步鉴定
➢染色镜检：取可疑菌落，进行革兰氏染色、镜检。 ➢氧化酶试验：挑取可疑菌落于滤纸片上，滴加一 滴新配制的5%二甲基对苯二胺试剂，15-30min内， 出现红色至紫红色，为阳性；若不变色，为阴性。
初步鉴定
➢绿脓菌素试验：选取可疑菌落2-3个，置于绿脓菌 素测定用培养基，于37℃培养24h，加入氯仿、色素 后，再加入盐酸 ，上层稀盐酸液内出现红色为阳性， 表示菌落中含有绿脓菌素。
铜绿假单胞菌的分离及鉴定
组员：张冲
铜绿假单胞菌
实验目的
了解铜绿假单胞菌的微生物学特性 掌握微生物实验技术基本原理及操作 熟悉铜绿假单胞菌的分离鉴定程序及
方法
概述
铜绿假单胞菌惯称绿脓杆菌，为革兰 氏阴性杆菌，属假单胞菌属。它在自然界 分布甚广，空气、水、土壤中均有存在， 在潮湿处可长期生存，对外环境的抵抗力 比其他菌强，抗干燥的能力也强。
生物学特性
形态：革兰氏阴性杆菌， 菌体长短不一 ；单端单鞭 毛；动力阳性；无芽胞。 特性：专性需氧；生长 温度范围是25℃~42℃， 最适生长温度35℃，4℃不 生长。
生物学特性
抗原性: O抗原
H抗原 粘液抗原 R抗原 菌毛抗原
产生荧光素和水溶性的绿脓素，培养物呈蓝 绿色。
生物学特性
在血平板上形成大而扁平、湿润、有金属 光泽、蓝绿色、透明溶血环菌落，有生姜 味； 在普通平板、血平板、麦康凯平板上可形 成5种不同形态的菌落
最终鉴定
吲哚试验：选取可疑菌落的纯培养物接种于蛋白胨 水，培养8h-24h后，加Kovacs（靛基质）试剂约3mm 高，如若在液层界面发生红色，即为阳性反应。 42℃生长试验：选取纯被检物，接种于普通琼脂斜 面培养基上，于42℃培养4h，铜绿假单胞菌能生长为 阳性反应。
血清学鉴定
血清群鉴定：取洁净玻片，滴加多价O血清于玻片， 再接种此菌的纯培养物少许混匀，2min观察凝集现象， 鉴定。 血清学分型：按血清分型试剂盒操作说明进行操作： 将待检测菌在LB琼脂培养基中过夜培养，取少许与 30μL阳性血清混合，一分钟观察结果。 判定标准：有凝集块出现，且生理盐水空白对照组 不凝集者为阳性。
粗糙型（麦康凯平板）
菌落中央凸起 边缘扁平 表面粗糙
生物学特性
大肠型（麦康凯平板）
菌落圆形凸起 似大肠埃希菌菌落
细小，无光泽 半透明菌落
侏儒型（麦康凯平板）
生化特性
氧化酶：+ 葡萄糖的氧化（O/F）：O 枸橼酸盐利用：+ 精氨酸双水解：+ 明胶液化：+ 硝酸盐还原：+ 乙酰胺酶：+ 吲哚试验：-
药敏试验
扩散法（K-B法）
➢选用抗菌药物，对分离的细菌进行敏感性试验： ➢药敏片：庆大霉素、环丙沙星、头孢噻肟、链霉素、 恩诺沙星、诺氟沙星、头孢哌酮、青霉素； ➢根据抑菌圈的大小判断病原菌对药物的敏感程度。
微生物学检验
检验程序
脓液 痰 尿液等
分离培养
直接涂片、革兰染色、镜检
（血平板、麦康凯）
35℃ 18-24h
可疑菌落（金属光泽、β-溶血、产绿色素、特殊气味）
初步鉴定
革兰阴性 杆菌，氧 化酶阳性
菌落特征 气味 绿脓素
最终鉴定
色素 来自百度文库定
生化 反应
42℃ 生长
分型 （血清学
噬菌体）
药敏试验
报告
试验材料
病料：痰液标本 试剂：氧化酶纸片，明胶、革兰染色液、药敏 纸片、无菌生理盐水及生化管配套试剂等 培养基：普通平板、血平板、麦康凯平板、半
固体培养基、非发酵菌微量生化管等 其它 ：显微镜、培养箱、小试管、载玻片、
接种针、接种环、酒精灯、火柴、平皿等
分离培养
标本采集：脓液、浓痰（无菌拭子） 痰液标本的前处理 加入等量的PH 7.6 的1% 胰酶溶液，放置35℃、 90 min使痰液均质化。 直接涂片，革兰氏染色，镜检 分别接种普通平板、血平板和麦康凯平板，培 养18—24h ，进一步进行鉴定。