实验室常用灭菌法详细版.ppt

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辐射灭菌法
• 将灭菌物品置于适宜放射源辐射的射线或
适意的电子加速其发生的电子束中进行电 离辐射而达到杀灭微生物的方法。
• 常用60Co-γ射线
• 用于医疗器械、容器、生产辅助用品、不
受辐射破坏的原料药及成品等。
• 参数：辐射剂量
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辐射灭菌特点
• γ射线
60Co
穿透力强
• β射线
• 微生物种类和数量
• 灭菌物品特性
• 蒸汽的性质
饱和蒸汽 热含量高 潜热大 穿透力强
湿饱和蒸汽
低
过热蒸汽
穿透力差
• 灭菌时间等
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干热灭菌法
• 利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原
的方法。
• 适用范围：耐高温但不宜使热灭菌法灭菌
的物品，如玻璃物品、金属物品、纤维制 品、固体试药、液体石蜡等。
灭菌法
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灭菌法定义
• 用适当的物理或化学手段将物品中活的微
生物杀灭或除去的方法。适用于制剂、原 料、辅料、医疗器械等的灭菌。
• 灭菌是指将物品中污染的微生物残存概率
下降至一定水平，以无菌保证水平 SAL(Sterility Assurance Level)表示。
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灭菌程序验证内容
• 撰写验证方案及制定评估标准。 • 确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确，
• 辐射灭菌：短小芽孢杆菌孢子（ATCC27142等，活孢子数为5×107～
5×108个/片 )
• 气体灭菌：
环氧乙烷灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为 5×105～5×106个/片 )
气态过氧化氢灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子 数为1×106～5×106个/片 )
菌种应无致病性。
菌株应稳定，存活期长，易于保存。
易于培养。若使用休眠孢子，孢子含量 在90%以上。
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常用生物指示剂
• 湿热灭菌：嗜热脂肪芽孢杆菌孢子（ATCC7953等，活孢子数为
5×105～5×106个/片 )
• 干热灭菌：枯草芽孢杆菌孢子（ATCC9372等，活孢子数为5×105～
5×106个/片 )
• 效果可靠、操作简便 • 应用广泛：容器、培养基、无菌衣、胶塞等 • 包括
– 热压灭菌 – 流通蒸汽灭菌 – 煮沸灭菌 – 低温间歇灭菌
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湿热灭菌条件
• 121℃× 15min、 121℃× 30min 、116 ×
40min 或其他可以保证灭菌效果的程序条 件。
×
• 过度杀灭法 • 灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有
由电子加速器产生
穿透力弱，灭菌效果差
• 不升高温度
• 设备费用高
• 辐射能引起一些药物pH值、含量、活性等改变，
某些制品不宜选用
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气体灭菌法
• 用化学消毒剂形成的气体杀灭微生物的方
法，常用环氧乙烷、气态过氧化氢、甲醛、 臭氧等。
• 适用于医疗器械、塑料制品等，能吸附环
氧乙烷的物品不宜采用。
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物理灭菌法
方法
主要技术参数
应用特点
干热灭菌
药典规定 180℃，1h 或 160-170℃， 穿透力弱，温度不易均匀，温度高，不
2-4h
适于大部分药品
湿热 灭菌
热压 灭菌 流通 蒸汽
98kPa(1kg/cm2),15-20min 100℃，30-60min
穿透力强，效果可靠，适用广 不能杀灭细菌芽胞
效均一
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灭菌容器操作注意
• 使用前认真检查设备的完好性
• 灭菌时须先将灭菌器中冷空气排出，以保
证最佳灭菌效果
• 灭菌时间应从待灭菌物品到达预定温度时
算起
• 灭菌完毕后停止加热，待压力表降至0，放
汽、开启灭菌器，物品温度降至80℃ 以下 时才能将灭菌器门全部开启
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影响湿热灭菌的因素
并能处于正常运行。
• 确认关键设备控制仪表在规定的参数范围
内能正常运行。
• 采用被灭菌物品或模拟物品进行重复实验
确认灭菌效果符合规定。
• 完善文件记录，撰写验证报告。
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灭菌程序运行监控
• 关键参数应在验证确定的范围内：温度、
压力、时间、湿度、灭菌气体浓度、辐照 剂量等
• 灭菌程序定期验证，时效不超过半年。 • 灭菌设备或程序发生变更重新进行验证。
不挥发，不易燃
无色醚样臭味气体，沸点 10.8 扩散穿透能力强，属广谱杀菌
环氧乙烷
℃，沸点以下为无色透明液 剂；用于对热敏感的药物等的
体，比重 0.882，溶于水。 灭菌；时间长，费用贵。
苯酚（石炭酸）
3～5%
地面、墙壁喷撒
甲酚皂溶液（来苏尔）
5～100%
低温 60-80℃，1h + 室温 24h，重复操作 适于必须加热灭菌而又不耐高温者；时
间歇
3 次以上
间长，效果不理想；须加抑菌剂
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化学灭菌法
40%甲醛溶液（福尔马林） 20ml/m3 加热蒸发,6～12h
粘膜强烈刺激
乳酸
1ml/m3 加热蒸发 0.5～1h
无毒
丙二醇
1ml/m3 加热蒸发
过滤除菌法：缺陷假单胞菌（ ATCC19146等）
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灭菌方法
• 方法：湿热灭菌法、干热灭菌法、辐射灭
菌法、气体灭菌法、过滤除菌法。
• 根据灭菌物品特性选择一种或几种wk.baidu.com法组
合灭菌。只要产品允许，尽可能选用最终 灭菌法。
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湿热灭菌法
• 在高温高压条件下利用沸水、蒸气变性微生物菌
体中的蛋白质、核酸而达到灭菌效果的方法。
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干热灭菌条件和效果
• 160～170℃× 120min、 170～180℃×
60min、250 ℃× 45min以上
• 灭菌过程有适当的装载方式，保证灭菌有
效均一
• 效果：
繁殖型细菌100℃ /1h可杀灭
耐热细菌: 120℃ 长时间不死亡,140 ℃ 杀菌率剧增
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火焰灭菌
置于火焰上直接灼烧 简便、可靠
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灭菌保证
• 灭菌效果与灭菌前产品污染程度及污染菌
特性有关，把握微生物污染水平及污染菌
耐受性，注意各个环节降低污染程度。
• 灭菌冷却阶段防止已灭菌物品再次污染。
• 适用生物指示剂、化学指示剂等监控灭菌
结果
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生物指示剂
• 基本要求：
菌种的耐受性应大于需灭菌产品中所有 可能污染菌的耐受性。
• 控制参数：温度、相对湿度、灭菌压力、
灭菌时间等
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过滤除菌法
• 利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理除
去气体或液体中的微生物。
• 用于热不稳定的药品或原料除菌
• 滤膜材料确定
• 滤膜孔径要求
繁殖型微生物1um，芽孢约0.5um或以下
0.45um可滤去大多数细菌，0.15um可滤 去热原
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