红米原花青素的测定方法

四种原花青素含量测定方法比较

四种原花青素含量测定方法比较一、本文概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，因其强大的抗氧化和生物活性，近年来在营养学、食品科学、医药学等领域受到了广泛关注。

其中，四种主要的原花青素——儿茶素（Catechin）、表儿茶素（Epicatechin）、没食子儿茶素（Gallocatechin）和表没食子儿茶素（Epigallocatechin）的含量测定对于评估食品营养价值、研究药物作用机制以及监控产品质量具有重要意义。

本文旨在比较和分析目前常用的四种原花青素含量测定方法，包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法（UV-Vis）、荧光光谱法（Fluorometry）和质谱法（MS），以期为相关领域的研究和实践提供有益的参考。

通过比较这些方法的准确性、灵敏度、操作简便性以及成本效益等方面的优劣，我们期望能为科研人员和企业选择最适合的原花青素含量测定方法提供指导。

二、方法概述原花青素（Procyanidins）是一类广泛存在于植物中的多酚类化合物，具有强效的抗氧化性能，对多种疾病具有预防和治疗作用。

由于其生物活性的重要性，对原花青素含量的准确测定显得尤为重要。

目前，常用的原花青素含量测定方法主要包括高效液相色谱法（HPLC）、紫外可见分光光度法、薄层色谱法（TLC）和毛细管电泳法（CE）。

这些方法各有优缺点，适用于不同的样品类型和实验条件。

高效液相色谱法（HPLC）具有高分辨率、高灵敏度、高重现性等优点，可以同时分离和测定多种原花青素。

但是，该方法需要昂贵的仪器设备和专业的操作人员，且样品处理过程繁琐，分析时间较长。

紫外可见分光光度法是一种简便、快速的测定方法，适用于大量样品的初步筛选。

然而，该方法只能测定总原花青素的含量，无法区分不同种类的原花青素，且易受样品中其他色素的干扰。

薄层色谱法（TLC）是一种基于原花青素在薄层板上的分离和显色进行测定的方法。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素（Anthocyanins）是一类广泛存在于植物中的天然色素，具有丰富的抗氧化和抗炎特性。

以下是关于花青素检测的50条内容和方法：1. 花青素的检测可以通过分光光度法进行，该方法通过测量样品吸收特定波长的光来确定花青素的含量。

2. 除了分光光度法，高效液相色谱法（HPLC）也是一种常用的花青素检测方法，可以准确测量不同类型的花青素。

3. 在花青素检测中，常用的溶剂包括甲醇、乙腈和水，这些溶剂可以帮助提取样品中的花青素。

4. 还可以使用质谱法（MS）结合色谱法进行花青素的鉴定和定量分析，能够提高检测的精准度和准确性。

5. 花青素的含量可以通过比色法进行测定，该方法通过添加试剂产生有色产物来测量花青素的浓度。

6. 采用高性能液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）可以对花青素进行定性和定量分析，具有高灵敏度和选择性。

7. 使用紫外-可见分光光度法（UV-Vis）可测定花青素的吸光度，从而推算花青素的浓度。

8. 考虑到植物样品中可能存在其他干扰物质，需要对样品进行预处理，如蛋白质去除和净化，以提高花青素的检测灵敏度和准确性。

9. 对于不同环境下的花青素含量变化调查，可以通过原子吸收光谱分析（AAS）确定植物中金属离子对花青素生成的影响。

10. 考虑到花青素的稳定性，检测前样品处理和存储条件至关重要，如低温保存、光照避免、氧气隔离等。

11. 比较两个或多个样品中花青素的含量，可以通过内标法（Internal standard method）进行定量，以减小实验误差。

12. 回收率试验可以通过添加已知浓度的花青素作为标准品，验证提取方法的效果和准确性。

13. 花青素的结构分析可以使用质谱联用色谱技术（LC-MS）进行，以确定不同花青素的分子结构和质量。

14. 对于不同类型的花青素，还可以使用凝胶层析法（Gel Filtration Chromatography）进行分离和检测。

15. 非离子表面活性剂（Non-ionic surfactants）可以在样品制备中用来改善花青素的提取率和稳定性。

原花色素的提取及测定

原花色素的提取及测定一、实验原理原花色素，也称原花青素，是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物，它既存在于多种水果的皮，核和果肉中，如葡萄，苹果，山楂等。

也存在于如黒荆树，马尾松，思茅松，落叶松等的皮和叶中。

原花色素属于生物类黄酮,它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。

依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。

从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。

其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（OPC）。

原花色素具有很强的抗氧化作用，能清除人体内过剩的自由基，提高人体的免疫力，可作为新型的抗氧化剂用于医药、保健、食品等领域。

利用低聚原花色素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花色素，再用大孔吸附树脂吸附、洗脱得到原花色素。

D101树脂是一种球状、非极性交联聚合物吸附剂，具有相当大的比表面和适当的孔径，对皂甙类、黄酮类、生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取类似性质的有机物质。

原花色素（I）的4~8连接键很不稳定，易在酸作用下打开。

反应过程（以二聚原花色素为例）是：在质子进攻下单元C8（D）生成碳正离子（II），4~8键裂开，下部单元形成（-）-表儿茶素（III），上部单元成为碳正离子（IV），失去一个质子成为黄-3-烯-醇（V），在有氧条件下失去C2上的氢，被氧化成花色素（VI），反应还生成相应的醚（VII）。

若采用正丁醇溶剂可防止醚的形成。

（如下图所示）在一定浓度范围内，原花色素的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的原花色素含量。

但盐酸-正丁醇法受原花色素的结构影响较大，对于低聚度原花色素及儿茶素等单体反应不灵敏。

二、实验器材新鲜山楂，烧杯，玻璃层析柱，大孔吸附树脂D-101，具塞试管*9，移液枪，紫外分光光度计，水浴锅；三、实验试剂60%乙醇，95%乙醇，原花色素标准品(1.0mg/mL)，HCl-正丁醇，2%硫酸铁铵，2.0mol/L HCl；四、实验步骤Ⅰ原花色素的制备1、称取新鲜山楂10.0g，剪成块状，置入锥形瓶中，加入40.0mL蒸馏水，沸水浴30min，间期混匀。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素检测是一项重要的化学分析技术，用于测定植物和食品中的花青素含量。

花青素是一类常见的天然色素，具有抗氧化和抗炎作用，因此对其含量进行快速和准确的测定具有重要的科学和应用意义。

以下为50条关于花青素检测内容和方法的详细描述：1. 花青素是一类具有紫、蓝、红等颜色的天然色素，主要存在于植物的花朵、果实和叶子中。

2. 花青素的主要类型包括花色素苷、原花青素和异花青素等，它们在植物中起着色素和抗氧化作用。

3. 花青素检测的方法包括分光光度法、高效液相色谱法、质谱法等，常用的是分光光度法和高效液相色谱法。

4. 分光光度法是利用物质吸收特定波长的光线进行测定，通过比色法或比浊法来测定花青素的含量。

5. 高效液相色谱法是利用高效液相色谱仪进行测定，通过分离和检测样品中的花青素成分来计算含量。

6. 质谱法是利用质谱仪进行测定，通过记录花青素分子的质荷比来确定其含量。

7. 花青素检测常用的标准曲线方法是通过不同浓度的标准品制备标准曲线，再根据待测样品吸光度的测定值来计算含量。

8. 花青素的提取方法包括有机溶剂提取、酸碱水提取、超声波提取等，不同样品可选择合适的提取方法。

9. 有机溶剂提取是利用乙醇、丙酮等有机溶剂将花青素从植物组织中提取出来，然后通过浓缩和干燥得到提取物。

10. 酸碱水提取是利用酸性或碱性水溶液将花青素从植物组织中提取出来，可以有效保留花青素的天然结构。

11. 超声波提取是利用超声波功率促使样品中的花青素溶解在有机溶剂或水中，提高了提取效率。

12. 花青素的测定结果可根据测定方法的不同而有所差异，因此需要在同一实验条件下进行多次重复测定来确保结果的准确性。

13. 在花青素检测过程中，可能会受到样品中其他化合物的干扰，因此需要进行干扰检查和修正。

14. 花青素检测结果可以用于评价植物的品质、食品的营养价值和天然色素的应用价值。

15. 花青素检测在食品工业中具有重要的应用，如在果汁、酒类、饮料等产品中进行质量控制。

红米原花青素的测定方法

红米原花青素的测定方法红米原花青素的提取及测定方法1、标准曲线的配置标准溶液的配制，用甲醇配制原花青素母液2mg/mL标准液配制：母液：2ml 3ml 4ml 5ml 6ml 7ml 8ml甲醇：8ml 7ml 6ml 5ml 4ml 3ml 2ml2、试剂试剂a：10g/L香草醛甲醇溶液，10g香草醛溶于1L甲醇溶液试剂b：245ml浓硫酸（18.4mol/L）溶于500ml甲醇溶液，并用甲醇定容直1L。

3、提取方法将红米磨粉后称0.5g，放入15ml试管中，加入8ml的80%甲醇溶液，至于黑暗的地方，每隔2h左右振荡一次，一直浸泡提取8小时。

4、测定方法吸取1ml提取液或标准液，加入10ml离心管中，然后依次加入2.5ml试剂a和2.5ml试剂b，混匀后35℃下水浴20min，水浴结束后8000rm离心10min，用移液器取上清液测定其在500nm下的吸光值。

5、参考文献：1、Sun B, Ricardo-da-Silva JM, Spranger I Critical Factors of Vanillin Assay for Catechins and Proanthocyanidins. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 1998, 46: 4267-42742、Gunaratne A, Wu K, Li D, et al. Antioxidant activity and nutritional quality of traditional red-grained rice varieties containing proanthocyanidins. Food Chemistry, 2013, 138: 1153-1161。

原花青素的含量测定方法

原花青素的含量测定方法原花青素含量思路：主要采用紫外分光光度法测定火棘果提取液中原花青素含量。

通过在特定的波长或某一范围的波长下，测定待测物品的吸光度，近而对原花青素进行定量分析。

原花青素(procyanidins，简称PC)是植物中广泛存在的一类属于双黄酮衍生物的天然多化合物，原花青素具有极强的抗氧化特性，一般存在于植物的果实、种子、花和皮中，在葡萄、山楂、花生、银杏、白桦树、松树等植物中的含量都很丰富。

在原花青素各种不同聚合体中以二聚体的抗氧化能力最强．原花青素具有多种生物活性，能防治多种疾病，具有高效、低毒、高生物利用率等特点，在植物中的主要作用是保护植物中易被氧化的成分，在人体内的抗氧化和清除自由基的能力是V-E50 倍，并且还具有保护心血管、预防高血压、抗肿瘤、抗辐射、抗突变及美容等作用．1.实验原理朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。

当入射光波长一定时，溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。

比耳的结论是，当用适当波长的单色光照射一固定液层厚度的均匀溶液时，A与C成正比，其数学表达式为:(此即称为比耳定律，k称为比例系数）当C采用摩尔浓度mol/L时，吸收定律表达为:(ε称摩尔吸光系数，单位为)2.材料和仪器主要试剂：火棘果提取液，原花青素标样，盐酸正丁醇溶液（量取95mL 正丁醇，加入5mL 浓盐酸，混匀）、NH4Fe(SO4)2、95%乙醇。

主要仪器：UV2100 型紫外分光光度计、恒温水浴锅。

3.实验步骤a.标准曲线的制备:准确称取原花青素标准样品0.0504g，用95% 乙醇溶解并定容于100mL 容量瓶中，所得浓度为5.04mg/mL 作标样。

吸取标样溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3mL 分别于25mL 具塞试管中，加95%乙醇定容为3mL, 然后分别加入0.2mL 2％NH4Fe(SO4)2 溶液和6mL盐酸正丁醇溶液，盖塞，摇匀，于95℃的水浴中加热反应40min 取出，于冷水中迅速冷却，溶液显红色，以0mL 溶液作为空白对照，于546nm 处测定其吸光度。

测定原花青素含量(硫酸香草醛法)1

香草醛法测定原花青素的含量说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。

通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。

以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。

一、器材/试剂紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。

二、实验步骤1.配制试剂( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液；( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％；( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。

（4）样品溶液：原花青素溶液以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。

浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。

2、扫描最大吸收波长取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。

以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。

确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。

3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度）浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095A（儿茶素）0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175A（儿茶素）0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245A（儿茶素）测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。

花青素检测内容和方法

花青素检测内容和方法花青素是一类具有强烈吸收红外光的化合物，广泛存在于植物中。

它们赋予了许多植物花朵、水果和蔬菜明亮的颜色。

花青素不仅可以提供视觉上的吸引力，还具有抗氧化和抗炎症等生物活性。

因此，检测花青素的含量和质量对食品、药物和其他相关领域的研究非常重要。

花青素含量的检测方法有许多种，下面将介绍一些常用的方法：1. 分光光度法：分光光度法是一种常见且简便的检测花青素含量的方法。

它基于花青素对特定波长的光有很强的吸收能力。

通过将样品溶解在适合的溶剂中，使用紫外-可见光谱仪测量吸光度，然后根据不同波长下的吸光度值来计算花青素的含量。

这种方法可以测量花青素的总含量。

2. 高效液相色谱法：高效液相色谱法（HPLC）是一种准确测定花青素含量的常用方法。

它基于为花青素分离和检测提供了高分辨能力的高效液相色谱仪。

首先，样品中的花青素会被分离出来，然后通过波长选择性检测器进行定量分析。

这种方法可以同时测量多种不同类型的花青素，并且具有高灵敏度和高选择性。

3. 液相色谱质谱联用法：液相色谱质谱联用法（LC-MS）是一种更为精确的花青素检测方法。

它将高效液相色谱与质谱技术结合起来，可以通过质谱仪的高分辨率和灵敏度来确定花青素的结构和含量。

这种方法对于复杂的样品和低浓度的花青素分析非常有用。

4. 薄层色谱法：薄层色谱法是一种简单快速的花青素分析方法。

它基于花青素在薄层色谱板上迁移的性质，并通过与特定试剂反应形成具有色素的斑点来检测花青素。

该方法不需要复杂的仪器设备，适用于初步评估样品的花青素含量。

5. 酶联免疫吸附测定法：酶联免疫吸附测定法（ELISA）是一种基于抗体-抗原反应的花青素检测方法。

通过使用特异性的抗体来检测花青素，可以实现高灵敏度和高选择性的分析。

这种方法对于复杂样品和低浓度花青素的检测非常有效。

总之，准确测定花青素含量对于食品、药物和化妆品等行业至关重要。

上述介绍的不同方法可以根据实际需要选择合适的进行花青素的检测。

红米花青素检测报告-2

“红米提取物”花青素类化合物测试报告2012年8月2号接到云南瑞宝生物科技有限公司邮寄来的红米提取物S-HMT120731、紫甘薯提取物S-ZGT120730A、甘蓝提取物S-GT120730A、萝卜提取物S-LT120730A，其中除红米样品外的其他样品的测试工作仍未完成。

红米样品中已完成花青素的检测任务，具体工作内容及结果如下：定性：采用制备色谱对样品中花青素进行分离纯化，收集纯化后的样品进行紫外光谱扫描（UV）、飞行时间多级质谱（MS n）检测，并将结果进行了数据解析，推测化合物结构。

定量：采用HPLC技术，外标法定量“红米样品”中三种花青素。

1.研究方法1.1 定性研究1.1.1 仪器及试剂WATERS 2695 高效液相色谱仪，配二极管矩阵检测器。

ESI-IT-TOF 质谱仪（Shimadzu公司，日本）。

岛津UV2550 紫外分光光度计。

甲醇，乙酸等。

1.1.2 样品溶液制备称取红米样品400mg，用甲醇定容至10mL，配成质量浓度为40mg/mL的储备液，置于4℃冰箱中备用。

1.1.3实验条件1.1.3.1制备色谱条件制备色谱系统：色谱柱，C18，250mm×8 mm，粒径：20-40μm；流动相：V (甲醇) /V (水)/V (乙酸) = 40：60：0.5；检测波长：520 nm；进样体积：2.5 mL；进样量：100 mg；柱温：室温。

样品溶液分5次进样，每次2.5mL，收集保留时间为8.2，11.5和12.8min的三个流份。

合并5次收集的流份，分别冷冻干燥，得三种花青素浓缩液，该浓缩液用于以下的质谱检测及紫外光谱扫描。

1.1.3.2 质谱条件电喷雾电离：正离子模式喷雾电压4.5kV。

加热模块（BH）温度200℃；曲形脱溶剂管（CDL）温度200℃。

碰撞诱导解离（CID）参数: （1）碰撞能量：MS1～MS3，50%。

（2）碰撞气比例：MS1～MS3, 50%。

紫外可见光分光光度法原花青素

紫外可见光分光光度法原花青素
一、引言
紫外可见光分光光度法是一种常用的分析方法，可以用于测定物质的吸收光谱，其中原花青素是一种常见的天然色素，具有广泛的应用价值。

本文将介绍紫外可见光分光光度法在原花青素分析中的应用。

二、原花青素的特性
原花青素是一种天然色素，广泛存在于植物、水果和蔬菜中。

它具有紫色或蓝色的颜色，是一种强烈的天然色素。

原花青素的分子结构中含有苯环和吡咯环，这些环结构使得原花青素具有吸收紫外和可见光的能力。

三、紫外可见光分光光度法的原理
紫外可见光分光光度法是一种常用的分析方法，它基于物质对紫外和可见光的吸收特性进行分析。

在分析原花青素时，可以使用紫外可见光分光光度法来测定其吸收光谱。

原花青素在紫外和可见光区域都有吸收峰，其中最大吸收峰位于紫外区域，波长为280nm左右。

四、紫外可见光分光光度法在原花青素分析中的应用
紫外可见光分光光度法是一种常用的分析方法，可以用于测定原花青
素的含量。

在分析原花青素时，可以使用紫外可见光分光光度法来测定其吸收光谱。

通过测定原花青素在280nm处的吸光度，可以计算出其浓度。

此外，还可以通过比较不同样品的吸光度值来确定原花青素的含量。

五、结论
紫外可见光分光光度法是一种常用的分析方法，可以用于测定原花青素的含量。

通过测定原花青素在280nm处的吸光度，可以计算出其浓度。

此外，还可以通过比较不同样品的吸光度值来确定原花青素的含量。

紫外可见光分光光度法在原花青素分析中具有广泛的应用价值，可以为相关领域的研究提供有力的支持。

花青素含量的测定

花青素是一类具有重要生物活性的天然色素，广泛存在于植物中，并对人体健康有益。

测定花青素含量的方法有多种，以下是其中一种常用的方法：
试剂和仪器：甲醇、乙酸、五氯酚酞溶液、高压液相色谱仪（HPLC）等。

步骤：
1.将待检测的样品（如花瓣、果实等）取适量，冷藏保存。

2.取少量样品，用甲醇将其加以浸泡，使其充分均匀地溶解，形成混合液。

该混合液可放于水浴中加热加速搅拌。

3.通过滤纸将混合液过滤，使其中的杂质分离并去除。

4.将滤过的液体放入离心管并进行离心分离，将上清液取出。

5.将上述上清液加入乙酸及五氯酚酞溶液中，混匀后置于常温下反应15-20
分钟，即可形成浅红色溶液。

6.将步骤5中得到的溶液进行过滤，然后放入样品瓶中，即为待测样品溶
液。

7.通过高压液相色谱仪（HPLC）对待测样品溶液中的花青素成分进行分析
和检测，得到花青素的含量。

注意事项：
1.在操作前应严格遵守操作规程，保持实验环境清洁卫生。

2.在每个步骤中加入足量的试剂以确保精准的测定结果。

3.操作时应小心谨慎，防止操作过程中出现意外。

4.为了得到较为准确的测试结果，最好采用与国家标准接近的检测方法，并
在实验条件允许的情况下重复测试。

测定原花青素含量(硫酸香草醛法)1

香草醛法测定原花青素的含量说明：原花青素的抗氧化性受到聚合物的影响，以乙酸为溶剂，香草只与原花青素中的末端的黄烷-3-醇发生缩合生成红色产物，由红色产物吸光度测定原花青素含量。

通过正交实验和单因素实验考查了硫酸香草醛法测定原花青素含量的合适条件，比色条件为硫酸浓度30%，香草醛浓度1%，反应T为30℃，反应时间为30分钟。

以儿茶素为标准品绘制标准曲线测定原花青素含量。

一、器材/试剂紫外分光光度计恒温水浴锅电子天平儿茶素标准品（浓度＞＝98%）；香草醛 ( 分析纯) ；硫酸 ( 分析纯) ；冰乙酸 ( 分析纯) ；实验用水为二级反渗透去离子水。

二、实验步骤1.配制试剂( 1 )配制儿茶素标准品溶液：称取一定量的儿茶素标准品，分别用去离子水定容至一定体积，配制成物质的量浓度为0.025~0.25 mm o l · mL 的儿茶素标准品溶液；( 2 )配制香草醛乙酸溶液：称取一定量的香草醛，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为1 ％；( 3 )配制硫酸乙酸溶液：量取一定体积的浓硫酸，分别用乙酸定容至一定体积，配制成浓度为3 0 ％的硫酸乙酸溶液。

（4）样品溶液：原花青素溶液以火棘果为原料，按液固比 6：1加入 4 0 ％乙醇溶液，4 5 ℃下浸提 1.5 h，问歇搅拌，连提3次，过滤，滤液旋蒸，回收溶剂。

浓缩液经过预处理好的AB一8树脂吸附，用去离子水洗涤、6 0％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，6 0％乙醇洗脱液即为样品溶液。

2、扫描最大吸收波长取0．5mL儿茶素标准品溶液，加入2．5mL30％的硫酸乙酸溶液，2.5mL 1％的香草醛乙酸溶液，混合均匀，30℃水浴中避光反应15min。

以无水乙酸做参比，在可见光区(400～800nm)进行光谱扫描。

确定最大吸收波长，以后在此波长下测定样品的含量。

3、绘制标准曲线（在最大波长吸收处测得吸光度）浓度0.025 0.035 0.045 0.055 0.065 0.075 0.085 0.095A（儿茶素）0.105 0.115 0.125 0.135 0.145 0.155 0.165 0.175A（儿茶素）0.185 0.195 0.205 0.215 0.225 0.235 0.245A（儿茶素）测原花青素样品的吸光度，通过以上标准曲线所得的标准曲线回归线方程计算得样品浓度。

原花青素检测方法注意细则

原花青素（20150518）1、原理原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。

原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子。

本方法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。

计算试样中原花青素含量。

2、试剂2.1 甲醇分析纯2.2 正丁醇分析纯2.3 盐酸分析纯2.4 硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2•12H2O溶液：用浓度2mmol/l盐酸配成2%（w/v）的溶液。

（1.67ml盐酸，加水至10ml）2.5 原花青素标准品葡萄籽提取物，纯度95%2.6 正丁醇盐酸混合液：正丁醇：盐酸=95：5（v：v）3、仪器3.1 分光光度计4、分析步骤4.1试样的制备4.1.1 片剂取20片试样，研磨成粉状。

4.1.2 胶囊挤出20粒胶囊内容物，研磨或搅拌均匀，如内容物含油，应将内容物尽可能挤出。

4.1.3 口服液摇匀后取样。

4.2 提取4.2.1 粉状试样称取70mg试样置于50ml容量瓶中，加入30ml甲醇，超声处理30min，放冷至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，静置30min，取上清液过滤备用。

4.2.2 含油试样称取50mg试样置于小烧杯中，用20ml甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50ml容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。

5.2.3 口服液吸取适量试样（取样量不超过1ml）置于50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

4.3 测定4.3.1 标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中，吸取该溶液0、0.1、0.3、0.5、1.0、1.5ml（用2ml刻度吸管量取）置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。

各取1ml 测定。

与试样测定方法相同。

4.3.2 试样测定取1ml试样溶液于10mL比色管中，加入6ml正丁醇盐酸混合液，再加入0.2ml 硫酸铁铵溶液，混匀，用封口膜封紧比色管口，置沸水浴精确加热40min后（氺浴锅调至100度，将装有比色管的烧杯放入氺浴锅中），立即置冰水中冷却3—5min后，取出放置约15min使供试液至室温，于546nm波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。

原花青素测定方法

原花青素测定方法1.电化学法原则：原花青素易以氢供体的形式捕获其它活泼的自由基形成多酚自由基。

邻苯三酚在碱性水溶液中迅速发生自氧化链式反应，产生中间产物超氧阴离子自由基-（o2）。

大分子量的多酚形成的自由基相对稳定，可以偶联形成聚合多酚多酚分子，同时发生竟争反应，使继续引发邻苯三酚自由基链式反应的趋势减弱或消失，表现为具有较强的清除自由基能力，且清除能力在一定的条件下与原花青素的加入量有线性关系，并随体系碱度的增大，羟基氢离子电离而增大。

超氧阴离子自由基(o2-)被清除，自氧化链式反应被阻断，反应终止，使邻苯三酚在-0.96v(vs.sce)的自氧化峰电流减小，故可以做为原花青素的定量测定方法。

试验方法：于5ml比色管中，加入适量浓度的原花青素贮备液，0.5ml0.5mol/l的tris-hci(ph=8.33)缓冲溶液，1.0ml5.00mmol/l邻苯三酚，定容刻度，摇匀。

在1min-6min内，记录扫描电位在(-0.8)―(-1.2v)范围内-0.96±0.02v处的二阶导数极谱波。

核磁共振定量方法原理:定量核磁共振（qnmr）分析针对被测组分特征氢核的共振吸收信号，分析结果直观准确。

原花青素通常是由表儿茶素及儿茶素通过4→8位或4→6位的碳-碳键连接，生成聚合度不同、空间结构十分复杂的混合物。

但每个原花青素分子中只有一个末端单元，并且它的h-4位移变化不明显，因此可以用它来表征样品中原花青素分子的数量。

试验方法：用微量天平精密称取内标物邻苯二甲酸氢钾约10mg、样品约40mg，加入dmso-d6为溶剂1ml使其充分溶解，转移到核磁管中进行1h谱nmr分析。

检测条件：5mmbbo探头，600.192mhz，谱宽为12335.5hz，脉冲宽度为13μs，采样时间为17s，延迟时间为6s，采样次数为16次。

3.高效液相色谱-串联质谱法原理:以液相色谱为分离系统，质谱为检测系统，对纯化后的样品进行液相色谱和质谱分离和电离，通过检测器得到质谱。

原花青素的测定

原花青素的分光光度测定法本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂（如葡萄子鱼松树皮提取物）中原花青素含量的测定。

1.方法提要原花青素（也称缩合单宁）是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体，属多酚类化合物。

与其他酚类化合物不同，黄烷醇（缩合单宁、单体、双体）在酸性介质中可与香草醛反应，生成在500nm处有最大吸收的有色物质，可通过比色测其含量。

2.仪器分光光度计。

3.试剂所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。

（1）香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。

（2）提纯的原花青素或儿茶素。

（3）4%香草醛甲醇液。

（4）标准使用液：将提纯的原花青素溶于蒸馏水，制成1mg/ml储备液，将储备液稀释至终浓度为1.0×10-2mg/ml至1mg/ml的标准使用液。

标准使用液应于测定当天配制。

如无提取纯的原花青素，可用儿茶素代替，配制方法同上。

4.测定步骤（1）样品中原花青素液的制备：植物材料经4倍体积丙酮+水（7+3，体积比）或者经60%甲醇提取，40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂，水相再经乙醚洗涤后定容。

冰冻干燥的固体原花青素制剂，直接溶于水中（先加少量甲醇助溶），制成原花青素液。

原花青素液于5℃下暗环境中保存备用。

（2）样品的测定：用锡箔将试管（14m m×120mm）包裹严，仅留管口用于加样。

向管内加入试样0.5ml，再加3.0ml4%香草醛甲醇液混合，然后加入1.5ml浓盐酸，彻底混匀，室温下显色15min，也可在暗环境下进行以上操作。

最后在500nm处比色。

可按以上操作步骤制得标准曲线（0.1mg原花青素在500nm处的吸收值为0.55）。

5.结果计算计算原花青素量的公式：原花青素（1×10-3mg）=A500nm÷0.55×100×V式中 V——试样稀释体积（倍数）。

6.注释（1）本方法的检测范围为（5～500）×10-3mg/0.5ml样液。

精密度与准确度大于1×10-3mg。

花青素含量的测定

花青素含量的测定花青素是一种常见的植物色素，广泛存在于植物中，特别是在花朵和水果中。

花青素不仅赋予植物丰富多彩的颜色，还具有多种生理活性和保健功能。

因此，准确测定花青素含量对于研究植物生长发育以及开发植物资源具有重要意义。

测定花青素含量的常用方法有分光光度法、高效液相色谱法、电化学法等。

其中，分光光度法是一种简单、快速、经济的测定方法，被广泛应用于花青素含量的测定。

分光光度法是基于花青素本身在紫外-可见光区域具有特定的吸收光谱特性。

通常情况下，花青素在紫外区域（200-400nm）和可见光区域（400-700nm）都有吸收峰，峰值波长和吸光度的大小与花青素的结构和浓度有关。

因此，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以间接推算出花青素的含量。

具体的测定步骤如下：1. 样品的制备：将待测样品（如花朵、水果等）剪碎或研磨成细粉，加入适量的提取液（如乙醇、甲醇等），充分摇匀，静置一段时间，使花青素充分溶解在提取液中。

2. 提取：将提取液和样品混合物进行离心或过滤，得到澄清的提取液。

3. 分光光度法测定：取适量的提取液，利用紫外-可见光分光光度计，在特定波长下（通常为紫外区域的吸光峰）测定样品的吸光度。

根据吸光度和标准曲线的关系，可以计算出样品中花青素的含量。

需要注意的是，为了保证测定结果的准确性和可靠性，实验中应该设置空白对照组和标准曲线。

空白对照组是不含花青素的提取液，用于消除其他物质的干扰。

而标准曲线则是利用已知浓度的花青素标准品，根据吸光度和浓度的线性关系建立的，用于计算样品中花青素的含量。

为了提高测定的精确度，还可以对样品进行预处理，如去除杂质、调整pH值等。

同时，在测定过程中要注意操作规范，控制好实验条件，避免误差的产生。

测定花青素含量是研究植物色素和植物生理活性的重要手段。

分光光度法是一种常用而有效的测定方法，通过测定样品在特定波长下的吸光度，可以准确推算出花青素的含量。

通过合理的实验设计和操作，可以获得准确可靠的测定结果，为植物资源的开发和利用提供科学依据。

原花青素值的测定

3．1 原花青素值的测定原花青素值的测定采用Bates—smith法和Poaer 法。

原理：原花青素在酸性条件下加热转化为红色的花青素，而儿茶素、表儿茶素等黄烷一3一醇单体没有此反应(图2)。

它们测出的结果是原花青素的相对含量，分别用原花青素指数和PVU表示，是根据经验公式求得的。

葡萄籽提取物中的原花青素指数一般在80～100之间，PVU一般在250～350之间。

原花青素值只是相对含量，并非原花青素的真实含量。

据调查，同为原花青素值95的产品，多酚含量相差15％，质量大相径庭四。

很多生产厂家使用原花青素指数来表示葡萄籽提取物中原花青素的百分含量是错误的。

3．2 原花青素含量的测定原花青素的含量测定方法很多，也比较混乱。

常用的有以下几种方法。

3．2．1 铁盐催化法此方法的反应原理与原花青素值测定原理相同，在计算原花青素的含量时使用了原花青素标准品。

Fe¨、盐酸为常用的催化剂和酸解剂。

由于水、乙醇为反应介质时吸光值很低，一般采用正丁醇为反应介质【15-161。

通常的具体操作：取1．0 mL 样液(或原花青素溶液)于10 mL刻度试管中，加入6．0 mL正丁醇一浓盐酸(95：5)与2％硫酸铁铵溶液(溶解于2 mol／L 盐酸)0．2mL，混匀，置于沸水浴中加热40min后，立即取出用冰水快速冷却至室温，在550 Nm处测定吸光值。

此方法较简便，而且对原花青素的选择性反应较好。

铁盐催化法对反应体系中的含水量和Fe 浓度要求比较严格，一般要求含水量6％，Fe 浓度4．5x10 ％，而且过高的Fe¨浓度对反应没有影响【l51。

傅武胜【l61 研究表明3％～4％为合适的含水量，Fe 浓度选择在9．OxlO ％左右。

但是也有学者总结分析2％～6％含水量对花青素的形成有抑制作用，稍高的Fe¨浓度(>15 g／L)也抑制花青素的生成.在铁盐催化反应的基础上，杨大进【l I等人利用高效液相色谱法检测了原花青素含量。