运动生理学实验指导

运动生理学实验指导

实验一血红蛋白测定及血型测定

A..血红蛋白的定量测定

【目的】掌握用比色法来测定血红蛋白量。（3分）

【原理】血红蛋白量测定方法有光电比色法、分光光度法和沙里氏比色计比色法。本实验采用沙里氏比色法。血液中血红蛋白的颜色随其结合的氧量多少而有一定的变化。为提高测定的标准，可向血液中加稀盐酸，使亚铁血红蛋白酸化成高铁血红蛋白而显稳定的棕黄色，加蒸馏水稀释并与标准色比较，既可求出100mL血液中所含的血红蛋白的克数。血红蛋白的含量受年龄、性别、营养状况、体育锻炼以及居住条件的影响。（5分）

我国正常成年男子约含12～15g·dL-1；女子约为11～14 g·dL-1。

【器材】沙里氏比色计（含比色管、比色架、吸血管）、采血针、75℅酒精、棉球、95℅酒精、0.1mol盐酸、乙醚、蒸馏水、小玻棒、小滴管。（6分）【步骤】

1.向比色管内加入0.1mol盐酸10滴（约达到比色管的10℅的刻度线）。（3

分）

2. 采血。以75℅的酒精消毒无名指及采血针（2分）；

3．用采血针刺破无名指指腹一侧皮肤，让血液自然流出，用消毒干棉球擦去一滴后，用右手平持吸血管使管口接触自然流出的一滴血管，准备吸取20μl 的血液（血柱液面平20μl刻度线）。（6分）

4．用干棉球拭檫管外的血液，然后迅速将吸血管移入比色管，徐徐将血液吹入盐酸深层，并用上层清夜多次洗涤吸血管，轻轻振荡，置室温中10～15min,充分到使亚铁血红蛋白变成高铁血红蛋白。（6分）

5.比色。将比色管放入血红蛋白比色架中，向比色管逐滴加入蒸馏水并且边滴边搅拌边竖起对光观察，将比色管的颜色与比色计上的标准颜色做比较，直至比色管溶液颜色与标准颜色一致为止。正确读出并记录比色管内溶液弯月面下缘最底点对应的比色管刻度数值，此数值即为每100mL血液中所含血红蛋白的克数。（9分）

【注意事项】

1.要准确配制0.1mol的盐酸。血液被酸化的时间不得少于10min。

2.吸取的血量应准确，并将吸血管外的血液抹去。

3.吹入血液和洗净吸血管时，切勿将空气吹入盐酸中，以免形成气泡影响

比色。

4.稀释时要耐心地逐滴加蒸馏水，并应边滴边搅边竖起比色，当颜色接近时，只能半滴半滴地稀释。

实验二 ABO血型的鉴定

【目的】学习ABO血型鉴定的方法，了解鉴定ABO血型的原理。（3分）

【原理】红细胞膜上有多种抗原物质，根据不同的抗原物质可把人的血液分为许多类型的血液。通常所说的血型是指根据红细胞膜上A凝集原和B凝集原而鉴别的ABO血型系统的血型。ABO血型系统的各血液的分类依据列于表1。A凝集原只能与抗A凝集索结合，B凝集原只能与抗B凝集素结合，使红细胞形成一簇簇不规则的细胞团，此现象称为红细胞凝集反应。据此可以用以知标准A型血血清和标准B型血血清鉴定受检查的红细胞膜上有无A凝集原、B 凝集原，从而判断受检查者的血型（图1）。（5分）

[实验方法]ABO血型的玻片检查法

【器材】显微镜、载波片、牙签、小试管、滴管、采血针、生理盐水、标准A型血血清、标准B型血血清、75℅酒精棉球。（5分）

【步骤】

（1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。（4分）

（2）细胞悬液制备从指尖取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。（5分）

（3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。（4分）

（4）竹签两头分别混合，搅匀。（3分）

（5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。（4分）

（6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。（见图）（5分）

（7）收拾，清洗仪器。（2分）

实验三安静时时人体心率与动脉血压的测定

【目的】通过实验，学会用间接法测定人体动脉血压和用听诊法测定心率的方法（3分）

【原理】血压的测定常用间接法。它是用血压计的袖带在动脉加压，根据血压管音的变化测定血压。通常血液在血管内流动时并没有声音。如果对血管施加压力，，使血管腔变窄而形成血液涡流时可发生血管音。通过袖带给动脉加压，当外加压力超过动脉血压的收缩压时，受压部位的血流完全被阻断，此时在受压部位的远侧听不到声音。如果将压力逐渐减低，当外加压力低于收缩压而高于舒张压时，血液则可断断续续地通过受压部位时血流形成涡流而发出声音，此时，在受压部位的远侧可以听到声音。当继续降低压力时，且外加压力等于舒张压时，受压部位的血流由断续流动恢复到持续流动，受压部位远侧的声音则由强变弱或突然消失。由此可以间接地测出：恰好能够完全阻断血流（即听到第一个音响时）所需的最大外加压力相当于收缩压。而血流由断续流动恢复持续流动时（即声音突然变弱或突然消失时）的外加压力为舒张压。正常人安静时心率约在60～100次min–1之间。心率常受年龄、性别、生理状况、训练水平、体力劳动及体育运动的影响。在实践中通过测定血压、心率可了解受检查者循环系统的功能；了解运动量、运动强度、运动训练对人的影响、运动后的恢复情况、运动的密度。心率的测定方法有直接听诊及心率遥测等。本实验以听诊器直接在心前区听取心音计算心率。（6分）

【实验仪器】血压计，听诊器，秒表

【步骤】

1．测安静时血压

（1）熟悉血压计的构造：座式水银血压计是由气球、袖带和检压计三部分组成的。检压计是一玻璃管，上端与我界相通，下端与水银槽相通，管左侧面附有0～300㎜刻度；管右侧槽面附有0～4kPa的刻度。袖带是由布套包裹着的长方形橡皮囊，借橡皮管分别与水银槽及气球相通。气球是一个前端有螺丝帽，后端有一个气孔的橡皮球；表式血压计是由气球、袖带和检压表三部分组成，其结构原理与水银检压计相同。（3分）

（2）受试者在测试前休息5min以上.(1 分)

（3）松开橡皮球上的螺丝帽，将袖带内的空气全部驱出，然后扭紧螺丝帽。（2分）（4）受试者脱去衣袖，前臂平放于桌上，掌心向上并与心脏、水银槽（或血压表）同一水平。将袖带缠缚在上臂中部（其下缘应高于肘关节上2㎝处）检紧适宜。（3分）（5）在肘窝内侧触到动脉搏动的位置，将听诊器的胸件置于其上面（图3），将听诊器的耳件置于外耳道（弯曲向前）。（3分）

（6）右手持气球打气向袖带内加压，使水银柱面液面升到24kPa随即稍松开螺丝帽，徐徐放气降低压力，与此同时仔细听诊，当听到第一声音时，水银柱面所处的刻度或表式血压计指针指向的刻度为收缩压。（4分）

（7）继续徐徐放气，声音会由低变高，然后由高到低或突然消失时，水银柱液面所处的刻度或表式血压计指针指向的刻度为舒张压。重测1～2次，各次相差小于4㎜刻度为准确，取其平均值，记录结果，其格式为：收缩压/舒张压（kPa）。（5分）

（8）将血压计向右侧倾斜45度，关闭血压计，将血压计及听诊器收拾好。（3分）

2.测安静时的心率。

测量方法：

（1）听诊法：将听诊器的耳件置于外耳道，将胸件置于心前区（左锁骨中线与第五肋间交点附近），仔细听取心脏的每个心动同时期所产生的心音，并数3个10s的次数相加再