蛋黄胆固醇测定
邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量
（ｃ ｏ ｏ Ｂ ｏａｄ ｏ ｄＴ ｃｎ ｌ ｙ Ｄａ ａ ｏ ｔ ｈ ｉ Ｕ ｉｅ ｉ ， ｌｎ１ ６３ ， 曲 ） Ｓ ｈ ｌ ｆ ｉ ｎ Ｆ ｏ ｅｈ ｏｏ ， ｌｎＰ ｌ ｅｎ ｃ ｎｖｍ ￣ Ｄａ ａ １０ ４ Ｃ 面ａ ｎ ｇ ｉ ｙｃ ｉ
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邻 苯 二 甲醛 （ Ｐ 法快 速 测 定 蛋黄 粉 中的胆 固醇 含量 Ｏ Ａ）
ｃ ｅ ｃｅ ｔｏｆ ｈ ｅｈ ｄ ８ ％ ， ｉｈ ａ ｇ ｒ ｃｓｏ ｎｄｒ ｃ ｖ ｒ Ｔｈｅｍ ｅ ｏ ｓｓｍ ｐｌ ｄ ｓａ ｌ，ａ ｓｓ ｔｂｅ ｆｒｒ ｐ ｄｄ ｔｒ ｉａｉ ｎ ｏ ｆ ｉｎ ｔ ｅｍ ｔ ｏ ｉ ２．９ ｉ ｓ ｗｈ ｃ ｈ ｓｈｉｈ ｐ ｅ ｉｉｎ ａ ｅ ｏ ｅｙ． ｔ ｄ ｉ ｉ ｈ ｅａ ｔｂｅ ｎｄｉ ｉ ｕｉ ｌ ｏ ａ ｉ ｅ ｅｍ ｎ ｔｏ ｎ ｔ ａ ｏ ｈ ｌ ｓｅ ｏ． ｔａ ｔ ｎ ｆｃ ｏｌｓｅ ｏ ｙ ｔ ａ ｏ －ｈ ｏ ｏ ｃｉｌｉ ｃ ｕ ａｅａ ｄ ｅ ｓｂｌ． ｆｃ ｏ ｅ ｔｒ １Ｅｘｒ ｃ ｏ ｏ ｈ ｅ ｔｒ ｌ ｍｅ ｎ ｌｃ ｌ ｒ ｆ＇ ｌ ｓａ ｃ ｒ ｔ ｉ ｂ ｈ ｒ ｎ ｆａ ｉ ｅ Ｋｅ ｒ ｓ Ｏ ｐ ｈａｄｉｌｅ ｙ ； ｈ ｌ ｓｅ ｏ ； ｅｅｍ ｉ ｔ ｎ ｙｗｏ ｄ ： — ｈｔ ｌ ａｄ ｈ ｄｅ ｃ ｏ ｅ ｔｒ ｌ ｄ ｔｒ ｎａｉ ｏ
蛋黄中胆固醇含量的快速测定方法
蛋黄中胆固醇含量的快速测定方法
郭福存;张礼华;王建国;谢家声;李新圃;刘端庄;段习文
【期刊名称】《中兽医医药杂志》
【年(卷),期】1997()1
【摘要】用该法测定胆固醇含量，其蛋样不需要处理（蒸煮和稀释），也不需要提取蛋黄样品脂肪，用直接皂化法即可。
这样不仅避免用毒性大而昂贵的试剂，而且操作时间大大缩短，当天即可完成测试。
用该法测定了１５个蛋黄样品中胆固醇的含量，其平均值为１１．７９ｍｇ／ｙｏｌｋ（１９５．２６ｍｇ／ｅｇｇ），Ｂｔｙｅｒ和Ｊｅｎｓｅｎ（１９８９）对美国乔治亚州１９个蛋鸡厂生产的鸡蛋中的胆固醇含量进行的试验结果表明，其含量平均为１９５ｍｇ／ｅｇｇ。
经Ｔ检验差异不显著，表明本法的精确度是令人满意的。
【总页数】3页(P6-8)
【关键词】蛋黄;胆固醇;测定
【作者】郭福存;张礼华;王建国;谢家声;李新圃;刘端庄;段习文
【作者单位】中国农业科学院中兽医研究所
【正文语种】中文
【中图分类】TS253.7
【相关文献】
1.邻苯二甲醛(OPA)法快速测定蛋黄粉中的胆固醇含量 [J], 白利;王瑞雪;王际辉;钱方
2.反相HPLC法快速测定鸭蛋蛋黄粉中胆固醇含量 [J], 黄红霞;张声华
3.蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究 [J], 张旭;胡艳;蒋桂韬;王向荣;李昊帮;戴求仲
4.禽蛋中胆固醇含量快速测定方法研究 [J], 章双杰;陆俊贤;高玉时;施祖灏;刘学贤;陈宽维
5.反相高效液相色谱法快速测定鹌鹑蛋黄胆固醇含量 [J], 高允生;齐永秀;姜隆梅;费洪荣;曲晓兰;高艳霞
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蛋黄胆固醇测定
实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）一、实验目的1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：1、吸光系数法2、标准曲线法不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
实验六蛋黄总胆固醇的测定(邻苯二甲醛法)(精)
实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）一、实验目的1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：1、吸光系数法2、标准曲线法不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量
直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量何春玫【摘要】采用正交实验优化各项技术参数,建立了直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量的分析方法.结果表明,鸡蛋蛋黄中胆固醇提取的最优工艺条件为:料液比为1:10(W:V),提取时间为1 h,提取温度为35℃,挥干温度为65℃,测得每100g鸡蛋蛋黄的胆固醇含量为1 609mg;回收率为95.41%,RSD为3.77%.此方法操作简单、快速、准确.【期刊名称】《广东农业科学》【年(卷),期】2011(038)009【总页数】4页(P110-113)【关键词】胆固醇;直接皂化法;比色法;蛋黄【作者】何春玫【作者单位】广西农业职业技术学院,广西南宁530007【正文语种】中文【中图分类】TS207.3鸡蛋是营养最丰富的食品之一，然而蛋黄的高胆固醇含量也引起广泛的关注。
据最新报道，每个大鸡蛋含有213 mg胆固醇[1]，蛋黄的胆固醇含量大约为9.21～22.8 mg[2]。
目前对食品胆固醇含量测定的方法主要有化学比色法、酶测定法和色普法等。
酶测定法的特点是敏感、专一、快速，并能实现自动化分析，但酶法技术要求较高，不适合作为常用的检测方法；色谱法（如薄层层析法、气象色谱法和液相色谱法）对试剂和仪器要求高，且仪器维护费用也相当昂贵，普通实验室难以承受，且操作步骤也较复杂，难以推广应用；而化学比色法简单易行、重现性好，在一般实验室就可以进行。
因此，我们借鉴硫磷铁显色剂比色法直接测定血清胆固醇的方法，对鸡蛋蛋黄中胆固醇总含量测定方法进行探讨，采用正交实验优化各项技术参数，建立了直接皂化-比色法测定鸡蛋黄中胆固醇含量的分析方法。
1 材料与方法1.1 试验材料主要仪器：VIS-7220型可见分光光度计，北京瑞利分析仪器公司；AL204电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；恒温水浴箱,上海安亭科学仪器厂。
主要试剂：胆固醇原液：称取干燥恒重结晶胆固醇100 mg，用甲醇溶解后移入100 mL容量瓶定容，贮存于密闭棕色瓶内，置于4℃冰箱保存；铁贮存液：称取三氯化铁2.5 g，溶于87%浓磷酸钠并定容至100 mL，贮存于密闭棕色瓶，常温下保存；硫磷铁显色剂：吸取贮存液8 mL，加浓硫酸至刻度100 mL；10%氢氧化钾溶液：称取10 g氢氧化钾先溶解再定容至100 mL；无水乙醇、石油醚、甲醇等；以上试剂均为分析纯。
鸡蛋、鸭蛋、鹌鹑蛋中HDL—C和LDL—C含量测定
中， 蛋黄的 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ都高于蛋清（ Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） 。结论： 禽蛋 中含有 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ ， 且在蛋黄 中含量显著高于蛋清。
关键 词 ： 鸡蛋； 鸭蛋 ； 鹌鹑蛋 ； 高密度 脂蛋 白胆 固醇
禽 蛋 中 所 含 氨 基 酸组 成 非 常 适 合 人 体 需 要 ，利 用 率 可 高 达 ９ ９ ． ６ ％， 是 天 然食 物 中最 理 想 的优 质 蛋 白质 。 其 中， 鸡蛋 、 鸭 蛋和 鹌 鹑 蛋都 是 日常生 活 中 常食 用 的禽 蛋 ， 内含 多 种 营养 物 质 ， 如 蛋 白质 、 维 生 素等 【 ｌ Ｊ 。 胆 固醇 （ ｃ ｈ ｏ ｌ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ， Ｃ ｈ ） 在 人 体 中 的主要 存 在形 式 为 Ｈ Ｄ Ｌ — ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ， 其 中， Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ与冠脉粥样硬化 （ ｃ ｏ ｒ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ａ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｓ ｃ ｌ ｅ ｒ ｏ — ｓ ｉ ｓ ， Ａ Ｓ ） 和冠心病 （ ｃ ｏ ｒ ｏ ｎ ａ ｒ ｙ ｈ ｅ ａ ｒ ｔ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ， Ｃ Ｈ Ｄ） 等 的 发 生 发 展 呈 负 相关 ， 其机制包括高密度脂蛋 白逆转运 ｃ ｈ 、 抗氧化 、 抗血栓等作用。 而Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ能 将 Ｃ ｈ 从 肝 脏运 送 到 细 胞 ，属 于 有 害 的脂 蛋 白胆 固醇 ， 是 Ａ Ｓ的主要危险因素之一 。若人体食用过多富含 Ｌ Ｄ Ｌ的食物 ， 血 液Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ水 平升 高 ， 可 引起 一 系列 疾 病 ， 如Ａ Ｓ 、 脂 肪肝 等 。 目前 ， 有关禽蛋营养成分研究主要集 中在蛋 白质 、 脂类等口 １ ， 禽蛋内 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ含量 检 测 在 国 内 尚未 见 报 ，本 实 验 分 别 测 定 鸡 蛋 、 鸭 蛋、 鹌鹑蛋的蛋清、 蛋黄 和去 壳 全蛋 中的 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ含 量 ， 有 助于进一步完善禽蛋的营养价值和膳食食谱。 １材 料 与方 法 １ ． １试 剂与 仪器 鸡蛋（ 产蛋 ６ ～ ８天 ） 、 鸭蛋 （ 产蛋 １ ０ — １ ５天 ） 、 鹌鹑蛋（ 产蛋 ８ ～ １ ２ 天） 各 １ ０只 （ 购 于广 东 省东 莞 市 大岭 山 镇农 贸 市场 ） ； ９ ６ 孔板 （ Ｃ ｏ ｓ ｔ ａ ｒ 公 司） ； Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ试剂盒 、 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ试剂盒（ 南京建成生物工程研究所） ； Ｓ ｙ ｎ ｅ ｒ ｇ ｙ ２多功 能 酶标 仪 （ Ｂ ｉ ｏ Ｔ ｅ ｋ 公司 ） 。 １ ． ２ 方 法 １ ． ２ ． １样 品 处 理 。设 鸡 蛋组 、 鸭蛋 组 和鹌 鹑 蛋 组 三个 实 验 组 ， 每 组设 ｌ ０ 个样品 ， 分离蛋清和蛋黄 ， 称取三种禽蛋中蛋清 、 蛋黄 、 去壳 总 蛋 的 重量 并 记 录 。 １ ． ２ － ２实 验 测 定 。按 照 Ｈ Ｄ Ｌ — Ｃ和 Ｌ Ｄ Ｌ — Ｃ试 剂 盒 说 明 书进 行 操 作， 用 酶 标仪 进 行 比色 （ ｋ ＝ ５ ０ ０ ｎ ｍ） 。 １ ． ２ ． ３ 统 计分 析 实验 数 据 用 Ｅ ｘ ｃ ｅ ｌ 建 立数 据 库 ， 并用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ７ ． ０ 处理 ， 两 组 间 比 较采用 ｔ 检验。
实验12---直接皂化-比色法测定鸡蛋中胆固醇含量
实验12 直接皂化-比色法测定鸡蛋中胆固醇含量一、原理当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取，用硫磷铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材1.仪器：分光光度计、水浴锅2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
（1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。
（6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤1.样品胆固醇提取g于25mLmL50%氢氧化钾溶液mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕，取出比色管，冷却。
加入10mL 石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。
取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。
另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液mg/mL）和3mL冰乙酸。
包括样品管，各管分别加入2mL磷硫铁试剂，混匀，25℃放置20min后在560nm波长下比色。
以空白管调零，测得吸光度。
胆固醇含量测定方法的研究进展_葛军营_宋从从_郑颖
［３］ 曹 劲 松 ． 两 种 测 定 鸡 蛋 胆 固 醇 方 法 的 比 较 ［Ｊ］． 食 品 科 学 ， １９９６，１７（９）：４８－５１．
［４］ 张佳程，骆承痒．直接皂化—比色法测定食品中胆固醇的研 究［Ｊ］．食品与发酵工业，２０００，２６（３）：３５－３８．
［８］ 万 莉，赵常志，徐华筠，等．基于蛋白质直接电子转移的全 胆固醇传感器［Ｊ］．高等学校化学学报，２００９，３０ （４）：６７０－６７４．
１４５
Research progress of detemrination methods of cholesterol
ＧＥ Ｊｕｎｙｉｎｇ， ＳＯＮＧ Ｃｏｎｇｃｏｎｇ，ＺＨＥＮＧ Ｙｉｎｇ
( College of Applied Chemistry and Bioengineering, Weifang Engineering Vocational College, Qingzhou 262500,China ) Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆｏｒ ｔｈｅ ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ ｏｆ ｎｏｒｍａｌ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ａｎｉｍａｌｓ． Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｐａｒｔｉｃｕｌａｒｌｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎｃｌｕｄｅ ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ， ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ， ｅｎｚｙｍｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｍｅｔｈｏｄ， ｅｔｃ．． Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｏｏｄｓ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｗｉｔｈ Ｒａｍａｎ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｓｅｎｓｏｒ ｗａｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ， ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｉｔ ｉｓ ｐｏｉｎｔｅｄ ｏｕｔ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｍｐｒｏｖｅｄ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ； ｄｅｔｅｍｒｉｎａｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ； ｆｏｏｄ； ｓｅｒｕｍ
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究
鸡蛋胆固醇含量测定方法比较研究吴超;李润航;于中英;娄玉杰【摘要】试验随机选取了中华绿蛋鸡产的绿壳蛋和依莎褐蛋鸡产的褐壳鸡蛋各20枚,采用邻苯二甲醛分光光度计比色法和气相色谱法,测定鸡蛋中胆固醇的含量,比较两种方法在测定鸡蛋胆固醇含量上的差异.结果表明,用邻苯二甲醛比色法测得褐壳蛋蛋黄胆固醇含量176.79 mg/枚,浓度为13.35mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量142.74 mg/枚,浓度为9.69mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).用邻苯二甲醛比色法测得绿壳蛋蛋黄胆固醇含量158.12mg/枚,浓度为10.65 mg/g.用气相色谱法测得胆固醇含量128.70 mg/枚,浓度为8.54 mg/g,二种方法测定的结果差异显著(P＜0.05).【期刊名称】《家畜生态学报》【年(卷),期】2013(034)011【总页数】4页(P57-60)【关键词】胆固醇;比色法;气相色谱;鸡蛋【作者】吴超;李润航;于中英;娄玉杰【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118;吉林农业大学动物科学技术学院,吉林长春130118【正文语种】中文【中图分类】S811.6在人们健康意识不断增强的今天，胆固醇往往片面的被认为是对人体有害的物质，但实际上，胆固醇是动物细胞各种膜结构及神经髓鞘的重要组成部分，可调节肠胃消化道中膳食脂肪的吸收，是胆汁酸、类固醇激素及维生素D3的前体，具有重要的生理功能[7]，但如果摄入量过多，可形成高血脂症，引起动脉粥样硬化，进而诱发冠心病、高血压等一系列心脑血管疾病[1-4]。
研究表明，来源于鸡蛋中的胆固醇与来源于其他原料的胆固醇相比更易导致人体血清胆固醇水平的提高[5-6]。
鸡蛋中的胆固醇总量在100～270 mg范围内变动[7]，为满足不同人群的需要，低胆固醇鸡蛋备受人们的关注，因而鸡蛋中胆固醇含量测定的方法及准确性是评定其营养价值的重要参数。
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究
取 新 鲜 蛋 黄 稀 释 液 （ 度 为 ０１ ・ １ 浓 ．ｇ ｍＬ ） ．ｍＬ ０ 于 １ ０ ｍＬ离 心管 中 ，加 入 ９ ％乙 醇 １ ，用 漩 涡 ５ ．ｍＬ ０ 振 荡器 混匀 后 ，加 入 乙醚 ２５ｍ ． Ｌ，再 次 混匀 后加 入 石 油 醚 ２５ｍ ，震 荡 混 匀 ，３００ｒｍ离 心 ５ｍｉ， ． Ｌ ０ ｐ ｎ
１ 材料 与 方法 １１ 试验 材料 ．
样 品前 处 理 方 法 同 １ ．，根 据 试 剂 盒 说 明将 ．Ｉ ２
样 品与工作 液混合 ，３ ７℃保 温 ５ｒｎ ，在波 长 ｉ后 ｎ ５ ０ｎ ０ ｍ处 比色 测 定 吸 光 度值 ，并 根 据样 品 管 和 校
准 管 的吸光 度值 及校 准 品浓度 计算 胆 固醇含 量 ，计
１２３ 试 剂 盒 法 ．．
反应来分析的传统方法 ，色谱法是适用范 围较广 、 灵敏 度较 高 的分析 方 法 ，而高 效液相 色谱 不需 要 载 气 ，在使用上较气相色谱和液相色谱一 质谱联用的方 法简 便 １ 试验 对液 相色谱 法 、皂化 一 。本 比色法 和 试剂 盒法 测 定蛋 黄胆 固醇 的过 程 和结果 进行 研究 和 比较 ，为鸡 蛋胆 固醇含量测 定工作提供 方法指导 。
入 冰 乙酸 １ 溶 解 残余 物 ，再 加 入显 色 液 ３ｍＬ于 ｍＬ ６ ０℃ 水 浴 １ ｉ，在 ４０ｎ 用 ７２ 光 光 度 计 ５ｍｎ ９ ｍ下 ２分 进 行 比色分 析 ，同法 做空 白样 。将胆 固醇标准 品 用 甲醇 溶解 配 成 １ ・ Ｌ 液 ，取 不 同体 积 胆 固醇 ｍ－ ｍｇ 溶 标 准 品溶 液 与样 品做 同样处 理 ，以胆 固醇 浓度 为横 坐 标 ，吸光 度值 为纵 坐标制 作 工作 曲线 。根据 样 品 的吸光 度值 计算样 品 中胆 固醇 含量 。
HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量
HPLC-ELSD测定鸡蛋中胆固醇的含量王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【摘要】应用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)对不同种类鸡蛋中胆固醇的含量进行测定.采用C18色谱柱为固定相,以甲醇为流动相,流速为1 mL·min-1,柱温为25℃;蒸发光散射检测器的氮气流速为2 L·min-1,漂移管温度为85℃.结果表明,胆固醇进样量在4.008～40.080 μg范围内,其对数与峰面积的对数呈良好的线性关系,相关系数R=0.9991,低、中、高三个浓度回收率为95.4%～99.1%.该方法操作简便、快速,精密度好,结果准确可靠.【期刊名称】《化学与生物工程》【年(卷),期】2009(026)003【总页数】3页(P76-78)【关键词】高效液相色谱-蒸发光散射检测器;鸡蛋;胆固醇;含量测定【作者】王术玲;郑夏生;黄敏娜;黄孟秋;冯燕兰;梁亮【作者单位】广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006;广州中医药大学,广东,广州,510006【正文语种】中文【中图分类】O657.72胆固醇是环戊烷骈多氢菲的衍生物，亦称“胆甾醇”，是动物体内维持正常生理活动所必需的最重要的固醇，通常以游离状态或酯化状态存在于动物组织中[1]。
但是人体内过多的胆固醇将引起高血脂，进而引发动脉粥样硬化、高血压、冠心病等一系列心血管疾病[2]，因此控制饮食中胆固醇摄入量非常必要。
鸡蛋中含有大量的胆固醇，是人体摄入胆固醇的重要途径。
对于鸡蛋中胆固醇含量的测定，文献报道多以在208 nm波长处紫外检测为主，对流动相的要求高，且样品中高紫外吸收物质的干扰大，易造成基线不稳，如果梯度洗脱则会引起基线漂移，使得胆固醇定量难度较大[3]。
测定鸡蛋胆固醇的高效液相色谱新方法
准确称取胆固醇
又常伴有共存脂质 因而对其测定非常复杂 ∀在所报 道的这些方法中 样品的处理不可避免地要经过皂 化 萃取步骤 并以多步溶剂萃取进行纯化和浓缩 ∀ 尤其是样品的皂化过程 往往是造成测量误差和操 作不便的最主要的原因 ∀ 本项工作旨在建立一种测定蛋黄胆固醇的相对 简单的高效液相色谱分析方法 ∀蛋黄以水稀释后 无 须皂化直接以乙醚和石油醚抽提 有机相抽空干燥 至
∀ 且测定方法更为简便 快速 并具有良好
的重现性 ∀ 该方法能有效地用于蛋黄中胆固醇的分 离和测定 对大批样品的测定效果尤其显著 ∀
参
考
文献 源自色 谱
卷
Αν Ι
ροϖεδ Μ ετηοδ οφ Χηολ εστερολ ∆ ετερ ινατιον ιν Ε γ γ Ψολ κ βψ Η ιγ η Περφορ ανχε Λιθυιδ Χηρο ατογ ρα ηψ
ε
谱
卷
而这些小峰在经皂化后萃取的样品色谱图 图 于 中几乎消失 ∀ 显然 在所选择的色谱条件下 包括脂 肪在内的其它组分能与胆固醇有效的分离 ∀ 由此可 见 采用反相高效液相色谱法测定蛋黄胆固醇含量 时可以有效地避免脂肪等其它组分的干扰 ∀ 我们的 实验也表明 采用不同前处理方法的同一样品 色谱 分离后胆固醇的峰高基本一致 ∀ 这表明皂化与否不 会对样品中胆固醇的测定带来影响 ∀很显然 在鸡蛋 蛋黄胆固醇的测定中 我们所采用的色谱条件可直 于 接用于不经皂化处理的样品的测定 并得到胆固醇 含量的可靠结果 ∀ 乙醇和
表
为皂化后萃取样品的
方法和比色法 方法直接萃取样品 胆固醇 Ù 个 蛋 法两种
蛋黄化学实验报告
实验名称：蛋黄中胆固醇的提取与测定实验目的：1. 学习从蛋黄中提取胆固醇。
2. 掌握薄层层析法分离混合物。
3. 了解胆固醇的定性分析方法。
实验原理：胆固醇是一种重要的生物活性物质，存在于动物组织中。
本实验采用有机溶剂提取蛋黄中的胆固醇，然后利用薄层层析法分离胆固醇与其他脂类成分，最后通过紫外灯下观察斑点的颜色和位置，对胆固醇进行定性分析。
实验仪器：1. 烧杯2. 玻璃棒3. 烘箱4. 薄层层析板5. 展开器6. 紫外灯7. 移液管8. 电子天平实验试剂：1. 蛋黄2. 氯仿3. 乙醇4. 硅胶5. 碘6. 碘化钾实验步骤：1. 称取一定量的蛋黄，加入适量的氯仿，用玻璃棒搅拌至蛋黄完全溶解。
2. 将溶液转移至烧杯中，用乙醇稀释，直至溶液澄清。
3. 将溶液过滤，收集滤液。
4. 取一张薄层层析板，用铅笔轻轻画出起始线。
5. 用移液管取少量滤液，滴加在起始线上，重复三次，每次间隔约1cm。
6. 将薄层层析板放入展开器中，用碘蒸气饱和展开器，使碘蒸气上升到层析板。
7. 展开一定时间后，取出薄层层析板，用紫外灯照射，观察胆固醇斑点的位置和颜色。
8. 记录胆固醇斑点的位置和颜色。
实验现象：在紫外灯下，胆固醇斑点呈现亮黄色，位于层析板的较下端。
实验数据记录与处理：1. 胆固醇斑点的位置：距离起始线约3cm。
2. 胆固醇斑点的颜色：亮黄色。
实验结果与讨论：根据实验结果，蛋黄中的胆固醇在薄层层析板上呈现亮黄色斑点，位于较下端。
这表明胆固醇在氯仿中溶解度较高，通过薄层层析法可以将其与其他脂类成分分离。
实验问题：1. 胆固醇在氯仿中的溶解度如何？2. 薄层层析法分离胆固醇的原理是什么？讨论与改进：1. 胆固醇在氯仿中的溶解度较高，因此可以使用氯仿作为提取剂。
2. 薄层层析法分离胆固醇的原理是利用不同成分在展开剂中的分配系数不同，从而实现分离。
为了提高实验结果的准确性，可以采取以下改进措施：1. 在提取过程中，确保蛋黄与氯仿充分混合，以提高胆固醇的提取率。
蛋黄总胆固醇的测定
• 一个成人平均一天摄取胆固醇量以50~300mg为 宜，大约一个鸡蛋。
二.实验原理
• 总胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式 存在。我们测定的是它的含量，分为五类方法：1. 化学试剂比色法 2.酶分析法 3.荧光法 4.气相法 5.高 效液相法
• 本次试验采用化学试剂比色法中的胆固醇及其酯在 硫酸存在下与邻苯二甲醛作用产生紫红色产物。产 物在553nm处有最大吸收，可以用分光光度法测定 。胆固醇含量400mg/100ml之内与吸光度呈良好的 线性关系。鸡蛋黄总胆固醇含量约为292.5mg/50g 。
蛋黄总胆固醇的测定
第三军医大学学员旅二队 方案设计：梁恭博 汇报：张臣科 PPT制作：徐喆
• Ⅰ.Purpose
Determine CHO Of Egg Yolk
• Ⅱ.Principle
• Ⅲ.Instrument And Reagent • Ⅴ.Steps • Ⅵ.Data
一.实验目的
• 1.查阅相关资料，了解测定蛋黄总胆固醇的临床 意义和几类方法。 • 2.学习实验设计的基本方法和步骤，设计出用分 光光度法测定蛋黄总胆固醇的实验方案。 • 3.用分光光度法测量出蛋黄总胆固醇含量
1
0 0.5 0.5 4.0 0
2
0.1 0.4 0.5 4.0 20
3
0.2 0.3 0.5 4.0 40
鸡蛋中胆固醇的含量实验报告结果与分析
鸡蛋中胆固醇的含量实验报告结果与分析1鸡蛋中胆固醇的含量实验报告结果与分析1.1流动相的选择据文献报道据文献报道，测定胆固醇采用的流动相有乙腈/异丙醇(4/1，V/V)或(2/1，V/V)，也有人采用甲醇/水(95/5，V/V)。
本文以100%甲醇作流动相，避免了有机相与无机相混合对仪器稳定及样品测定结果的影响。
从理论上讲与使用乙腈相比，使用甲醇对操作者来说，挥发性与毒性小一些的，更利于健康与安全。
1.2波长的选择对新到的24对胆固醇标准溶液进行扫描后确定在205nm处有最大吸收峰，故选择205nm为测定波长。
有些文献报道考虑甲醇的截止波长为205nm，而选择208nm为测定波长时会造成了峰值的降低。
通过对大量样品的测定结果表明，选择205nm并没有很大影响。
1.3样品皂化液的选择试样如果含有较高的脂肪，则加入的氢氧化钾溶液的浓度要较高，加入无水乙醇的量也要适当增加。
这样能够保证样品被完全皂化，而目不会出现乳化的现象。
实验对氢氧化钾的用量进行了研究，当氢氧化钾的用量为10mL和15mL 能保证完全皂化，对结果无明显影响。
最后确定采用60%的氢氧化钾溶液的用量为10mL。
1.4样品萃取的选择使用前通常采用的萃取剂有乙醚、石油醚、正己烷等。
考虑到成本问题，采用乙醚、石油醚较为便宜。
但由于乙醚挥发性太大，且乙醚、石油醚萃取效果区别大，因此采用乙醚/石油醚(1/1，V/V)。
1.5标准回归方程用胆固醇标准储备液配成01mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL0.5mg/mL 系列使用液，分别取104L行色谱测定，以胆固醇浓度作为纵坐标y，峰面积x 为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为y=0.00000026x-0.01693817，相关系数R2=0.9951,说明呈线性回归见(图3-5)，可以用于定量分析。
1.6 精密度实验精密度系指用该法测定同一匀质样品的一组测量值彼此符合的程度。
它们越接近就越精密。
蛋黄的测定 文档
蛋黄中胆固醇含量测定方法的研究胆固醇含量的分析方法有酶法、比色法、液相色谱法、气相色谱法、液相色谱-质谱联用法等试剂盒法是基于酶法测定胆固醇的原理进行的比色法一种依据显色反应来分析的传统方法色谱法是适用范围较广、灵敏度较高的分析方法而高效液相色谱不需要载气在使用上较气相色谱和液相色谱-质谱联用的方法简便[ 6-11 ]。
本试验对液相色谱法、皂化-比色法和试剂盒法测定蛋黄胆固醇的过程和结果进行研究和比较为鸡蛋胆固醇含量测定工作提供方法指导。
1材料与方法1.1试验材料蛋黄由市售新鲜鸡蛋中取出胆固醇标准品纯度≥99.7%由中国计量科学研究院提供总胆固醇试剂盒酶法由北京北化康泰临床试剂有限公司提供显色液为FeSO4-冰乙酸-浓硫酸 将Fe⁃SO4100 mg溶于1mL蒸馏水中 再加入100 mL冰乙酸混合溶解 然后与100 mL浓硫酸缓慢混匀冷却后使用。
1.2试验方法1.2.1 HPLC法取新鲜蛋黄稀释液浓度为0.1 g·mL-1 1.0 mL于10 mL离心管中加入95%乙醇1.0 mL用漩涡振荡器混匀后加入乙醚2.5 mL再次混匀后加入石油醚2.5 mL震荡混匀3 000 rpm离心5 min移出上层萃取液在低于45℃下用氮气吹干加无水乙醇溶解残余物2.0 mL用0.45μm有机微孔滤膜过滤后进样。
色谱条件为色谱柱ZORBAXEclipse XDB-C184.6 mm×150 mm5μm流动相乙腈-异丙醇(4:1)V/V流速0.8 mL·min-1柱温35℃检测波210 nm 进样量10μL。
取胆固醇标准品用色谱级无水乙醇溶解配成浓度为1 mg·mL-1的标准液取标准液稀释成不同浓度0~1 000μg·mL-1以胆固醇浓度为横坐标峰面积值为纵坐标制作标准曲线。
采用外标法定量分析样品中胆固醇含量。
1.2.2皂化比色法称取鲜蛋黄100 mg于25 mL试管中加入KOH-甲醇溶液5 mL200 g·L-1漩涡震荡混匀置于80℃水浴恒温振荡器中皂化10 min取出冷却至室温加入正己烷10 mL漩涡震荡混匀静置将上层液体移入10 mL离心管中3 000 rpm离心10 min 取出上清液60℃下用氮气吹干。
试论HPLC法测定不同品种鸡蛋中的胆固醇含量
分析检测T logy科技借助于HPLC法对不同种类鸡蛋里面的胆固醇含量进行有效测定，本文以浓度为2.0mol/L的KOH-乙醇溶液开展皂化，石油醚萃取，以C18反相色谱柱进行分离，HPLC法测定，对操作环节进行了简化，减少了试剂的总体使用量，并且进一步节省了探究时间，整个探究过程只需要1.5小时。
本方法用来测定实际样品，效果明显。
胆固醇是生物膜以及神经髓鞘的核心构成部分，而且是胆汁酸以及类固醇激素的前体。
可身体内部太多的胆固醇会进一步引起高血脂等疾病，于是，人们需要对日常饮食中胆固醇的摄入量进行控制。
鸡蛋是人体进一步摄入胆固醇的核心渠道。
HPLC法对蛋黄里面胆固醇的具体含量进行测定，操作快速、方便，在短期内就能够完成探究，能够满足快速探究以及大批量样品测定的双重需要。
材料与方法仪器与试剂。
Agilentl100化学工作站，紫外检测器G1314A，Agilent 1100高效液相色谱仪，异丙醇、乙腈、甲醇、石油醚、胆固醇、氯化钠、氢氧化钾以及无水乙醇。
制定浓度为1.0mg/ml的胆固醇溶液：将100mg胆固醇放在100ml的容量瓶里面，以少量甲醇进行溶解后，用甲醇稀到刻度。
样品处理以及测定。
将称好的0.20g鸡蛋放在50ml 的具塞比色管里面，添加5.0ml浓度为2.0moL/L的KOH 一乙醇液，进行充分振荡，放在65℃的水浴里面实施皂化30分钟后取出，利用流动的水实施冷却，添加2.0ml的饱和氯化钠溶液后，然后添加20.0ml的石油醚，旋涡混合均匀后开展离心分离，将10.0ml的上清液放进10ml刻度的比色管中，通入氮气进行吹干，再采取1.0ml甲醇对残渣进行有效溶解，过0.45μm滤膜之后，将10.0μl有效添加到液相色谱仪，根据以上色谱条件有效实施测定，外标法定量。
结果线性范围以及方法的最低检出限。
按照探究步骤对胆固醇的标准溶液进行配制，在本实验的背景下，胆固醇的浓度从0至1.0mg/ml范围，标准曲线进一步呈现优良的线性关系。
胆固醇测定实验讲义
实验12 直接皂化-比色法测定鸡蛋中胆固醇含量一、原理当固醇类化合物与酸作用时，可脱水并发生聚合反应，产生颜色物质。
因此可先对食品样品进行皂化和提取，用磷硫铁试剂作为显色剂，测定食品中胆固醇的含量。
在样品的冰乙酸提取液中加磷硫铁试剂，胆固醇与试剂反应产生紫红色化合物，颜色的深浅与胆固醇的量成正比，可用分光光度计在波长560nm•处测定。
二、实验仪器及试材1.仪器：分光光度计、水浴锅2.试剂：本实验用水均需用蒸馏水或去离子水。
试剂纯度均为分析纯。
（1）石油醚（沸点30-60℃）、无水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氢氧化钾溶液：称取50g氢氧化钾，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（3）25%氯化钠溶液：称取25g氯化钠，用蒸馏水溶解，并稀释至100mL。
（4）10% 三氯化铁溶液：将10g FeCl3·6 H2O溶于磷酸中，定容至100 mL，储于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫铁试剂：取10% 三氯化铁溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶内，加浓硫酸定容至刻度。
（6）胆固醇标准储液：准确称取胆固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）胆固醇标准溶液：临用前将储液用冰乙酸稀释10倍。
三、实验方法与步骤1.样品胆固醇提取准确称取充分混匀的鸡蛋约0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氢氧化钾溶液和4.5mL无水乙醇，振荡混匀，在80℃恒温水浴中皂化20min。
皂化时每隔5min振摇一次使皂化完全。
皂化完毕，取出比色管，冷却。
加入10mL 石油醚，盖紧玻璃塞，振摇1min，静置分层。
取上层石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管内，在65℃水浴中让石油醚自然挥发干，加入4mL冰乙酸，轻摇使胆固醇溶解，待测。
2.样品和标准胆固醇含量测定另取两支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（标准管）加入1mL胆固醇标准溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。
包括样品管，各管分别加入2mL磷硫铁试剂，混匀，25℃放置20min后在560nm波长下比色。
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实验六蛋黄总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）
一、实验目的
1、学习分光光度计的原理及操作。
2、学习用分光光度法测定蛋黄中总胆固醇（脂肪）含量及标准曲线的制作。
二、基本原理
胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生紫红色物质，此物质在550nm由最大吸收值，可用比色法测定。
胆固醇含量在400mg/100ml之内与吸光度呈现良好线性关系。
本法操作简便，灵敏、稳定。
实验相关原理
根据物质对光的吸收特征和吸收强度，对物质进行定性和定量的分析方法，称为分光光度法(spectrophotometry)。
该法具有一定的灵敏度和准确度，分析手续较简便快速，仪器设备也不复杂，故应用很广。
吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比，称为朗伯—比尔定律，简称比尔定律，即光的吸收定律。
吸光系数的大小，取决于物质(溶质、溶剂)的本性和光的波长。
1. 物质不同，则吸光系数不同，所以吸光系数可作为物质的特性常数。
在分光光度法中，常用摩尔吸光系数ε来衡量显色反应的灵敏度，ε值越大，灵敏度越高。
2. 溶剂不同，其吸光系数亦不同。
3. 光的波长不同，其吸光系数亦不同。
如将不同波长的单色光依次通过被分析物质，分别测得吸光度，然后绘制吸光度—波长曲线，称为吸收曲线(absorption curve)，吸收曲线上有极大值的部分，称为吸收峰。
吸收峰所对应的波长，称为最大吸收波长，以符号λmax表示，这是物质定性的依据之一。
4.单色光的纯度也影响吸光系数。
单色光越纯，即经单色器分光后的波长范围越窄，其吸光系数越大。
定量方法：
1、吸光系数法
2、标准曲线法
不是任何情况下都能适用的。
特别是在单色光不纯的情况下，测得的吸光度值可以随所用仪器不同而在一个相当大的幅度内变化不定，若用吸光系数换算成浓度，则将产生很大误差。
先配制一系列浓度不同的标准溶液，在测定条件相同情况下，分别测定其吸光度，然后以标准溶液的浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A—C关系图，在相同条件下测出样品溶液的吸光度，就可以从标准曲线上查出样品溶液的浓度。
3、对照法
标准曲线的制作
（1）配置一系列浓度不同的标准溶液。
（2）在测定条件相同的情况下，分别测定其吸光度。
（3）以标准溶液浓度为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，绘制A-C关系图。
（4）在相同条件下测出样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出浓度。
定性方法：
将一系列不同波长的单色光，照射到含待测组分的溶液，可测得相应的一系列吸光度。
如果以吸光度为纵坐标，以波长为横坐标作图，便可得到该待测物质的吸收曲线。
由于每一种物质均有其特征的吸收曲线，故可与其标准品比较而定性。
但在实际工作中常用λmax 和ε来定性，λmax可从吸收曲线中吸收峰所对应的波长直接找出；ε通常需配制待测物质三种不同浓度的溶液，于1cm
吸收池中，在λmax处分别测定其吸光度，根据A=εbc，即ε=A/bc，计算出ε，将三次结果平均，即得该物质的摩尔吸光系数。
三、试剂
1. 邻苯二甲醛试剂
2. 90%醋酸
3. 混合酸：等体积浓硫酸+等体积90%醋酸
4. 0.1mg/ml标准胆固醇应用液
5. 小牛血清
四、操作步骤
1、标准曲线的绘制：
取5只试管，分别加入0，0.1，0.2，0.3，0.4mL标准胆固醇应用液，再依次加入醋酸使各管体积均为0.4ml。
每管加入邻苯二甲醛试剂0.2ml，蒸馏水0.01ml，加入4ml混合酸，震荡混匀，10分钟后于550nm测定吸光值，以胆固醇量mg/100ml为横坐标，光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。
3、加毕，混匀，静置10分钟后，以对照管校0于550nm测定吸光值，从标准曲线中查出相应的浓度。
样品吸光度A=0.475
因为K为如图所画直线斜率，所以样品中的胆固醇量为：A/K≈24.39(mg/100mL)
由于样品中的蛋黄含量为600mg/100mL,所以蛋黄胆固醇含量为：24.39/600*100%=4.06%
06级生物科学2班
小组成员: 宋茜40608064
刘芳40608089
魏小丽40608091
黄玮40608095。