原果胶含量试剂盒说明书
苏州格锐思生物科技有限公司多聚半乳糖醛酸酶(PG)试剂盒说明书
多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonase,PG)试剂盒说明书(货号:G0701F分光法48样)一、产品简介:果胶酶是指分解果胶的多种酶,主要包括多聚半乳糖醛酸酶(PG),果胶裂解酶(PL),果胶甲酯酶(PME)和原果胶酶,贮藏过程中起作用的主要是PG。
所以该酶在食品贮藏保鲜和植物抗病性等领域具有较高的研究价值。
果胶在多聚半乳糖醛酸酶(PG)作用下,能水解产生带有具有还原性醛基的半乳糖醛酸。
与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
二、试剂盒组成和配制:试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体20mL×1瓶4℃保存试剂三液体46mL×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存若重新做标曲,则用到该试剂三、所需仪器和用品:可见分光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、台式离心机、天平、可调式移液器、水浴锅、研钵、冰。
四、多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测:建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备:①组织样本:称取约0.2g组织(水分充足的样本可取1g),加入1mL经预冷的95%乙醇冰浴匀浆,4℃放置10min;12000rpm,4℃离心5min;弃上清,留沉淀,向沉淀中加入经预冷的80%乙醇混匀,4℃放置10min;12000rpm,4℃离心5min;弃上清,留沉淀。
再向沉淀中加入1mL经预冷提取液,涡旋混匀,4℃放置10min;12000rpm,4℃离心10min;留上清,弃沉淀。
上清液置冰上待测。
②液体样本:直接检测。
若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:①分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
②在EP管中依次加入:试剂名称(μL)测定管对照管样本6060试剂一390试剂二39040℃水浴30min试剂三450450沸水浴(95-100℃)5min,冰浴或淋浴冷却后,全部转移于1mL玻璃比色皿中,540nm处测定吸光值A,△A=A测定管-A对照管(每个测定管设一个对照管)。
造纸原料果胶含量的测定
造纸原料果胶含量的测定
果胶是一种常见的造纸原料,它的质量是影响造纸效果的重要因素。
因此,测定果胶含量是非常重要的。
学习测定果胶含量,首先要了解相关的理论知识。
果胶的定义,果胶的组成成分,果胶的收获和加工等,以及与果胶有关的分析技术,如果没有基础的知识,将无法准确测定果胶含量。
其次,要熟悉相关的实验方法。
目前,主要采用微新型光度法和液体析出法,测定果胶含量。
光度法是通过测量果胶经紫外线照射后发射的某些特定波长的光动态变化,来估算果胶含量;而液体析出法是通过将果胶与某种浓度的溶剂混合,使果胶迅速溶解,并用比色法或层析技术测定果胶含量。
最后,遵守安全和卫生要求。
在操作实验的时候,要严格遵守安全操作规程,确保实验无任何安全隐患。
对所有样品,实验前后应进行卫生消毒,并保持实验环境卫生,这样才能保证测试结果的可靠性。
以上就是测定果胶含量的基本方法,只要按照[正确的]方法来进行,就可以得到准确的测试结果。
果胶的提取与果胶含量的测定
资料范本本资料为word版本,可以直接编辑和打印,感谢您的下载果胶的提取与果胶含量的测定地点:__________________时间:__________________说明:本资料适用于约定双方经过谈判,协商而共同承认,共同遵守的责任与义务,仅供参考,文档可直接下载或修改,不需要的部分可直接删除,使用时请详细阅读内容果胶的提取与果胶含量的测定一、引言果胶广泛存在于水果和蔬菜中,如苹果中含量为0.7—1.5%(以湿品计),在蔬菜中以南瓜含量最多(达7%-17%)。
果胶的基本结构是以α-1,4苷键连接的聚半乳糖醛酸,其中部分羧基被甲酯化,其余的羧基与钾、钠、铵离子结合成盐。
在果蔬中,尤其是未成熟的水果和皮中,果胶多数以原果胶存在,原果胶通过金属离子桥(比如Ca2+)与多聚半乳糖醛酸中的游离羧基相结合。
原果胶不溶于水,故用酸水解,生成可溶性的果胶,再进行提取、脱色、沉淀、干燥,即为商品果胶。
从柑橘皮中提取的果胶是高酯化度的果胶(酯化度在70%以上)。
在食品工业中常利用果胶制作果酱、果冻和糖果,在汁液类食品中作增稠剂、乳化剂。
二、实验材料、试剂与仪器材料:桔皮,苹果等;试剂:0.25% HCL,95%乙醇(AR),精制乙醇,乙醚,0.05mol/L HCl,0.15%咔唑乙醇溶液,半乳糖醛酸标准液,浓硫酸(优级纯)仪器:分光光度计,50mL比色管,分析天平,水浴锅,回流冷凝器,烘箱等三、实验步骤(一)果胶的提取1、原料预处理:称取新鲜柑橘皮20g(或干样8g),用清水洗净后,放入250mL容量瓶中,加水120mL,加热至90℃保持5-10min,使酶失活。
用水冲洗后切成3~5mm的颗粒,用50℃左右的热水漂洗,直至水为无色、果皮无异味为止(每次漂洗必须把果皮用尼龙布挤干,在进行下一次的漂洗)。
2、酸水解提取:将预处理过的果皮粒放入烧杯中,加约60mL 0.25% HCL 溶液,以浸没果皮为宜,调pH至2.0~2.5,加热至90℃煮45min,趁热用100目尼龙布或四层纱布过滤。
原果胶提取实验报告
一、实验目的1. 了解原果胶的基本性质及其在植物体中的存在形式。
2. 掌握原果胶的提取方法和实验操作技能。
3. 分析影响原果胶提取效率的因素,并优化提取条件。
二、实验原理原果胶是一种高分子多糖类物质,广泛存在于植物细胞壁中,尤其在未成熟的水果和果皮中含量较高。
原果胶不溶于水,但可以与钙、镁等金属离子形成可溶性的果胶盐。
本实验通过酸水解原果胶,使其转变为可溶性果胶,然后通过离心、沉淀等步骤提取原果胶。
三、实验材料与仪器材料:- 新鲜柑橘皮- 95%乙醇- 36%盐酸溶液- 1.5mol/L氢氧化钠溶液- 无水乙醇- 活性炭- 蒸馏水仪器:- 烧杯- 离心机- 砂轮研钵- 布氏漏斗- 抽滤瓶- 滤纸- 尼龙布- 电子天平- 移液管- 滴定管- 酸度计四、实验步骤1. 原料预处理:- 称取新鲜柑橘皮20g(干品8g),用清水洗净,切成小块。
- 将柑橘皮放入烧杯中,加入120mL水,加热至90℃,保温5-10分钟,使酶失活。
- 用水冲洗柑橘皮,直至水为无色,果皮无异味。
2. 酸水解:- 将处理好的柑橘皮粒放入烧杯中,加入20mL 36%盐酸溶液,在室温下搅拌2小时。
3. 离心分离:- 将酸水解后的混合液用离心机以3000r/min离心10分钟,取上清液。
4. 中和:- 用1.5mol/L氢氧化钠溶液调节上清液pH至6.5-7.0。
5. 沉淀:- 加入等体积的95%乙醇,充分搅拌,静置过夜。
6. 过滤:- 用布氏漏斗过滤沉淀,收集滤渣。
7. 脱色:- 将滤渣放入烧杯中,加入适量活性炭,搅拌10分钟,过滤。
8. 干燥:- 将滤液放入蒸发皿中,蒸干,然后用无水乙醇洗涤,干燥。
五、实验结果与分析1. 原果胶提取率:- 通过实验计算,本实验的原果胶提取率为8.2%。
2. 影响原果胶提取效率的因素:- 酸水解时间:酸水解时间越长,原果胶提取率越高,但过长的酸水解时间会导致果胶降解。
- 酸浓度:酸浓度越高,原果胶提取率越高,但过高的酸浓度会导致果胶降解。
果胶甲酯化程度试剂盒说明书
果胶甲酯化程度试剂盒说明书 微量法100T/96S注 意:正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:植物细胞壁中的果胶是植物初生细胞壁的主要成分,除了起结构支撑、物质运输等作用外,还具有抵抗逆境的作用。
果胶甲酯化程度影响了细胞壁的坚韧程度及其抗性。
测定原理:果胶甲酯键经皂化处理后释放出甲醇,甲醇与2,4-戊二酮反应显色,在412nm 下测定吸光值;同时半乳糖醛酸在70℃下与浓硫酸反应生成5-甲酰基-2-呋喃甲酸,5-甲酰基-2-呋喃甲酸与3,5-二甲基苯酚反应产生有色物质,在450nm 下有最大吸光值。
以甲醇生成量与半乳糖醛酸含量的比值代表果胶甲酯化程度。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、酶标仪、96 孔板、恒温水浴锅、蒸馏水、硫酸。
试剂组成和配制:提取液:液体100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体3mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体3mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体3mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂四:液体 2.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂五:粉剂×1 瓶,4℃避光保存;临用前加入22mL 试剂六充分溶解待用,用不完的试剂4℃避光保存。
试剂六:液体25mL×1 瓶,4℃保存。
试剂七:液体3mL×1 瓶,4℃保存。
试剂八:液体 2.5mL×1 瓶,4℃避光保存。
酶液提取:称取约0.1g 组织,加入1mL 蒸馏水,进行冰浴匀浆。
10000g 4℃离心10min,弃上清,留沉淀。
沉淀中加入1mL 提取液,混匀后90℃水浴2h,冷却至室温,10000g4℃离心10min,取上清待测。
测定操作表:1.甲醇生成量测定:试剂名称(μL)空白管测定管样本50提取液50试剂一25 25混匀,室温静置30min试剂二25 25试剂三20 20混匀,冰浴至紫色褪去,约需要15-30min试剂四20 20水60 60试剂五200 200混匀,60℃反应15min。
原果胶检测试剂盒(咔唑比色法)
原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)简介:天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中,是细胞壁的一种组成成分,它们伴随纤维素而存在,构成相邻细胞中间层粘结物,使植物组织细胞紧紧黏结在一起。
原果胶是不溶于水的物质,但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下,加水分解转变成水溶性果胶。
果胶(Pectin)又称多聚半乳糖醛酸,是由D-半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键连接形成的直链状聚合物,本质上是一种线形的多糖聚合物,含有数百个脱水半乳糖醛酸残基。
原果胶是一种非水溶性的物质,在未成熟的果实或植物组织中果胶物质大多与纤维素结合以原果胶的形式存在,原果胶能使果实或其他植物组织坚硬、变脆。
Leagene 原果胶(PP)检测试剂盒(咔唑比色法)检测原理是果胶物质水解生成半乳糖醛酸,后者在硫酸溶液中咔唑进行缩合反应形成紫红色的化合物,该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比,该化合物颜色在反应内呈色最深,当反应液颜色最深时在波长处测定吸光度,通过与标准曲线比较,计算出样品中原果胶或可溶性果胶含量。
该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中原果胶含量,亦可用于定量检测植物组织或果实中可溶性果胶含量,进而计算出总果胶含量(为原果胶含量与可溶性果胶含量之和)。
该25T试剂盒可以检测25-30左右个样本。
该试盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
组成:自备材料:编号名称TC212325TStorage试剂(A): 果胶标准(1mg/ml) 1ml 4℃避光试剂(B): SP Lysis buffer 2×500ml RT试剂(C): PP Lysis buffer 100ml RT使用说明书1份1、蒸馏水2、浓硫酸3、实验材料:桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织4、研钵或匀浆器5、试管6、离心机7、水浴锅8、比色杯9、分光光度计操作步骤(仅供参考):1、可溶性及原果胶提取:①取果实或其他植物组织,洗净,擦干,称取剪碎的新鲜样品,置于研钵或匀浆器。
检测试剂盒使用方法
检测试剂盒使用方法检测试剂盒是一种用于检测特定物质的工具,广泛应用于医学、科研和生产领域。
正确的使用方法对于获得准确的检测结果至关重要。
本文将介绍检测试剂盒的使用方法,帮助您正确、高效地进行检测。
首先,使用前请仔细阅读使用说明书。
每种检测试剂盒都有相应的使用说明书,其中包含了使用方法、注意事项、存储条件等重要信息。
在使用前,请务必仔细阅读,并按照说明书上的步骤进行操作。
其次,准备好实验所需的材料和试剂。
在进行检测之前,需要准备好所有需要使用的材料和试剂,包括但不限于样品、标准溶液、试剂盒、吸管、移液器等。
确保所有材料都处于干净、完整的状态,以避免对实验结果造成影响。
接着,按照使用说明书上的步骤进行操作。
在进行检测时,按照使用说明书上的步骤进行操作,严格控制每个步骤的时间和操作方法。
在添加试剂、混合溶液、离心等操作时,需要注意操作的轻缓和均匀,避免产生气泡或悬浮物影响结果。
然后,注意实验环境的清洁和消毒。
在进行检测时,需要确保实验环境的清洁和消毒,避免外界因素对实验结果的影响。
使用无菌吸管、移液器等实验工具,避免交叉污染,保证实验结果的准确性。
最后,记录实验数据并进行结果分析。
在进行检测时,需要及时记录实验数据,包括但不限于各个步骤的操作时间、试剂的使用量、样品的浓度等信息。
在实验结束后,对实验数据进行分析,得出准确的检测结果,并根据结果进行相应的处理和解释。
总之,正确的使用方法对于检测试剂盒的准确性和可靠性至关重要。
在进行检测时,需要严格按照使用说明书上的步骤进行操作,注意实验环境的清洁和消毒,及时记录实验数据并进行结果分析。
希望本文能够帮助您更好地掌握检测试剂盒的使用方法,为您的实验工作提供帮助。
果胶酯酶(pectinesterase ,PE )试剂盒说明书
货号: QS2628 规格:20样果胶酯酶(pectinesterase,PE)试剂盒说明书电位滴定法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:果胶酯酶属果胶酶系,催化水解果胶中甲氧基生成果胶酸,从而增加果胶在水中的溶解度,广泛存在于高等植物和可以降解细胞壁的细菌和真菌中,起内源调控植物细胞壁上及细胞之间果胶含量的作用,在食品工业中具有及其重要的作用和开发前景。
测定原理:果胶酯酶催化水解果胶分子释放H+,是反应体系的的pH下降,用碱液保持体系的pH始终保持在7,通过碱消耗的量反映果胶酯酶的活性。
需自备的仪器和用品:天平、研钵、常温离心机、自动电位滴定仪。
试剂的组成和配制:提取液:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前每瓶加双蒸水100mL充分溶解。
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加少量蒸馏水于50℃加热溶解,冷却后转入1L容量瓶,用蒸馏水定容。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加少量蒸馏水溶解,转入1L容量瓶,用蒸馏水定容。
样品处理:将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液体积(mL)为1: 10的比列(建议取约0.5g样品,加入5mL提取液)冰浴研磨,再于8000g、4℃离心15min,取上清液待测。
测定操作:1.试剂一于50℃保温10min,同时打开电位滴定仪,用蒸馏水清洗仪器。
2.用试剂二补液,补液结束后用取50mL试剂一,用试剂二滴定到pH为7。
3.加入待测样品5mL,将滴定延迟时间设为180s,用试剂二滴定至pH为7。
4.滴定结束后记录消耗的试剂二体积V(mL)和滴定至终点所需时间T(S)。
计算公式:酶活定义:每g组织每秒钟消耗NaOH的量定义为一个酶活单位。
PE活性(U/g 鲜重)= V/(T-180)×F/WV:滴定所消耗的NaOH的量,mL;T-180:反应时间,S;F:样品稀释倍数;W:样品质量,g注意事项:1.补液结束后检查输液管中是否有气泡,有气泡要补液清除气泡后再进行样品滴定。
果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒说明书
货号:MS2622 规格:100管/48样果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。
测定原理:果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。
10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
测定操作表:1、分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至235nm,蒸馏水调零。
2、操作表第1页,共3页酶活性计算公式:a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1. 组织中PL活性(1)按照蛋白浓度计算酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
原果胶含量计算公式
原果胶含量计算公式原果胶是一种重要的食品添加剂,具有增稠、凝胶、乳化、保湿等功能,被广泛应用于食品、医药、化妆品等领域。
原果胶含量是评价原果胶产品质量的重要指标之一,正确计算原果胶含量对于产品的质量控制和生产管理具有重要意义。
下面将介绍原果胶含量的计算公式及其应用。
原果胶含量计算公式如下:原果胶含量(%)=(样品中原果胶质量 / 样品质量)×100%。
其中,样品中原果胶质量是指在一定条件下,通过特定的方法测定样品中原果胶的质量,通常采用酶解法或硫酸法进行测定;样品质量是指待测样品的总质量。
在实际应用中,原果胶含量的计算需要注意以下几点:1. 样品准备,样品的准备对于原果胶含量的准确计算至关重要。
首先需要确保样品的代表性,即样品应该能够代表整个批次的产品。
其次,需要对样品进行充分的混合和均匀化处理,确保取样的准确性和可靠性。
2. 原果胶质量的测定,原果胶质量的测定是计算原果胶含量的关键步骤。
通常采用酶解法或硫酸法进行测定。
酶解法是将样品中的原果胶水解成果胶酶水解产物,再用酚酞法或酚酞-硫酸法测定产生的果胶酸。
硫酸法是将样品中的原果胶水解成果胶酸,再用酚酞-硫酸法测定产生的果胶酸。
在测定过程中需要注意控制实验条件,确保测定结果的准确性和可靠性。
3. 样品质量的准确测定,样品质量的准确测定是计算原果胶含量的另一个关键步骤。
在测定过程中需要注意避免样品的挥发和吸湿,确保样品质量的准确性和可靠性。
4. 数据处理,在计算原果胶含量时,需要将测定得到的原果胶质量和样品质量代入计算公式进行计算。
在计算过程中需要注意保留足够的有效数字,确保计算结果的准确性和可靠性。
通过以上步骤的操作,就可以得到准确的原果胶含量。
在实际应用中,原果胶含量的准确计算对于产品的质量控制和生产管理具有重要意义。
合理控制原果胶含量可以保证产品的质量稳定,提高产品的市场竞争力。
因此,加强对原果胶含量计算方法的研究和应用具有重要意义。
果胶含量的测定
果胶含量的测定配制1mg/ml 半乳糖醛酸标准液,之后分别吸取0,2,4,6,8,10mL ,分别移入100mL 容量瓶中用蒸馏水定容;然后于8支20mL 刻度试管中,分别加入浓度为0,20,40,60,80,100ug/mL 的半乳糖醛酸标准液1mL ;然后小心地沿试管壁加入浓硫酸6mL ,混匀,在沸水浴中加热20min ,冷却至室温后;各加入0.5mL 0.15%咔唑乙醇溶液摇匀。
在暗处放置2小时,在530nm 波长处测定消光值,绘制标准曲线。
样品测定:称取样品2.5g(不需研磨),置于50mL 三角瓶中,加入40mL 95%乙醇,在沸水浴上加热30min ,除去糖分及其它物质。
用滤纸过滤,弃去滤液,沉淀放入原三角瓶中,加水30mL ,在水浴上50℃保温30min ,以溶解可溶性果胶。
过滤,用少量水洗涤滤纸和沉淀。
滤液移入100mL 容量瓶中加水定容。
此为可溶性果胶液。
沉淀放入原三角瓶中,加40mL 0.5mol/L 浓硫酸,在沸水浴上加热1小时,以水解不可溶性果胶,冷却后移入100mL 容量瓶中,加0.5mol/l 硫酸定容,此为不可溶性果胶测定液。
吸取可溶性果胶液和不可溶性果胶液各0.1mL ,加入0.9mL H 2O 到20mL 的刻度试管中。
接着按标准曲线的操作步骤进行测定,然后小心地沿试管壁加入浓硫酸6mL ,混匀,在沸水浴中加热20min ,冷却至室温后,各加入0.5mL 0.15%咔唑乙醇溶液摇匀。
在暗处放置2小时,在530nm 波长处测定消光值,绘制标准曲线。
并从标准曲线上查出相应的含量,按进行计算。
重复三次测定。
果胶=不可溶性果胶+可溶性果胶;果胶含量(mg/g)=VcW V C *10*t*3C ——从标准曲线上查得的半乳糖醛酸含量(ug/mL )Vt ——样品的最终体积(mL)——可溶性果胶为100mL ,原果胶为100mL Vc ——测定时所用的体积(mL) W ——样品重量(g )0.15%咔唑:0.15g 溶于100ml1mg/ml 半乳糖醛酸:0.1g 溶于100ml 0.5mol/L 硫酸:28ml 定容到1000ml。
果胶含量的测定
果胶含量的测定配制1mg/ml 半乳糖醛酸标准液,之后分别吸取0,2,4,6,8,10mL ,分别移入100mL 容量瓶中用蒸馏水定容;然后于8支20mL 刻度试管中,分别加入浓度为0,20,40,60,80,100ug/mL 的半乳糖醛酸标准液1mL ;然后小心地沿试管壁加入浓硫酸6mL ,混匀,在沸水浴中加热20min ,冷却至室温后;各加入0.5mL 0.15%咔唑乙醇溶液摇匀。
在暗处放置2小时,在530nm 波长处测定消光值,绘制标准曲线。
样品测定:称取样品2.5g(不需研磨),置于50mL 三角瓶中,加入40mL 95%乙醇,在沸水浴上加热30min ,除去糖分及其它物质。
用滤纸过滤,弃去滤液,沉淀放入原三角瓶中,加水30mL ,在水浴上50℃保温30min ,以溶解可溶性果胶。
过滤,用少量水洗涤滤纸和沉淀。
滤液移入100mL 容量瓶中加水定容。
此为可溶性果胶液。
沉淀放入原三角瓶中,加40mL 0.5mol/L 浓硫酸,在沸水浴上加热1小时,以水解不可溶性果胶,冷却后移入100mL 容量瓶中,加0.5mol/l 硫酸定容,此为不可溶性果胶测定液。
吸取可溶性果胶液和不可溶性果胶液各0.1mL ,加入0.9mL H 2O 到20mL 的刻度试管中。
接着按标准曲线的操作步骤进行测定,然后小心地沿试管壁加入浓硫酸6mL ,混匀,在沸水浴中加热20min ,冷却至室温后,各加入0.5mL 0.15%咔唑乙醇溶液摇匀。
在暗处放置2小时,在530nm 波长处测定消光值,绘制标准曲线。
并从标准曲线上查出相应的含量,按进行计算。
重复三次测定。
果胶=不可溶性果胶+可溶性果胶;果胶含量(mg/g)=VcW V C *10*t*3C ——从标准曲线上查得的半乳糖醛酸含量(ug/mL )Vt ——样品的最终体积(mL)——可溶性果胶为100mL ,原果胶为100mL Vc ——测定时所用的体积(mL) W ——样品重量(g )0.15%咔唑:0.15g 溶于100ml1mg/ml 半乳糖醛酸:0.1g 溶于100ml 0.5mol/L 硫酸:28ml 定容到1000ml。
果胶检查法操作规程
编制目的:规范果胶检验操作规程。
编制依据:适用范围:适用于果胶的检验。
职责:化验员负责本规程实施,质量保证部部长、化验室主任负责监督检查。
规程:1.原理先用70%乙醇处理样品,使果胶沉淀,再依次用乙醇、乙醚洗涤沉淀,以除去可溶性糖类、脂肪、色素等物质,残渣分别用酸或用税提取总果胶或水溶性果胶。
果胶经皂化生成果胶酸钠,再经乙酸酸化使之生成果胶酸,加入钙盐则生成果胶钙沉淀,烘干后称重。
2.检查2.1仪器及用具:G2垂融坩埚、布氏漏斗、抽滤瓶、真空泵。
2.2试剂及试药:乙醇、乙醚、0.05mol/L盐酸、0.1mol/L氢氧化钠溶液、1mol/L 乙酸溶液、1mol/L氯化钙溶液。
2.3试液的配制:2.3.1 1mol/L乙酸溶液:取58.3ml冰乙酸,用水定容到100ml。
2.3.2 1mol/L氯化钙溶液:称取110.99g无水氯化钙,用水定容到500ml。
2.4样品处理:2.4.1新鲜样品:称取试样30~50g,用小刀切成薄片,置于预先放有99%乙醇的500ml 锥形瓶中,装上回流冷凝器,在水浴上沸腾回流15min后,冷却,用布氏漏斗过滤,残渣于研钵中一边慢慢磨碎,一边滴加70%的热乙醇,冷却后再过滤,反复操作至滤液不呈糖的反应(用苯酚-硫酸法检验)为止。
残渣用99%乙醇洗涤脱水,再用乙醚洗涤以除去脂类和色素,风干乙醚。
2.4.2干燥样品:研细,使之通过60目筛,称取5~10g样品于烧杯中,加入热的70%乙醇充分搅拌以提取糖类,过滤。
反复操作至滤液不呈糖的反应。
残渣用99%乙醇洗涤,再用乙醚洗涤,风干乙醚。
2.5提取果胶:2.5.1水溶性果胶提取:用150ml水将上述漏斗中的残渣移入250ml烧杯中,加热至沸并保持沸腾1h,随时补足蒸发的水分,冷却后移入250ml容量瓶中,加水定容,摇匀,过滤,弃去初滤液,收集滤液即得水溶性果胶提取液。
2.5.2总果胶的提取:用150ml加热至沸的0.05mol/L盐酸把漏斗中的残渣移入250ml 锥形瓶中,装上冷凝器,于沸水浴中加热回流1h,冷却后移入250ml容量瓶中,加甲基红指示剂2滴,加0.5mol/L氢氧化钠溶液中和后,用水定容,摇匀,过滤,收集滤液即得总果胶提取液。
原果胶含量检测试剂盒说明书__可见分光光度法UPLC-MS-4124
可见分光光度法原果胶含量检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4124规格:50T/24S产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致,有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液一液体100mL×1瓶(自备)4℃保存提取液二液体30mL×1瓶4℃保存提取液三液体50mL×1瓶4℃保存试剂一液体60mL×1瓶(自备)4℃保存试剂二液体3mL×1瓶4℃保存试剂三液体5mL×1瓶4℃保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制:1、提取液一:80%乙醇,自备。
即将80mL无水乙醇和20mL蒸馏水混合。
2、试剂一:浓硫酸60mL,自备。
3、标准品:10mg半乳糖醛酸,临用前加入0.943mL提取液三,配成50μmol/mL的标准液。
产品说明:果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,不溶性果胶为原果胶。
原果胶是不溶于水的物质,但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下,加水分解转变成水溶性果胶,在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
原果胶在碱性条件下水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530nm处有特征吸收峰。
注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙酮、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。
操作步骤:一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)取约0.1g样本,加入1mL提取液一,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g25℃离心10min,弃上清。
沉淀加入1.5mL提取液一和丙酮交替各洗2遍(涡旋振荡2min左右,4000g25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL提取液二(去除淀粉)浸泡15小时,4000g25℃离心10min,弃上清,加入1mL 提取液三,充分匀浆。
果胶测定的实验报告
一、实验目的1. 了解果胶的基本性质和提取方法。
2. 掌握测定果胶含量的实验操作步骤。
3. 通过实验验证果胶提取和测定的准确性。
二、实验原理果胶是一种天然高分子多糖,广泛存在于水果和蔬菜中,具有较强的凝胶性能。
果胶的提取通常采用酸浸提法,通过调节溶液的pH值和温度,使果胶从原料中分离出来。
果胶含量的测定通常采用重量法,即测定提取液中果胶的重量占原料重量的百分比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:苹果、柠檬、橘子等水果,盐酸、无水乙醇、蒸馏水等。
2. 实验仪器:天平、烧杯、漏斗、抽滤瓶、蒸馏装置、锥形瓶、量筒、pH计等。
四、实验步骤1. 果胶提取(1)将水果洗净,去皮,去核,切成小块。
(2)将水果块放入烧杯中,加入适量的盐酸溶液,调节pH值为2.0。
(3)将烧杯置于恒温水浴锅中,加热至60℃,保温1小时。
(4)将提取液过滤,收集滤液。
2. 果胶含量测定(1)将提取液置于锥形瓶中,加入适量的无水乙醇,搅拌均匀。
(2)将锥形瓶置于冰箱中,冷却至室温。
(3)取出锥形瓶,将上层清液倒出,剩余沉淀物用蒸馏水洗涤两次。
(4)将洗涤后的沉淀物转移至烧杯中,加入适量的蒸馏水,加热溶解。
(5)将溶液过滤,收集滤液。
(6)将滤液转移至烧杯中,加入适量的氯化钡溶液,搅拌均匀。
(7)将烧杯置于恒温水浴锅中,加热至80℃,保温30分钟。
(8)将烧杯取出,加入适量的稀硝酸,使溶液呈酸性。
(9)将溶液过滤,收集滤液。
(10)将滤液转移至烧杯中,加入适量的过氧化氢溶液,加热至沸。
(11)将溶液冷却至室温,用蒸馏水定容至一定体积。
(12)用分光光度计测定溶液在波长520nm处的吸光度。
(13)根据标准曲线计算果胶含量。
五、实验结果与分析1. 实验结果(1)苹果提取液吸光度为0.823,果胶含量为2.56%。
(2)柠檬提取液吸光度为0.798,果胶含量为2.42%。
(3)橘子提取液吸光度为0.812,果胶含量为2.34%。
2. 实验分析本实验采用酸浸提法提取果胶,结果表明,苹果、柠檬、橘子中的果胶含量分别为2.56%、2.42%、2.34%。
果胶含量检测试剂盒说明书 微量法
果胶含量检测试剂盒说明书微量法注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC1405规格:100T/48S产品内容:试剂一:标准液1mL×1支,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
产品说明果胶是一种植物胶体,分布于果蔬类植物中,存在于植物的细胞壁和细胞内层。
果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,主要成分是半乳糖醛酸,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。
采用咔唑比色法测定果胶含量。
果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂缩合生成紫红色化合物,在530nm处有最大吸收峰。
测定样品中半乳糖醛酸的含量,即可确定果胶的含量。
需自备的仪器和用品研钵、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤:一、样品处理将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和蒸馏水体积(mL)为1:5-10的比列(建议取约0.1g样品,加入1mL蒸馏水),充分匀浆,8000g、4℃离心10min,取上清液待测。
二、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至530nm处,蒸馏水调零,试剂一和试剂二37℃预热10min以上。
三、测定操作表(在EP管中加入下列试剂)试剂名称(μL)空白管标准管对照管测定管待测样本5050试剂一50蒸馏水5050试剂二505050混匀浓硫酸400400400400充分混匀,95℃水浴5min后,冷却至室温,取200μL置微量石英比色皿或96孔板中,测定530nm 处吸光值,空白管、标准管、对照管和测定管吸光值分别记为A1、A2、A3和A4。
若A大于1,需将待测样本用蒸馏水稀释(可稀释10倍或20倍)注意:空白管和标准管只要做一管,每个测定管需设一个对照管。
四、计算公式果胶含量(mg/mg prot)=(C标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷Cpr×稀释倍数果胶含量(mg/g鲜重)=(C标准×V1)×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)×稀释倍数=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀释倍数C标准:标准管浓度,0.05mg/mL;V1:加入样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
果胶实验报告范文
实验名称:果胶提取与含量测定实验日期:2023年3月15日实验地点:食品科学与工程学院实验室实验目的:1. 掌握果胶提取的基本原理和方法;2. 学习并运用分光光度法测定果胶含量;3. 了解果胶在食品工业中的应用。
实验原理:果胶是一种天然高分子多糖,广泛存在于水果、蔬菜等植物中。
果胶具有增稠、稳定、乳化等特性,在食品、医药、化妆品等领域具有广泛的应用。
本实验采用酶法提取果胶,利用分光光度法测定果胶含量。
实验材料与仪器:1. 材料与试剂:苹果皮、乙醇、盐酸、无水乙醇、苯酚、NaOH、硫酸、95%乙醇、FeCl3、无水乙醇、氯化钠等;2. 仪器:分光光度计、电子天平、烧杯、移液管、滴定管、锥形瓶、研钵、玻璃棒、水浴锅等。
实验步骤:1. 果胶提取(1)称取一定量的苹果皮,用研钵研磨成粉末;(2)将研磨好的苹果皮粉末加入适量乙醇,搅拌均匀,静置过夜;(3)取上层清液,加入适量盐酸,调节pH值为2.5;(4)将混合液加热至80℃,保持30分钟,冷却后用布氏漏斗过滤;(5)将滤液加入适量无水乙醇,静置过夜,滤取沉淀;(6)将沉淀用95%乙醇洗涤三次,干燥后称重,得到果胶粗提物。
2. 果胶含量测定(1)准确称取一定量的果胶粗提物,用蒸馏水溶解;(2)用移液管准确移取一定体积的溶液于锥形瓶中;(3)加入苯酚溶液,振荡均匀;(4)加入NaOH溶液,振荡均匀;(5)加入FeCl3溶液,振荡均匀;(6)加入95%乙醇,振荡均匀;(7)在分光光度计上测定溶液的吸光度;(8)根据标准曲线计算果胶含量。
实验结果与分析:1. 果胶提取结果实验得到果胶粗提物的得率为5.2%。
2. 果胶含量测定结果通过分光光度法测定,得到果胶含量为2.4%。
3. 实验结果分析(1)实验中采用酶法提取果胶,操作简单,提取效果较好;(2)分光光度法测定果胶含量准确可靠,实验结果符合预期;(3)果胶在食品工业中的应用前景广阔,具有很高的研究价值。
实验结论:1. 本实验成功提取了苹果皮中的果胶,提取率为5.2%;2. 通过分光光度法测定,苹果皮中的果胶含量为2.4%;3. 果胶在食品工业中具有广泛的应用前景,具有很高的研究价值。
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货号:MS3113 规格:100管/48样
原果胶含量试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一,分为水溶性果胶和不溶性果胶,即原果胶。
因其具有良好的乳化、增稠和凝胶作用,在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
测定原理:
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶,并进一步转化为半乳糖醛酸,产物在强酸中与咔唑缩合生成紫红色化合物,在530 nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、常温离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、浓硫酸和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液一:液体100mL×2瓶,4℃保存。
提取液二:液体100mL×1瓶,4℃保存。
标准品:液体1mL×1支,4℃保存。
试剂一:浓硫酸,自备。
试剂二:液体2mL×1支,4℃保存。
试剂三:液体3mL×1瓶,4℃避光保存。
样品处理:
将组织样品捣碎,按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为1: 20的比列(建议取约0.05g样品,加入1mL提取液一),置于90℃恒温水浴锅中浸提30min,取出冷却后于5000g、 25℃离心10min,去掉上清,沉淀中再加入1mL提取液一重复操作一次,离心后去上清,沉淀中加入1mL提取液二,置于90℃恒温水浴锅中水解1h,取出冷却后于8000g、25℃离心15min,取上清液待测。
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注意:空白管和标准管只需测定一次。
计算公式:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W×V样÷V样总) = 0.25×△A2÷
△A1÷W
C标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V标:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;W:样本鲜重,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
原果胶含量(mg /g 鲜重)= (C标准×V标) ×△A2÷△A1÷(W×V样÷V样总) =0.25×△A2÷
△A1÷W
C标准:标准品浓度,0.25mg/mL;V标:反应体系中加入标准品体积,0.02mL;V样:反应体系中加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL; W:样本鲜重,g。
注意事项:
1.浓硫酸具有强腐蚀性,操作时需特别注意,90℃加热取出后冷却再打开盖子,以防液体飞
溅烧伤。
2.若吸光值超过1,可将样本提取液进行适当稀释再进行测定,并在计算公式中乘以稀释倍
数。
3.最低检出限为10μg/g。
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